疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移ppt课件

免疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移鉴定中的应用疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移1免疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移免疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移鉴定中的鉴定中的 前前 言言 白白血血病病和和肿肿瘤瘤细细胞胞骨骨髓髓转转移移的的诊诊断断主主要要靠靠骨骨髓髓细细胞胞病病理理学学诊诊断断。骨骨髓髓细细胞胞病病理理学学诊诊断断的的方方法法主主要要有有细细胞胞形形态态学学、细细胞胞化化学学染染色色、免免疫疫细细胞胞化化学学染染色色、细细胞胞遗遗传传学学以以及及分分子子生生物物学学。根根据据文文献献报报道道，根根据据细细胞胞形形态态对对白白血血病病进进行行分分型型的的准准确确性性是是64%77%。细细胞胞形形态态学学和和细细胞胞化化学学结结合合可可使使准准确确性性达达86%2，但但对对于于AML-M0、M7、M5a、MAL 鉴鉴定定有有一一定定的的困困难难。而而免免疫疫细胞化学染色在一定程度上可以解决此类问题。细胞化学染色在一定程度上可以解决此类问题。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移2 前前 言疫细胞化学染色在白血病免疫分型和言疫细胞化学染色在白血病免疫分型和 骨髓转移性癌（骨髓转移性癌（BMT）原发于非造血组织的恶性肿）原发于非造血组织的恶性肿瘤转移至骨髓的总称，骨髓不仅是造血组织恶性肿瘤瘤转移至骨髓的总称，骨髓不仅是造血组织恶性肿瘤的好发部位，同时又是其它恶性肿瘤常转移的部位。的好发部位，同时又是其它恶性肿瘤常转移的部位。肿瘤经血行或淋巴管转移到骨髓，有的能找到原发灶，肿瘤经血行或淋巴管转移到骨髓，有的能找到原发灶，而有的找不到原发灶，这就需要在骨髓内直接鉴定肿而有的找不到原发灶，这就需要在骨髓内直接鉴定肿瘤细胞。转移到骨髓内的癌细胞同血液系统的恶性肿瘤细胞。转移到骨髓内的癌细胞同血液系统的恶性肿瘤细胞及转移癌细胞之间，在形态上有一定的区别，瘤细胞及转移癌细胞之间，在形态上有一定的区别，而对于分化较差的癌细胞其形态较难辨认，易同急性而对于分化较差的癌细胞其形态较难辨认，易同急性淋巴细胞性白血病、淋巴瘤细胞以及其它的肿瘤细胞淋巴细胞性白血病、淋巴瘤细胞以及其它的肿瘤细胞如神经母细胞瘤、肾上腺母细胞瘤等相混淆不易鉴别。如神经母细胞瘤、肾上腺母细胞瘤等相混淆不易鉴别。转移到骨髓中的肿瘤细胞无组织结构特点，加之肿瘤转移到骨髓中的肿瘤细胞无组织结构特点，加之肿瘤细胞化学染色缺乏一定的特异性，使转移性肿瘤细胞细胞化学染色缺乏一定的特异性，使转移性肿瘤细胞的鉴定具有一定的困难，也需要用免疫细胞化学染色的鉴定具有一定的困难，也需要用免疫细胞化学染色来解决。来解决。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移3疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移3一、免疫细胞化学染色定义一、免疫细胞化学染色定义l 免疫细胞化学或称免疫组织化学是指用免免疫细胞化学或称免疫组织化学是指用免疫学原理，通过特异的抗原、抗体反应标记上疫学原理，通过特异的抗原、抗体反应标记上可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成份的方法。此法可以识别定位各种原或抗体成份的方法。此法可以识别定位各种细胞组织成份。如蛋白质、多肽、核酸、部分细胞组织成份。如蛋白质、多肽、核酸、部分类酯、多糖、肿瘤的标记物等。在光学显微镜、类酯、多糖、肿瘤的标记物等。在光学显微镜、荧光显微镜下观察其特定定位。荧光显微镜下观察其特定定位。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移4一、免疫细胞化学染色定义一、免疫细胞化学染色定义 免疫细胞化学或称免疫组织免疫细胞化学或称免疫组织二、免疫细胞化学染色理论基础（一）白血病免疫分型一）白血病免疫分型 各各种种血血细细胞胞来来源源于于多多能能干干细细胞胞，经经过过分分化化发发育育而而成成为为成成熟熟的的血血细细胞胞。这这些些血血细细胞胞在在分分化化发发育育过过程程中中，在在其其表表面面出出现现不不同同阶阶段段的的特特异异性性分分化化抗抗原原，利利用用各各种种特特异异性性单单克克隆隆抗抗体体和和酶酶联联免免疫疫方方法法测测定定这这些些抗抗原原，从从而而精精确确测测定定细细胞胞类类型型及及不不同同的的分分化化阶阶段段。