红细胞血型血清学技术的发展和应用课件

红细胞血型血清学红细胞血型血清学 实验技术的发展和应用实验技术的发展和应用实验技术的发展和应用实验技术的发展和应用6/29/20241 红细胞血型血清学8/11/20231二十一世纪临床输血工作安安 全全高高 效效准准 确确可可 靠靠6/29/20242二十一世纪临床输血工作安 全高 效准 确可 输血安全和输血安全和输血相容性实验输血相容性实验 红细胞血型相容性实验规范化红细胞血型相容性实验规范化 输血传播病原微生物检测输血传播病原微生物检测 输血相容性实验输血相容性实验 血型定型：抗原、基因水平血型定型：抗原、基因水平 抗体检测：筛检、鉴定、确证抗体检测：筛检、鉴定、确证 交叉配血：完全和不完全抗体交叉配血：完全和不完全抗体相容（相容（Compatible）即和谐共存（）即和谐共存（existing in harmony）6/29/20243输血安全和输血相容性实验 红细胞血型相容性实验规范血型血清学免疫基础概述血型血清学免疫基础概述抗抗 原：原：（1 1）免疫原性）免疫原性 （2 2）反应原性）反应原性/抗原性抗原性根据抗原来源与机体的亲缘关系分类：根据抗原来源与机体的亲缘关系分类：异种抗原异种抗原 同种异型抗原：同种异型抗原：ABOABO、RhRh、HLAHLA等等 自身抗原自身抗原 异嗜性抗原异嗜性抗原6/29/20244血型血清学免疫基础概述抗 原：8/11/20234血型血清学免疫基础概述血型血清学免疫基础概述l抗体抗体:l抗体都是免疫球蛋白抗体都是免疫球蛋白l并非所有免疫球蛋白都具有抗体活性并非所有免疫球蛋白都具有抗体活性lAbAb是功能描述，是功能描述，IgIg是化学结构描述是化学结构描述l分泌型分泌型Ig(sIg)Ig(sIg)和膜型和膜型Ig(mIg)Ig(mIg)lIgIg不耐热，在不耐热，在60-7060-70被破坏被破坏lIgIg能被多种蛋白酶水解能被多种蛋白酶水解6/29/20245血型血清学免疫基础概述抗体:8/11/20235血型血清学免疫基础概述血型血清学免疫基础概述l类：根据类：根据C CH H抗原特异性的差异，将抗原特异性的差异，将IgIg分为分为IgGIgG、IgMIgM、IgAIgA、IgDIgD、IgE IgE 五类五类l亚类：根据亚类：根据C CH H(主要是主要是铰链区铰链区)AA)AA和二硫键和二硫键的差异的差异 IgG:IgG1 IgG:IgG1、IgG2IgG2、IgG3IgG3、IgG4 IgG4 IgA:IgA1 IgA:IgA1、IgA2IgA2 IgM:IgM1 IgM:IgM1和和IgM2IgM2l型：根据型：根据C CL L化学结构与抗原性的差异化学结构与抗原性的差异 和和 型型l亚型：亚型：1 1、2 2、3 3、4 46/29/20246血型血清学免疫基础概述类：根据CH抗原特异性的差异，将Ig分血型血清学免疫基础概述血型血清学免疫基础概述l补补 体：体：l主要由肝细胞、巨噬细胞等合成，半衰期约主要由肝细胞、巨噬细胞等合成，半衰期约1 1天天l多为糖蛋白，占血清蛋白总量的多为糖蛋白，占血清蛋白总量的10%10%左右左右l血清中各成分含量不等，血清中各成分含量不等，C3C3含量最高含量最高l正常生理情况下，以非活化形式存在正常生理情况下，以非活化形式存在于血清中于血清中l性质不稳定，加热性质不稳定，加热56 30min56 30min失活失活l对温度、酸、碱、蛋白酶、乙醇等敏感对温度、酸、碱、蛋白酶、乙醇等敏感6/29/20247血型血清学免疫基础概述补 体：8/11/20237红细胞血型血清学技术的发展和应用课件The complement system explainedThe complement system explained6/29/20249The complement system explaine血型血清学免疫基础概述血型血清学免疫基础概述抗原抗体反应抗原抗体反应是抗原和相应抗体之间的特异性结合反应是抗原和相应抗体之间的特异性结合反应既可发生在体内，也可发生在体外既可发生在体内，也可发生在体外一般规律：一般规律：特异性特异性 可逆性可逆性 阶段性阶段性 比例性比例性 