微生物的实验室培养医学知识培训ppt课件

微生物的实验室培养医学知识微生物的实验室培养医学知识1二二.实验操作实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌大肠杆菌2微生物的实验室培养医学知识二.实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基大肠杆菌2微生物2（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g将上述物质溶解后，添加水，定容至1000mL3微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛3（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算：计算：根据配方比例，计算根据配方比例，计算100mL100mL培养基各成分用量培养基各成分用量牛肉膏：0.5g蛋白胨：1.0gNaCl：0.5g琼脂：2.0g2.2.称量：称量：准确称取各成分准确称取各成分4微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：牛肉膏：0.5g24电子天平（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基2.2.称量：称量：准确称取各成分准确称取各成分注注意意：称称取取牛牛肉肉膏膏和和蛋蛋白白胨胨时时动动作作要要迅迅速速，称后要及时盖上瓶盖称后要及时盖上瓶盖牛肉膏：0.5g蛋白胨：1.0gNaCl：0.5g琼脂：2.0g5微生物的实验室培养医学知识电子天平（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基2.称量：注意：称取5（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基3.3.溶化：溶化：加水加热溶化牛肉膏加水加热溶化牛肉膏牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，溶化后取出称量纸牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，溶化后取出称量纸加入蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解加入蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解加入琼脂，加入琼脂，不断搅棒不断搅棒熔解熔解用蒸馏水定容到用蒸馏水定容到100mL100mL目的：防止琼脂糊底而导致烧杯破裂目的：防止琼脂糊底而导致烧杯破裂6微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基3.溶化：目的：防止琼脂糊底6（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基4.4.调调 pHpH：用用1mol/L1mol/L的的NaOHNaOH溶液调节溶液调节pHpH至至偏碱性偏碱性（pH7.6pH7.6）pH试纸7微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基4.调 pH：pH试纸7微生7（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基5.5.灭菌：灭菌：v将将配配置置好好的的培培养养基基用用玻玻棒棒转转移移至至三三角角锥锥瓶瓶中中，塞塞上上棉棉花花塞塞，包包上上牛牛皮皮纸纸，再再放放入入高高压压蒸蒸气气灭灭菌锅菌锅内灭菌内灭菌151530min30min8微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基5.灭菌：8微生物的实验室培8（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基5.5.灭菌：灭菌：v将将配配置置好好的的培培养养基基用用玻玻棒棒转转移移至至三三角角锥锥瓶瓶中中，塞塞上上棉棉花花塞塞，包包上上牛牛皮皮纸纸，再再放放入入高高压压蒸蒸气气灭灭菌锅菌锅内灭菌内灭菌151530min30minv将将培培养养皿皿用用旧旧报报纸纸包包紧紧，放放入入干干热热灭灭菌菌箱箱内内灭灭菌菌2h2h9微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基5.灭菌：9微生物的实验室培9（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基6.6.倒平板：倒平板：待培养基冷却到待培养基冷却到5050左右左右时，在时，在酒精灯火焰酒精灯火焰附近附近倒平板倒平板讨论讨论1 1：你用什么办法来估计培养基的温度？用手触摸锥形瓶，感觉温度刚好不烫手用手触摸锥形瓶，感觉温度刚好不烫手10微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基6.倒平板：讨论1：你用什么10倒平板操作倒平板操作1 11.1.