氨基酸代谢生物化学教学课件

生物化学 多媒体课件试用版 第七章 氨基酸代谢 （Amino Acid Metabolism）Biochemistry DepartmentDepartment of Basic Medical SciencesHangzhou Normal UniversityGuyisheng第一节 蛋白质的营养作用一、蛋白质营养的重要性u维持组织细胞的生长、修补和更新u参与多种生命活动u氧化供能（17.2kJ/g 或 4.1kcal/g）2024/7/22Department of Biochemistry二、氮平衡（nitrogen balance）u概念、意义u三种类型 摄入氮 排出氮u总平衡（正常成人）u正平衡（儿童、孕妇等）u负平衡（饥饿、消耗性疾病）2024/7/23Department of Biochemistryu最低需要量：3050g/天u营养学会推荐：80g/天四、蛋白质的营养价值u必需氨基酸（essential amino acid）u概念 种类u营养价值的标准u蛋白质互补三、蛋白质的生理需要量2024/7/24Department of Biochemistry第二节 蛋白质的消化、吸收与腐败一、蛋白质的消化（一）胃中的消化u胃蛋白酶原的激活u胃酸激活 自身激活u胃蛋白酶的作用u分解蛋白质（多肽、少量氨基酸）u凝乳作用（乳儿重要）胃蛋白酶原胃蛋白酶HCl(+)(+)2024/7/25Department of Biochemistry（二）小肠中的消化u胰酶（胰液中）u内肽酶：胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶等u外肽酶：羧基肽酶A、羧基肽酶B等 产物：氨基酸、寡肽 酶原激活（肠激酶激活、自身激活）、意义u寡肽酶（小肠粘膜细胞刷状缘、胞液中）u氨基肽酶、二肽酶等 产物：氨基酸水解作用激活图专一性胰酶激活2024/7/26Department of Biochemistry二、氨基酸的吸收（一）氨基酸吸收载体u载体蛋白（carrier protein）u中性氨基酸载体（为主）u碱性氨基酸载体u酸性氨基酸载体u亚氨基酸和甘氨酸载体u氨基酸载体u与氨基酸、Na+组成三联体部位：小肠为主（小肠粘膜细胞、肾小管上皮细胞、肌细胞等）主动吸收：消耗ATP图示2024/7/27Department of Biochemistry（二）r-谷氨酰基循环（r-glutamyl cycle）u通过谷胱甘肽起作用u分布小肠粘膜细胞、肾小管细胞、脑细胞等u消耗能量（3分子ATP）u关键酶：r-谷氨酰基转移酶（三）肽的吸收u耗能的主动转运过程u吸收二肽、三肽（需载体蛋白）r-GT2024/7/28Department of Biochemistry三、蛋白质的腐败作用（putrefaction）u概念u肠道细菌对蛋白质及其消化产物所起的作用称为腐败作用u生成物质：胺类、氨、其他有害物等u去路：u随粪便排出（大部分）u吸收，经肝转化解毒（小部分）u细菌可产生少量脂酸、维生素等2024/7/29Department of Biochemistryu氨基酸脱羧基生成胺类，如：组氨酸组胺 赖氨酸尸胺 色氨酸色胺 酪氨酸酪胺 注：假神经递质与肝昏迷有关（二）氨的生成u氨基酸脱氨基u尿素水解（三）其他有害物质的生成u苯酚、吲哚、甲基吲哚、H2S等产生的氨可吸收入肝，降低肠道pH（酸性），氨吸收减少（一）胺类的生成假递质2024/7/210Department of Biochemistry第三节 氨基酸的一般代谢一、体内蛋白质的分解u降解量：每天12u蛋白质寿命：半寿期表示（t1/2）（half-life）肝内蛋白的t1/2：18天 血浆蛋白的t1/2：10天 结缔组织蛋白的t1/2：180天u有关酶类：蛋白酶、肽酶等2024/7/211Department of Biochemistry蛋白质降解途径u溶酶体：不依赖 ATP 的过程u降解外来蛋白质、膜蛋白、长寿命胞内蛋白质u蛋白酶体：依赖 ATP 和泛素的过程u蛋白酶体存在于胞液和细胞核u降解异常蛋白、短寿命蛋白u泛素：76个氨基酸残基（8.5kD）泛素与蛋白质结合泛素化蛋白酶体参与蛋白质降解 