6/29/202410血型血清学免疫基础概述抗原抗体反应8/11/202310血型血清学免疫基础概述血型血清学免疫基础概述特异性：由抗原决定簇和抗体分子超变区之间空间结构的特异性：由抗原决定簇和抗体分子超变区之间空间结构的互补性决定互补性决定可逆性（可逆性（reversibility)reversibility)：指指AgAg与相应与相应AbAb结合成结合成ICIC后，在后，在一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性ICIC解离取决于：解离取决于：抗体对相应抗原的亲和力抗体对相应抗原的亲和力 环境因素环境因素6/29/202411血型血清学免疫基础概述特异性：由抗原决定簇和抗体分子超变区之血型血清学免疫基础概述l环境因素：环境因素：pHpH值、离子强度、温度等值、离子强度、温度等l常用于解离常用于解离ICIC的物质有：的物质有：3M3M硫氰化钾、硫氰化钾、pH2.4 0.1MpH2.4 0.1M甘氨酸、甘氨酸、7M7M尿素等尿素等l解离后抗原、抗体仍保持原有特性解离后抗原、抗体仍保持原有特性6/29/202412血型血清学免疫基础概述环境因素：pH值、离子强度、温度等8/血型血清学免疫基础概述血型血清学免疫基础概述阶段性阶段性第一阶段：特异性结合阶段第一阶段：特异性结合阶段 反应速度快，几秒钟或几分钟即可完成反应速度快，几秒钟或几分钟即可完成 不出现肉眼可见反应不出现肉眼可见反应第二阶段：可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结第二阶段：可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合等反应合等反应 反应进行慢，需要几分钟、几十分钟或更长反应进行慢，需要几分钟、几十分钟或更长 受电解质、温度、酸碱度等多种因素影响受电解质、温度、酸碱度等多种因素影响6/29/202413血型血清学免疫基础概述阶段性8/11/202313血型血清学免疫基础概述血型血清学免疫基础概述l比例性比例性（proportionalityproportionality）：l最适比或等价点：指抗原与抗体发生可见反应需遵最适比或等价点：指抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时，循一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时，才出现可见反应才出现可见反应l等价带：抗原与抗体分子比例合适的范围等价带：抗原与抗体分子比例合适的范围l带现象：带现象：AgAg与与AbAb比例不适而不出现可见反应比例不适而不出现可见反应 前带前带(prozone)(prozone)：抗体过量时：抗体过量时 后带后带(postzone)(postzone)：抗原过量时：抗原过量时6/29/202414血型血清学免疫基础概述比例性（proportionality血型血清学免疫基础概述血型血清学免疫基础概述抗原抗体结合力：抗原抗体结合力：抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合不形成牢固的共价键，通过非共价键结合不形成牢固的共价键，通过非共价键结合涉及几种分子间的作用力：涉及几种分子间的作用力：静电引力静电引力 范德华力范德华力 氢键结合力氢键结合力 疏水作用力疏水作用力6/29/202415血型血清学免疫基础概述抗原抗体结合力：8/11/202315血型血清学免疫基础概述血型血清学免疫基础概述影响抗原抗体反应的因素：影响抗原抗体反应的因素：一、反应物自身因素：一、反应物自身因素：抗原：理化特性、抗原：理化特性、AgAg决定簇数量、决定簇数量、AgAg决定簇种类决定簇种类抗体：来源、特异性与亲和力、浓度抗体：来源、特异性与亲和力、浓度二、环境条件：二、环境条件：电解质：电解质：0.85%NaCl0.85%NaCl酸碱度：酸碱度：pH 6pH 69 9温度：温度：15 15 40 406/29/202416血型血清学免疫基础概述影响抗原抗体反应的因素：8/11/20血型血清学免疫基础概述血型血清学免疫基础概述检测抗原抗体反应的基本技术检测抗原抗体反应的基本技术：凝集反应凝集反应（又称直接凝集反应）（又称直接凝集反应）颗粒性颗粒性Ag +Ag +相应相应AbAb颗粒性团块样凝集颗粒性团块样凝集沉淀反应沉淀反应 可溶性可溶性Ag +Ag +相应相应AbAb免疫复合物出现沉淀免疫复合物出现沉淀溶血反应溶血反应 RBC RBC血型血型Ag Ag 相应血型相应血型AbAb溶血（红细胞破坏）溶血（红细胞破坏）补体补体6/29/202417血型血清学免疫基础概述检测抗原抗体反应的基本技术：补体8/1红细胞血型血清学概要红细胞血型血清学概要(一一一一)血型定义血型定义血型定义血型定义 血型是血液系统的一种遗传多态性，是产生抗血型是血液系统的一种遗传多态性，是产生抗原抗体的遗传性状。