白白血血病病细细胞胞具具有有与与其其对对应应的的分分化化抗抗原原,因因此此利利用用分分化化抗抗原原可可对对白白血血病病进进行行免免疫疫学学分分型。型。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移5二、免疫细胞化学染色理论基础（一）白血病免疫分型二、免疫细胞化学染色理论基础（一）白血病免疫分型 疫细胞化学疫细胞化学（二）肿瘤细胞鉴定（二）肿瘤细胞鉴定 肿肿瘤瘤是是由由正正常常细细胞胞恶恶变变所所致致，故故细细胞胞膜膜表表面面、细细胞胞质质内内和和细细胞胞核核内内可可能能存存在在着着与与正正常常相相比比在在质质或或量量上上明明显显异异常常的的物物质质，这这些些物物质质可可以以成成为为抗抗原原，因因而而可可以以用用特特异异性性抗抗体体通通过过免免疫疫细细胞胞化化学学染染色色检检测测。由由于于来来源源于于不不同同组组织织的的肿肿瘤瘤细细胞胞因因为为其其所所含含的的蛋蛋白白质质和和酶酶的的不不同同，利利用用针针对对这这些些蛋蛋白白质质和和酶酶的的各各种种特特异异性性单单克克隆抗体对肿瘤细胞种类鉴别。隆抗体对肿瘤细胞种类鉴别。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移6（二）肿瘤细胞鉴定疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞（二）肿瘤细胞鉴定疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞三实验方法种类三实验方法种类（一）仪器法：流式细胞仪、自动免疫染色仪（二）手工法（玻片法）1 根据二抗标记物不同：碱性磷酸酶法、辣根过氧化物酶法、荧光法、抗生物素 -生物素法等。2 根据实验原理：二步法、三步法等。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移7三实验方法种类（一）仪器法：疫细胞化学染色在白血病免疫分型和三实验方法种类（一）仪器法：疫细胞化学染色在白血病免疫分型和四、免疫组化二步法染色原理 将一抗滴加在玻片上，如果被标记的细胞将一抗滴加在玻片上，如果被标记的细胞含有特异性抗原，则一抗抗体被结合，在洗涤含有特异性抗原，则一抗抗体被结合，在洗涤过程中不被洗掉，再加入二抗酶聚合物与一抗过程中不被洗掉，再加入二抗酶聚合物与一抗结合。加入底物后，在酶的催化下细胞显棕黄结合。加入底物后，在酶的催化下细胞显棕黄色。如果细胞不含特异性抗原，就不能与一抗色。如果细胞不含特异性抗原，就不能与一抗结合，一抗就被洗掉，整个反应就不能进行，结合，一抗就被洗掉，整个反应就不能进行，细胞不显棕黄色。细胞不显棕黄色。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移8四、免疫组化二步法染色原理四、免疫组化二步法染色原理 将一抗滴加将一抗滴加 疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移9 疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤五、实验步骤 1.选选择择厚厚薄薄均均匀匀的的骨骨髓髓涂涂片片56张张，根根据据需需要要用用免免疫疫组组化化圈圈笔笔在在涂涂片片上上画画直直径径1.5cm左左右右的的圆圆圈圈数数个个。然然后后将将玻玻片片置置于于95%酒酒精溶液中固定精溶液中固定510分钟或分钟或4丙酮丙酮10分钟。分钟。2.取取出出玻玻片片用用流流水水冲冲洗洗，再再用用PBS缓缓冲冲液液冲冲洗洗，滴滴加加3%H2O250l，阻阻断断内内源源性性过过氧氧化物酶，室温孵育化物酶，室温孵育10分钟。分钟。3.PBS冲洗，冲洗，5分钟分钟3。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移10五、实验步骤五、实验步骤 1.选择厚薄均匀的骨髓涂片选择厚薄均匀的骨髓涂片56张，根据需要用张，根据需要用4.滴加非免疫动物血清滴加非免疫动物血清50l，室温孵育，室温孵育10 分钟。分钟。5.根据形态学初检选择需要标记的第一抗根据形态学初检选择需要标记的第一抗体滴在圆圈内并做好记号，然后将玻片体滴在圆圈内并做好记号，然后将玻片置于湿盒内室温下置于湿盒内室温下1.5小时或小时或4 过夜。过夜。6.PBS冲洗，冲洗，5分钟分钟3疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移114.滴加非免疫动物血清滴加非免疫动物血清50l，室温孵育，室温孵育10 疫细胞化学染疫细胞化学染7.每每个个圆圆圈圈内内滴滴加加二二抗抗与与辣辣根根过过氧氧化化物物酶酶聚聚合合物，置于湿盒内室温下物，置于湿盒内室温下0.5小时。小时。8.取取出出玻玻片片用用PBS缓缓冲冲液液洗洗5分分钟钟3。在在每每个个圆圆圈圈内内滴滴加加DAB显显色色液液，置置于于湿湿盒盒内内室室温温下下5-15分钟。分钟。9.