荧光定量PCR在临床医学中的应用ppt课件

荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用1荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的内容提要一、基因诊断技术简介一、基因诊断技术简介二、乙型肝炎的病原检测二、乙型肝炎的病原检测三、丙型肝炎的病原检测三、丙型肝炎的病原检测四、性病相关病原体的检测四、性病相关病原体的检测荧光定量PCR在临床医学中的应用2内容提要一、基因诊断技术简介荧光定量PCR在临床医学中的应用基因诊断技术简介荧光定量PCR在临床医学中的应用3基因诊断技术简介荧光定量PCR在临床医学中的应用34 基因诊断3 免疫学诊断临床诊断细胞膜细胞核DNA转录 mRNA翻译蛋白质1 形态学诊断2 生化诊断概念荧光定量PCR在临床医学中的应用44 基因诊断3 免疫学诊断临床诊断细胞膜细胞核DNA转录 mPCR与基因诊断技术基因诊断即通过核酸的分子生物学检测直接检测基因的存在状态或缺陷对疾病作出诊断的方法。Polymerase chain reaction(PCR)，聚合酶链式反应，是一种DNA的快速扩增技术。PCR技术通过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热酶的作用，可在3个小时内把特定的DNA片段扩增1000万倍。九十年代中期PCR临床应用在国内全面开展，1998年，荧光定量PCR技术开始在中国应用于临床检测。荧光定量PCR在临床医学中的应用5PCR与基因诊断技术基因诊断即通过核酸的分子生物学检测直接检荧光定量PCR技术实时荧光定量PCR技术，是指在反应体系中加入荧光标记，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，通过标准曲线对PCR终产物的分析，最终实现对未知的起始模版进行定量分析的一种技术，是迄今对已知基因序列的核酸测定中最灵敏的方法。荧光染料：SYBR Green I、EVA Green荧光探针：TaqMan、HybridizationProbes、MolecularBeacon荧光定量PCR在临床医学中的应用6荧光定量PCR技术荧光染料：SYBR Green I、EVA荧光定量PCR在临床医学中的应用7荧光定量PCR在临床医学中的应用7荧光定量PCR技术的优点特异性强：直接扩增病原体的特异DNA或异常基因片段灵敏度高：可检测到极少量的DNA，有效降低漏诊率高效省时：扩增周期短，有利于快速诊断取材范围广：血清、痰液、体液、毛发等多种样本全封闭反应：无需PCR后处理，降低污染定量准确：利用标准曲线法，采用对数期分析自动化程度高：操作安全，避免人为判断荧光定量PCR在临床医学中的应用8荧光定量PCR技术的优点特异性强：直接扩增病原体的特异DNARocheLightCycler荧光定量PCR在临床医学中的应用9Roche荧光定量PCR在临床医学中的应用9荧光定量PCR在临床医学中的应用10荧光定量PCR在临床医学中的应用10荧光定量PCR技术的临床应用病毒性肝炎（HBV、HBV-YMDD、HCV）的基因检测性病相关病原体（CT、NG、UU、HPV）的基因检测优生优育项目诊断：人巨细胞病毒（HCMV）、单纯疱疹病毒II型（HSV）、弓形虫（TOX）、风疹病毒其它病原体检测：结核杆菌、肺炎支原体、EB病毒、伤寒杆菌、幽门螺旋杆菌等荧光定量PCR在临床医学中的应用11荧光定量PCR技术的临床应用病毒性肝炎（HBV、HBV-YM乙型肝炎的病原检测荧光定量PCR在临床医学中的应用12乙型肝炎的病原检测荧光定量PCR在临床医学中的应用12乙肝病毒乙肝病毒荧光定量PCR在临床医学中的应用13乙肝病毒荧光定量PCR在临床医学中的应用13荧光定量PCR在临床医学中的应用14荧光定量PCR在临床医学中的应用14 HBV的感染过程的感染过程荧光定量PCR在临床医学中的应用15 HBV的感染过程荧光定量PCR在临床医学中乙肝如何传染？