原抗体的遗传性状。(二二二二)血型抗原血型抗原血型抗原血型抗原 红细胞上的化学构型，必须是用相应抗体检测红细胞上的化学构型，必须是用相应抗体检测到的红细胞表面抗原。当给缺乏某种抗原的个体输到的红细胞表面抗原。当给缺乏某种抗原的个体输入此种抗原时，可以刺激产生相应的抗体。入此种抗原时，可以刺激产生相应的抗体。6/29/202418红细胞血型血清学概要(一)血型定义8/11/202318红细胞血型血清学概要红细胞血型血清学概要人类红细胞血型抗原人类红细胞血型抗原 309 309个个 3030个血型系统个血型系统 ，270270个抗原个抗原;个血型系列，系列（低频率）个血型系列，系列（低频率）18 18个抗原；个抗原；系列（高频率）系列（高频率）9 9个抗原；个抗原；未归类，未归类，2 2个抗原。个抗原。6/29/202419红细胞血型血清学概要人类红细胞血型抗原 309个 8/11/红细胞血型血清学概要红细胞血型血清学概要 血型抗原是红细胞上的化学构型。按照生化性质血型抗原是红细胞上的化学构型。按照生化性质人红细胞抗原决定簇可分为糖分子和多肽人红细胞抗原决定簇可分为糖分子和多肽2 2类。类。决定簇是糖分子的血型抗原：决定簇是糖分子的血型抗原：ABO,Hh,Lewis,ABO,Hh,Lewis,P,Ii,P,Ii,也称为组织型抗原，因为它们不仅存在于红也称为组织型抗原，因为它们不仅存在于红细胞表面，而且广泛存在于大部分上皮细胞、各种体细胞表面，而且广泛存在于大部分上皮细胞、各种体液、分泌液中。组织型抗原决定簇可以是细胞分化和液、分泌液中。组织型抗原决定簇可以是细胞分化和成熟的标志。成熟的标志。决定簇为多肽的血型抗原：决定簇为多肽的血型抗原：MNS,Rh,Kell,MNS,Rh,Kell,Kidd Kidd 等，其抗原化学组成为蛋白质、糖蛋白、脂蛋等，其抗原化学组成为蛋白质、糖蛋白、脂蛋白，只分布于红细胞膜或其它骨髓造血干细胞。白，只分布于红细胞膜或其它骨髓造血干细胞。6/29/202420红细胞血型血清学概要 血型抗原是红细胞上的化学构型。按红细胞血型血清学概要红细胞血型血清学概要有临床意义的抗原：有临床意义的抗原：ABOABO、RhRh、Diego Diego、DuffyDuffy、Kell Kell、HhHh、KiddKidd、P P、和、和SsSs等等一定条件下具临床意义的抗原：一定条件下具临床意义的抗原：ColtonColton、CromerCromer、Dombrock Dombrock、Gerbich Gerbich、IndianIndian、Wiener Wiener、和、和YtYt等等无临床意义的抗原（无临床意义的抗原（37 37 无反应）无反应）:LutheranLutheran、MNMN、P1P1等等 目前尚未发现有临床意义的抗原目前尚未发现有临床意义的抗原:Chido/RodgersChido/Rodgers、JMHJMH、KnopsKnops、Xg Xg 等。等。6/29/202421红细胞血型血清学概要有临床意义的抗原：8/11/202321Blood groups structuresL-岩藻糖岩藻糖D-半乳糖半乳糖N-乙酰葡萄糖胺乙酰葡萄糖胺N-乙酰半乳糖胺乙酰半乳糖胺前体物质前体物质H物质物质ABO基基因位于因位于染色体染色体9q34.1-34.2;基基因产物因产物是糖基是糖基转移酶转移酶ABO抗原抗原的化的化学结学结构是构是糖蛋糖蛋白白O基因为无效基因，基因为无效基因，A基因基因 N-乙酰乙酰-D-半乳糖转移酶，半乳糖转移酶，B基因基因 D-半乳糖转移酶半乳糖转移酶H基因基因 L-岩藻糖基转移酶岩藻糖基转移酶6/29/202422Blood groups structuresL-岩藻糖D-抗抗 原原6/29/202423抗 原8/11/202323Differences between normal D,D-weak and partial-D phenotypes6/29/202424Differences between normal