取取出出玻玻片片用用PBS缓缓冲冲液液冲冲洗洗，再再用用苏苏木木精精复复染染3分钟，流水冲洗晾干。分钟，流水冲洗晾干。10.在显微镜油镜下观察所要标记的细胞。在显微镜油镜下观察所要标记的细胞。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移127.每个圆圈内滴加二抗与辣根过氧化物酶聚合物，置于湿盒内室温每个圆圈内滴加二抗与辣根过氧化物酶聚合物，置于湿盒内室温六、实验结果 细细胞胞膜膜、细细胞胞浆浆或或细细胞胞核核上上出出现现棕棕黄黄色色或或棕棕黄黄色色颗颗粒粒则则为为阳阳性性，说说明明此此细细胞胞含含有有针针对对所所标标记记的的单单克克隆隆抗抗体体的的抗抗原原，如果不显棕黄色或棕黄色颗粒则为阴性。如果不显棕黄色或棕黄色颗粒则为阴性。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移13六、实验结果六、实验结果 疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转七、注意事项1.标本应新鲜，彻底干燥后方能检测。通常标本应新鲜，彻底干燥后方能检测。通常放置放置24小时后检测小时后检测,但标本采集后应在但标本采集后应在3-4天天内测定完毕。若标本采集后不能及时测定，内测定完毕。若标本采集后不能及时测定，勿预先固定和冰箱内保存。勿预先固定和冰箱内保存。2.滴加单克隆一抗时，格外小心避免混淆。滴加单克隆一抗时，格外小心避免混淆。3.滴加二抗、显色剂时无需分开。滴加二抗、显色剂时无需分开。4.整个检测过程中自固定后标本均应保持湿整个检测过程中自固定后标本均应保持湿润，不能干燥，直至复染后方能使其干燥。润，不能干燥，直至复染后方能使其干燥。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移14七、注意事项七、注意事项1.标本应新鲜，彻底干燥后方能检测。通常放置标本应新鲜，彻底干燥后方能检测。通常放置24八、常用单克隆抗体及谱系特异性（一）白血病免疫分型常用单克隆抗体（一）白血病免疫分型常用单克隆抗体T林巴细胞：林巴细胞：CD2 CD3 CD5 CD7 CD8 CDl TCR-TCR-B林巴细胞：林巴细胞：CD10 CD19 CD20 CD24 CD22 CD79 CyIgM 髓髓 系系 细细 胞：胞：MPO CD13 CD14 CD15 CD64 CD65 CD68 CD118 血型糖蛋白血型糖蛋白A巨核细胞巨核细胞：PPO CD41 CD42 CD61 HLA-DR非系列特异性非系列特异性：TdT HLA-DR CD34疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移15八、常用单克隆抗体及谱系特异性（一）白血病免疫分型常用单克隆八、常用单克隆抗体及谱系特异性（一）白血病免疫分型常用单克隆(二)白血病免疫学积分系统（EGIL，1998）分值 B系 T系 髓系 2 CD79 CD3 MPO CyCD22 TCR-Cy IgM TCR-1 CD19 CD2 CD117 CD20 CD5 CD13 CD10 CD8 CD33 CD10 CD65 0.5 CD14 CD24 CD7 CD15 CDla CD64 疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移16(二二)白血病免疫学积分系统（白血病免疫学积分系统（EGIL，1998）分值）分值 (二二)根据白血病免疫学积分系统，将根据白血病免疫学积分系统，将AL分为四型分为四型1.急性未分化型白血病（急性未分化型白血病（AUL）髓系和髓系和T或或B系抗原积分均系抗原积分均2。2.急性混合细胞白血病急性混合细胞白血病 有三种类型：双表型、双克隆型和双有三种类型：双表型、双克隆型和双 系列型。髓系和系列型。髓系和 B或或T淋巴系积分均淋巴系积分均2。3.伴有髓系抗原表达的伴有髓系抗原表达的ALL（My+ALL）T或或B淋巴系积分淋巴系积分2同时粒同时粒-单系抗原表达，但积分单系抗原表达，但积分2。伴有淋巴系抗原表达的伴有淋巴系抗原表达的AML（Ly+AML)髓系积分髓系积分2同时淋巴系抗原表达，但积分同时淋巴系抗原表达，但积分2。4.单表型单表型 表达淋巴系（表达淋巴系（T或或B）者髓系积分为）者髓系积分为0，表达髓系者淋巴，表达髓系者淋巴 系积分为系积分为0 5。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移17(二二)根据白血病免疫学积分系统，将根据白血病免疫学积分系统，将AL分为四型疫细胞化学分为四型疫细胞化学(三三)急性髓细胞白血病微分化型急性髓细胞白血病微分化型(M0)特点及免疫特点及免疫 表型表型特点特点:M0为形态学不能分型为形态学不能分型;常规细胞化学常规细胞化学 染色阴染色阴 性性;无无Auer小体。小体。免疫表型：髓系分化抗原免疫表型：髓系分化抗原CD13、CD33、CD14、CD15、CD11b中至少有一种阳性。