苏景宽：国家基金申请技巧讲座课件

基金申请技巧讲座基金申请技巧讲座第四军医大学科研部第四军医大学科研部苏景宽苏景宽基金申请技巧讲座第四军医大学科研部苏景宽1第一部分第一部分 如何撰写申请书如何撰写申请书第一部分 如何撰写申请书2一、摘一、摘 要（限要（限400400字）字）包括：研究方法、内容、目标、科学意义。包括：研究方法、内容、目标、科学意义。包括：研究方法、内容、目标、科学意义。包括：研究方法、内容、目标、科学意义。如：采用如：采用方法，进行方法，进行研究，研究，阐明阐明机制或揭示机制或揭示规律，规律，为为奠定基础提供奠定基础提供思路。思路。作用：作用：画龙点睛画龙点睛效果：效果：引发评议专家的兴趣，使其产生探个究竟的好奇心引发评议专家的兴趣，使其产生探个究竟的好奇心 “他到底是怎么做的他到底是怎么做的？”一、摘 要（限400字）包括：研究方法、内容、目标、科学3 3 采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术建立老年性白内障晶状建立老年性白内障晶状建立老年性白内障晶状建立老年性白内障晶状体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用此芯片筛选出白内障相关基因。此芯片筛选出白内障相关基因。此芯片筛选出白内障相关基因。此芯片筛选出白内障相关基因。通过基因转染在体和通过基因转染在体和通过基因转染在体和通过基因转染在体和培养的晶状体上皮细胞，培养的晶状体上皮细胞，培养的晶状体上皮细胞，培养的晶状体上皮细胞，观察细胞的形态、增殖和凋观察细胞的形态、增殖和凋观察细胞的形态、增殖和凋观察细胞的形态、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分子生物学机制，子生物学机制，子生物学机制，子生物学机制，为防治白内障提供新思路和理论依据。为防治白内障提供新思路和理论依据。为防治白内障提供新思路和理论依据。为防治白内障提供新思路和理论依据。采用改良的消减杂交技术建立老年性白内障晶状体4 4二、立论依据二、立论依据 对基础研究，对基础研究，对基础研究，对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，着重结合国际科学发展趋势，着重结合国际科学发展趋势，着重结合国际科学发展趋势，论述论述论述论述科学意义科学意义科学意义科学意义 对应用基础研究，对应用基础研究，对应用基础研究，对应用基础研究，着重结合学科前沿，围着重结合学科前沿，围着重结合学科前沿，围着重结合学科前沿，围 绕国民经济和社会发展中的重要科技问题绕国民经济和社会发展中的重要科技问题绕国民经济和社会发展中的重要科技问题绕国民经济和社会发展中的重要科技问题 论述论述论述论述应用前景应用前景应用前景应用前景二、立论依据5 5 在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、具体科学问题的理解具体科学问题的理解具体科学问题的理解具体科学问题的理解 研究领域：研究领域：研究领域：研究领域：白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、治疗措施等研究治疗措施等研究治疗措施等研究治疗措施等研究 研究方向：研究方向：研究方向：研究方向：白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病 靶点、细胞水平、分子水平研究等靶点、细胞水平、分子水平研究等靶点、细胞水平、分子水平研究等靶点、细胞水平、分子水平研究等 科学问题：科学问题：科学问题：科学问题：白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病 基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等 在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、6 6在研究领域层面在研究领域层面从研究方向展开从研究方向展开围绕某一具体科学问题围绕某一具体科学问题（本项目研究目标）（本项目研究目标）进行归纳分析进行归纳分析提出研究提出研究设想设想从研究领域切入从研究领域切入研究意义研究意义国内外现状分析国内外现状分析在研究领域层面从研究方向展开围绕某一具体科学问题提出研究从研7 7 1 1 1 1、项目的研究意义、项目的研究意义、项目的研究意义、项目的研究意义 存在问题：存在问题：存在问题：存在问题：对科学意义的阐述不足或夸大对科学意义的阐述不足或夸大对科学意义的阐述不足或夸大对科学意义的阐述不足或夸大 撰写方法：撰写方法：撰写方法：撰写方法：从领域入手，提出主要问题，引出热点研究方向。从领域入手，提出主要问题，引出热点研究方向。从领域入手，提出主要问题，引出热点研究方向。从领域入手，提出主要问题，引出热点研究方向。