D,红细胞血型血清学概要红细胞血型血清学概要（三）、血型血清学抗体的定义辨析及其意义（三）、血型血清学抗体的定义辨析及其意义血型抗体一般为血型抗体一般为IgMIgM、IgGIgG或或IgA,IgAIgA,IgA不多见不多见血型抗体免疫球蛋白的特点血型抗体免疫球蛋白的特点IgMIgMIgGIgGIgAIgA分子量分子量950000950000150000150000180000180000563h563h处理处理活性减弱活性减弱不受影响不受影响不受影响不受影响2-Me2-Me处理处理降降 解解不受影响不受影响部分降解部分降解固定补体固定补体能能能能不不 能能通过胎盘通过胎盘不不 能能能能不不 能能血型物质的作用血型物质的作用易被中和易被中和难被中和难被中和6/29/202425红细胞血型血清学概要（三）、血型血清学抗体的定义辨析及其意义红细胞血型血清学概要红细胞血型血清学概要天然抗体天然抗体天然抗体天然抗体（natural antibodynatural antibody）：也是机体对抗原免疫）：也是机体对抗原免疫应答的产物，只是没有可觉察的抗原刺激，并非天然应答的产物，只是没有可觉察的抗原刺激，并非天然产生的抗体。主要存在于产生的抗体。主要存在于ABO,MN,P,LewisABO,MN,P,Lewis。产生。产生机制可能与环境中广泛存在的菌类、花粉、尘埃等有机制可能与环境中广泛存在的菌类、花粉、尘埃等有关，这些物质与某些抗原有共同成分，通过隐性刺激关，这些物质与某些抗原有共同成分，通过隐性刺激产生血型抗体。产生血型抗体。免疫抗体免疫抗体免疫抗体免疫抗体：有可查知的抗原刺激而产生，抗原一般通过有可查知的抗原刺激而产生，抗原一般通过输血、妊娠、注射输血、妊娠、注射3 3种方式引入。血型不相容的输血种方式引入。血型不相容的输血是很强的免疫刺激，输入受血者没有的血型抗原，可是很强的免疫刺激，输入受血者没有的血型抗原，可能产生相应抗体能产生相应抗体。6/29/202426红细胞血型血清学概要天然抗体（natural antibod红细胞血型血清学概要红细胞血型血清学概要规则抗体规则抗体规则抗体规则抗体：ABOABO系统产生抗系统产生抗A A、抗、抗B B是有规律的，是有规律的，即即A A型人产生抗型人产生抗B B，B B型人产生抗型人产生抗A A，O O型人产生型人产生抗抗A A和抗和抗B B，这是符合，这是符合LandsteinerLandsteiner规则的，称规则的，称为规则抗体（为规则抗体（regular antibodyregular antibody）。）。不规则抗体不规则抗体不规则抗体不规则抗体(irregular antibody)(irregular antibody)：除：除ABOABO系系统外，其它系统产生的抗体均无此规律，称统外，其它系统产生的抗体均无此规律，称为不规则抗体或意外抗体，不规则抗体通称为不规则抗体或意外抗体，不规则抗体通称意外抗体意外抗体(unexpected antibody)(unexpected antibody)。6/29/202427红细胞血型血清学概要规则抗体：ABO系统产生抗A、抗B是有规红细胞血型血清学概要红细胞血型血清学概要完全抗体完全抗体完全抗体完全抗体(complete(complete antibodyantibody)：在盐水介质中：在盐水介质中能凝集红细胞，又称盐水抗体，多为能凝集红细胞，又称盐水抗体，多为IgMIgM抗体。抗体。不完全抗体不完全抗体不完全抗体不完全抗体(incomplete(incomplete antibodyantibody)：能使红细：能使红细胞致敏，但在盐水中不能凝集红细胞的抗体，胞致敏，但在盐水中不能凝集红细胞的抗体，多为多为IgGIgG，通过抗人球蛋白法或其它非盐水介，通过抗人球蛋白法或其它非盐水介质法检测。质法检测。6/29/202428红细胞血型血清学概要完全抗体(complete antibo红细胞血型血清学概要红细胞血型血清学概要 血型抗体的临床意义血型抗体的临床意义 能够引起红细胞存活期缩短、新生儿溶血病、能够引起红细胞存活期缩短、新生儿溶血病、溶血反应的抗体具有临床意义。并非所有血型抗溶血反应的抗体具有临床意义。并非所有血型抗体都有临床意义。体都有临床意义。一般来说，在一般来说，在3737不与红细胞发生反应的抗体不与红细胞发生反应的抗体无临床意义。无临床意义。对于有临床意义的抗体，输血时应选择相应抗对于有临床意义的抗体，输血时应选择相应抗原阴性、交叉配血相合的红细胞。原阴性、交叉配血相合的红细胞。