不表达中至少有一种阳性。不表达B系系特异性抗原（特异性抗原（CD10、CD19、CD22、CD24）和和T系特异性抗原（系特异性抗原（CD2、CD3、CD5）。可）。可表达无系列特异性未成熟标志表达无系列特异性未成熟标志CD34、TdT、HLA-DR。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移18(三三)急性髓细胞白血病微分化型急性髓细胞白血病微分化型(M0)特点及免疫特点及免疫 疫细疫细（四）鉴定骨髓转移性肿瘤细胞常用的单（四）鉴定骨髓转移性肿瘤细胞常用的单克隆抗体克隆抗体1.Cytokertin(Pan)细细胞胞角角蛋蛋白白（广广谱谱）：广广谱谱细细胞胞角角蛋蛋白白CK（AE1/AE3）主主要要标标记记角角化化上上皮皮、复复层层鳞鳞状状上上皮皮、复复层层上上皮皮、增增生生的的角角化化细细胞胞和和单单层层上上皮皮，用用于于鳞鳞癌癌、各种腺癌、移行细胞癌、小细胞癌等。各种腺癌、移行细胞癌、小细胞癌等。2.Cytokeratin(High MW)细细胞胞角角蛋蛋白白（高高分分子子量量）：简简称称CK高高分分子子。细细胞胞角角蛋蛋白白34E12为为高高分分子子量量的的细细胞胞角角蛋白，主要用于鳞癌的诊断。蛋白，主要用于鳞癌的诊断。3.Cytokeratin(low MW)细细胞胞角角蛋蛋白白（低低分分量量）：简简称称CK低低分分子子。细细胞胞角角蛋蛋白白35H11为为低低分分子子量量的的细细胞胞角角蛋蛋白，主要用于腺癌的诊断。白，主要用于腺癌的诊断。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移19（四）鉴定骨髓转移性肿瘤细胞常用的单克隆抗体（四）鉴定骨髓转移性肿瘤细胞常用的单克隆抗体1.Cytok4.CD45（LCA）白细胞共同抗原：）白细胞共同抗原：CD45（LCA）是造血）是造血细胞的特异性标记，主要分布在细胞的特异性标记，主要分布在T、B细胞、单核细胞、细胞、单核细胞、粒细胞和前体细胞表面，一般不存在于非造血组织中，粒细胞和前体细胞表面，一般不存在于非造血组织中，是区别淋巴瘤、白血病和非造血组织肿瘤的一个良好标是区别淋巴瘤、白血病和非造血组织肿瘤的一个良好标记物。记物。5.Vimentin 波形蛋白：波形蛋白：波形蛋白主要分布于间叶细胞及其波形蛋白主要分布于间叶细胞及其起源的肿瘤组织。上皮细胞及其肿瘤一般不含此蛋白，起源的肿瘤组织。上皮细胞及其肿瘤一般不含此蛋白，主要用于间叶来源的恶性肿瘤等诊断。主要用于间叶来源的恶性肿瘤等诊断。6.CD3：T细胞分化抗原，对早期细胞分化抗原，对早期T细胞有较高的特异性，细胞有较高的特异性，对对B细胞不表达，主要用于细胞不表达，主要用于T细胞淋巴瘤。细胞淋巴瘤。7.CD7：在绝大多数成熟与不成熟在绝大多数成熟与不成熟T细胞和细胞和T细胞白血病中细胞白血病中表达。表达。8.CD19：表达于前表达于前B细胞和成熟的细胞和成熟的B细胞膜表面，主要用于细胞膜表面，主要用于标记正常标记正常B细胞及肿瘤性细胞及肿瘤性B细胞。细胞。9.CD20：主要分布在主要分布在B细胞、前细胞、前B细胞后期和浆细胞之前的细胞后期和浆细胞之前的B细胞，一般不与细胞，一般不与T细胞呈交叉反应，在恶性淋巴瘤尤其细胞呈交叉反应，在恶性淋巴瘤尤其是是T或或B细胞淋巴瘤的分类上，细胞淋巴瘤的分类上，CD20是最常用的是最常用的B细胞标细胞标记。记。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移204.CD45（LCA）白细胞共同抗原：）白细胞共同抗原：CD45（LCA）10.神经元特异性烯醇化酶神经元特异性烯醇化酶(NSE)主要分布于神经元和一些神经内分泌细主要分布于神经元和一些神经内分泌细胞中胞中,用于神经内分泌肿瘤的辅助诊断。用于神经内分泌肿瘤的辅助诊断。11.S-100 Protein 用于室管膜瘤、神经母细胞瘤、神经鞘用于室管膜瘤、神经母细胞瘤、神经鞘瘤等的诊断与鉴别诊断。瘤等的诊断与鉴别诊断。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移2110.神经元特异性烯醇化酶神经元特异性烯醇化酶(NSE)疫细胞化学染色在白血病免疫细胞化学染色在白血病免l李晓燕，女，李晓燕，女，2929岁岁l住院号：住院号：159299159299l肺科肺科3 3床床l20042004年年9 9月月1515日骨髓片日骨髓片图片资料疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移22李晓燕，女，李晓燕，女，29岁图片资料疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿岁图片资料疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移23疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移23疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移24疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移24l崔单雨，女，崔单雨，女，9 