荧光定量PCR在临床医学中的应用16乙肝如何传染？荧光定量PCR在临床医学中的应用16慢性HBV感染病毒持续病毒持续6个月未被清除者个月未被清除者免疫耐受期：HBV复制活跃免疫清除期非活动或低复制期荧光定量PCR在临床医学中的应用17慢性HBV感染病毒持续6个月未被清除者荧光定量PCR在临床医慢性乙型肝炎HBeAg阳性慢性乙型肝炎HBeAg阴性慢性乙型肝炎荧光定量PCR在临床医学中的应用18慢性乙型肝炎HBeAg阳性慢性乙型肝炎荧光定量PCR在临床医乙型肝炎肝硬化代偿期肝硬化失代偿期肝硬化荧光定量PCR在临床医学中的应用19乙型肝炎肝硬化代偿期肝硬化荧光定量PCR在临床医学中的应用1HBsAg与抗HBsHBsAg在感染在感染HBV两周后即可阳性。只要两周后即可阳性。只要HBsAg阳阳性就可诊断性就可诊断HBV感染，阴性则不能排除感染，阴性则不能排除HBV感染。感染。抗抗HBs为保护性抗体，阳性表示对为保护性抗体，阳性表示对HBV有免疫力。有免疫力。荧光定量PCR在临床医学中的应用20HBsAg与抗HBsHBsAg在感染HBV两周后即可阳性。只HBsAg和抗和抗HBs同时阴性：同时阴性：即所谓窗口期，此时即所谓窗口期，此时HBsAg和抗和抗HBs都未产生。都未产生。HBsAg和抗和抗HBs同时阳性：同时阳性：HBV感染恢复期，此时感染恢复期，此时HBsAg未消失，抗未消失，抗HBs已已产生。或者是亚型感染。产生。或者是亚型感染。荧光定量PCR在临床医学中的应用21HBsAg和抗HBs同时阴性：荧光定量PCR在临床医学中的应为什么HBsAg阴性不能排除HBV感染？窗口期窗口期检测试剂不够灵敏检测试剂不够灵敏隐匿性慢性乙肝（隐匿性慢性乙肝（S S基因变异）基因变异）重叠重叠HCVHCV感染（干扰感染（干扰HBsAgHBsAg合成）合成）荧光定量PCR在临床医学中的应用22为什么HBsAg阴性不能排除HBV感染？窗口期荧光定量PCR抗HBs阳性就万无一失了吗？单一抗单一抗HBsHBs阳性阳性HBV DNAHBV DNA检出率检出率0-11.8%0-11.8%先后感染了不同的先后感染了不同的HBVHBV亚型亚型HBVHBV病毒病毒S S基因变异基因变异荧光定量PCR在临床医学中的应用23抗HBs阳性就万无一失了吗？单一抗HBs阳性HBV DNA检如何诊断血清HBsAg阴性的HBV感染？提高提高检测敏感性检测敏感性采用针对变异抗原的检测试剂采用针对变异抗原的检测试剂HBV DNAHBV DNA的检测！的检测！荧光定量PCR在临床医学中的应用24如何诊断血清HBsAg阴性的HBV感染？提高检测敏感性荧光定HBeAg与抗HBeHBeAg的存在表示病毒复制活跃且有较强的的存在表示病毒复制活跃且有较强的传染性。传染性。HBeAg消失而抗消失而抗HBe产生称为血清产生称为血清转换。抗转换。抗HBe阳转后，病毒复制水平低，传染阳转后，病毒复制水平低，传染性降低。性降低。但长期抗但长期抗HBe阳性者并不代表病毒复制停止或阳性者并不代表病毒复制停止或无传染性，研究显示无传染性，研究显示20%50%仍可检测到仍可检测到HBV DNA，部分可能由于前，部分可能由于前C区基因变异，区基因变异，导致不能形成导致不能形成HBeAg。