围绕热点研究方向进行简要分析，围绕热点研究方向进行简要分析，围绕热点研究方向进行简要分析，围绕热点研究方向进行简要分析，找出目前尚未解找出目前尚未解找出目前尚未解找出目前尚未解决的具体科学问题决的具体科学问题决的具体科学问题决的具体科学问题，以此为切入点提出假设，阐述如果解决，以此为切入点提出假设，阐述如果解决，以此为切入点提出假设，阐述如果解决，以此为切入点提出假设，阐述如果解决了该问题（研究目标），对该领域甚至相关领域的科学贡献了该问题（研究目标），对该领域甚至相关领域的科学贡献了该问题（研究目标），对该领域甚至相关领域的科学贡献了该问题（研究目标），对该领域甚至相关领域的科学贡献（理论意义或应用前景）。（理论意义或应用前景）。（理论意义或应用前景）。（理论意义或应用前景）。1、项目的研究意义8 8 老年性白内障老年性白内障老年性白内障老年性白内障是与年龄相关的疾病，随着年龄的增是与年龄相关的疾病，随着年龄的增是与年龄相关的疾病，随着年龄的增是与年龄相关的疾病，随着年龄的增 加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，白内障的患病人数还将持续增加。目前，白内障的患病人数还将持续增加。目前，白内障的患病人数还将持续增加。目前，白内障的患病人数还将持续增加。目前，它已是人类它已是人类它已是人类它已是人类 第一位的致盲疾病。第一位的致盲疾病。第一位的致盲疾病。第一位的致盲疾病。迄今为止迄今为止迄今为止迄今为止,治疗白内障唯一有效的治疗白内障唯一有效的治疗白内障唯一有效的治疗白内障唯一有效的 方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的 术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障 所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重 的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的 发病时间延缓发病时间延缓发病时间延缓发病时间延缓10101010年，白内障手术的数量就会减少年，白内障手术的数量就会减少年，白内障手术的数量就会减少年，白内障手术的数量就会减少45%45%45%45%1111。所以，一些学者认为通过所以，一些学者认为通过所以，一些学者认为通过所以，一些学者认为通过预防白内障预防白内障预防白内障预防白内障发生或延缓其发展发生或延缓其发展发生或延缓其发展发生或延缓其发展 的途径征服白内障的途径征服白内障的途径征服白内障的途径征服白内障已成为一项全球性的社会和社会经济已成为一项全球性的社会和社会经济已成为一项全球性的社会和社会经济已成为一项全球性的社会和社会经济 问题问题问题问题2222。老年性白内障是与年龄相关的疾病，随着年龄的9 9 但是目前我们对老年性白内障但是目前我们对老年性白内障但是目前我们对老年性白内障但是目前我们对老年性白内障发病机理发病机理发病机理发病机理的认识的认识的认识的认识还不十分还不十分还不十分还不十分清楚。清楚。清楚。清楚。多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因调控知之甚少。如果从参与老年性白内障调控知之甚少。如果从参与老年性白内障调控知之甚少。如果从参与老年性白内障调控知之甚少。如果从参与老年性白内障晶状体上皮细胞变晶状体上皮细胞变晶状体上皮细胞变晶状体上皮细胞变化的相关基因化的相关基因化的相关基因化的相关基因入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和理论依据。制，为防治白内障提供新思路和理论依据。制，为防治白内障提供新思路和理论依据。制，为防治白内障提供新思路和理论依据。但是目前我们对老年性白内障发病机理的认识还1010 2 2 2 2、国内外现状分析（与综述的区别）、国内外现状分析（与综述的区别）、国内外现状分析（与综述的区别）、国内外现状分析（与综述的区别）存在问题：存在问题：存在问题：存在问题：A A A A、低水平重复：、低水平重复：、低水平重复：、低水平重复：不了解最新进展，对国内外现不了解最新进展，对国内外现不了解最新进展，对国内外现不了解最新进展，对国内外现 状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。B B B B、文献复习不全：、文献复习不全：、文献复习不全：、文献复习不全：检索文献方法不当、选择关键词检索文献方法不当、选择关键词检索文献方法不当、选择关键词检索文献方法不当、选择关键词 不妥，甚至人为缩小检索范围。不妥，甚至人为缩小检索范围。不妥，甚至人为缩小检索范围。不妥，甚至人为缩小检索范围。C C C C、总结表达不够：、总结表达不够：、总结表达不够：、总结表达不够：对国内外现状缺乏归纳分析，对国内外现状缺乏归纳分析，对国内外现状缺乏归纳分析，对国内外现状缺乏归纳分析，只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。D D、对方法原理理解不够：对方法原理理解不够：对方法原理理解不够：对方法原理理解不够：对研究方法不熟悉，简对研究方法不熟悉，简对研究方法不熟悉，简对研究方法不熟悉，简 单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。