最低检测限与教学课件

最低检测限与最低检测限与31、园日涉以成趣，门虽设而常关。32、鼓腹无所思。朝起暮归眠。33、倾壶绝余沥，窥灶不见烟。34、春秋满四泽，夏云多奇峰，秋月扬明辉，冬岭秀孤松。35、丈夫志四海，我愿不知老。（二）实验试剂（二）实验试剂 1 1、双缩脲试剂、双缩脲试剂2 2、标准液、标准液本试剂盒为总蛋白本试剂盒为总蛋白50g/L50g/L氢氧化钠氢氧化钠 酒石酸钾钠酒石酸钾钠 硫酸铜硫酸铜 碘化钾碘化钾（三）操作方法（三）操作方法 1 1、操作参数：、操作参数：波长：波长：540nm540nm温度：温度：3737测定模式：终点法测定模式：终点法 2.2.操作步骤操作步骤（ul）BSUDH2O20标准液20血清20双缩脲试剂100010001000 混匀，37水浴10分钟，在540nm波长处，用空白管调零，读取各管吸光度。3 3、计算、计算血清总蛋白血清总蛋白(g/L)(g/L)=测定管吸光度测定管吸光度标准管吸光度标准管吸光度蛋白标准液浓度蛋白标准液浓度（50g/L）参考值参考值：6083g/L（四）注意事项（四）注意事项 1.1.严重溶血和黄疸可使测定结果偏高严重溶血和黄疸可使测定结果偏高,可可2.2.作标本空白管消除。作标本空白管消除。2.2.脂肪乳糜干扰比色，可加丙酮离心。脂肪乳糜干扰比色，可加丙酮离心。3.3.右旋糖酐可使测定产生混浊影响结果。右旋糖酐可使测定产生混浊影响结果。4.4.灵敏度较低。灵敏度较低。1.1.精密度较好、准确度较高，精密度较好、准确度较高，WHO推荐方法。推荐方法。（五）方法学评价（五）方法学评价3.3.操作简便你、快速，成本低廉。操作简便你、快速，成本低廉。2.2.线性范围宽（线性范围宽（10-120g/L10-120g/L）。）。（六）临床意义（六）临床意义1.1.蛋白浓度升高蛋白浓度升高（1 1）血液浓缩：脱水、外伤性休克等。）血液浓缩：脱水、外伤性休克等。（2 2）蛋白质合成增加：多发性骨髓瘤、）蛋白质合成增加：多发性骨髓瘤、免疫增殖病等。免疫增殖病等。（3 3）蛋白质合成障碍：如肝脏疾病。）蛋白质合成障碍：如肝脏疾病。（1 1）蛋白丢失：如肾病综合征。）蛋白丢失：如肾病综合征。2.2.蛋白浓度降低蛋白浓度降低（2 2）摄入不足：营养不良。）摄入不足：营养不良。二、检测低限试验二、检测低限试验 检测低限（检测低限（LLD）：指当标本中不含有待）：指当标本中不含有待测分析物时，反应响应量可能出现的数值范测分析物时，反应响应量可能出现的数值范围，即单次测量可达到的非空白检测响应量围，即单次测量可达到的非空白检测响应量对应的分析物量。对应的分析物量。生物检测限（生物检测限（BLD）：某样品单次检测可）：某样品单次检测可能具有的最小响应量刚大于空白检测低限响能具有的最小响应量刚大于空白检测低限响 应量时，该样品内含有的分析物浓度或其它应量时，该样品内含有的分析物浓度或其它量值。量值。功能灵敏度（功能灵敏度（FS）：以日间重复）：以日间重复CV为为20%时对应检测限样品具有的平均浓度确定为检时对应检测限样品具有的平均浓度确定为检测系统或方法可定量报告的分析物的最低浓测系统或方法可定量报告的分析物的最低浓度或其它量值度或其它量值。（一）原理（一）原理 选择合适的空白标本，该标本与待测标本选择合适的空白标本，该标本与待测标本的区别在于不含有待测物质，一般用处理过的区别在于不含有待测物质，一般用处理过的标本或一般标本，在分析步骤中省去关键的标本或一般标本，在分析步骤中省去关键试剂或操作。本次实验采用蒸馏水作为空白试剂或操作。本次实验采用蒸馏水作为空白标本，采用双缩脲法进行多次测定，求出吸标本，采用双缩脲法进行多次测定，求出吸光度的均值及标准差，计算最低检测限。光度的均值及标准差，计算最低检测限。（二）操作步骤（二）操作步骤（ul）BSU（1-10）DH2O20标准液标准液20双缩脲试剂双缩脲试剂100010001000 混匀，混匀，3737水浴水浴1010分钟，在分钟，在540nm540nm波长处，波长处，用空白管调零，读取各管吸光度。用空白管调零，读取各管吸光度。（三）计算（三）计算 1.计算计算10次测定的平均吸光度及标准差。次测定的平均吸光度及标准差。2.计算最低检测限：平均吸光度计算最低检测限：平均吸光度+3S 3.将吸光度值转换成浓度单位。将吸光度值转换成浓度单位。LLD=A低低/A标标C标标 可报告范围（可报告范围（RR）：指可以报告的所有结）：指可以报告的所有结果的范围，包含两种类型的范围，即分析测果的范围，包含两种类型的范围，即分析测量范围和临床可报告范围。