荧光定量PCR在临床医学中的应用25HBeAg与抗HBeHBeAg的存在表示病毒复制活跃且有较强HBeAg与抗HBe共存？处于血清转换过程中处于血清转换过程中野生株与变异株同时存在野生株与变异株同时存在荧光定量PCR在临床医学中的应用26HBeAg与抗HBe共存？处于血清转换过程中荧光定量PCR在HBeAg水平与HBV DNA的关系HBeAgHBeAg阳性标本阳性标本HBV DNAHBV DNA检出率检出率9090左右左右HBeAgHBeAg与与HBV DNAHBV DNA有着良好的相关性有着良好的相关性荧光定量PCR在临床医学中的应用27HBeAg水平与HBV DNA的关系HBeAg阳性标本HBVHBeAg阴性/抗HBe阳性/HBV DNA阳性HBV DNA水平一般较低水平一般较低HBVHBV低水平复制低水平复制HBVHBV病毒前病毒前C C区基因变异区基因变异重叠重叠HCVHCV感染感染荧光定量PCR在临床医学中的应用28HBeAg阴性/抗HBe阳性/HBV DNA阳性HBV DN“两对半”缺陷“两对半”是机体的免疫反应状态，为间接指标。机体的免疫反应状态，为间接指标。“携带者携带者”、“大三阳大三阳”、“小三阳小三阳”等免疫学等免疫学指标不能反应体内病毒复制水平与感染程度。指标不能反应体内病毒复制水平与感染程度。HBsAgHBsAg阴性或阴性或HBeAgHBeAg阴性不能排除阴性不能排除HBVHBV感染。感染。荧光定量PCR在临床医学中的应用29“两对半”缺陷“两对半”是机体的免疫反应状态，为间接指标。荧HBV DNA 是病毒复制和传染性的直接标志。是病毒复制和传染性的直接标志。HBV DNA定量对于判断病毒复制程度、传染性大定量对于判断病毒复制程度、传染性大小、病毒药物疗效等有重要意义。小、病毒药物疗效等有重要意义。HBV DNA拷贝数乙肝病毒载量拷贝数乙肝病毒载量荧光定量PCR在临床医学中的应用30HBV DNA 是病毒复制和传染性的直接HBV DNA检测的临床意义HBV DNAHBV DNA是是HBVHBV存在最直接的依据存在最直接的依据HBV DNAHBV DNA是是HBVHBV复制的标志复制的标志HBV DNAHBV DNA是患者具有传染性的标志是患者具有传染性的标志HBV DNAHBV DNA对乙肝两对半起补充作用对乙肝两对半起补充作用HBV DNAHBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标HBV DNAHBV DNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎可检测出隐匿性慢性乙型肝炎荧光定量PCR在临床医学中的应用31HBV DNA检测的临床意义HBV DNA是HBV存在最直接提供直接证据缩短提供直接证据缩短“窗口期窗口期”PCRPCR检测“窗口期窗口期”核酸核酸检测缩短的短的“窗口期窗口期”的天数的天数HBVHBV56566-156-15HCVHCV707041-6041-60HIVHIV222210-1510-15有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断HBV DNA检测的临床意义荧光定量PCR在临床医学中的应用32PCR检测“窗口期”核酸检测缩短的“窗口期”的天数HBHBV DNA检测的临床意义 调查表明并不是所有调查表明并不是所有“大三阳大三阳”的病人都的病人都处于处于HBV复制期，具有传染性；也不是所有复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳小三阳”的病人的病人HBV都无复制。因此，要准确都无复制。