肺结核实验室诊断课件

结核分枝杆菌的试验室诊断结核分枝杆菌的试验室诊断安徽省立医院检验科安徽省立医院检验科 马筱玲马筱玲1结核分枝杆菌的试验室诊断安徽省立医院检验科马筱玲1结核疫情及诊断进展结核疫情及诊断进展 2结核疫情及诊断进展2l黛玉脸色苍白，瘦骨嶙峋，经不断咳嗽及吐血后，香消玉殒，结束了一场哀怨凄绝的爱情故事。3黛玉脸色苍白，瘦骨嶙峋，经不断咳嗽及吐血后，香消玉殒，结我国结核病疫情我国结核病疫情 全球结核病第二高负担国家，结核病疫情表现有全球结核病第二高负担国家，结核病疫情表现有“六多六多”。一、感染人数多一、感染人数多亿人感染过结核菌，约占全国人口亿人感染过结核菌，约占全国人口 的，高于全球平均水平。的，高于全球平均水平。二、患病人数多二、患病人数多活动性肺结核、传染性肺结核患病率活动性肺结核、传染性肺结核患病率 分别为万和万，分别为万和万，三、新发患者多三、新发患者多全国每年新发活动性肺结核患者全国每年新发活动性肺结核患者 万，万，其中传染性其中传染性 肺结核患者万。肺结核患者万。四、死亡人数多四、死亡人数多全国每年约有万人死于结核病。全国每年约有万人死于结核病。五、农村患者多五、农村患者多全国约有的结核病人集中在农村，全国约有的结核病人集中在农村，主要在经济不发达的中西部地主要在经济不发达的中西部地 区。区。六、耐药患者多六、耐药患者多全国结核病耐药率高达。全国结核病耐药率高达。4我国结核病疫情全球结核病第二高负担国家，结核病疫情表现有“结核病实验室结核病实验室诊断方法介绍诊断方法介绍5结核病实验室诊断方法介绍5概述l结核病人的细菌学检查不仅是发现传染源的主要途径和手段，也是结核病确诊和制订抗痨方案，考核疗效、评价治疗效果的可靠标准。l由于结核菌的遗传特性决定其生长周期长，致使常规细菌学检查方法存在着灵敏度低、操作复杂，需时间较长和影响因素较多，不易标准化等缺陷，使细菌学诊断发展缓慢，无法充分满足临床诊断的需要。6概述结核病人的细菌学检查不仅是发现传染源的主要途径和手段实验室诊断方法l病原学诊断病原学诊断l辅助诊断辅助诊断l 7实验室诊断方法病原学诊断7病原学诊断病原学诊断一、涂片抗酸染色镜检法，二、液基夹层杯结核杆菌检验三、荧光染色法四、培养法 五、液体培养显微镜观察药敏试验六、快速培养检测法，七、色谱法 八、分子生物学法 九、噬菌体生物扩增法8病原学诊断一、涂片抗酸染色镜检法，8一、涂片抗酸染色镜检法：一、涂片抗酸染色镜检法：l国内大多采用厚涂片，比薄涂片法可提高阳性率；涂片萎尼抗酸染色法能保存较久，可备复查；l因费时、繁琐，综合医疗单位常因重视不够，致涂阳检出率低于，专业机构涂阳率可达到。l国外痰涂片阳性率可达，反复多次查，可增加到；9一、涂片抗酸染色镜检法：国内大多采用厚涂片，比薄涂片法可提涂片优点：简便、快速、价廉涂片优点：简便、快速、价廉 10涂片优点：简便、快速、价廉10 涂片的缺点涂片的缺点l l敏感性低：条菌敏感性低：条菌敏感性低：条菌敏感性低：条菌l l特异性差：所有分枝杆菌均可着色特异性差：所有分枝杆菌均可着色特异性差：所有分枝杆菌均可着色特异性差：所有分枝杆菌均可着色l l无法区别死菌与活菌：结果均为阳性无法区别死菌与活菌：结果均为阳性无法区别死菌与活菌：结果均为阳性无法区别死菌与活菌：结果均为阳性11涂片的缺点敏感性低：条菌11痰菌假阴性原因l病变是封闭或开放；l病变性质和其中能够排出的菌量和排出时间间歇；l结核分枝杆菌形态多样性；12痰菌假阴性原因病变是封闭或开放；12二、液基夹层杯结核杆菌检验工作原理二、液基夹层杯结核杆菌检验工作原理 将经过消化灭活处理液处理的痰液、或其他体液标本混悬将经过消化灭活处理液处理的痰液、或其他体液标本混悬液置于具有符合光学要求基片的夹层杯中，经过专业离心机液置于具有符合光学要求基片的夹层杯中，经过专业离心机离心将混悬液中细菌或细胞牢固附着基片上，并在夹层杯中离心将混悬液中细菌或细胞牢固附着基片上，并在夹层杯中直接染色后取出基片在载波片上封片，置显微镜下观察。