2、国内外现状分析（与综述的区别）1111 撰写方法：撰写方法：撰写方法：撰写方法：要要要要紧紧围绕紧紧围绕紧紧围绕紧紧围绕本次申请项目的主题。本次申请项目的主题。本次申请项目的主题。本次申请项目的主题。A A A A、从领域切入，、从领域切入，、从领域切入，、从领域切入，简要论述简要论述简要论述简要论述国内外研究国内外研究国内外研究国内外研究成果成果成果成果，并引，并引，并引，并引 出当前的热点研究方向。出当前的热点研究方向。出当前的热点研究方向。出当前的热点研究方向。B B B B、从研究方向展开，、从研究方向展开，、从研究方向展开，、从研究方向展开，较详细地分析较详细地分析较详细地分析较详细地分析国内外的研究国内外的研究国内外的研究国内外的研究 进展进展进展进展，阐明在该方向上存在的问题。，阐明在该方向上存在的问题。，阐明在该方向上存在的问题。，阐明在该方向上存在的问题。C C C C、围绕存在的问题，结合国内外以往的研究、围绕存在的问题，结合国内外以往的研究、围绕存在的问题，结合国内外以往的研究、围绕存在的问题，结合国内外以往的研究结果、结果、结果、结果、当前的当前的当前的当前的现状现状现状现状及今后的及今后的及今后的及今后的发展趋势发展趋势发展趋势发展趋势，详细论述和分详细论述和分详细论述和分详细论述和分 析析析析这些问题产生的原因，这些问题产生的原因，这些问题产生的原因，这些问题产生的原因，提出该方面的空白点、提出该方面的空白点、提出该方面的空白点、提出该方面的空白点、未知数、以及研究的难点、焦点，未知数、以及研究的难点、焦点，未知数、以及研究的难点、焦点，未知数、以及研究的难点、焦点，从而为自己从而为自己从而为自己从而为自己 申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。1212 D D D D、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。成熟的方法成熟的方法成熟的方法成熟的方法重点介绍可以应用于本研究的理论重点介绍可以应用于本研究的理论重点介绍可以应用于本研究的理论重点介绍可以应用于本研究的理论依据和实验依据。依据和实验依据。依据和实验依据。依据和实验依据。新方法在详细介绍其原理的基础上新方法在详细介绍其原理的基础上新方法在详细介绍其原理的基础上新方法在详细介绍其原理的基础上，阐明可，阐明可，阐明可，阐明可以应用于本研究的理论依据和实验依据。以应用于本研究的理论依据和实验依据。以应用于本研究的理论依据和实验依据。以应用于本研究的理论依据和实验依据。需特别注意的问题：需特别注意的问题：需特别注意的问题：需特别注意的问题：必须对所运用的技术方必须对所运用的技术方必须对所运用的技术方必须对所运用的技术方法的原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题法的原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题法的原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题法的原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题要十分清楚，要十分清楚，要十分清楚，要十分清楚，绝不能是一种简单的移植。绝不能是一种简单的移植。绝不能是一种简单的移植。绝不能是一种简单的移植。例如：抗体例如：抗体例如：抗体例如：抗体+功能基团，理论上可以实现融功能基团，理论上可以实现融功能基团，理论上可以实现融功能基团，理论上可以实现融合，但存在合，但存在合，但存在合，但存在“活性、表达载体选择、纯化等问题。活性、表达载体选择、纯化等问题。活性、表达载体选择、纯化等问题。活性、表达载体选择、纯化等问题。E E E E、提出本项目的研究设想。、提出本项目的研究设想。、提出本项目的研究设想。、提出本项目的研究设想。D、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。1313 防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。就致就致就致就致病的环境因素讲，病的环境因素讲，病的环境因素讲，病的环境因素讲，氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障的发生有关。均与老年性白内障的发生有关。均与老年性白内障的发生有关。均与老年性白内障的发生有关。就研究的部位分，就研究的部位分，就研究的部位分，就研究的部位分，晶状晶状晶状晶状体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的晶状体上晶状体上晶状体上晶状体上皮细胞皮细胞皮细胞皮细胞在白内障的形成中的变化更引人关注。在白内障的形成中的变化更引人关注。在白内障的形成中的变化更引人关注。在白内障的形成中的变化更引人关注。