u泛素化2024/7/212Department of Biochemistryu氨基酸的来源u食物蛋白质消化吸收u组织蛋白质分解u体内合成（部分非必需氨基酸）u氨基酸的代谢去路u合成蛋白质u分解代谢u生成其他含氮化合物脱氨基（生成NH3、-酮酸）（为主）脱羧基（生成胺、CO2）二、氨基酸代谢库（metabolic pool）2024/7/213Department of Biochemistry氨基酸代谢库图示脱脱氨氨基基作用作用NH3-酮酸酮酸非必需氨基酸非必需氨基酸CO2+H2O糖或脂类糖或脂类其它含氮物质其它含氮物质谷氨酰胺谷氨酰胺尿素尿素胺类胺类+CO2脱羧基作用脱羧基作用嘌嘌呤呤、嘧嘧啶啶、肌肌酸酸等含氮化合物等含氮化合物代谢转变代谢转变合成合成分解分解消化吸收消化吸收食食物物蛋蛋白白质质组组织织蛋蛋白白质质血液血液氨基氨基酸酸组织组织氨基氨基酸酸氨氨基基酸酸代代谢谢库库2024/7/214Department of Biochemistry三、氨基酸的脱氨基作用u脱氨基方式u转氨基u氧化脱氨基u联合脱氨基（主要方式）u非氧化脱氨基u脱氨基的产物：氨、-酮酸u氨基酸分解代谢的主要途径2024/7/215Department of Biochemistry（一）转氨基作用（transamination）u概念、基本过程u在转氨酶的催化下，某一氨基酸的氨基转移到另一种-酮酸的酮基上，生成相应的氨基酸；原来的氨基酸则转变为-酮酸u反应可逆，平衡常数接近1u大多数氨基酸都可以参与转氨基（赖氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸例外）u以L-谷氨酸和-酮酸之间的转氨基最重要图示2024/7/216Department of Biochemistry转氨基作用的机制u转氨酶（aminotransferase）及临床意义u谷丙转氨酶（GPT）（丙氨酸转氨酶 ALT）u谷草转氨酶（GOT）（天冬氨酸转氨酶 AST）u转氨基机制u辅酶：磷酸吡哆醛（及磷酸吡哆胺）（含VitB6）u生理作用与局限性机制分布表2024/7/217Department of Biochemistry（二）氧化脱氨基作用 （L-谷氨酸氧化脱氨基作用）u多种氨基酸氧化酶（D型、L型）uL-谷氨酸脱氢酶催化的氧化脱氨基u概念与基本过程 在谷氨酸脱氢酶的催化下，谷氨酸脱氢生成亚谷氨酸，然后水解生成-酮戊二酸和氨u辅酶：NAD+（或NADP+）u生理作用与局限性谷氨酸氧化酶2024/7/218Department of Biochemistry（三）联合脱氨基作用u1、转氨基与L-谷氨酸脱氢酶的联合脱氨基u2、嘌呤核苷酸循环（purine nucleotide cycle）联合脱氨基u概念与基本过程 氨基酸首先与-酮戊二酸在转氨酶作用下生成-酮酸和谷氨酸，谷氨酸再经L-谷氨酸脱氢酶作用，脱氨基生成-酮戊二酸u生理作用 （1）体内脱氨基的主要方式 （2）反应可逆，是合成非必需氨基酸的主要途径2024/7/219Department of Biochemistry嘌呤核苷酸循环（purine nucleotide cycle）u原因：u骨骼肌、心肌中谷氨酸脱氢酶活性低u生理作用（重要性）u心肌、骨骼肌中氨基酸脱氨基的主要方式u反应过程（另一种形式的联合脱氨基作用）核苷酸循环附：非氧化脱氨基2024/7/220Department of Biochemistry四、氨基酸碳链骨架(-酮酸)的代谢u（一）氨基化生成非必需氨基酸u（二）转变为糖及脂类u同位素标记实验的证明u生糖氨基酸、生酮氨基酸、生糖兼生酮氨基酸u酮酸的代谢中间物质u丙酮酸、三羧酸循环中间物等u乙酰CoA、乙酰乙酰CoA等u（三）氧化供能分类表2024/7/221Department of Biochemistry第四节 氨的代谢u概况：氨的毒性u一、氨的来源u氨基酸分解代谢产NH3（主要来源）胺类分解、核苷酸分解等（少量）（RCH2NH2RCHO+NH3）u肠道吸收的NH3（血氨的重要来源）u肠道细菌分解氨基酸、尿素等uNH3的吸收与肠道pH有关u肾小管上皮细胞产生的NH3谷氨酰胺谷氨酸NH3谷氨酰胺酶NH4+排出H+吸收入血OH-2024/7/222Department