9岁岁l住院号：住院号：144061144061l小儿科小儿科1515床床l20042004年年4 4月月5 5日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移25崔单雨，女，崔单雨，女，9岁疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓岁疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移26疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移26疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移27疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移27l杨飞祥，男，杨飞祥，男，2 2岁岁l住院号：住院号：158737158737l小儿科小儿科1313床床l20042004年年9 9月月4 4日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移28杨飞祥，男，杨飞祥，男，2岁疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓岁疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓肾上腺母细胞瘤?神经母细胞瘤神经母细胞瘤？神经母细胞瘤神经母细胞瘤？CD45疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移29肾上腺母细胞瘤肾上腺母细胞瘤?神经母细胞瘤？神经母细胞瘤？神经母细胞瘤？神经母细胞瘤？CD45疫细胞化疫细胞化l史夕琴，女，史夕琴，女，3030岁岁l住院号：住院号：161136161136l血液科血液科8 8床床l20042004年年1010月月6 6日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移30史夕琴，女，史夕琴，女，30岁疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨岁疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移31疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移31疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移32疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移32l邵乐，男，邵乐，男，6 6岁岁l住院号：住院号：160462160462l小儿科小儿科1919床床l20042004年年9 9月月2121日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移33邵乐，男，邵乐，男，6岁疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转岁疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移34疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移34l韩茂芬，女，韩茂芬，女，5757岁岁l住院号：住院号：165004165004l感染科感染科2727床床l20042004年年1010月月6 6日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移35韩茂芬，女，韩茂芬，女，57岁疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨岁疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨CD7疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移36CD7疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移36疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移37疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移37l攀胜甫，男，攀胜甫，男，4242岁岁l住院号：住院号：166298166298l消化科消化科4 