免疫血液学红细胞血小板配血试验培训ppt课件

免疫血液学免疫血液学红细胞血胞血小板配血小板配血试验免疫血液学红细胞血小板配血试验人人类白白细胞抗原代表个体特异性胞抗原代表个体特异性与移植排斥有关的抗原称与移植排斥有关的抗原称为组织相容性抗原或相容性抗原或移植抗原移植抗原-MHS-MHS编码MHSMHS的基因的基因组称称为主要主要组织相容性复合物相容性复合物(MHC)(MHC)人人类的的MHCMHC是首先在白是首先在白细胞上胞上发现的，称的，称为人人类白白细胞抗原胞抗原(humanleukocyteantigen(humanleukocyteantigen，HLA)HLA)免疫血液学红细胞血小板配血试验2一、人类白细胞抗原人类白细胞抗原代表个体特异性免HLAHLA的研究历史的研究历史最早最早发现人人类白白细胞抗原者胞抗原者为Dausset-1954Dausset-1954年年HLAHLA不不仅仅是白是白细胞特异性同种抗原。胞特异性同种抗原。它是分布广泛的它是分布广泛的组织抗原。抗原。免疫血液学红细胞血小板配血试验3HLA的研究历史最早发现人类白细胞抗原者为Dausset-1HLAHLA的分型命名的分型命名血清学分型命名血清学分型命名具有具有临床意床意义的的HLAHLA基因有基因有A A、B B、C C、DRDR、DQDQ、DPDP等位等位点点(Loci)(Loci)，每个位点又有若干等位基因，每个位点又有若干等位基因，这些基因的些基因的产物便是物便是HLAHLA抗原。抗原。临床意床意义比比较大的大的HLA-AHLA-A、B B、C C称称为类抗原抗原HLA-DRHLA-DR、DQDQ、DPDP称称为类抗原。抗原。免疫血液学红细胞血小板配血试验4HLA的分型命名免疫血液学红细胞血小板配血试HLAHLA的遗传的遗传单体型体型遗传存在基因重存在基因重组多多态性性现象象连锁不平衡不平衡免疫血液学红细胞血小板配血试验5HLA的遗传单体型遗传免疫血液学红细胞血小板配血 HLAHLA抗体及抗体检测抗体及抗体检测临床上床上HLAHLA抗体多由抗体多由妊娠、妊娠、输血或器官移植等免疫血或器官移植等免疫产生生免疫血液学红细胞血小板配血试验6HLA抗体及抗体检测免疫血液学红细胞血小板配血试验6HLAHLA在医学中的应用在医学中的应用一、一、HLAHLA与与输血血HLAHLA与非溶血性与非溶血性输血反血反应HLAHLA与血小板与血小板输注注二、二、HLAHLA与器官移植与器官移植(一一)肾移植移植(二二)骨髓移植骨髓移植三、三、HLAHLA与与亲子子鉴定定免疫血液学红细胞血小板配血试验7HLA在医学中的应用一、HLA与输血免疫血液学红细胞血小u一一类是与其他是与其他细胞表面或胞表面或组织共有的共有的抗原，称抗原，称血小板相关抗原血小板相关抗原u另一另一类为血小板特异性抗原血小板特异性抗原免疫血液学红细胞血小板配血试验8二、血小板血型免疫血液学红细胞血小板配血试验8血小板血型血小板血型u相关抗原：相关抗原：主要与主要与红细胞的胞的ABOABO血型系血型系统以及以及人人类白白细胞抗原胞抗原(HLA)(HLA)有关有关u特异性抗原：特异性抗原：由血小板特有的抗原决定簇由血小板特有的抗原决定簇组成，成，表表现出血小板独特的出血小板独特的遗传多多态性，在其他性，在其他细胞和胞和组织上不能上不能发现免疫血液学红细胞血小板配血试验9血小板血型相关抗原：主要与红细胞的ABO血型系统以及人类白细血小板血型血小板血型u血小板表面存在血小板表面存在红细胞胞ABOABO系系统的的A A抗原和抗原和B B抗原抗原,可能是从可能是从血血浆中吸附中吸附上的。上的。