of Biochemistry二、氨的去路1、合成尿素（主要去路）2、合成谷氨酰胺（氨的转运形式之一，运至肾脏以铵盐形式排出）（NH3+H+NH4+）3、合成某些非必需氨基酸（以及嘌呤、嘧啶）等（通过脱氨基作用的逆过程）2024/7/223Department of Biochemistry三、氨的转运u（一）丙氨酸葡萄糖循环(alanine-glucose cycle)u（二）谷氨酰胺的运氨作用丙葡循环u基本过程uNH3与丙酮酸生成丙氨酸（肌）u丙氨酸运至肝脏（血液）u丙氨酸脱下NH3，生成丙酮酸（NH3合成尿素）（肝）u丙酮酸异生成葡萄糖，运至肌组织，再生成丙酮酸u肌肉中的氨以丙氨酸形式运至肝，肝又为肌组织提供葡萄糖2024/7/224Department of Biochemistry（二）谷氨酰胺生成以及运氨作用u脑、骨骼肌向肝、肾转运NH3u谷氨酰胺的生成与分解u谷氨酰胺的作用：u氨的解毒产物u氨的储存和运输形式u合成蛋白质u参与嘌呤、嘧啶等的合成谷酰生成附：天冬酰胺谷氨酰胺生成是体内NH3的重要去路之一2024/7/225Department of Biochemistry四、尿素的生成u尿素合成的器官：肝（为主）（实验）u鸟氨酸循环学说（ornithine cycle）（urea cycle）（Krebs-Henseleit cycle）u（肝薄片培养与同位素标记实验）u鸟氨酸循环的基本过程u基本反应式 2NH3+CO2NH2-CO-NH2（尿素）2024/7/226Department of Biochemistry鸟氨酸循环的具体步骤u细胞定位：线粒体、胞液u步骤：u1、氨基甲酰磷酸的合成（线粒体）u2、瓜氨酸的合成（线粒体）u3、精氨酸代琥珀酸的合成（胞液）u4、精氨酸的合成（胞液）u5、精氨酸水解生成尿素（胞液）全过程2步骤2024/7/227Department of Biochemistry尿素合成的总反应式u2个氮原子直接或间接来自氨基酸脱氨基u消耗4个高能键（表面看3分子ATP）NH2|CO|NH2u基本反应式：2NH3+CO2+3ATP+3H2O +2ADP+AMP+4Pi循环联系2024/7/228Department of Biochemistry尿素合成的有关问题1、氨基甲酰磷酸合成酶、的区别uCPS：线粒体 尿素合成 细胞分化的指标uCPS：胞液 嘧啶合成 细胞增殖的指标2、肝细胞再生 再生完成 鸟氨酸氨基甲酰转移酶 活性 活性 天冬氨酸氨基甲酰转移酶 活性 活性 嘧啶合成 尿素合成2024/7/229Department of Biochemistry尿素合成的调节u食物蛋白质的影响（促进作用）uCPS的调节（AGA、精氨酸的促进作用）u精氨酸代琥珀酸合成酶（限速酶）的调节高血氨症与氨中毒血氨酮戊二酸谷氨酸谷氨酰胺NH3NH3酮戊二酸三羧酸循环2024/7/230Department of Biochemistry第五节 个别氨基酸的代谢u一、脱羧基作用（decarboxylation）u产物；胺类、CO2u意义：生成特殊的胺类，具有重要的生理功能u酶：氨基酸脱羧酶 u辅酶：磷酸吡哆醛（含Vit B6）2024/7/231Department of Biochemistry代谢途径：氨基酸（部分）发挥生理作用醛类胺氧化酶O羧酸O胺氨基酸脱羧酶磷酸吡多醛CO2CO2+H2OO2024/7/232Department of Biochemistry（一）r-氨基丁酸（r-aminobutyric acid,GABA）u谷氨酸脱羧酶在脑、肾组织中活性较高uGABA是抑制性神经递质2024/7/233Department of Biochemistry（二）牛磺酸（taurine）u牛磺酸是结合胆汁酸的成分u脑内含牛磺酸也较多2024/7/234Department of Biochemistry（三）组胺（histamine）u是强烈的血管扩张剂，与创伤性休克、炎症等有关u肥大细胞中含量高（乳腺、肺、肝、肌、胃粘膜等）u能刺激胃蛋白酶及胃酸分泌2024/7/235Department of