4床床l20042004年年1111月月2727日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移38攀胜甫，男，攀胜甫，男，42岁疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨岁疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移39疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移39疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移40疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移40疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移41疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移41l杨雨甜，女，杨雨甜，女，1 1岁岁3 3个月个月l住院号：住院号：167108167108l小儿科小儿科1313床床l20042004年年1111月月2929日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移42杨雨甜，女，杨雨甜，女，1岁岁3个月疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细个月疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移43疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移43疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移44疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移44病例测定结果 表表1 FAB分型分型25例例AML中，形态学和免疫组化中，形态学和免疫组化均符合髓系白血病均符合髓系白血病16例（占例（占64%）；）；4例（例（16%）既有）既有髓系又有髓系又有T系抗原表达；系抗原表达；5例（例（20%）既有髓系又有）既有髓系又有B系抗原表达，与文献系抗原表达，与文献3报道较一致。表报道较一致。表1显示，髓系抗显示，髓系抗原原CD13和和CD33，在，在AML中表达较高（分别为中表达较高（分别为80%和和76）。）。表表1 25例例AML CD抗原阳性表达情况抗原阳性表达情况 疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移45病例测定结果病例测定结果 表表1 FAB分型分型25 表表2 11例例ALL患患者者8种种CD抗抗原原表表达达显显示示，淋淋 系系 抗抗 原原（CD3，CD7，CD19，CD20）在在 ALL呈呈高高表表达达，而而髓髓系系抗抗原原（CD13 CD14 CD33）表表达达率率低低，其其中中有有2例既表达淋系又表达髓系抗原。例既表达淋系又表达髓系抗原。表表2 11例例ALL CD抗原阳性表达情况抗原阳性表达情况 疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移46 表表2 11例例ALL患者患者8种种CD抗原抗原 表表3 3例例FAB难难分分型型的的白白血血病病，2例例髓髓系系表表达达并并且且CD14阳阳性性确确诊诊为为M5b，一一例例既既有有T系系表表 达达又又有有髓髓系系表表达达，确确诊诊为为M+ALL（急急性性淋淋巴巴细细胞胞性性白白血血病病髓髓系系表表达）。达）。表表3 3例例FAB不能定型的不能定型的CD抗原阳性表达情况抗原阳性表达情况%疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移47 表表3 3例例FAB难分型的白血病，难分型的白血病，2 表表4 10例例肿肿瘤瘤细细胞胞BM转转移移，其其中中 5例例癌癌细细胞胞BM转转移移，4例例CK低低分分子子阳阳性性，确确诊诊为为腺腺癌癌。1例例CK高高分分子子阳阳性性确确诊诊为为鳞鳞癌癌。4例例似似诊诊为为淋淋巴巴瘤瘤BM浸浸润润？恶恶性性组组织织细细胞胞病病（恶恶组组）待待排排，2例例T系系表表达达，2例例B系系表表达达，确确诊诊为为淋淋巴巴瘤瘤BM浸浸润润。1例例形形态态上上难难以以确确定定是是癌癌还还是是瘤瘤的的，因因CK低低分分子子阳性，确诊为腺癌细胞。