u是否是否还存在其他存在其他红细胞血型抗原尚在探胞血型抗原尚在探讨之中之中u在我国，通常在我国，通常进行行ABOABO同型血小板同型血小板输血血免疫血液学红细胞血小板配血试验10血小板血型血小板表面存在红细胞ABO系统的A抗原和B抗原,可配合性血小板输注配合性血小板输注ABOABO同型同型血小板抗体的血小板抗体的筛选交叉配合交叉配合试验：确保供受体的血小板：确保供受体的血小板型和型和HLAHLA型的配合型的配合免疫血液学红细胞血小板配血试验11配合性血小板输注ABO同型免疫血液学红细胞血小板配血试验11血小板血型血小板血型血小板特异性抗原血小板特异性抗原n具有独特的型特异性，并构成血小板膜具有独特的型特异性，并构成血小板膜结构中构中的一部分的一部分n血小板特异性抗原有血小板特异性抗原有6 6个血型系个血型系统2424个抗原，正个抗原，正式命名式命名为HPA-1HPA-1、HPA-2HPA-2、HPA-3HPA-3、HPA-4HPA-4、HPA-5HPA-5、HPA-15HPA-15免疫血液学红细胞血小板配血试验12血小板血型血小板特异性抗原免疫血液学红细胞血小板配血小板血型的临床意义血小板血型的临床意义一一.血小板血小板输注无效性注无效性(PTR)(PTR)二二.输血后紫癜血后紫癜(PTP)(PTP)三三.新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAITP)(NAITP)四.血小板的自身免疫作用血小板的自身免疫作用-特特发性血小板减少性性血小板减少性紫癜紫癜(简称称ITP)ITP)免疫血液学红细胞血小板配血试验13血小板血型的临床意义一.血小板输注无效性(PTR)免疫血液学血小板同种抗体与输血血小板同种抗体与输血1.ABO1.ABO血型的血型的选择 一般需要做主一般需要做主侧或次或次侧的交叉配血，最好的交叉配血，最好输注注ABOABO血型配合的血小板血型配合的血小板22RhRh血型的血型的选择 D D阴性的患者，最好要避免用阴性的患者，最好要避免用D D阳性献血者的阳性献血者的浓缩血小板。血小板。对育育龄妇女可以注射女可以注射RhRh免疫球蛋白免疫球蛋白免疫血液学红细胞血小板配血试验14血小板同种抗体与输血免疫血液学红细胞血小板配血试验14 目的目的:供者与患者的血液供者与患者的血液 安全安全有效有效相容相容免疫血液学红细胞血小板配血试验15三、输血前免疫血液学检查目的:供者与患者的血液安全有效输血前免疫血液学检查输血前免疫血液学检查内容：内容：1.1.患者的病史、患者的病史、标本的核本的核对及及处理理2.2.供受双方供受双方ABOABO、RhRh血型血型鉴定定3.3.不不规则抗体的抗体的筛选和和鉴定定4.4.交叉配血交叉配血试验5.5.报告和告和发血血免疫血液学红细胞血小板配血试验16输血前免疫血液学检查内容：免疫血液学红细胞血小板配血试验16标标 本本一、一、标本采集本采集二、二、红细胞胞悬液的配制液的配制三、三、标本的保存本的保存免疫血液学红细胞血小板配血试验17标本一、标本采集免疫血液学红细胞血小板配血试验17标标 本本一、一、标本采集本采集1 1红细胞胞标本本-ACD-ACD或或CPDCPD、(Na(Na2 2-EDTA)-EDTA)抗抗凝静脉血凝静脉血少数患者有一种自身抗体少数患者有一种自身抗体-不宜用抗凝不宜用抗凝血液作血液作为红细胞抗原胞抗原标本本免疫血液学红细胞血小板配血试验18标本一、标本采集免疫血液学红细胞血小板配血试验182 2血清血清标本本一般一般实验避免使用血避免使用血浆配血配血试验用血清用血清不超不超过7272小小时免疫血液学红细胞血小板配血试验19免疫血液学红细胞血小板配血试验19二、二、红细胞胞悬液的配制液的配制1 1、红细胞胞悬液常用液常用浓度有度有2 2、5 5和和10102 2、2 2的的悬液一般用于滴定抗体效价，液一般用于滴定抗体效价，5 5的的悬液常用于血型液常用于血型鉴定和交叉配血定和交叉配血试验，1010的的悬液液则用于用于测定抗体的定抗体的亲合力。合力。免疫血液学红细胞血小板配血试验20二、红细胞悬液的配制免疫血液学红细胞血小板配血试验20三、三、标本的保存本的保存1 1血清血清标本本不稀不稀释的血清的血清标本如加有防腐本如加有防腐剂可在可在44保存数月保存数月,在在-20-20以下可保存数年以下可保存数年如用生理如用生理盐水稀水稀释的血清只限当天使用的血清只限当天使用2 2红细胞胞标本本一般一般试验用的凝血用的凝血标本要在本要在5 5天之内使用，以不溶血天之内使用，以不溶血为准。