右右手手拿拿装装有有培培养养基基的的锥锥形形瓶瓶，左左手手拨出棉塞拨出棉塞11微生物的实验室培养医学知识倒平板操作11.右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞11微11倒平板操作倒平板操作2 22.2.右右手手拿拿锥锥形形瓶瓶，使使瓶瓶口口迅迅速速通通过过火火焰焰讨论讨论2 2：为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？进行灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基进行灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基12微生物的实验室培养医学知识倒平板操作22.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰讨论2：为什12倒平板操作倒平板操作3 33.3.用用左左手手的的拇拇指指和和食食指指将将培培养养皿皿打打开开一一条条稍稍大大于于瓶瓶口口的的缝缝隙隙，右右手手将将锥锥形形瓶瓶中中的的培培养养基基(约约10-20mL)10-20mL)倒倒入入培培养养皿皿，左左手手立立即即盖盖上上培养皿的皿盖培养皿的皿盖13微生物的实验室培养医学知识倒平板操作33.用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口13倒平板操作倒平板操作4 44.4.等等待待平平板板冷冷却却凝凝固固（大大约约5-10min5-10min）后后，将将平平板板倒倒过过来来放置放置讨论讨论3 3：平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平平板板冷冷凝凝后后，皿皿盖盖上上会会凝凝结结出出水水珠珠，凝凝固固后后的的培培养养基基表表面面的的温温度度较较高高，将将平平板板倒倒置置，既既可可防防止止皿皿盖盖上上的的水水珠珠落落入入培培养养基基，造造成成污污染染，又又可可避避免免培培养养基基中中水水分分过快地挥发过快地挥发14微生物的实验室培养医学知识倒平板操作44.等待平板冷却凝固（大约5-10min）后，将14讨讨论论4 4：在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？不不能能，空空气气中中的的微微生生物物可可能能在在皿皿盖盖与与皿皿底底之之间的培养基上滋生，造成污染间的培养基上滋生，造成污染注注意意：倒倒平平板板时时，不不能能将将培培养养基基溅溅在在皿皿盖盖与与皿皿底之间的部位底之间的部位倒平板操作倒平板操作15微生物的实验室培养医学知识讨论4：在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之15微生物的实验室培养医学知识培训ppt课件16（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌1.1.微生物的分离与纯化：微生物的分离与纯化：从从混混杂杂微微生生物物群群体体中中获获得得只只含含某某一一种种或或某某一一株株微生物的过程微生物的过程，称为微生物的分离与纯化 利用固体培养基，将混杂细菌分散或稀释成单个细胞，使其繁殖成单个菌落2.2.微生物接种方法：微生物接种方法：平板划线法平板划线法 稀释涂布平板法稀释涂布平板法 工具：接种环17微生物的实验室培养医学知识（二）纯化大肠杆菌1.微生物的分离与纯化：17微生物的实验室17平板划线操作平板划线操作18微生物的实验室培养医学知识平板划线操作18微生物的实验室培养医学知识18平板划线操作平板划线操作19微生物的实验室培养医学知识平板划线操作19微生物的实验室培养医学知识19平板划线操作平板划线操作土壤稀释液土壤稀释液20微生物的实验室培养医学知识平板划线操作土壤稀释液20微生物的实验室培养医学知识20平板划线操作平板划线操作21微生物的实验室培养医学知识平板划线操作21微生物的实验室培养医学知识21平板划线操作平板划线操作22微生物的实验室培养医学知识平板划线操作22微生物的实验室培养医学知识22平板划线操作平板划线操作23微生物的实验室培养医学知识平板划线操作23微生物的实验室培养医学知识23平板划线操作平板划线操作用力不能过大24微生物的实验室培养医学知识平板划线操作用力不能过大24微生物的实验室培养医学知识24平板划线操作平板划线操作25微生物的实验室培养医学知识平板划线操作25微生物的实验室培养医学知识25平板划线操作平板划线操作区域一区域二区域三区域四区域五26微生物的实验室培养医学知识平板划线操作区域一区域二区域三区域四区域五26微生物的实验室26平板划线操作平板划线操作27微生物的实验室培养医学知识平板划线操作27微生物的实验室培养医学知识27思考：思考：平板划线操作的整个过程，是如何实现纯化大肠杆菌的？28微生物的实验室培养医学知识思考：平板划线操作的整个过程，是如何实现纯化大肠杆菌的？2828平板划线操作平板划线操作区域一区域二区域三区域四区域五菌种多菌种多菌种少菌种少菌种减少菌种减少菌种减少菌种减少菌种减少菌种减少菌种最少菌种最少29微生物的实验室培养医学知识平板划线操作区域一区域二区域三区域四区域五菌种多菌种少菌种减2930微生物的实验室培养医学知识30微生物的实验室培养医学知识30