阳性，确诊为腺癌细胞。表表4 10例肿瘤细胞例肿瘤细胞BM转移转移CD和和CK阳性表达情况阳性表达情况 疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移48 表表4 10例肿瘤细胞例肿瘤细胞BM转移，其中转移，其中 病例讨论lFAB对急性白血病分型，可将大部分白血病分型，对急性白血病分型，可将大部分白血病分型，仍有小部分很难定型，尤其是仍有小部分很难定型，尤其是POX染色阴性染色阴性M0、M5a、L2及及MAL。由于白血病细胞形态多变性及。由于白血病细胞形态多变性及形态学的主观性，加上有些化学染色由于试剂质量形态学的主观性，加上有些化学染色由于试剂质量方法等因素也缺乏一定特异性，所以有小部分急方法等因素也缺乏一定特异性，所以有小部分急性白血病根据形态及化学染色很难定型，特别是性白血病根据形态及化学染色很难定型，特别是M0只能用免疫组化定型。表只能用免疫组化定型。表3 3例例FAB难以定型白难以定型白血病，其中血病，其中1例形态上象例形态上象M5b，细胞核明显扭曲折，细胞核明显扭曲折叠，染色质细致，浆量丰富。叠，染色质细致，浆量丰富。M5bPOX染色阳性率染色阳性率3%，但其，但其POX染色染色100%阴性，阴性，PAS染色呈细小染色呈细小颗粒弱阳性，非特异性脂酶染色阴性，而颗粒弱阳性，非特异性脂酶染色阴性，而M5b应该应该是阳性。所以此例病例是是阳性。所以此例病例是M5b？还是？还是L2？很难定型。？很难定型。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移49病例讨论病例讨论FAB对急性白血病分型，可将大部分白血病分型，仍有小对急性白血病分型，可将大部分白血病分型，仍有小l但其免疫组化显示但其免疫组化显示CD14、CD33、CD13阳性，阳性，不表达淋系抗原。所以此病例确诊为不表达淋系抗原。所以此病例确诊为M5b。其它。其它两例也同此例类似。由于两例也同此例类似。由于CD单抗直接测定细胞单抗直接测定细胞的分化抗原，且特异性强，所以可以弥补的分化抗原，且特异性强，所以可以弥补FAB分分型的不足。型的不足。l表表1和表和表2 25例例AML和和11例例ALL免疫表型结果分免疫表型结果分析可以看出，急性白血病免疫分型与析可以看出，急性白血病免疫分型与FAB形态学形态学分型有较好的一致性。分型有较好的一致性。AML免疫分型与形态学免疫分型与形态学分型完全符合者（单纯表达髓系抗原）占分型完全符合者（单纯表达髓系抗原）占64%，ALL免疫分型与形态学分型完全符合者（单纯免疫分型与形态学分型完全符合者（单纯表达淋系抗原）占表达淋系抗原）占81%，与文献报道，与文献报道4基本一致。基本一致。约约36%AML表达淋系抗原（表达淋系抗原（Ly+M）和）和18%ALL表达髓系抗原表达髓系抗原(M+ALL)。这是因为正常造血干。这是因为正常造血干细胞存在髓系和淋系抗原在其分化过程中逐渐形细胞存在髓系和淋系抗原在其分化过程中逐渐形成系列专一抗原表达，而白血病细胞不能遵循正成系列专一抗原表达，而白血病细胞不能遵循正常造血干细胞的发育常造血干细胞的发育分化规律。分化规律。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移50但其免疫组化显示但其免疫组化显示CD14、CD33、CD13阳性，不阳性，不l因而出现抗原表达的紊乱，表现出免疫标志的异因而出现抗原表达的紊乱，表现出免疫标志的异质性质性4。Ly+AML和和ly-AML及及M+ALL和和M-ALL患者在对化疗的反应，预后等方面有很大差别。患者在对化疗的反应，预后等方面有很大差别。根据文献报道根据文献报道Ly+AML患者较之患者较之ly-AML患者对患者对化疗反应差，预后不佳，但化疗反应差，预后不佳，但M+ALL则无此特征则无此特征4，因此免疫分型可为临床制定化疗方案和判断，因此免疫分型可为临床制定化疗方案和判断疾病预后提供实验室依据。疾病预后提供实验室依据。l临临床床上上有有些些病病人人肿肿瘤瘤细细胞胞BM已已经经转转移移，但但原原发发灶灶有有时时很很难难找找到到。那那么么BM转转移移的的肿肿瘤瘤细细胞胞的的鉴鉴定定则则成成为为重重要要和和必必须须。但但从从形形态态上上有有时时只只能能确确定定是是癌癌或或是是肉肉瘤瘤，当当形形态态不不典典型型时时，有有时时也也不不能能区区别别。而而用用CK高高分分子子单单抗抗与与CK低低分分子子单单抗抗，不不仅仅能能区区分分鳞鳞癌癌和和腺腺癌癌，同同时时将将腺腺癌癌与与肉肉瘤瘤区区分分。CK高高分分子子阳阳性性是是鳞鳞癌癌，CK低低分分子子阳阳性性是是腺腺癌癌，肉瘤细胞肉瘤细胞CK高分子和高分子和CK低分子都是阴性。低分子都是阴性。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移51因而出现抗原表达的紊乱，表现出免疫标志的异质性因而出现抗原表达的紊乱，表现出免疫标志的异质性4。