因此，要准确知道知道HBV是否处于复制状态，最准确的方法还是否处于复制状态，最准确的方法还是通过检测是通过检测HBV DNA来决定。来决定。荧光定量PCR在临床医学中的应用33HBV DNA检测的临床意义 调查表明并HBV DNA检测方法斑点杂交（基本淘汰）斑点杂交（基本淘汰）定性定性PCR（基本淘汰）（基本淘汰）荧光定量荧光定量PCR（主流）（主流）基因芯片（将来？）基因芯片（将来？）荧光定量PCR在临床医学中的应用34HBV DNA检测方法斑点杂交（基本淘汰）荧光定量PCR在临为什么建议病人要进行HBV DNA检测？荧光定量PCR在临床医学中的应用35为什么建议病人要进行HBV DNA检测？荧光定量PCR在临荧光定量PCR方法检测HBV感染的各期血清标本Copies/mlHBeAg阳性慢性乙型肝炎病人8.3 x 108经干扰素治疗后HBeAg转阴6.2 x 103非活动性HBsAg携带者血清5.6 x 103原先血中HBV DNA阳性，已痊愈超过12个月的血清103荧光定量PCR在临床医学中的应用36荧光定量PCR方法检测HBV感染的各期血清标本Copies/荧光定量PCR在临床医学中的应用37荧光定量PCR在临床医学中的应用37HBsAg和HBeAg均阳性而HBV DNA阴性？干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。PCR所用引物相应的所用引物相应的DNA序列发生突变，此序列发生突变，此引物与突变引物与突变DNA不能配对结合。不能配对结合。病毒病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBV DNA很少或缺乏。很少或缺乏。荧光定量PCR在临床医学中的应用38HBsAg和HBeAg均阳性而HBV DNA阴性？干扰素或拉乙肝的治疗目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的药物，目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到最好的抗病毒药物疗效也仅能达到5050左右。左右。目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗病毒药物主要有两大类：病毒药物主要有两大类：干扰素：重组人干扰素：重组人-1b-1b干扰素、干扰素、-2a-2a、-2b -2b干扰素等。干扰素等。核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。荧光定量PCR在临床医学中的应用39乙肝的治疗目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的药物，最乙肝的治疗主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等对于HBV DNA105的患者应进行抗病毒治疗荧光定量PCR在临床医学中的应用40乙肝的治疗主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等荧光拉米夫定可迅速降低HBV DNAHBV DNA的浓度，改善肝脏组织的病变，还可能阻断肝纤维化的进程，终止肝硬化的发展。尤其是拉米夫定不受病毒感染的模式、野生型或基因组前C区突变的影响。此外拉米夫定还能抑制肝移植受体和AIDSAIDS病人体内的HBVHBV复制。