直接染色后取出基片在载波片上封片，置显微镜下观察。13二、液基夹层杯结核杆菌检验工作原理将经过消化灭优点：优点：、操作方便，易于掌握。、操作方便，易于掌握。、片中结核菌分布均匀，染色效果清、片中结核菌分布均匀，染色效果清晰晰、液基结核菌制片技术较离心浓缩集、液基结核菌制片技术较离心浓缩集菌法有显著提高：菌法有显著提高：该方法将所有消该方法将所有消化后标本的抗酸杆菌均完整地保留化后标本的抗酸杆菌均完整地保留于液基薄片中，从而显著提高了检于液基薄片中，从而显著提高了检出率。出率。、安全性有所提高：、安全性有所提高：消化，制片，消化，制片，烤片，染色均在彭氏杯中完成，操烤片，染色均在彭氏杯中完成，操作人员不直接接触标本。作人员不直接接触标本。采用结核采用结核专用消化液，可有效杀灭结核分支专用消化液，可有效杀灭结核分支杆菌，更好的提高了操作的安全性。杆菌，更好的提高了操作的安全性。14优点：14三、荧光染色法：l是涂片法中阳性率较高，较快速的方法，是涂片法中阳性率较高，较快速的方法，l集菌与荧光染色相结合，则荧光显微镜下的抗集菌与荧光染色相结合，则荧光显微镜下的抗酸杆菌阳性率可达，酸杆菌阳性率可达，l荧光法的缺点：荧光法的缺点：l 假阳性率较高，假阳性率较高，l 保存时间短，不到个月保存时间短，不到个月15三、荧光染色法：是涂片法中阳性率较高，较快速的方法，15四、培养法l一般都用改良罗氏固体培养基一般都用改良罗氏固体培养基l接种后第第天观察，以后每周观察一次接种后第第天观察，以后每周观察一次菌落生长情况，第周若仍无生长，报告菌落生长情况，第周若仍无生长，报告为阴性。为阴性。l优点：准确，灵敏度略高于涂片法；可优点：准确，灵敏度略高于涂片法；可以鉴定死菌与活菌；可进一步进行菌种以鉴定死菌与活菌；可进一步进行菌种鉴定和药敏试验鉴定和药敏试验.l缺点：诊断周期长，最快也需要周。缺点：诊断周期长，最快也需要周。l有一定的污染率有一定的污染率16四、培养法一般都用改良罗氏固体培养基161717培养假阴性的原因l个别细菌营养要求的特异性；l细菌和细菌营养代谢异质性；l细菌培养前处理对细菌活性影响；18培养假阴性的原因个别细菌营养要求的特异性；18分枝杆菌药物敏感性试验l绝对浓度法检测分枝杆菌药敏实验是采用含药罗氏培养基进行的。常用药物终浓度（）l 表 绝对浓度法含药培养基中的药物终浓度 l 药 物 浓 度（）l 低浓度 高浓度 l异烟肼 l利福平 l链霉素 l乙胺丁醇 l对氨基水杨酸 l氨硫脲 l乙硫异烟胺 l卡那霉素 l卷曲霉素 l 紫霉素 l氧氟沙星 l左氧氟沙星 l环丙沙星 l司帕沙星 l力克肺疾 l丁胺卡那 l 19分枝杆菌药物敏感性试验绝对浓度法检测分枝杆菌药敏实验是采用检测方法l 菌悬液的制备l.接种及培养l.结果判定与报告 l敏感（一）：含药培养基上无菌落生长。l 报告菌落数：当含药培养基上菌落数在个以下时，报告菌落个数。l耐药（）：含药培养基上菌落数约占斜面面积；l耐药（）：含药培养基上菌落数约占斜面面积；l耐药（）：含药培养基上菌落数约占斜面面积；l耐药()：含药培养基上菌落呈菌苔样生长。