酶免疫测试EIA技术医学知识培训ppt课件

酶免疫测试EIA技术医学知识酶免疫测试EIA技术医学知识1 酶免疫分析技术（enzyme immunoassay,EIA）是继荧光免疫技术和放射免疫技术之后建立的一种非放射性免疫技术，是将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用相结合，发展建立的一种非放射性标记的免疫性标记分析方法。酶免疫分析系统则属于开放式的，符合标准的各种品牌的ELISA试剂盒均可应用，且有灵敏度高、特异性强、酶免疫试剂的性质比较稳定、操作方法简便、快速、无放射性污染以及应用范围广等很多优点。2 2酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识 酶免疫分析技术（enzyme immunoa2酶免疫测试EIA技术医学知识培训ppt课件3二、二、ELISAELISA技术方法与原理技术方法与原理（1 1）ELISAELISA特特点点：在在固固相相表表面面组组装装免免疫疫活活性性物物质质形形成成 免免疫疫吸吸附附剂剂；酶酶标标记记免免疫疫活活性性物物质质，进进行行信信号号放放大大；有有二二步步温温育育反反应应二二次次洗洗涤涤过过程程；灵敏度特异性相对较高。灵敏度特异性相对较高。（2 2）ELISAELISA局局限限性性：只只能能检检测测到到ngng水水平平，精精密密度度差差（批批内内CV15-20%CV15-20%）；线线性性范范围围窄窄（一一个个数数量级）。量级）。（3 3）根据检测目的和操作步骤不同有三种基本方）根据检测目的和操作步骤不同有三种基本方法：双抗体（原）夹心法法：双抗体（原）夹心法 ；间接法；竞争法；间接法；竞争法 4 4酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识二、ELISA技术方法与原理（1）ELISA特点：在固相表4ELISA测试原理 1）将链霉亲合素包被的聚苯乙烯塑料试管安置固定。2）将生物素标记的特异性抗体和待测抗原加入链霉亲合素包被小管内，经温育，生物素和亲和素发生连接，待测抗原和特异性抗体发生结合，形成固相包被亲合素-生物素-特异性抗体-待测抗原复合物，然后进行洗涤，除去未结合的抗原和生物素标记抗体。3）加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的特异性抗体(酶标抗体)，经温育形成固相包被链酶亲合素-生物素-特异性抗体-待测抗原-酶标抗体复合物，再次进行洗涤，除去多余的酶标抗体。4）加入底物ABTS和H2O2，经温育，ABTS在辣根过氧化物酶的作用下显色，然后经波长450nm的光度计测定获得A值，从标准曲线上计算出待测抗原的含量。5 5酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识ELISA测试原理 1）将链霉亲合素包被的聚苯乙烯塑料试管安5三、自动化酶标仪基本工作原理三、自动化酶标仪基本工作原理 光源 光路 微孔板触摸屏电源 单 A/D转换 程控放大器 多路开关 光电检测显示器 片打印机 步进电机驱动 步进电机 送样机构电源 机 图2 工作原理方框图电源6 6酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识三、自动化酶标仪基本工作原理 电源6酶免疫测试EIA技术医学6四、四、ELISAELISA操作步操作步（1）试剂的准备（2）加样（3）保温 使用恒温水箱 使用保温箱（4）洗涤（5）比色7 7酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识四、ELISA操作步（1）试剂的准备7酶免疫测试EIA技术7五、五、ELISA质量控制质量控制（一）的测试前标本的采集和保存（一）的测试前标本的采集和保存（1）可作标本广泛，体液（如血清，血浆，各种积液），分泌物（如唾液）和排泻物（如粪便，尿液）均可。（2）标本采集时应尽量避免溶血，否则造成假阳性；长菌的标本同样的道理易产生假阳性。（3）抗凝不完全的标本因纤维蛋白元的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝剂。（4）标本保存：血清置4冰箱5天内完成测试；一周以上则要-20冰冻保存，融解时应上下颠倒充分混匀。（5）ELISA的灵敏度1ng/ml水平上,标本间的污染要尽量避免，尤其不应与生化试验用同一管标本，最起码应先做免疫后做生化。8 8酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识五、ELISA质量控制（一）的测试前标本的采集和保存（8（二）仪器质控（二）仪器质控（1）移液器：ELISA加样量小（5-100l），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查，一般应在10%以内；（2）水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有1的误差；（3）洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；（4）酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。