荧光定量PCR在临床医学中的应用41拉米夫定可迅速降低HBV DNA的浓度，改善肝脏组织的病变，拉米夫定治疗人群有明显HBV DNA复制者前C区变异的慢性乙型肝炎代偿期的慢性乙型肝炎接受肝脏移植的患者干扰素治疗失败荧光定量PCR在临床医学中的应用42拉米夫定治疗人群有明显HBV DNA复制者荧光定量PCR在临拉米夫定治疗效果绝大多数患者绝大多数患者HBV DNAHBV DNA水平显著下降。水平显著下降。用药用药4 4周开始下降，周开始下降，1212至至1616周约半数以上的病周约半数以上的病例血清例血清HBV DNAHBV DNA降到可检测水平以下。降到可检测水平以下。治疗治疗1 1年后年后HBeAgHBeAg阴转率约为阴转率约为20%20%。荧光定量PCR在临床医学中的应用43拉米夫定治疗效果绝大多数患者HBV DNA水平显著下降。荧光病毒学应答：HBV DNA低于检测下限血清学应答生化学应答组织学应答应用抗病毒药物后如何判断疗效？荧光定量PCR在临床医学中的应用44病毒学应答：HBV DNA低于检测下限应用抗病毒药物后如何判应用抗病毒药物后如何判断疗效？治疗结束时治疗结束时完全应答完全应答随访随访1 1年年持续应答持续应答无应答无应答荧光定量PCR在临床医学中的应用45应用抗病毒药物后如何判断疗效？治疗结束时完全应答荧光定量PCYMDD变异YMDDYMDD：酪氨酸蛋氨酸天门冬氨酸天：酪氨酸蛋氨酸天门冬氨酸天 门冬氨酸门冬氨酸蛋氨酸（蛋氨酸（M M）突变为异亮氨（）突变为异亮氨（I I）或缬氨酸）或缬氨酸（V V）形成）形成YIDDYIDD变异株或变异株或YVDDYVDD变异株变异株 。抗病毒治疗中存在的问题荧光定量PCR在临床医学中的应用46YMDD变异YMDD：酪氨酸蛋氨酸天门冬氨酸天 抗HBV-YMDD变异检测的临床意义动态检测动态检测：服用拉米夫定：服用拉米夫定3个月开始，每月个月开始，每月 检测检测1次次提前发现提前发现：可在耐药临床表现发生前：可在耐药临床表现发生前1-4个个 月检测出突变株月检测出突变株及时调整及时调整：适时调整用药方案，防止因耐：适时调整用药方案，防止因耐 药而导致病情恶化药而导致病情恶化荧光定量PCR在临床医学中的应用47HBV-YMDD变异检测的临床意义动态检测：服用拉米夫定3个丙型肝炎的病原检测荧光定量PCR在临床医学中的应用48丙型肝炎的病原检测荧光定量PCR在临床医学中的应用48丙肝病毒HCV是单链RNA病毒主要通过血液和血制品传播感染后易转变为慢性肝炎或发展为肝硬化、肝癌呈全球性分布，约1%普通人群感染荧光定量PCR在临床医学中的应用49丙肝病毒HCV是单链RNA病毒荧光定量PCR在临床医学中的应抗HCV IgM和抗HCV IgGHCV抗体不是保护性抗体，是存在HCV感染的标志。抗HCV IgM在发病后即可检测到，一般持续13个月。如果抗HCV IgM持续阳性，提示病毒持续复制，易转为慢性。低滴度抗HCV IgG提示病毒处于静止状态，高滴度提示病毒复制活跃。荧光定量PCR在临床医学中的应用50抗HCV IgM和抗HCV IgGHCV抗体不是保护性抗体，HCV抗原检测的困难HCVHCV在血液中含量极低，仅为在血液中含量极低，仅为HBVHBV的的1%1%HCVHCV病毒颗粒很难有效地分离纯化、人工合成抗原病毒颗粒很难有效地分离纯化、人工合成抗原丙型肝炎的窗口期很长，血清学检测无法早期诊断丙型肝炎的窗口期很长，血清学检测无法早期诊断抗体持续性存在，无法提示正确的病毒载量抗体持续性存在，无法提示正确的病毒载量HCVHCV的型别复杂，高突变率的型别复杂，高突变率HCVHCV核心抗原检测试剂盒敏感性差：核心抗原检测试剂盒敏感性差：45.68%45.68%荧光定量PCR在临床医学中的应用51HCV抗原检测的困难HCV在血液中含量极低，仅为HBV的1%HCV RNA HCV RNA阳性是病毒感染和复制的直接标志。