Biochemistry（四）5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）u脑内的5-HT，抑制性神经递质u外周的5-HT，具有缩血管作用u类癌患者的尿中5-羟吲哚乙酸（5-HT的代谢产物）排出增多5-羟色胺5-羟色醛5-羟吲哚乙酸单胺氧化酶OO2024/7/236Department of Biochemistry（五）多胺（polyamines）u包括腐胺、精脒、精胺等u以鸟氨酸、SAM为原料，鸟氨酸脱羧酶是限速酶u精脒、精胺是调节细胞生长的重要物质（稳定细胞结构，增强核酸、蛋白质合成）u临床意义（癌瘤病人的血、尿中多胺含量测定）多胺2024/7/237Department of Biochemistry二、一碳单位的代谢u一碳单位（one carbor unit）概念某些氨基酸分解代谢过程中产生的含一个碳原子的基团u种类；甲基、甲烯基（亚甲基）、甲炔基（次甲基）、甲酰基、亚氨甲基u辅酶（运载体）：四氢叶酸（FH4）四氢叶酸2024/7/238Department of Biochemistry一碳单位的生成与互变u主要来源：丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、色氨酸 代谢一碳单位的生理意义u嘌呤、嘧啶合成的原料（与核酸、蛋白质相关）u联系氨基酸代谢与核酸代谢u一碳单位代谢障碍，可引起巨幼红细胞贫血u磺胺药、甲氨蝶呤等药物干扰叶酸、四氢叶酸的合成，发挥抗菌、抗肿瘤作用生成与互变一碳生成2024/7/239Department of Biochemistry三、含硫氨基酸代谢u包括甲硫氨酸、半胱氨酸和胱氨酸u（一）甲硫氨酸（蛋氨酸）的代谢1、S-腺苷甲硫氨酸（SAM）形成与转甲基作用uSAM：活性甲硫氨酸 体内最重要的甲基供体参与：肾上腺素、肌酸、肉碱、胆碱等的合成 DNA、RNA的甲基化反应SAM生成2024/7/240Department of Biochemistry2、甲硫氨酸循环（methionine cycle）u概念与基本过程：u（与一碳单位代谢相联系）u生理意义：u利用N5-CH3-FH4供给甲基，通过SAM，进行广泛的甲基化反应蛋氨酸循环附：同型半胱氨酸能损伤血管内皮，与粥样硬化有关u使FH4再生u生成甲硫氨酸转甲基酶催化，Vit B12参与2024/7/241Department of Biochemistry3、肌酸的合成u合成器官：肝（为主），还有肌、脑u合成原料：甘氨酸、精氨酸、SAMu肌酸激酶（CPK）：三种同工酶uMM（骨骼肌）、MB（心肌）、BB（脑）（心肌梗塞，血中MB升高）u肌酸代谢的意义：u磷酸肌酸：能量贮存u肌酐测定：检查肾功能肌酸合成2024/7/242Department of Biochemistry（二）半胱氨酸和胱氨酸的代谢u半胱氨酸和胱氨酸两者互变u维持蛋白质结构（含巯基，形成二硫键）谷胱甘肽巯基酶 u巯基酶的活性（毒物，如重金属盐）u谷胱甘肽合成（GSH）及功用2024/7/243Department of BiochemistryuPAPS的功能（转硫酸基作用）u参与生物转化u参与硫酸软骨素、硫酸角质素等合成u含硫氨基酸 H2S H2SO4 PAPS尿排出（三）硫酸根的代谢uPAPS（活性硫酸根）的生成2024/7/244Department of Biochemistry儿茶酚胺分解代谢遗传病四、芳香族氨基酸的代谢u1、合成儿茶酚胺类u2、合成黑色素、甲状腺激素等u3、分解代谢：生成延胡索酸、乙酰乙酸u4、代谢缺陷（白化病、苯丙酮酸尿症等）总图u（一）苯丙氨酸和酪氨酸的代谢苯丙氨酸羟化生成酪氨酸2024/7/245Department of Biochemistry（二）色氨酸的代谢u1、生成5-羟色胺（5-HT）u2、生成一碳单位u3、生成尼克酰胺（Vit PP）等u4、分解代谢：生成丙酮酸、乙酰乙酰CoA代谢图2024/7/246Department of Biochemistry五、支链氨基酸的代谢u附表：氨基酸的衍生物相应的酮酸亮氨酸异亮氨酸缬氨酸转氨酶乙酰CoA+琥珀酸单酰CoA乙酰CoA+乙酰乙酰CoA琥珀酸单酰CoAu主要在骨骼肌中进行衍生物2024/7/247Department of