防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年1414 因为因为因为因为晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂活性、是晶状体中唯一有分裂活性、是晶状体中唯一有分裂活性、是晶状体中唯一有分裂活性、数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如此，此，此，此，晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞还是晶状体中还是晶状体中还是晶状体中还是晶状体中受外来刺激影响受外来刺激影响受外来刺激影响受外来刺激影响较早较早较早较早的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞还发生还发生还发生还发生退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，与单纯老化与单纯老化与单纯老化与单纯老化的晶状体之间存在差异的晶状体之间存在差异的晶状体之间存在差异的晶状体之间存在差异3-53-53-53-5 。因为晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂活性1515 体外实验也证实体外实验也证实体外实验也证实体外实验也证实多种因素多种因素多种因素多种因素(H2O2(H2O2(H2O2(H2O2、UV-BUV-BUV-BUV-B、晶状体蛋、晶状体蛋、晶状体蛋、晶状体蛋白的自身抗体白的自身抗体白的自身抗体白的自身抗体)诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中晶状体上皮的损伤晶状体上皮的损伤晶状体上皮的损伤晶状体上皮的损伤是晶状体混浊的主要环节是晶状体混浊的主要环节是晶状体混浊的主要环节是晶状体混浊的主要环节6-86-86-86-8。因此，从晶状体上皮细因此，从晶状体上皮细因此，从晶状体上皮细因此，从晶状体上皮细胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白内胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白内胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白内胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节。而障发病机理的主要环节。而障发病机理的主要环节。而障发病机理的主要环节。而晶状体上皮细胞变化的基因晶状体上皮细胞变化的基因晶状体上皮细胞变化的基因晶状体上皮细胞变化的基因调控机制调控机制调控机制调控机制是问题的关键所在，也是有待我们深入研究的是问题的关键所在，也是有待我们深入研究的是问题的关键所在，也是有待我们深入研究的是问题的关键所在，也是有待我们深入研究的问题。问题。问题。问题。体外实验也证实多种因素(H2O2、UV-B、晶1616 白内障的形成与白内障的形成与白内障的形成与白内障的形成与晶状体的老化晶状体的老化晶状体的老化晶状体的老化密不可分，是晶状密不可分，是晶状密不可分，是晶状密不可分，是晶状体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用的结果，的结果，的结果，的结果，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，也有程序性的、非随机性的组织特异性也有程序性的、非随机性的组织特异性也有程序性的、非随机性的组织特异性也有程序性的、非随机性的组织特异性多种基因表达的多种基因表达的多种基因表达的多种基因表达的改变。改变。改变。改变。目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下三方面：三方面：三方面：三方面：白内障的形成与晶状体的老化密不可分，是晶1717 一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的研究。研究。研究。研究。UV-BUV-BUV-BUV-B辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是主要的靶细胞，其主要的靶细胞，其主要的靶细胞，其主要的靶细胞，其Na-K-ATPNa-K-ATPNa-K-ATPNa-K-ATP酶的活性增加，蛋白质的合酶的活性增加，蛋白质的合酶的活性增加，蛋白质的合酶的活性增加，蛋白质的合成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有c-fosc-fosc-fosc-fos基因基因基因基因的表达增加；还有组蛋白的表达增加；还有组蛋白的表达增加；还有组蛋白的表达增加；还有组蛋白H4H4H4H4、H3 H3 H3 H3 的低表达的低表达的低表达的低表达 和蛋白酶和蛋白酶和蛋白酶和蛋白酶C C C C、-肌动蛋白、肌动蛋白、肌动蛋白、肌动蛋白、-肌动蛋白基因的高表达肌动蛋白基因的高表达肌动蛋白基因的高表达肌动蛋白基因的高表达9-129-129-129-12。