血涂片染色及白细胞分类计数教材课件

临床检验基础实验六血涂片染色白细胞分类计数临床检验基础实验六血涂片染色1 11.瑞氏染色1.1试剂成分：伊红酸性嗜碱性染料亚甲蓝（美蓝）碱性嗜酸性染料甲醇固定 溶剂磷酸缓冲液（pH:6.4-6.8）1.瑞氏染色2 21.2着色原理：化学亲和作用+物理的吸附作用伊红+细胞中的碱性物质红色亚甲蓝+酸性物质蓝色中性物质+伊红和亚甲蓝淡紫色1.2着色原理：3 31.3 pH对细胞染色影响pH过低 PI PI 负电荷增多负电荷增多易与易与亚甲蓝亚甲蓝结合结合偏蓝偏蓝偏蓝偏蓝最适环境最适环境：弱酸（：弱酸（：弱酸（：弱酸（pH6.4-6.8pH6.4-6.8pH6.4-6.8pH6.4-6.8）1.3 pH对细胞染色影响pH过低 PI 4 4 血涂片：血涂片：血涂片：血涂片：淡紫红色淡紫红色淡紫红色淡紫红色 镜镜镜镜 下：下：下：下：成熟红细胞成熟红细胞成熟红细胞成熟红细胞粉红色粉红色粉红色粉红色 白细胞白细胞白细胞白细胞胞质胞质胞质胞质 呈现其特有的色彩呈现其特有的色彩呈现其特有的色彩呈现其特有的色彩 细胞核细胞核细胞核细胞核 紫红色紫红色紫红色紫红色 染色质结构清楚染色质结构清楚染色质结构清楚染色质结构清楚判别方法判别方法5 5染色偏酸:红细胞、嗜酸粒细胞颗粒偏红 白细胞核 淡紫红色或不着色染色偏碱：染色偏碱：红细胞红细胞 灰蓝色灰蓝色 中性粒细胞颗粒中性粒细胞颗粒 深暗、偏粗，紫黑色深暗、偏粗，紫黑色 嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞 暗褐色或紫黑色、蓝色暗褐色或紫黑色、蓝色染色偏酸:6 6血涂片染色及白细胞分类计数教材课件7 71.4器材 载玻片、推玻片、洗耳球载玻片、推玻片、洗耳球1.5试剂 瑞氏染液（商品）瑞氏染液（商品）I I液：瑞特染料、纯甲醇、甘油液：瑞特染料、纯甲醇、甘油 I I液：磷酸盐缓冲液（液：磷酸盐缓冲液（KHKH2 2PO4 NaPO4 Na2 2HPO4HPO4）1.4器材8 81.6 1.6 操作操作制备血涂片（待完全晾干）制备血涂片（待完全晾干）加加I I液数滴覆盖整个血膜液数滴覆盖整个血膜0.5-1min0.5-1min 滴加等量或稍多的滴加等量或稍多的IIII液（洗耳球混匀）液（洗耳球混匀）5-10min5-10min 冲洗冲洗（注意）（注意）干燥干燥 1.6 操作9 9l l注意事项注意事项1.1.血涂片干后方可染色血涂片干后方可染色2.2.加染液不能过少加染液不能过少3.3.冲洗时应以流水冲洗冲洗时应以流水冲洗4.4.染色过淡可复染，先加缓冲液再加染液染色过淡可复染，先加缓冲液再加染液5.5.染色过深可用水冲洗或浸泡一定时间，也可用染色过深可用水冲洗或浸泡一定时间，也可用甲醇脱色甲醇脱色6.6.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关。染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关。应在具体实践中摸索合适的时间。应在具体实践中摸索合适的时间。注意事项10102.WBC分类计数2.12.12.12.1原理原理原理原理2.22.22.22.2器材器材器材器材:显微镜、香柏油、拭镜纸、清洁剂显微镜、香柏油、拭镜纸、清洁剂2.32.32.32.3操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤 1.1.采末梢血采末梢血染色染色 2.2.低倍镜下选择细胞分布均匀、着色良好的域，低倍镜下选择细胞分布均匀、着色良好的域，滴香柏油一滴滴香柏油一滴 3.3.油镜油镜下分类，分类时要有秩序的连续进行下分类，分类时要有秩序的连续进行（“几几”字形），避免主观选择视野。通常分类字形），避免主观选择视野。通常分类100100个白细胞，计个白细胞，计 数并报告各种白细胞所占百分数并报告各种白细胞所占百分比。比。4.4.计算计算 5.5.报告方式：报告方式：XXXX细胞：细胞：XX%XX%2.WBC分类计数2.1原理11112.4 外周血正常白细胞形态特征:中性粒细胞：杆中性粒细胞：杆+分分10-1510-15 m圆形胞质粉红胞质内颗粒量多、细小、均匀、紫红色核弯曲呈杆、带状染色质粗糙，紫红色分叶核：核分2-5叶2.4 外周血正常白细胞形态特征:中性粒细胞：杆+分10-1121213-1513-15 m圆形胞质着色不清胞质内颗粒粗大、整齐、均匀、充满胞质、桔红色核多分2叶染色质粗糙，紫红色嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞+淋巴细胞淋巴细胞13-15 m嗜酸性粒细胞+淋巴细胞131310-1210-12 m圆形胞质着色不清胞质内颗粒量少、大小不匀、排列零乱、紫黑色，可盖核上核形不清染色质粗糙，紫红色嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞10-12 m嗜碱性粒细胞14146-156-15 m圆形/椭圆形胞质透明、淡蓝色胞质内多无颗粒核形 圆/椭圆/肾形染色质粗紧成块，深紫红色，核外缘光滑淋巴细胞淋巴细胞6-15 m淋巴细胞151512-1512-15 m圆/椭圆/不规则胞质半透明、灰蓝色或灰红色胞质内有细小、尘土样紫红色颗粒核形 不规则/山字/肾/马碲形，扭曲折叠染色质疏松网状，淡紫红色，有膨胀感和立体起伏感12-15 m16162.52.5注意事项：注意事项：1.1.分类最佳区域为体、尾交界处分类最佳区域为体、尾交界处2.2.分类时要有秩序地连续进行分类时要有秩序地连续进行3.3.白细胞总数与分类个数白细胞总数与分类个数4.4.分类中如见幼红细胞，不计入分类中如见幼红细胞，不计入100100个细胞内，以分类个细胞内，以分类100100个白细胞过程中见到幼红细胞多少个来报告，并应个白细胞过程中见到幼红细胞多少个来报告，并应注明其所属阶段。注明其所属阶段。5.5.分类中应注意观察成熟红细胞、血小板的形态染色及分类中应注意观察成熟红细胞、血小板的形态染色及其分布情况，注意有无寄生虫（如疟原虫）及其他异其分布情况，注意有无寄生虫（如疟原虫）及其他异常所见。常所见。2.5注意事项：1717Thanks Thanks 1818