阳性是病毒感染和复制的直接标志。HCV RNA的定量测定有助于了解病毒复制程度、抗的定量测定有助于了解病毒复制程度、抗病毒治疗的选择及疗效评估等。病毒治疗的选择及疗效评估等。荧光定量PCR在临床医学中的应用52HCV RNA HCV RNA阳性是病毒HCV RNA荧光定量PCR检测的临床意义早期诊断：在免疫学检测的“窗口期”或一部分不产生抗体的丙肝病毒携带者，都可出现HCV RNA阳性，抗HCV阴性的检测结果。弥补ELISA方法的高漏检率,HCV RNA可作为HCV感染诊断的指标。HCV RNA定量可指导用药，为疗效观察及预后判断提供客观指标。抗HCV不能作为抗病毒疗效的指标。慢性丙型肝炎长期抗HCV阳性，这只表示曾经感染了丙肝病毒并出现了相应的免疫应答，并不代表体内仍有丙肝病毒的存在或复制，这时只能通过HCV RNA定量检测鉴别丙肝病毒的活动性和复制程度。HCV主要通过输血和血制品传播，对献血员及血制品进行检测，以减少医源性丙型肝炎的发生和传播。核酸检测在核酸检测在HCV感染的诊断中要比感染的诊断中要比HBV感染的诊断重要得多！感染的诊断重要得多！荧光定量PCR在临床医学中的应用53HCV RNA荧光定量PCR检测的临床意义早期诊断：在免疫学性病相关病原体的检测荧光定量PCR在临床医学中的应用54性病相关病原体的检测荧光定量PCR在临床医学中的应用54 性病在我国已成为性病在我国已成为一个重要的公共卫生问一个重要的公共卫生问题，自题，自9999年以来，性病年以来，性病的发生率居高不下，其的发生率居高不下，其发病率在传染性疾病中发病率在传染性疾病中位居第位居第3 3位，位，0303年我国累年我国累计报道性病病例数（计报道性病病例数（HIV除外）除外）7373万。浙江省为万。浙江省为高发区，位居全国第三。高发区，位居全国第三。荧光定量PCR在临床医学中的应用55 性病在我国已成为一个重要的公共卫生问题，自99年以来常见性传播疾病病原体淋病双球菌(NG)沙眼衣原体(CT)解脲支原体(UU)人类乳头瘤病毒(HPV)人类免疫缺陷病毒(HIV)荧光定量PCR在临床医学中的应用56常见性传播疾病病原体淋病双球菌(NG)荧光定量PCR在临床医淋病双球菌的传统检测方法涂片染色：对于女性患者检出率低，易出现假阴性分离培养：培养较困难，生化鉴定复杂，时间长ELISA抗原检测法：存在交叉反应，非特异反应较严重荧光定量PCR在临床医学中的应用57淋病双球菌的传统检测方法涂片染色：对于女性患者检出率低，易出荧光定量PCR检测NG的优势可在短时间内快速、准确地直接从临床各种标本中检出含量极低的病原菌对女性疑似淋球菌引起的各种炎症的诊断及鉴别诊断起决定性作用对症状轻者或无症状的淋球菌感染者做到早期诊断和鉴别诊断可用于疗效考核荧光定量PCR在临床医学中的应用58荧光定量PCR检测NG的优势可在短时间内快速、准确地直接从临沙眼衣原体荧光定量PCR在临床医学中的应用59沙眼衣原体荧光定量PCR在临床医学中的应用59沙眼衣原体感染与致病近年来在欧美等国，沙眼衣原体的感染率和危害性已超过淋球菌在我国，在非淋球菌性尿道炎中居首位在我国，在非淋球菌性尿道炎中居首位泌尿生殖道感染，妨碍妊娠盆腔感染，可致生殖能力损害荧光定量PCR在临床医学中的应用60沙眼衣原体感染与致病近年来在欧美等国，沙眼衣原体的感染率和危传统方法检测沙眼衣原体的缺陷“窗口期”检测不出不能判定是现症感染还是既往感染荧光定量PCR在临床医学中的应用61传统方法检测沙眼衣原体的缺陷“窗口期”检测不出荧光定量PCR荧光定量PCR检测衣原体的优势灵敏度98%以上、特异性100%提高阳性检出率适用于感染的早期诊断和无症状携带者的检查荧光定量PCR在临床医学中的应用62荧光定量PCR检测衣原体的优势灵敏度98%以上、特异性100解脲支原体荧光定量PCR在临床医学中的应用63解脲支原体荧光定量PCR在临床医学中的应用63UU难以分离，需特殊培养基培养，操作费时，需1-3天才能得到初步结果。