对于无临床意义的抗体，输血时选择交叉配血对于无临床意义的抗体，输血时选择交叉配血相合的红细胞即可。相合的红细胞即可。6/29/202429红细胞血型血清学概要 血型抗体的临床意义8/11红细胞血型血清学概要红细胞血型血清学概要抗抗 体体自然发生自然发生 免免 疫疫盐盐 水水 Coombs/LISSHDNHTR相容表型相容表型抗抗-A-AyesyesyesyesmostmostmostmostyesyesyesyesB B、O O抗抗-B ByesyesyesyesmostmostmostmostyesyesyesyesA A、O O抗抗-AB-AByesyesyesyesmostmostmostmostyesyesyesyesO O抗抗-H HyesyesyesyesmostmostmostmostyesyesyesyesOhOh临床输血重要的人血清红细胞抗体临床输血重要的人血清红细胞抗体6/29/202430红细胞血型血清学概要抗 体自然发生 免 疫盐红细胞血型血清学概要红细胞血型血清学概要抗抗 体体自然发生自然发生 免免 疫疫盐水盐水 Coombs/LISSHDNHTR相容表型相容表型抗抗D DNoNoyesyes罕见罕见mostmostyesyesyesyesD D阴性血阴性血抗抗C CNoNoyesyes罕见罕见mostmostyesyesyesyesC C阴性血阴性血抗抗E ENoNoyesyessomesomemostmostyesyesyesyesE E阴性血阴性血抗抗c cNoNoyesyes罕见罕见mostmostyesyesyesyesc c阴性血阴性血抗抗e eNoNoyesyes罕见罕见mostmostyesyesyesyese e阴性血阴性血临床输血重要的人血清红细胞抗体临床输血重要的人血清红细胞抗体6/29/202431红细胞血型血清学概要抗 体自然发生 免 疫盐水 红细胞血型血清学概要红细胞血型血清学概要红细胞破坏的免疫学机制红细胞破坏的免疫学机制血管内：通过补体系统活化形成膜攻击复合物而引起红血管内：通过补体系统活化形成膜攻击复合物而引起红细胞破坏。细胞破坏。血管外：吞噬细胞表面有抗体或补体的结合位点，通过血管外：吞噬细胞表面有抗体或补体的结合位点，通过其调节作用，单核巨噬细胞系统吞噬红细胞。其调节作用，单核巨噬细胞系统吞噬红细胞。6/29/202432红细胞血型血清学概要红细胞破坏的免疫学机制8/11/2023红细胞血型血清学实验技术的发展红细胞血型血清学实验技术的发展19001900：LandsteinerLandsteiner发现发现A A、B B、O O血型血型1939193919391939：LevineLevineLevineLevine和和和和StetsonStetsonStetsonStetson发现了发现了发现了发现了RhRhRhRh血型系统血型系统血型系统血型系统1945194519451945：CoombsCoombsCoombsCoombs等建立了抗球蛋白试验等建立了抗球蛋白试验等建立了抗球蛋白试验等建立了抗球蛋白试验1947194719471947：MortonMortonMortonMorton和和和和PicklesPicklesPicklesPickles建立了酶法试验建立了酶法试验建立了酶法试验建立了酶法试验1974197419741974：LowLowLowLow和和和和MesseterMesseterMesseterMesseter使用低离子盐水液增使用低离子盐水液增使用低离子盐水液增使用低离子盐水液增强抗原抗体的相互作用强抗原抗体的相互作用强抗原抗体的相互作用强抗原抗体的相互作用6/29/202433红细胞血型血清学实验技术的发展1900：Landsteine红细胞血型血清学实验技术的发展红细胞血型血清学实验技术的发展19801980：LalezariLalezari等建立了等建立了 PolybrenePolybrene试验试验19841984：PlappPlapp等建立了固相试验等建立了固相试验19871987：NanceNance和和GarrattyGarratty建立了建立了 PEGPEG方法方法19901990：LapierreLapierre等发明了微柱凝胶凝集试验等发明了微柱凝胶凝集试验6/29/202434红细胞血型血清学实验技术的发展1980：Lalezari等建红细胞血型血清学实验技术的临床应用红细胞血型血清学实验技术的临床应用ABOABO、RhDRhD血型鉴定血型鉴定血型抗体筛检、鉴定、确证血型抗体筛检、鉴定、确证交叉配血交叉配血新生儿溶血病诊断新生儿溶血病诊断血型抗体效价测定血型抗体效价测定6/29/202435红细胞血型血清学实验技术的临床应用ABO、RhD血型鉴定8/红细胞血型血清学实验技术的临床应用红细胞血型血清学实验技术的临床应用2.2.