Biochemistry一氧化氮（NO）生成uNO：参与信号转导u神经递质、血液调节物质u激活可溶性鸟苷酸环化酶受体u通过cGMP蛋白激酶G信息转导途径精氨酸鸟氨酸NO一氧化氮合酶（NOS）2024/7/248Department of Biochemistry蛋白水解酶的激活示意图2024/7/249Department of Biochemistry胰蛋白酶胰酶的激活图解胰蛋白酶原糜蛋白酶弹性蛋白酶原弹性蛋白酶羧基肽酶（A及B）糜蛋白酶原羧基肽酶原（A及B）肠激酶(+)(+)(+)(+)2024/7/250Department of Biochemistry蛋白质多肽链蛋白水解酶作用示意图氨基酸 寡肽氨基酸二肽酶（寡肽酶）氨基肽酶羧基肽酶内肽酶（胰蛋白酶等）2024/7/251Department of Biochemistry蛋白水解酶作用专一性表2024/7/252Department of Biochemistry氨基酸的吸收示意图载体载体2024/7/253Department of Biochemistryr-谷氨酰基循环2024/7/254Department of Biochemistry假神经递质的生成HOCHOHCH2NH2OH去甲肾上腺素HOCH2CH2NH2OH多巴胺脱羧CH2CHNH2COOHOH酪氨酸CH2CH2NH2OH酪胺羟化CHOHCH2NH2OH羟酪胺CH2CHNH2COOH苯丙氨酸脱羧CH2CH2NH2苯乙胺羟化CHOHCH2NH2苯乙醇胺2024/7/255Department of Biochemistry 依赖ATP和泛素 降解异常蛋白和短寿蛋白质n 泛素泛素(ubiquitinubiquitin)76个氨基酸组成的多肽(8.5kD)普遍存在于真核生物而得名 一级结构高度保守蛋白质在蛋白酶体被降解蛋白质在蛋白酶体被降解2024/7/256Department of Biochemistry泛素与选择性被降解蛋白质形成共价连接，并使其激活,即泛素化，包括三种酶参与的3步反应，并需消耗ATP。蛋白酶体(proteasome)对泛素化蛋白质的降解。n 泛素介导的蛋白质降解过程泛素介导的蛋白质降解过程2024/7/257Department of Biochemistryn泛素化泛素化E1：泛素激活酶泛素激活酶E2：泛素结合酶泛素结合酶E3：泛素蛋白连接酶泛素蛋白连接酶UB：泛素泛素Pr：被降解蛋白质被降解蛋白质UBCO-O+HS-E1ATPAMP+PPiUBCOS-E1HS-E2HS-E1UBCOS-E1UBCOS-E2PrHS-E2E3UBCOS-E2PrUBCONH2024/7/258Department of Biochemistry蛋白酶体存在于细胞核和胞浆内，主要降解异常蛋白质和短寿蛋白质。2626S S蛋白蛋白质酶体质酶体 2020S S的核心的核心颗粒颗粒(CP)CP)1919S S的调节颗粒的调节颗粒(RP):RP):18 18个亚基个亚基,6 6个亚基具有个亚基具有ATPATP酶活性酶活性2 2个个环：环：7 7个个亚基亚基2 2个个环：环：7 7个个亚基亚基2024/7/259Department of Biochemistry2024/7/260Department of Biochemistry泛素介导的蛋白质降解过程图示泛素介导的蛋白质降解过程图示2024/7/261Department of BiochemistryALT（GPT）和AST（GOT）催化的反应2024/7/262Department of Biochemistry转氨酶的分布2024/7/263Department of Biochemistry转氨基作用的机制2024/7/264Department of BiochemistryL-氨基酸氧化酶催化脱氨基存在于肝、肾组织2024/7/265Department of BiochemistryL-谷氨酸氧化脱氨基作用图解u谷氨酸脱氢酶：变构酶（6个相同亚基）uGTP、ATP 变构抑制剂uGDP、ADP 变构激活剂2024/7/266Department of Biochemistry转氨基与L-谷氨酸脱氢酶的联合脱氨基（图解）2024/7/267Department of