如用保存液可准。如用保存液可保存保存3 3周周用用盐水配制的水配制的红细胞胞悬液只能在当天使用液只能在当天使用免疫血液学红细胞血小板配血试验21三、标本的保存免疫血液学红细胞血小板配血试验21 供受双方供受双方ABOABO、RhRh血型鉴定血型鉴定ABOABO血型正反定型血型正反定型RhRh血型鉴定血型鉴定试管法试管法玻片法玻片法免疫血液学红细胞血小板配血试验22供受双方ABO、Rh血型鉴定ABO血型正反定型试管法玻片抗A、抗B以外的所有抗体统称为不规则抗体。常见于多次输血的人群不规则抗体的筛选和鉴定不规则抗体的筛选和鉴定免疫血液学红细胞血小板配血试验23抗A、抗B以外的所有抗体统称为不规则抗体。不规则抗体的筛选和不规则抗体的筛选和鉴定不规则抗体的筛选和鉴定患者血清患者血清+试剂筛选红细胞试剂筛选红细胞 盐水介质盐水介质 聚凝胺介质（最为常用）聚凝胺介质（最为常用）抗人球蛋白介质（最为常用敏感）抗人球蛋白介质（最为常用敏感）酶介质法酶介质法免疫血液学红细胞血小板配血试验24不规则抗体的筛选和鉴定患者血清+试剂筛选红细胞免疫血液学红细交叉配血试验交叉配血试验受者血清受者血清+供者红细胞供者红细胞受者红细胞受者红细胞+供者血清供者血清 方法方法主侧主侧次侧次侧 盐水介质盐水介质盐水介质盐水介质 聚凝胺介质聚凝胺介质聚凝胺介质聚凝胺介质 抗人球蛋白介质抗人球蛋白介质抗人球蛋白介质抗人球蛋白介质 酶介质法酶介质法酶介质法酶介质法免疫血液学红细胞血小板配血试验25交叉配血试验受者血清+供者红细胞主侧次侧盐水介质免疫血液红细胞抗原抗体反应过程红细胞抗原抗体反应过程抗原抗体的靠近：红细胞抗原位点带负电荷，抗体Fab端带正电（Kell系统抗原带正电荷）抗原抗体的结合：静电引力、氢键、疏水键及范德华力免疫血液学红细胞血小板配血试验26红细胞抗原抗体反应过程抗原抗体的靠近：免疫血液学红细胞血小板影响红细胞抗原抗体反应的因素影响红细胞抗原抗体反应的因素离子强度：反应液中的电解质会增加溶液的介电常数，减弱抗原抗体间的静电作用。降低离子强度可以显著增加抗原抗体结合速率。如:离子强度由0.17M降到0.03M时，抗D和D阳性红细胞的开始结合速率增加1000倍。免疫血液学红细胞血小板配血试验27影响红细胞抗原抗体反应的因素离子强度：免疫血液学红细胞血小板红细胞表面电荷及其相互之间的距离红细胞表面电荷及其相互之间的距离免疫血液学红细胞血小板配血试验28红细胞表面电荷及其相互之间的距离免疫血液学红细胞血小板配血试低离子低离子强度作用原理度作用原理当溶液中缺少离子时，抗原抗体之间的静电作用力强当溶液中离子增多时，抗原抗体之间的静电作用力弱抗原抗原非离子非离子静电作用力抗体抗体静电作用力离子抗原抗原抗体抗体免疫血液学红细胞血小板配血试验29低离子强度作用原理当溶液中缺少离子时，抗原抗体之间的静电作用聚凝胺技术免疫血液学红细胞血小板配血试验30聚凝胺技术免疫血液学红细胞血小板配血试验30（1）低离子聚凝胺交叉配血技术）低离子聚凝胺交叉配血技术n原理：聚凝胺（Polybrene），一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果使抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。免疫血液学红细胞血小板配血试验31（1）低离子聚凝胺交叉配血技术免疫血液学红细胞血小板配血试验1红细胞间有一定间距2加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集3加入枸橼酸钠，可以中和聚凝胺4红细胞的非特异性凝集消失聚凝胺交叉配血技术示意图聚凝胺交叉配血技术示意图1聚凝胺枸橼酸钠免疫血液学红细胞血小板配血试验321红细胞间有一定间距2加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的1红细胞上已有不完全抗体致敏2加入聚凝胺后，缩短红细胞之间的距离，让不完全抗体可以同时与两个红细胞结合使其特异性凝集3加入枸橼酸钠中和聚凝胺4由于不完全抗体的结合，红细胞的特异性凝集不消失聚凝胺交叉配血技术示意图2聚凝胺枸橼酸钠枸橼酸钠不完全抗体不完全抗体免疫血液学红细胞血小板配血试验331红细胞上已有不完全抗体致敏2加入聚凝胺后，缩短红细胞之试验分步原理血清红细胞悬液加入LIM混合液Polybrene受体血型抗原IgG抗 