CarperCarperCarperCarper等等等等13131313利用利用利用利用RT-PCR-DD(reverse transcription-RT-PCR-DD(reverse transcription-RT-PCR-DD(reverse transcription-RT-PCR-DD(reverse transcription-polymerase chain reaction differential display)polymerase chain reaction differential display)polymerase chain reaction differential display)polymerase chain reaction differential display)技技技技术研究术研究术研究术研究H2O2H2O2H2O2H2O2诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果显示显示显示显示NADHNADHNADHNADH脱氢酶脱氢酶脱氢酶脱氢酶4 4 4 4亚基、细胞色素亚基、细胞色素亚基、细胞色素亚基、细胞色素b b b b、谷氨酰胺转移酶基、谷氨酰胺转移酶基、谷氨酰胺转移酶基、谷氨酰胺转移酶基因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子2 2 2 2（alternative splicing factoralternative splicing factoralternative splicing factoralternative splicing factor）、）、）、）、-三羟基异丁酰三羟基异丁酰三羟基异丁酰三羟基异丁酰辅酶辅酶辅酶辅酶A A A A水解酶基因表达的增加。水解酶基因表达的增加。水解酶基因表达的增加。水解酶基因表达的增加。一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮1818 二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。波形纤维蛋白基因波形纤维蛋白基因波形纤维蛋白基因波形纤维蛋白基因（vimentinvimentinvimentinvimentin）、杂交的）、杂交的）、杂交的）、杂交的型中间纤维蛋白基因的转基因型中间纤维蛋白基因的转基因型中间纤维蛋白基因的转基因型中间纤维蛋白基因的转基因小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化受抑制受抑制受抑制受抑制14,1514,1514,1514,15。GongGongGongGong等等等等16161616报告晶状体的细胞膜蛋白连报告晶状体的细胞膜蛋白连报告晶状体的细胞膜蛋白连报告晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白接蛋白接蛋白接蛋白3333（3 Connexin3 Connexin3 Connexin3 Connexin）基因敲除小鼠（）基因敲除小鼠（）基因敲除小鼠（）基因敲除小鼠（knockout knockout knockout knockout mousemousemousemouse）在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受影）在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受影）在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受影）在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一些基因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是些基因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是些基因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是些基因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是否与老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。否与老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。否与老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。否与老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。二是利用转基因动物的研究。波形纤维蛋白基1919 三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。