20检测方法菌悬液的制备20本法弊端l l操作繁琐操作繁琐l l需时久，周需时久，周l l结果准确性差结果准确性差21本法弊端操作繁琐21五、液体培养五、液体培养显微镜观察药敏试验显微镜观察药敏试验l l是年建立的一种痰标本液体培养结合显微镜观察技术。是年建立的一种痰标本液体培养结合显微镜观察技术。是年建立的一种痰标本液体培养结合显微镜观察技术。是年建立的一种痰标本液体培养结合显微镜观察技术。其原理是含有索状因子，因此其在液体培养基中生长时其原理是含有索状因子，因此其在液体培养基中生长时其原理是含有索状因子，因此其在液体培养基中生长时其原理是含有索状因子，因此其在液体培养基中生长时分泌索状因子，形成索状特征性结构，利用倒置显微镜分泌索状因子，形成索状特征性结构，利用倒置显微镜分泌索状因子，形成索状特征性结构，利用倒置显微镜分泌索状因子，形成索状特征性结构，利用倒置显微镜观察索状结构可用于的快速诊断。由于液体培养基营养观察索状结构可用于的快速诊断。由于液体培养基营养观察索状结构可用于的快速诊断。由于液体培养基营养观察索状结构可用于的快速诊断。由于液体培养基营养丰富，因此生长迅速，使的培养时间显著缩短，培养阳丰富，因此生长迅速，使的培养时间显著缩短，培养阳丰富，因此生长迅速，使的培养时间显著缩短，培养阳丰富，因此生长迅速，使的培养时间显著缩短，培养阳性率显著增加。该法还能在培养的同时直接进行临床标性率显著增加。该法还能在培养的同时直接进行临床标性率显著增加。该法还能在培养的同时直接进行临床标性率显著增加。该法还能在培养的同时直接进行临床标本的直接药敏试验，因此能显著缩短从临床标本到耐药本的直接药敏试验，因此能显著缩短从临床标本到耐药本的直接药敏试验，因此能显著缩短从临床标本到耐药本的直接药敏试验，因此能显著缩短从临床标本到耐药性测定的所需时间，这是其它传统方法所不具有的，也性测定的所需时间，这是其它传统方法所不具有的，也性测定的所需时间，这是其它传统方法所不具有的，也性测定的所需时间，这是其它传统方法所不具有的，也是的最大优点。是的最大优点。是的最大优点。是的最大优点。22五、液体培养显微镜观察药敏试验是年建立的一种痰标本液体液体培养显微镜观察23液体培养显微镜观察23结结 论论l l本试剂检测简便，快速，天就可获得多耐药结核杆本试剂检测简便，快速，天就可获得多耐药结核杆菌的检测结果，同时具有较高的敏感性和特异性，菌的检测结果，同时具有较高的敏感性和特异性，与常规方法符合率较高，可用于多耐药结核病的快与常规方法符合率较高，可用于多耐药结核病的快速检测。速检测。l l痰标本直接药敏试验比常规方法提早周，更具有痰标本直接药敏试验比常规方法提早周，更具有快速诊断价值。快速诊断价值。l l本试剂费用低廉，不需特殊仪器设备，适合基层推本试剂费用低廉，不需特殊仪器设备，适合基层推广应用。广应用。l l本法安全、对预防耐药结核病的流行与传播、防止本法安全、对预防耐药结核病的流行与传播、防止实验室工作人员的感染具有重要意义。实验室工作人员的感染具有重要意义。24结论24六、快速培养检测法.培养系统培养系统.培养系统培养系统25六、快速培养检测法.培养系统25.培养系统培养系统 基本原理 培养瓶底部含有包被于树脂上的荧光显示剂，由于该显示剂为氧抑制性，当分支杆菌生长使氧消耗后，荧光显示剂被激活，而发出荧光。检测仪测试荧光强度，并判定结果。优点：快速 天培养阳性 简便 比常规法操作简便，培养阳性率高于法 缺点：无法观察菌落形态，污染率略高于法，产品依赖进口，价格较贵26.培养系统26 培养系统培养系统培养系统培养系统l原理：该系统采用产色检测技术检测培养系统中分支杆菌生长情况。