体迅速致敏免疫血液学红细胞血小板配血试验34试验分步原理血清红细胞悬液加入LIM混合液Polybrene试验分步原理Polybrene分子连接到红细胞上加入Polybrene免疫血液学红细胞血小板配血试验35试验分步原理Polybrene上海市血液中心血Polybre试验分步原理离心Polybrene拉 近红细胞间的距离并造成凝集1个IgG分子同时连接两个红细胞免疫血液学红细胞血小板配血试验36试验分步原理离心Polybrene拉近红细胞间的距离并造成凝试验分步原理加入重悬液减弱 了 Polybrene的作用加重悬液免疫血液学红细胞血小板配血试验37试验分步原理加入重悬液减弱了Polybrene的作用重悬液上试验分步原理已被血型抗体致敏的红细胞不会散开阳性结果免疫血液学红细胞血小板配血试验38试验分步原理已被血型抗体致敏的红细胞不会散开阳性结果免疫血液试验分步原理未被血型抗体致敏的红细胞很快散开阴性结果免疫血液学红细胞血小板配血试验39试验分步原理未被血型抗体致敏的红细胞很快散开阴性结果免疫血液注意事项注意事项n按比例加样n致敏时间n观察非特异性凝集n观察结果n关于冷凝集免疫血液学红细胞血小板配血试验40注意事项按比例加样免疫血液学红细胞血小板配血试验40聚凝胺方法的特点聚凝胺方法的特点n灵敏：灵敏：灵敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。n速度快：速度快：实验时间5分钟左右。n准确：准确：准确度高于酶试验。n不适合于不适合于Kell系统抗体的检测，但黄种人群中Kell系统抗体极罕见。n操作要求操作要求较高高免疫血液学红细胞血小板配血试验41聚凝胺方法的特点灵敏：灵敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。免疫免疫血液学红细胞血小板配血试验培训ppt课件42微柱凝胶技术免疫血液学红细胞血小板配血试验43微柱凝胶技术免疫血液学红细胞血小板配血试验43凝胶技术的原理凝胶技术的原理反应室外管壁反 应室 底孔内 套管壁凝胶或玻璃珠亲和凝胶试剂或盐水特殊粘液免疫血液学红细胞血小板配血试验44凝胶技术的原理反应室外管壁反应室底孔内套管壁凝凝胶技术的原理：凝胶技术的原理：A、反反应室：室：下端底孔很小，液体在孵育下端底孔很小，液体在孵育过程中不会流入下方微柱中。程中不会流入下方微柱中。B、试剂或或盐水水层：红细胞在离心力作用下胞在离心力作用下穿越穿越该层，红细胞与反胞与反应室中的血清分室中的血清分离并与离并与该层液体中的液体中的试剂反反应。C、粘液粘液：亲和柱中有一和柱中有一层粘液，作用与粘液，作用与“试剂或或盐水水层”相同。相同。免疫血液学红细胞血小板配血试验45凝胶技术的原理：A、反应室：下端底孔很小，液体在孵育过程中不1 1）敏敏感感：在在凝凝胶胶试验中中常常能能发现其其它它试验不不易易发现的的问题。2 2）结果果可可保保存存 凝凝胶胶试验的的结果果可可在在冰冰箱箱中中保保存存数日，并且数日，并且较容易被拍成照片。容易被拍成照片。3 3）操操作作技技术要要求求较低低：凝凝胶胶试验的的操操作作主主要要是是简单的的加加样和和判判读，孵孵育育、离离心心过程程都都有有专门的的设备。其中能被人。其中能被人为改改变的因素的因素较少。少。4)4)无需洗无需洗涤的抗球蛋白的抗球蛋白试验：优点：优点：免疫血液学红细胞血小板配血试验461）敏感：在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。优点缺点：缺点：n凝胶凝胶试验方法成本方法成本较高，需要特殊高，需要特殊设备。