抗体抗体 性质：性质：临床有意义抗体和无意义抗体临床有意义抗体和无意义抗体完全抗体和不完全抗体完全抗体和不完全抗体血型检测血型检测不完全抗体的检测不完全抗体的检测交叉配血交叉配血1.1.检查程序：检查程序：3.3.检测技术和方法：检测技术和方法：对完全抗体的检测对不完全抗体的检测 盐水血凝试验盐水血凝试验 i 筛检筛检-促凝集方法促凝集方法i 木瓜酶木瓜酶i 聚凝胺聚凝胺i 确定确定-抗人球蛋白方法抗人球蛋白方法i 传统传统Coombs Testi 微柱凝胶试验微柱凝胶试验输血前的输血相容性血型血清学检查输血前的输血相容性血型血清学检查6/29/202436红细胞血型血清学实验技术的临床应用2.抗体 性常用红细胞血型血清学实验技术常用红细胞血型血清学实验技术 一一盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验应用范围：应用范围：主要用于主要用于IgMIgM抗体的检出、抗体的检出、鉴定、配血；鉴定、配血；本法最为简便、快速、价廉，但有局限性：本法最为简便、快速、价廉，但有局限性：只能检出只能检出ABOABO、P P、LewisLewis等系统的抗体；等系统的抗体；不能检出不能检出RhRh、KiddKidd、DuffyDuffy等系统的抗体。等系统的抗体。6/29/202437常用红细胞血型血清学实验技术 一盐水介质凝集试验8/11/常用红细胞血型血清学实验技术常用红细胞血型血清学实验技术二、酶处理细胞的凝集试验二、酶处理细胞的凝集试验 主要用于抗体筛查和交叉配血主要用于抗体筛查和交叉配血常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、无花果酶等常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、无花果酶等优点：可以增强一些抗原抗体系统的反应活性，优点：可以增强一些抗原抗体系统的反应活性，对对RhRh和和KiddKidd系统最明显系统最明显缺点：会破坏一些抗原的结构缺点：会破坏一些抗原的结构(M(M、N N、FyaFya、Fyb)Fyb)；酶液批次不同，有活性差异，每批次都需标化；酶液批次不同，有活性差异，每批次都需标化最适孵育时间。最适孵育时间。6/29/202438常用红细胞血型血清学实验技术二、酶处理细胞的凝集试验 8/1常用红细胞血型血清学实验技术常用红细胞血型血清学实验技术三、聚凝胺试验聚凝胺试验主要用于抗体筛查和交叉配血主要用于抗体筛查和交叉配血优点：简便快捷，对优点：简便快捷，对RhRh系统敏感度高系统敏感度高缺点：可增强自身抗体或冷凝集素干扰，缺点：可增强自身抗体或冷凝集素干扰，对对KellKell系统不敏感。系统不敏感。注意事项：抗原抗体比例适当；聚凝胺要注意事项：抗原抗体比例适当；聚凝胺要去除干净；排除肝素等的干扰。去除干净；排除肝素等的干扰。6/29/202439常用红细胞血型血清学实验技术三、聚凝胺试验8/11/2023常用红细胞血型血清学实验技术常用红细胞血型血清学实验技术四、抗球蛋白试验（四、抗球蛋白试验（Coombs TestCoombs Test）主要用于抗体筛查、交叉配血、新生儿溶血病、主要用于抗体筛查、交叉配血、新生儿溶血病、自身免疫性疾病（贫血等）检测。自身免疫性疾病（贫血等）检测。抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白含有抗抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白含有抗IgGIgG、抗抗C3dC3d、抗、抗C3bC3b、抗、抗C4bC4b、抗、抗IgMIgM、抗、抗IgAIgA；单特；单特异性抗球蛋白主要有抗异性抗球蛋白主要有抗IgGIgG和抗和抗C3dC3d两种，主要两种，主要应用于抗体阳性者分类鉴定。应用于抗体阳性者分类鉴定。6/29/202440常用红细胞血型血清学实验技术四、抗球蛋白试验（Coombs 常用红细胞血型血清学实验技术常用红细胞血型血清学实验技术抗球蛋白试验特点：抗球蛋白试验特点：（1 1）是血清血型学试验中经典试验，用于各）是血清血型学试验中经典试验，用于各种血型抗原抗体鉴定。