Lee17Lee17Lee17Lee17利用利用利用利用RT-PCRRT-PCRRT-PCRRT-PCR技术研究显示前极性白内障与核性白内障上技术研究显示前极性白内障与核性白内障上技术研究显示前极性白内障与核性白内障上技术研究显示前极性白内障与核性白内障上皮细胞中纤维连接蛋白、皮细胞中纤维连接蛋白、皮细胞中纤维连接蛋白、皮细胞中纤维连接蛋白、I I I I型胶原纤维、型胶原纤维、型胶原纤维、型胶原纤维、-平滑肌蛋白、平滑肌蛋白、平滑肌蛋白、平滑肌蛋白、TGF-1TGF-1TGF-1TGF-1、TGF-2TGF-2TGF-2TGF-2、TGF-TGF-TGF-TGF-型受体、结缔组织生长因型受体、结缔组织生长因型受体、结缔组织生长因型受体、结缔组织生长因子的基因表达有差异。子的基因表达有差异。子的基因表达有差异。子的基因表达有差异。KantorowKantorowKantorowKantorow等等等等18181818利用利用利用利用RT-PCR-DDRT-PCR-DDRT-PCR-DDRT-PCR-DD研研研研究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达的究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达的究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达的究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达的初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和12121212个低表个低表个低表个低表达的基因。达的基因。达的基因。达的基因。但就但就但就但就DD-PCRDD-PCRDD-PCRDD-PCR技术来讲，在实验中难以解决假技术来讲，在实验中难以解决假技术来讲，在实验中难以解决假技术来讲，在实验中难以解决假阴性、假阳性以及克隆全长阴性、假阳性以及克隆全长阴性、假阳性以及克隆全长阴性、假阳性以及克隆全长cDNAcDNAcDNAcDNA的问题。的问题。的问题。的问题。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。Le2020 上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相关的基因及其功能。关的基因及其功能。关的基因及其功能。关的基因及其功能。寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间胞间胞间胞间差异表达的基因差异表达的基因差异表达的基因差异表达的基因有可能揭示白内障的发病机理。有可能揭示白内障的发病机理。有可能揭示白内障的发病机理。有可能揭示白内障的发病机理。上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，2121 寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术（subtractive hybridization,SHsubtractive hybridization,SHsubtractive hybridization,SHsubtractive hybridization,SH），它是），它是），它是），它是，但是，但是，但是，但是实验操作复杂。实验操作复杂。实验操作复杂。实验操作复杂。经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交（suppression suppression suppression suppression subtractive hybridization,SSHsubtractive hybridization,SSHsubtractive hybridization,SSHsubtractive hybridization,SSH是是是是DiatchenkoDiatchenkoDiatchenkoDiatchenko等等等等1996199619961996年年年年建立的方法）建立的方法）建立的方法）建立的方法）简化了实验操作，但仍然问题很多。简化了实验操作，但仍然问题很多。简化了实验操作，但仍然问题很多。简化了实验操作，但仍然问题很多。我校生化教研室我校生化教研室我校生化教研室我校生化教研室建立了改良消减杂交技术建立了改良消减杂交技术建立了改良消减杂交技术建立了改良消减杂交技术19191919，20202020，其其其其特点是：特点是：特点是：特点是：简便易行，能够获得目的细胞特异表达的全长基简便易行，能够获得目的细胞特异表达的全长基简便易行，能够获得目的细胞特异表达的全长基简便易行，能够获得目的细胞特异表达的全长基因，对低丰度基因也能有效分离。因，对低丰度基因也能有效分离。因，对低丰度基因也能有效分离。因，对低丰度基因也能有效分离。寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术（2222 该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基因，其中表达的基因，其中表达的基因，其中表达的基因，其中5 5 5 5个为新基因。同理，利用此方法也能个为新基因。同理，利用此方法也能个为新基因。同理，利用此方法也能个为新基因。