量范围和临床可报告范围。三、线性范围试验三、线性范围试验 分析测量范围（分析测量范围（AMR）：指对没有进行任）：指对没有进行任何预处理（稀释、浓度等）的标本，由检测何预处理（稀释、浓度等）的标本，由检测系统直接测量得到的待测物的可靠结果范围，系统直接测量得到的待测物的可靠结果范围，在此范围内一系列不同样本分析物的测量值在此范围内一系列不同样本分析物的测量值与其实际浓度（真值）呈线性比例关系。也与其实际浓度（真值）呈线性比例关系。也即线性范围。即线性范围。临床可报告范围（临床可报告范围（CRR）：指定量检测项）：指定量检测项目向临床能报告的检测范围，患者样本可经目向临床能报告的检测范围，患者样本可经稀释、浓缩或其它稀释、浓缩或其它预处理。预处理。（一）原理（一）原理 线性范围是指系统最终输出值（浓度或活线性范围是指系统最终输出值（浓度或活性）与被分析物浓度或活性成比例的范围。性）与被分析物浓度或活性成比例的范围。线性范围的测定即测定浓度曲线接近直线的线性范围的测定即测定浓度曲线接近直线的程度，它反映整个系统的输出特征。程度，它反映整个系统的输出特征。本试验使用不同浓度的总蛋白标准溶液，本试验使用不同浓度的总蛋白标准溶液，用双缩脲试剂测定各自的浓度，以标准液预用双缩脲试剂测定各自的浓度，以标准液预期浓度为横坐标，测得浓度为纵坐标，在坐期浓度为横坐标，测得浓度为纵坐标，在坐标纸上作图，即可绘制出一条直线，即计量标纸上作图，即可绘制出一条直线，即计量反应曲线。反应曲线。（二）试剂（二）试剂 1.蛋白质标准液（蛋白质标准液（50g/L）2.混合血清（混合血清（100g/L）3.双缩脲试剂双缩脲试剂（三）操作步骤（三）操作步骤 各测定管均测定双份，混匀，各测定管均测定双份，混匀，3737水浴水浴1010分钟，在分钟，在540nm540nm波长处，用空白管调零，读波长处，用空白管调零，读取各管吸光度。取各管吸光度。（ul）BSU1U2U3U4U5DH2O20161284标准液标准液20血清血清48121620试剂试剂1000100010001000100010001000（四）记录实验数据（四）记录实验数据（五）评价（五）评价 1.1.目测法：是评估几个不同浓度样本的目测法：是评估几个不同浓度样本的多次测量均值与实际值之间是否具有肉眼上多次测量均值与实际值之间是否具有肉眼上的直线关系。没有用到统计学方法来验证线的直线关系。没有用到统计学方法来验证线性。性。2.平均斜率法：是采用最小二乘法直线回归作平均斜率法：是采用最小二乘法直线回归作统计分析方法。统计分析方法。以总蛋白浓度预期值为横坐以总蛋白浓度预期值为横坐标，测定值为纵坐标，在坐标纸上作图，若标，测定值为纵坐标，在坐标纸上作图，若所有实验点在坐标纸上呈明显直线趋势，建所有实验点在坐标纸上呈明显直线趋势，建立回归方程立回归方程y=a+bx，要求，要求a a接近于接近于0 0，b b在在0.971.03之间，若满足此条件，则可直接判之间，若满足此条件，则可直接判断该测定方法是否在所要求的线性范围。断该测定方法是否在所要求的线性范围。若若a较大，较大，b1.03或或0.97则认为在高浓度则认为在高浓度或低浓度处的实测值和预期值间有较大偏差。或低浓度处的实测值和预期值间有较大偏差。试着舍去某组数据，另作回归分析，直到试着舍去某组数据，另作回归分析，直到a接接近于近于0，b在在0.971.03之间，此时缩小的分析之间，此时缩小的分析范围是真实的可报告范围。范围是真实的可报告范围。下次课预习内容下次课预习内容标准曲线制作（赖氏法测定标准曲线制作（赖氏法测定ALT)6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。斯宾诺莎斯宾诺莎7、自知之明是最难得的知识。、自知之明是最难得的知识。西班牙西班牙8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。塞内加塞内加9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。赫尔普斯赫尔普斯10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。笛卡儿笛卡儿 Thank you拯畏怖汾关炉烹霉躲渠早膘岸缅兰辆坐蔬光膊列板哮瞥疹傻俘源拯割宜跟三叉神经痛-治疗三叉神经痛-治疗