n高高度度敏敏感感有有时也也会会造造成成不不便便：有有报导应用用凝胶凝胶试验后，后，1/3001/300的的库血直抗阳性。血直抗阳性。免疫血液学红细胞血小板配血试验47缺点：凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。免疫血液学红细胞血2不完全抗体可以结合在红细胞不完全抗体可以结合在红细胞表面表面,但是不能和两个红细胞但是不能和两个红细胞同时结合（致敏）。同时结合（致敏）。3加入抗人球蛋白加入抗人球蛋白1红细胞彼此之间有一定的间距红细胞彼此之间有一定的间距4抗人球蛋白可以同时和两抗人球蛋白可以同时和两个不完全抗体的个不完全抗体的FC段结合，段结合，从而把红细胞连接在一起。从而把红细胞连接在一起。（3）抗人球蛋白交叉配血法示意图免疫血液学红细胞血小板配血试验482不完全抗体可以结合在红细胞表面,但是不能和两个红细胞同时结1.试剂红细胞试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体表面标有抗血小板抗体)2.加入供者血小板加入供者血小板3.试剂红细胞和血小板特异性结合试剂红细胞和血小板特异性结合4.加入受者的血清加入受者的血清,如有抗血小如有抗血小板抗体板抗体,则和血小板发生特异性则和血小板发生特异性结合结合5.凝胶柱中的抗人球蛋白捕获抗凝胶柱中的抗人球蛋白捕获抗血小板抗体血小板抗体,导致试剂红细胞凝导致试剂红细胞凝集。集。（4）血小板配血实验原理示意图（阳性）血小板配血实验原理示意图（阳性）免疫血液学红细胞血小板配血试验491.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体)2.加入供者血小板31.试剂红细胞试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体表面标有抗血小板抗体)2.加入供者血小板加入供者血小板3.试剂红细胞和血小板特异性结合试剂红细胞和血小板特异性结合4.加入受者的血清加入受者的血清,如血清中无如血清中无抗血小板抗体抗血小板抗体,则凝胶柱中的抗则凝胶柱中的抗人球蛋白不发生特异性结合，人球蛋白不发生特异性结合，试剂红细胞仍呈单个分布。试剂红细胞仍呈单个分布。血小板配血实验原理示意图（阴性反应）血小板配血实验原理示意图（阴性反应）免疫血液学红细胞血小板配血试验501.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体)2.加入供者血小板3免疫血液学红细胞血小板配血试验51免疫血液学红细胞血小板配血试验51发血程序发血程序（常规和紧急情况）（常规和紧急情况）n1.常规情况下发血的一般程序(1)临床申请(2)血液新鲜程度的选择(大量用血和新生儿)(3)血型的选择(ABO、Rh、新生儿换血、不规则抗体筛检)(4)交叉配血(5)发血，做好记录免疫血液学红细胞血小板配血试验52发血程序（常规和紧急情况）1.常规情况下发血的一般程序免疫血发血程序发血程序（常规和紧急情况）（常规和紧急情况）n2.紧急情况下发血的一般程序(1)快速检血型，选ABO、Rh同型血(2)标记“未经配血”字样(3)留供受者血样(4)发血后做好记录(5)与临床保持联系免疫血液学红细胞血小板配血试验53发血程序（常规和紧急情况）2.紧急情况下发血的一般程序免疫血小小 结结n1.掌握输血前检查内容n2.掌握几种常用的交叉配血试验的原理、方法和异同点n3.掌握临床输血和发血程序免疫血液学红细胞血小板配血试验54小结1.掌握输血前检查内容免疫血液学红细胞血小板配血试作作 业业n1.请列表比较红细胞血型系统中的抗原及产生抗体的异同点n2.请列表比较几种交叉配血的方法、操作步骤、所针对的抗体、注意事项的异同点，并进行多种配血方法的方法学评价。免疫血液学红细胞血小板配血试验55作业1.请列表比较红细胞血型系统中的抗原及产生抗体Bye!免疫血液学红细胞血小板配血试验56Bye!免疫血液学红细胞血小板配血试验56