同理，利用此方法也能快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全长皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全长皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全长皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全长cDNAcDNAcDNAcDNA，为进一步，为进一步，为进一步，为进一步的结构和功能研究打下基础。的结构和功能研究打下基础。的结构和功能研究打下基础。的结构和功能研究打下基础。该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的2323 基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未知基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未知基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未知基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未知DNADNADNADNA分子变得更快捷、准确、高效。分子变得更快捷、准确、高效。分子变得更快捷、准确、高效。分子变得更快捷、准确、高效。基因芯片是在基因芯片是在基因芯片是在基因芯片是在1996199619961996年年年年被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的DNADNADNADNA探针集探针集探针集探针集中到中到中到中到1 1 1 1厘米见方的基片上，利用碱基互补原理，厘米见方的基片上，利用碱基互补原理，厘米见方的基片上，利用碱基互补原理，厘米见方的基片上，利用碱基互补原理，DNADNADNADNA探针中探针中探针中探针中的已知碱基序列与被测定的未知的已知碱基序列与被测定的未知的已知碱基序列与被测定的未知的已知碱基序列与被测定的未知DNADNADNADNA分子杂交后由标记分分子杂交后由标记分分子杂交后由标记分分子杂交后由标记分子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，从而子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，从而子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，从而子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，从而对检对检对检对检测基因进行定性、定量和结构分析，确定未知测基因进行定性、定量和结构分析，确定未知测基因进行定性、定量和结构分析，确定未知测基因进行定性、定量和结构分析，确定未知DNADNADNADNA分子。分子。分子。分子。基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未知DN2424 由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片，由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片，由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片，由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片，根据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所有基根据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所有基根据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所有基根据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所有基因建立因建立因建立因建立cDNAcDNAcDNAcDNA文库，再利用基因芯片技术文库，再利用基因芯片技术文库，再利用基因芯片技术文库，再利用基因芯片技术制备成基因芯片制备成基因芯片制备成基因芯片制备成基因芯片，以此以此以此以此检测多个样本中白内障晶状体上皮细胞与正常晶状检测多个样本中白内障晶状体上皮细胞与正常晶状检测多个样本中白内障晶状体上皮细胞与正常晶状检测多个样本中白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基因，体上皮细胞间差异表达的基因，体上皮细胞间差异表达的基因，体上皮细胞间差异表达的基因，从中从中从中从中进一步筛选出白内进一步筛选出白内进一步筛选出白内进一步筛选出白内障特异的基因障特异的基因障特异的基因障特异的基因，它们中可能有已知基因，也可能有未知，它们中可能有已知基因，也可能有未知，它们中可能有已知基因，也可能有未知，它们中可能有已知基因，也可能有未知基因。