种血型抗原抗体鉴定。（2 2）试验同时需做阳性、阴性及自身对照试）试验同时需做阳性、阴性及自身对照试验，验，“结果结果”方才可靠。方才可靠。（3 3）检测）检测IgGIgG抗体最为可靠。抗体最为可靠。（4 4）操作烦琐，影响试验结果的因素众多。）操作烦琐，影响试验结果的因素众多。6/29/202441常用红细胞血型血清学实验技术抗球蛋白试验特点：8/11/2常用红细胞血型血清学实验技术常用红细胞血型血清学实验技术五、微柱凝胶试验五、微柱凝胶试验基本可以替代传统的红基本可以替代传统的红细胞血清学实验方法细胞血清学实验方法灵敏度高、特异性强、灵敏度高、特异性强、结果直观并可永久保存结果直观并可永久保存血型鉴定血型鉴定抗体筛检和鉴定抗体筛检和鉴定交叉配血交叉配血抗体效价抗体效价新生儿溶血病新生儿溶血病抗人球蛋白实验抗人球蛋白实验6/29/202442常用红细胞血型血清学实验技术五、微柱凝胶试验血型鉴定8/11红细胞血型血清学实验技术原理红细胞抗原和相应抗体的凝集反应红细胞抗原和相应抗体的凝集反应IgMIgM抗体凝集红细胞抗体凝集红细胞IgGIgG抗体凝集红细胞抗体凝集红细胞（有活性的补体参与则为溶血）（有活性的补体参与则为溶血）6/29/202443红细胞血型血清学实验技术原理红细胞抗原和相应抗体的凝集反应8AgglutinationClumping or agglutination of erythrocytesBecause the corresponding antibodies are lacking,there is due to antibodies no agglutination and the cells remain in suspension以红细胞凝集或溶血为反应终点和判断标准6/29/202444AgglutinationClumping or agglu玻片法6/29/202445玻片法8/11/202345试管法6/29/202446试管法8/11/2023466/29/2024478/11/202347弱凝集反应结果通常不易判断。弱凝集反应结果通常不易判断。弱凝集反应结果通常不易判断。弱凝集反应结果通常不易判断。非固定性结果非固定性结果非固定性结果非固定性结果-不便移交上级主管人员审核。不便移交上级主管人员审核。不便移交上级主管人员审核。不便移交上级主管人员审核。6/29/202448弱凝集反应结果通常不易判断。8/11/202348微微孔孔板板法法凝凝集集6/29/202449微孔板法凝集8/11/202349Solid phase technique Compare between agglutination and solid phase6/29/202450Solid phase technique8/11/2023Solid phase technique6/29/202451Solid phase technique8/11/2023Reaction environment NaCl6/29/202452Reaction environment NaCl8/11/Complete antibodiesRed cells in PBS with water jacketComplete antibodies(IgM,pentamer)Agglutination6/29/202453Complete antibodiesRed cellIgM抗体凝集红细胞示意图IgMIgM在盐水介质中在盐水介质中产生凝集产生凝集6/29/202454IgM抗体凝集红细胞示意图IgM在盐水介质中产生凝集8/11Incomplete antibodiesIncomplete antibodies(IgG monomer)“Sensitized”red cellsRed cells in PBS with water jacket6/29/202455Incomplete antibodiesIncomplIgG抗体与红细胞抗原反应示意图IgGIgG在盐水介质中在盐水介质中不产生凝集不产生凝集6/29/202456IgG抗体与红细胞抗原反应示意图IgG在盐水介质中不产生凝集缩短间距，IgG使红细胞凝集酶处理、凝聚胺酶处理、凝聚胺6/29/202457缩短间距，IgG使红细胞凝集酶处理、凝聚胺8/11/202POLYBRENE凝集细胞示意图凝集细胞示意图+聚凝胺+无凝集+有凝集反应-枸橼酸纳-6/29/202458POLYBRENE凝集细胞示意图+聚凝胺+无增强技术白蛋白增强凝集法白蛋白增强凝集法白蛋白能提高红细胞悬浮液中的介电常数，从而白蛋白能提高红细胞悬浮液中的介电常数，从而降低降低zetezete电位，缩小了细胞间距离，增加细胞与电位，缩小了细胞间距离，增加细胞与细胞的接触面。