Biochemistry嘌呤核苷酸循环（图解）2024/7/268Department of Biochemistry（四）非氧化脱氨基作用u脱水脱氨基u丝氨酸丙酮酸NH3u脱硫化氢脱氨基u半胱氨酸丙酮酸NH3u直接脱氨基u天冬氨酸延胡索酸NH32024/7/269Department of Biochemistry生糖、生酮氨基酸2024/7/270Department of Biochemistry丙氨酸葡萄糖循环（图解）2024/7/271Department of Biochemistry谷氨酰胺的生成与分解脑、肌脑、肌肝、肾肝、肾2024/7/272Department of Biochemistry天冬酰胺的生成及意义u天冬酰胺的生成：（谷氨酰胺提供酰胺基）天冬氨酸谷氨酰胺天冬酰胺谷氨酸u天冬酰胺的水解：u天冬酰胺酶的应用及意义2024/7/273Department of Biochemistry鸟氨酸循环的步骤（1）氨基甲酰磷酸氨基甲酰磷酸氨基甲酰磷酸氨基甲酰磷酸2024/7/274Department of Biochemistry鸟氨酸循环的步骤（2）2024/7/275Department of Biochemistry鸟氨酸循环全过程2024/7/276Department of Biochemistry鸟氨酸循环全过程（2）2024/7/277Department of Biochemistry鸟氨酸循环与三羧酸循环的联系2024/7/278Department of Biochemistry多胺的合成（图解）鸟氨酸鸟氨酸脱羧酶脱羧酶2024/7/279Department of Biochemistry四氢叶酸的生成与结构2024/7/280Department of Biochemistry一碳单位与四氢叶酸2024/7/281Department of Biochemistry一碳单位与氨基酸代谢2024/7/282Department of Biochemistry一碳单位与氨基酸代谢(2)2024/7/283Department of Biochemistry一碳单位的生成与互变2024/7/284Department of BiochemistrySAM的生成与甲基化反应（SAM）（SAM）2024/7/285Department of Biochemistry甲硫氨酸循环转甲基酶转甲基酶2024/7/286Department of Biochemistry附：同型半胱氨酸的代谢去路同型半胱氨酸胱硫脒胱硫脒合酶丝氨酸u（甲硫氨酸是生糖氨基酸）半胱氨酸酮丁酸氨基酸代谢琥珀酸单酰CoA三羧酸循环（糖代谢途径）2024/7/287Department of Biochemistry肌酸合成与代谢图示2024/7/288Department of Biochemistry巯基酶的抑制及复活2024/7/289Department of Biochemistry等等谷胱甘肽及其功能u由谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸合成u含巯基（功能基团）u具有多种生物学功能u保护酶分子中的巯基u具有抗氧化作用u参与生物转化谷甘半胱2024/7/290Department of Biochemistry苯丙氨酸与酪氨酸代谢（图解）2024/7/291Department of Biochemistry儿茶酚胺生成神经组织、肾上腺髓质中2024/7/292Department of Biochemistry黑色素生成黑色素细胞中2024/7/293Department of Biochemistry酪氨酸分解代谢2024/7/294Department of Biochemistry氨基酸代谢缺陷病2024/7/295Department of Biochemistry色氨酸代谢途径2024/7/296Department of Biochemistry氨基酸衍生的重要含氮化合物2024/7/297Department of Biochemistry Good by!2024/7/298Department of Biochemistry谢谢！谢谢！99