因其所用的培养瓶底部有颜色感应器，当培养瓶中有细菌生长，产生、下降时，颜色感应器由绿色变成黄色。仪器自动连续检测，检测的数据输入计算机，根据计算结果自动显示培养瓶中有无分支杆菌生长。l优点：快速 天培养阳性 简便 比常规法操作简便，培养阳性率高于法 l缺点：无法观察菌落形态，污染率略高于法，l 产品依赖进口，价格较贵。27培养系统原理：该系统采用产色检测技术检测培养系统中分支七、色谱法l分为气相色谱()、气液相色谱、高效液相色谱()等l等能检测分枝杆菌代谢过程中的挥发性物质如脂肪酸所产生的含量，出现不同的色谱峰，从而可鉴定结核杆菌和大部分菌种，且可测药敏。l优点：简单、快速、定量、重复性好，与质谱()联用更好；l缺点：仪器昂贵，维护不易，无法普及。28七、色谱法分为气相色谱()、气液相色谱、高效液相色谱()等八、分子生物学法八、分子生物学法 利用分子生物学检测方法来检测结核杆菌特异性基利用分子生物学检测方法来检测结核杆菌特异性基因片断，从而为结核病的快速诊断提供依据。因片断，从而为结核病的快速诊断提供依据。、聚合酶链反应、聚合酶链反应()：、核酸探针、核酸探针()、染色体核酸指纹法：、染色体核酸指纹法：、()序列法序列法、耐药基因的检则：、耐药基因的检则：、其它分子生物学方法、其它分子生物学方法29八、分子生物学法利用分子生物学检测方法来检、聚合酶链反应、聚合酶链反应()：l能快速扩增结核分枝杆菌，l检测假阳性和假阴性问题是影响其应用的关键问题。l对于存在的问题对策如下：l扩增产物特异性鉴定探针杂交l高质量试剂（建立国家级检定考评）l规范化操作（培训操作人员）l质量控制 （标准实验室）30、聚合酶链反应()：能快速扩增结核分枝杆菌，30、核酸探针()l探针是一小段带标记而能识别特异性核苷酸序列的单链分子。、染色体核酸指纹法：l有多种方法，l如限制性内切酶图谱()和限制性酶切片段长度多态性()分析等，l用于菌株菌种鉴定和流行病学调查研究。31、核酸探针()探针是一小段带标记而能识别特异性核苷酸序列的单、()序列法l用于分枝杆菌的菌种鉴定，差不多所有种的分枝杆菌都可鉴定出来。、耐药基因的检则：l已查出的结核杆菌耐药基因有(对利福平)，、(对异烟肼)，(对乙胺丁醇)，、(对链霉素)，(对吡嗪酰胺)和(对氟喹诺酮类，则为低度耐药)等。32、()序列法用于分枝杆菌的菌种鉴定，差不多所有种的分枝杆菌 九、噬菌体生物扩增法（）九、噬菌体生物扩增法（）该法建立，并用于结核该法建立，并用于结核分枝杆菌耐药性测定。近年来分枝杆菌耐药性测定。近年来进展很快。进展很快。33九、噬菌体生物扩增法（）该法建立，并用于结核33 检测原理检测原理 分枝杆菌噬菌体能感染活的分枝杆菌，并在菌体内增殖，裂分枝杆菌噬菌体能感染活的分枝杆菌，并在菌体内增殖，裂分枝杆菌噬菌体能感染活的分枝杆菌，并在菌体内增殖，裂分枝杆菌噬菌体能感染活的分枝杆菌，并在菌体内增殖，裂解菌体，释放出的子代噬菌体，即可感染随后加入的指示细胞解菌体，释放出的子代噬菌体，即可感染随后加入的指示细胞解菌体，释放出的子代噬菌体，即可感染随后加入的指示细胞解菌体，释放出的子代噬菌体，即可感染随后加入的指示细胞（也是一种分枝杆菌），并使指示细胞裂解，在培养皿上出现噬（也是一种分枝杆菌），并使指示细胞裂解，在培养皿上出现噬（也是一种分枝杆菌），并使指示细胞裂解，在培养皿上出现噬（也是一种分枝杆菌），并使指示细胞裂解，在培养皿上出现噬菌斑。菌斑。菌斑。菌斑。