血清学检查，仅10%UU尿道炎患者在病程中特异性抗体滴度升高4倍，使其方法学应用受限。一些非致病的脲原体或培养过程中的污染都可能导致假阳性的结果。传统方法检测解脲支原体的缺陷荧光定量PCR在临床医学中的应用64UU难以分离，需特殊培养基培养，操作费时，需1-3天才能得到具有高度的敏感性和特异性，提高阳性检出率快速、定量准确，可以为临床评价疗效提供依据荧光定量PCR检测支原体的优势荧光定量PCR在临床医学中的应用65具有高度的敏感性和特异性，提高阳性检出率荧光定量PCR检测支 CT、UU是美国FDA批准的PCR检测试剂盒，作为首选方法，在临床推广应用荧光定量PCR在临床医学中的应用66 CT、UU是美国FDA批准的PCR检测试剂盒，作为首选方人类乳头瘤病毒有100多个型只能感染人的皮肤和黏膜上皮细胞，人是HPV的惟一宿主 免疫原性低，易形成持续性感染免疫原性低，易形成持续性感染 新生儿产道感染新生儿产道感染荧光定量PCR在临床医学中的应用67人类乳头瘤病毒有100多个型荧光定量PCR在临床医学中的应用HPV宫颈癌宫颈癌荧光定量PCR在临床医学中的应用68HPV宫颈癌荧光定量PCR在临床医学中的应用68荧光定量PCR在临床医学中的应用69荧光定量PCR在临床医学中的应用69传统巴氏涂片漏诊率可达30%从细胞学水平来观察细胞的形态学改变，其中80%的患者确诊时已是宫颈癌晚期传统方法检测HPV的缺陷荧光定量PCR在临床医学中的应用70传统巴氏涂片漏诊率可达30%传统方法检测HPV的缺陷荧光定量早期感染的病原检测可对HPV进行分型可以评估病毒载量与患癌症风险可以考核疗效与预后用于HPV感染与生殖器肿瘤相关性的研究荧光定量PCR检测HPV的优势荧光定量PCR在临床医学中的应用71早期感染的病原检测荧光定量PCR检测HPV的优势荧光定量PC人类免疫缺陷病毒是引起艾滋病的病原体是引起艾滋病的病原体荧光定量PCR在临床医学中的应用72人类免疫缺陷病毒是引起艾滋病的病原体荧光定量PCR在临床医学可判定无症状且血清阴性患者潜在的HIV传播性检测长潜伏期的HIV携带者使“窗口期”缩短10天在治疗过程中观察患者血清HIV载量的变化预示病情的转归和指导临床用药对于新生儿是否从母体感染HIV的诊断尤为适用荧光定量PCR检测HIV荧光定量PCR在临床医学中的应用73可判定无症状且血清阴性患者潜在的HIV传播性荧光定量PCR检小结荧光定量PCR是特异、灵敏、高效的基因诊断技术对致病微生物核酸含量进行定量检测弥补免疫检测的缺陷（如HCV）缩短诊断的窗口期（如HIV），利于早期诊断荧光定量PCR在临床医学中的应用74小结荧光定量PCR是特异、灵敏、高效的基因诊断技术荧光定量P对治疗过程进行疗效监测指导用药过程及剂量，以制定合理的疗效方案定量PCR的临床应用可结合临床表现，并与传统的免疫学、影像学等诊断方法来综合评判，更为科学小结荧光定量PCR在临床医学中的应用75对治疗过程进行疗效监测小结荧光定量PCR在临床医学中的应用7 04年6月，卫生部临检中心主任申子瑜、中国医科大学附属一院副院长尚红等专家对迪安医学检验中心的PCRPCR基因诊断实验室基因诊断实验室进行验收，并顺利通过！荧光定量PCR在临床医学中的应用76 04年6月，卫生部临检中心主任申子瑜、中国医科大学附 谢谢 谢谢 大大 家家！荧光定量PCR在临床医学中的应用77 荧光定量PCR在临床医学中的应用77