9 9酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识（二）仪器质控（1）移液器：ELISA加样量小（5-1009（三）分析中质控（三）分析中质控（1）加样（2）温育（3）洗涤（4）显色（5）酶标仪判读结果 1010酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识（三）分析中质控（1）加样10酶免疫测试EIA技术医学知识10六、六、ELISAELISA操作注意事项操作注意事项（1）测试之前，冰箱内试剂一定要复温（至室温），并检查是否已经变质，同时用双蒸水稀释浓缩的洗涤液和稀释液，若用不合格的蒸馏水则可使空白值增高。（2）微量加液器应注意保养并定期校正，否则结果误差较大，同时加样时不可出现气泡，以免反应物间不能充分混匀反应。（3）温育时要力求受热均匀，同时避免液体蒸发。（4）洗涤时力求次数足够，且避免形成气泡，否则洗涤不完全。（5）比色时反应管内不能留有气泡，管底不能存有水滴，否则出现较大误差。1111酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识六、ELISA操作注意事项（1）测试之前，冰箱内试剂一定要11七、影响七、影响ELLSAELLSA测试结果常见问测试结果常见问题原因及解决方法题原因及解决方法 1.选择试剂 2.加样 3.孵育 4.洗板 5.显色 6.终止 7.读板 1212酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识七、影响ELLSA测试结果常见问题原因及解决方法 1.选择试12八、八、RT-2100CRT-2100C型多功能酶标仪仪型多功能酶标仪仪器特点：器特点：1、RT-2100C可广泛应用于传染病、肿瘤标志物、血液病、艾滋病、内分泌障碍测定等临床论断领域。2、大屏幕汉化界面，利用触摸屏和笔作为输入方式，极大地方便了用户的操作输入。3、100个可编程的检验项目。4、多种定量、定性计算方法5、96孔可视化布板，空白位、对照位、样本位、标准品位任意设置，同一板上可同时进行最多12个项目的测试。6、8通道检测迅速准确(5秒/板)，测试前的震动混匀功能。1313酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识八、RT-2100C型多功能酶标仪仪器特点：1、RT-2137、大容量历史数据保存，最多可保存500个项目，1000个病人，10000条样本记录。8、形式多样的综合中文报告输出，支持多种品牌系列的外置打印机。9、强大的网络功能：可与医院内部计算机网络、质量监测中心及雷杜用户服务中心联网，为工作带来极大的便捷。10、配合使用雷杜酶标实验室管理系统，可以在联网计算机上进行数据管理和分析。11、辅助管理功能：内置科室数据库、医生数据库和系统日志数据库。1414酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识7、大容量历史数据保存，最多可保存500个项目，1000个病14九、九、RT-2100CRT-2100C型多功能酶标仪常用型多功能酶标仪常用测试项目测试项目（1 1）肝肝炎炎类类：甲甲肝肝抗抗体体IgMIgM、乙乙肝肝两两对对半半、丙丙、丁丁、戊戊、庚庚性性肝肝炎炎抗体等抗体等（2 2）传传染染病病类类：爱爱滋滋病病、衣衣原原体体、肺肺炎炎支支原原体体、腺腺病病毒毒、幽幽门门螺螺旋旋杆杆菌、腮腺炎、麻疹、水痘、百日咳杆菌、流行性出血热、狂犬病等。菌、腮腺炎、麻疹、水痘、百日咳杆菌、流行性出血热、狂犬病等。（3 3）肿肿瘤瘤标标志志物物类类：卵卵巢巢癌癌、乳乳腺腺癌癌、胃胃肠肠道道癌癌、癌癌胚胚抗抗原原、甲甲胎胎蛋蛋白、膀胱癌、铁蛋白等。白、膀胱癌、铁蛋白等。（4 4）内内分分泌泌类类：T T3 3、T T4 4、促促卵卵泡泡生生成成素素(FSH)(FSH)、黄黄体体生生成成素素(LH)(LH)、泌泌乳乳 素素(PRL)(PRL)、人人 绒绒 毛毛 促促 性性 腺腺 激激 素素(HCG)(HCG)、睾睾 酮酮(TESTO)(TESTO)、孕孕 酮酮(PROG)(PROG)、雌雌二二醇醇(E(E2 2)、雌雌三三醇醇(E(E3 3)、生生长长素素(HGH)(HGH)、促促甲甲状状腺腺素素(TSH)(TSH)、皮质醇或皮质酮、皮质醇或皮质酮(C)(C)、促红细胞生成素、促红细胞生成素(EPO)(EPO)等。等。（5 5）自自身身抗抗体体类类：ENAENA全全套套6 6项项筛筛选选、抗抗核核抗抗体体、抗抗SmSm抗抗体体、抗抗精精子子抗体、抗双链抗体、抗双链/单链单链DNADNA、红斑狼疮筛选等。、红斑狼疮筛选等。（6 6）TorchTorch类类、病病毒毒感感染染类类：弓弓形形虫虫、巨巨细细胞胞病病毒毒、风风疹疹病病毒毒、单单纯纯疱疹病毒等。疱疹病毒等。（7 7）细胞因子类：白细胞介素、可溶性）细胞因子类：白细胞介素、可溶性CDCD抗原。抗原。1515酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识九、RT-2100C型多功能酶标仪常用测试项目（1）肝炎类：15十、十、RT-2100CRT-2100C型酶标仪基本操型酶标仪基本操作步骤作步骤（1）开机，待机器自行检测稳定（2）项目设置：RT-2100C所有项目均由用户自行定义，最多允许设置100个项目。用户已经设置的项目均在窗口中列表显示，关机时自动保存。（3）样品测试（4）综合报告1616酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识十、RT-2100C型酶标仪基本操作步骤（1）开机，待机器自16实验操作项目：血清睾酮的定量测定1717酶免疫测试酶免疫测试EIAEIA技术医学知识技术医学知识实验操作项目：17酶免疫测试EIA技术医学知识17