若先将待检菌株与某种药物作用一段时间后在加噬菌体检测，若先将待检菌株与某种药物作用一段时间后在加噬菌体检测，若先将待检菌株与某种药物作用一段时间后在加噬菌体检测，若先将待检菌株与某种药物作用一段时间后在加噬菌体检测，并以不加药管为对照，根据含药管和不含药管出现的噬菌斑情况并以不加药管为对照，根据含药管和不含药管出现的噬菌斑情况并以不加药管为对照，根据含药管和不含药管出现的噬菌斑情况并以不加药管为对照，根据含药管和不含药管出现的噬菌斑情况即可判断细菌的耐药性。即可判断细菌的耐药性。即可判断细菌的耐药性。即可判断细菌的耐药性。34检测原理分枝杆菌噬菌体能感染活的分枝杆菌噬菌体噬菌体 病毒病毒核酸衣壳只能在活的易感細胞內生長只能在活的易感細胞內生長溶原性感染和溶菌性感染溶原性感染和溶菌性感染35噬菌体病毒核酸衣壳只能在活的易感細胞 特异性噬菌体识别,并与之结合36特异性噬菌体识别,并与之结合36噬菌体进入细胞,并在其内扩增;同时生产蛋白外壳,开始产生新的病毒颗粒37噬菌体进入细胞,并在其内扩增;同时生产蛋白外壳,开始产生新的添加特异性杀病毒剂去除所有胞外的噬菌体,胞内噬菌体不受损伤。38添加特异性杀病毒剂去除所有胞外的噬菌体,胞内噬菌体不受损伤。终止杀病毒反应，添加非致病性，快生长分枝杆菌（敏感细胞）39终止杀病毒反应，添加非致病性，快生长分枝杆菌（敏感细胞）39结核分枝杆菌破裂，释放噬菌体。40结核分枝杆菌破裂，释放噬菌体。40细胞周围的敏感细胞，并在其胞内增殖41细胞周围的敏感细胞，并在其胞内增殖41经过多个“感染增殖细胞消融”循环，在琼脂培养基中的菌苔上形成肉眼可见，清晰的噬菌斑42经过多个“感染增殖细胞消融”循环，在琼脂培养基中的菌苔上4343结核分枝杆菌杀病毒剂杀灭未感染的噬菌体敏感细胞敏感细胞敏感细胞敏感细胞裂解,释放出来的噬菌体感染敏感细胞噬菌体感染结核分枝杆菌产生噬菌斑 先以特异性噬菌体感染、裂解标本中的结核分枝杆菌，再用杀病毒剂清除所有未感染的噬菌体，而结核分枝杆菌胞内的噬菌体继续扩增，进而裂解细胞，释放噬菌体。裂解释放的噬菌体感染随即添加的敏感细胞，在其胞内扩增并裂解敏感细胞，敏感细胞菌苔上肉眼可见的噬菌斑。如待检标本不含结核分枝杆菌，噬菌体被杀病毒剂完全清除，故无噬菌体感染敏感细胞，敏感细胞菌苔上无噬菌斑出现。44结核分枝杆菌杀病毒剂杀灭未感染的噬菌体敏感细胞敏感细胞敏感细质控 阳性对照 个噬菌斑 阴性对照 个噬菌斑结果判断标准标本 阳性结果 个噬菌斑 阴性结果 个噬菌斑阴性：无噬菌斑阳性：可数噬菌斑阳性：噬菌斑部分融合阳性：噬菌斑完全融合45质控结果判断标准标本阴性：阳性：阳性：阳性：45适用范围可检测痰液、胸水、腹水、脑脊液、尿、骨髓等多种标本用于结核病的实验诊断抗痨治疗效果的评价尤其是初诊病人的鉴别诊断用于结核菌耐药性的快速检测用于高危人群的鉴别诊断 46适用范围可检测痰液、胸水、腹水、脑脊液、尿、骨髓等多种标本F药敏试验药敏试验47药敏试验47 n M.tb bacillus Sensor cellSensor cellSensor cellSensor cellSensor cell指示细胞指示细胞指示细胞指示细胞指示细胞l 室温分钟 小时小时小时小时加入杀毒剂加入杀毒剂加入培养基和指示细胞加入培养基和指示细胞药物细菌药物细菌小时小时加入噬菌体加入噬菌体48 敏感株结果敏感株结果 无 含49敏感株结果无耐药株结果 无 含 50耐药株结果无含50上上上上 海海海海 市市市市 结结结结 核核核核 （肺）（肺）（肺）（肺）重重重重 点点点点 实实实实 验验验验 室室室室方法评价优点l l快速：小时快速：小时l l比较灵敏：条比较灵敏：条l l检测活菌：检测活菌：l l相对定量：相对定量：l