细胞的接触面。低离子强度盐溶液（低离子强度盐溶液（LissLiss）法）法 在凝集反应第一阶段，若降低介质的离子强度，在凝集反应第一阶段，若降低介质的离子强度，就会减少红细胞周围的阳离子云，促进带正电荷就会减少红细胞周围的阳离子云，促进带正电荷的的IgGIgG与带负电荷的红细胞发生反应。与带负电荷的红细胞发生反应。6/29/202459增强技术白蛋白增强凝集法8/11/202359抗球蛋白试验6/29/202460抗球蛋白试验8/11/202360Antiglobuline TestAgglutination by adding antiglobuline serumIncomplete antibodies(IgG monomer)“Sensitized”red cellsAntiglobuline antibodies(Coombs serum)Red cells in PBS with water jacket6/29/202461Antiglobuline TestAgglutinatio微柱凝胶技术 凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。当抗原抗心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应抗人球蛋白试验时，血细胞发生凝集。离体反应抗人球蛋白试验时，血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应；未凝集血细胞离心时可通过凝胶间呈阳性反应；未凝集血细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。6/29/202462微柱凝胶技术 凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术Principle of gel technique6/29/202463Principle of gel technique8/11MGIA性质:红细胞凝集试验6/29/202464MGIA性质:红细胞凝集试验4+2+8/11/202364Principle of gel technique凝集反应凝集反应:颗粒性抗原与相应抗体在颗粒性抗原与相应抗体在盐水盐水介质中介质中(试管中或玻片上试管中或玻片上)出现的肉眼可见出现的肉眼可见的反应的反应微柱凝胶免疫反应：红细胞抗原与相应抗微柱凝胶免疫反应：红细胞抗原与相应抗体在体在胶质介质中胶质介质中(微柱凝胶中微柱凝胶中)出现的肉眼出现的肉眼可见的反应。可见的反应。6/29/202465Principle of gel technique凝集反应Principle of gel technique中中 性性 胶：微柱腔内及凝胶中不含特异性抗体胶：微柱腔内及凝胶中不含特异性抗体,也不含抗人球蛋白。也不含抗人球蛋白。抗人球胶：微柱腔内及凝胶中含抗人球蛋白。抗人球胶：微柱腔内及凝胶中含抗人球蛋白。特异性胶：微柱腔内及凝胶中含特异性抗体。特异性胶：微柱腔内及凝胶中含特异性抗体。如该抗体是完全抗体，则：中性胶如该抗体是完全抗体，则：中性胶+抗体；如抗体；如该抗体为不完全抗体，则：中性胶该抗体为不完全抗体，则：中性胶+抗体抗体+抗人球。抗人球。6/29/202466Principle of gel technique中 性 血液样本检测结果判断标准结果判读注意事项：结果判读注意事项：正定管正定管A、B、D，4为阳性结果，为阳性结果，（0）为阴性结）为阴性结果。果。1至至3时时需进一步分析，需进一步分析，可能为亚型或弱可能为亚型或弱化抗原。化抗原。反定管反定管1至至 4为阳性结果。为阳性结果。质控（质控（Ctl）管应）管应为（为（0）阴性。）阴性。6/29/202467血液样本检测结果判断标准结果判读注意事项：8/11/2023 血液样本检测结果判断标准6/29/202468 血液样本检测结果判断标准8/11/202368