Ly+l淋巴瘤淋巴瘤BM浸润和早期恶组，由于细胞少，从形浸润和早期恶组，由于细胞少，从形态和化学染色上很难鉴定，特别易将组织细胞态和化学染色上很难鉴定，特别易将组织细胞样淋巴瘤诊断为恶组。随着免疫组化和分子生样淋巴瘤诊断为恶组。随着免疫组化和分子生物学技术的发展及应用，对以前诊断的恶组重物学技术的发展及应用，对以前诊断的恶组重新进行研究，发现许多所谓的新进行研究，发现许多所谓的“恶组恶组”病例瘤病例瘤细胞并不是组织细胞源性，而是来源于其它细细胞并不是组织细胞源性，而是来源于其它细胞，如胞，如T细胞、细胞、B细胞、细胞、NK细胞等。第四军医细胞等。第四军医大学病理教研室对大学病理教研室对13例恶性组织细胞增生症免例恶性组织细胞增生症免疫组织化学研究结果疫组织化学研究结果,9 例例T 细胞性淋细胞性淋(CD45RO阳性阳性),2例组织细胞肿瘤例组织细胞肿瘤(CD68阳性阳性),1例杂合表例杂合表达达(CD45RO和和CD68 同时阳性同时阳性),1例例T细胞源性间细胞源性间变性大细胞淋巴瘤变性大细胞淋巴瘤(CD45RO,EMA和和CD30阳性阳性),无一例无一例B 细胞或细胞或NK细胞肿瘤细胞肿瘤(CD20和和CD56 全全部阴性部阴性).疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移52淋巴瘤淋巴瘤BM浸润和早期恶组，由于细胞少，从形态和化学染色上很难浸润和早期恶组，由于细胞少，从形态和化学染色上很难lWHO（2000）分类中，为避免混淆，未再提）分类中，为避免混淆，未再提真正的恶性组织细胞增生症，而将组织细胞肉真正的恶性组织细胞增生症，而将组织细胞肉瘤作为单独一类列出，并提出组织细胞肉瘤的瘤作为单独一类列出，并提出组织细胞肉瘤的诊断标准：诊断标准：（1）表达）表达2种或种或2种以上单核细胞种以上单核细胞/巨噬细胞起源的相关抗原，而不表达巨噬细胞起源的相关抗原，而不表达T和和B细胞细胞相关抗原；（相关抗原；（2）无）无B细胞免役球蛋白和细胞免役球蛋白和T细胞细胞受体基因重排。受体基因重排。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移53WHO（2000）分类中，为避免混淆，未再提真正的恶性组织细）分类中，为避免混淆，未再提真正的恶性组织细l应应用用免免疫疫组组化化可可将将两两者者明明显显区区分分。恶恶组组细细胞胞单单抗抗标标记记为为CD14CD68La LeuM3 63D3淋淋巴巴瘤细胞为瘤细胞为CD3CD7CD19CD20、CD10、lCD45（RO）、）、CD45（RA）等。）等。l表表4中中4例例淋淋巴巴瘤瘤BM浸浸润润恶恶组组待待排排拟拟诊诊病病人人，因因免免疫疫组组化化的的应应用用而而得得到到明明确确诊诊断断。所所以以鉴鉴定定BM中肿瘤细胞的种类及来源，应常规使用免疫组化。中肿瘤细胞的种类及来源，应常规使用免疫组化。l综上所述，应用免疫组化，可增加白血病诊断的综上所述，应用免疫组化，可增加白血病诊断的准确性，弥补形态学分型的不足，鉴定准确性，弥补形态学分型的不足，鉴定BM中肿中肿瘤细胞种类和来源，为临床白血病的化疗和判断瘤细胞种类和来源，为临床白血病的化疗和判断预后提供实验室依据。预后提供实验室依据。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移54应用免疫组化可将两者明显区分。恶组细胞单抗标记为应用免疫组化可将两者明显区分。恶组细胞单抗标记为CD14C参考文献参考文献1姚姚尔尔固固，徐徐世世荣荣，董董作作仁仁.新新编编白白血血病病化化疗疗学学.第第一版一版.天津：天津科学技术出版社，天津：天津科学技术出版社，2000：12谭谭齐齐贤贤.临临床床血血液液学学和和血血液液检检验验.第第三三版版.北北京京：人人民卫生出版社，民卫生出版社，2003年年2月月3曾曾小小菁菁，晏晏家家益益.采采用用免免疫疫组组化化技技术术进进行行白白血血病病免免疫分型的研究，疫分型的研究，2000；24（5）：）：2842864裴敏飞，张广森裴敏飞，张广森.成人急性白血病免疫表型特征分成人急性白血病免疫表型特征分析及意义析及意义.湖南医科大学学报，湖南医科大学学报，2000；25（3）：）：262264 5叶任高，陆再英叶任高，陆再英.内科学内科学.第六版第六版.北京：人民卫生出北京：人民卫生出版社，版社，2004年年5月月疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移55参考文献参考文献1姚尔固，徐世荣，董作仁姚尔固，徐世荣，董作仁.新编白血病化疗学新编白血病化疗学.疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移56谢谢！疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移谢谢！疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移56