l安全：安全：51上海市结核（肺）重点实验上上上上 海海海海 市市市市 结结结结 核核核核 （肺）（肺）（肺）（肺）重重重重 点点点点 实实实实 验验验验 室室室室 方法评价缺点方法评价缺点l l操作步骤多操作步骤多l l影响因素多影响因素多l l有假阳性和假阴性有假阳性和假阴性l l 假阴性率假阴性率假阴性率假阴性率假阳性率假阳性率假阳性率假阳性率52上海市结核（肺）重点实验上上上上 海海海海 市市市市 结结结结 核核核核 （肺）（肺）（肺）（肺）重重重重 点点点点 实实实实 验验验验 室室室室假阳性和假阴性原因假阳性和假阴性原因l l噬菌体的交叉感染噬菌体的交叉感染噬菌体的交叉感染噬菌体的交叉感染l l 种检测结果阳性种检测结果阳性种检测结果阳性种检测结果阳性l l （偶然、胞内、金色、丁酸、耻垢、草（偶然、胞内、金色、丁酸、耻垢、草（偶然、胞内、金色、丁酸、耻垢、草（偶然、胞内、金色、丁酸、耻垢、草分枝）分枝）分枝）分枝）l l操作因素对结果的影响操作因素对结果的影响操作因素对结果的影响操作因素对结果的影响l l 53上海市结核（肺）重点实验辅助诊断一、免疫学诊断方法二、血清学诊断三、酶学诊断54辅助诊断一、免疫学诊断方法54一、免疫学诊断方法一、免疫学诊断方法l皮试，用于鉴别诊断有参考意义。皮试，用于鉴别诊断有参考意义。l细胞亚群和一些细胞因子：、细胞亚群和一些细胞因子：、()、干扰、干扰素、肿瘤坏死因子等检查，以了解细胞免素、肿瘤坏死因子等检查，以了解细胞免疫状态，或作为考核指标前后对比。疫状态，或作为考核指标前后对比。55一、免疫学诊断方法皮试，用于鉴别诊断有参考意义。55二二.血清学诊断结核抗体检测血清学诊断结核抗体检测()结明试验()，分枝杆菌细胞壁富含脂阿拉伯甘露聚糖()，为一种抗原，能诱发宿主产生相应抗体，激发迟发超敏反应，不提供保护性免疫。有试剂盒供应，操作方便，敏感性左右，特异性左右，适用于菌阴肺结核病和肺外结核病；菌阴肺结核病如果证明试验阳性，示有活动性，可给予化疗。本法分钟可出结果。()金免疫斑点渗滤试验(，金标法)，用 作为抗原，产生与同样结果，国产、价格较廉。()蛋白质抗原，是主要免疫原，用以区别结核感染还是感染，正在研究中。56二.血清学诊断结核抗体检测()结明试验()，分枝杆菌细胞壁测定方法：测定方法：酶联免疫吸附试验（）酶联免疫吸附试验（）免疫渗滤试验（）免疫渗滤试验（）免疫层析试验（）免疫层析试验（）57测定方法：57 假阳性率假阳性率 假阴性率假阴性率5858结核抗体检测临床应用结核抗体检测临床应用）辅助诊断结核病）作鉴别诊断）用于疗效观察）在结核病流行病学调查中的应用）作为器官移植并发结核感染的监测指标 59结核抗体检测临床应用59 结核抗体检测优点：结核抗体检测优点：简便、快速简便、快速 分钟分钟 灵敏灵敏 阳性率阳性率 特异特异 特异性特异性 应用面广应用面广 各部位结核各部位结核60结核抗体检测优点：60有一定的假阳性和假阴性有一定的假阳性和假阴性结果判断带有主观性结果判断带有主观性缺乏有效的质控手段缺乏有效的质控手段 存在的问题存在的问题:61存在的问题:61 （二）噬菌体生物扩增法（）（二）噬菌体生物扩增法（）该法建立，并用于结核该法建立，并用于结核分枝杆菌耐药性测定。近年来分枝杆菌耐药性测定。近年来进展很快。近来用于诊断研究进展很快。近来用于诊断研究报道不少。报道不少。上上上上 海海海海 市市市市 结结结结 核核核核 （肺）（肺）（肺）（肺）重重重重 点点点点 实实实实 验验验验 室室室室62（二）噬菌体生物扩增法（）该法建立，并用于结核上谢谢！谢谢！63谢谢！63