通过以上两种技术的有机结合，我们能更快捷、基因。通过以上两种技术的有机结合，我们能更快捷、基因。通过以上两种技术的有机结合，我们能更快捷、基因。通过以上两种技术的有机结合，我们能更快捷、有效、准确地得到白内障相关基因。有效、准确地得到白内障相关基因。有效、准确地得到白内障相关基因。有效、准确地得到白内障相关基因。由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片2525 综上所述，分子生物学技术的发展为研究白内障综上所述，分子生物学技术的发展为研究白内障综上所述，分子生物学技术的发展为研究白内障综上所述，分子生物学技术的发展为研究白内障发生过程中的功能基因及特异调控基因提供了有利武发生过程中的功能基因及特异调控基因提供了有利武发生过程中的功能基因及特异调控基因提供了有利武发生过程中的功能基因及特异调控基因提供了有利武器。器。器。器。本项目从晶状体上皮细胞入手，利用改良的消减本项目从晶状体上皮细胞入手，利用改良的消减本项目从晶状体上皮细胞入手，利用改良的消减本项目从晶状体上皮细胞入手，利用改良的消减杂交技术和基因芯片技术系统研究与白内障相关的基杂交技术和基因芯片技术系统研究与白内障相关的基杂交技术和基因芯片技术系统研究与白内障相关的基杂交技术和基因芯片技术系统研究与白内障相关的基因，并采用对体外培养细胞和在体晶状体上皮细胞的因，并采用对体外培养细胞和在体晶状体上皮细胞的因，并采用对体外培养细胞和在体晶状体上皮细胞的因，并采用对体外培养细胞和在体晶状体上皮细胞的基因转染，探讨它们在晶状体上皮细胞变化和白内障基因转染，探讨它们在晶状体上皮细胞变化和白内障基因转染，探讨它们在晶状体上皮细胞变化和白内障基因转染，探讨它们在晶状体上皮细胞变化和白内障形成中的作用，可望阐明白内障晶状体上皮细胞变化形成中的作用，可望阐明白内障晶状体上皮细胞变化形成中的作用，可望阐明白内障晶状体上皮细胞变化形成中的作用，可望阐明白内障晶状体上皮细胞变化的分子生物学机制，为防治白内障提供新的思路和理的分子生物学机制，为防治白内障提供新的思路和理的分子生物学机制，为防治白内障提供新的思路和理的分子生物学机制，为防治白内障提供新的思路和理论依据。论依据。论依据。论依据。综上所述，分子生物学技术的发展为研究白内障2626 3 3 3 3、参考文献、参考文献、参考文献、参考文献 A A A A、文献类别要全、文献类别要全、文献类别要全、文献类别要全：以英文文献为主，同时也要引用：以英文文献为主，同时也要引用：以英文文献为主，同时也要引用：以英文文献为主，同时也要引用 中文文献中文文献中文文献中文文献-国内同行中知名专家的文献。国内同行中知名专家的文献。国内同行中知名专家的文献。国内同行中知名专家的文献。B B B B、引文信息要全、引文信息要全、引文信息要全、引文信息要全：文章题目、作者姓名、具体出处：文章题目、作者姓名、具体出处：文章题目、作者姓名、具体出处：文章题目、作者姓名、具体出处 （包括期刊名、年份、卷期、页码等）。（包括期刊名、年份、卷期、页码等）。（包括期刊名、年份、卷期、页码等）。（包括期刊名、年份、卷期、页码等）。C C C C、文献年代要新、文献年代要新、文献年代要新、文献年代要新：主要是近五年的文献，最好能有：主要是近五年的文献，最好能有：主要是近五年的文献，最好能有：主要是近五年的文献，最好能有 07 07 07 07年的最新文献。年的最新文献。年的最新文献。年的最新文献。3、参考文献 A、文献类别要全：以英文文献为2727三、研究方案三、研究方案 1 1 1 1、研究目标、研究目标、研究目标、研究目标 撰写要求：撰写要求：撰写要求：撰写要求：有限目标，与研究内容相呼应有限目标，与研究内容相呼应有限目标，与研究内容相呼应有限目标，与研究内容相呼应 如：明确如：明确如：明确如：明确关系，揭示关系，揭示关系，揭示关系，揭示规律，规律，规律，规律，阐明阐明阐明阐明原理（机制），建立原理（机制），建立原理（机制），建立原理（机制），建立方法等方法等方法等方法等举例举例举例举例：筛选出与老年性白内障相关的基因，明确部分基：筛选出与老年性白内障相关的基因，明确部分基：筛选出与老年性白内障相关的基因，明确部分基：筛选出与老年性白内障相关的基因，明确部分基因在白内障形成中的作用，从晶状体上皮变化的角度阐因在白内障形成中的作用，从晶状体上皮变化的角度阐因在白内障形成中的作用，从晶状体上皮变化的角度阐因在白内障形成中的作用，从晶状体上皮变化的角度阐明白内障的发生机理，为防治白内障提供线索。明白内障的发生机理，为防治白内障提供线索。明白内障的发生机理，为防治白内障提供线索。明白内障的发生机理，为防治白内障提供线索。三、研究方案 1、研究目标 如：明确关系2828 2 2、研究内容：、研究内容：存在问题：存在问题：存在问题：存在问题：内容过多，一个研究周期难以完成内容过多，一个研究周期难以完成内容过多，一个研究周期难以完成内容过多，一个研究周期难以完成 内容分散，不能集中阐明研究目标内容分散，不能集中阐明研究目标内容分散，不能集中阐明研究目标内容分散，不能集中阐明研究目标 撰写要求：撰写要求：撰写要求：撰写要求：内容要适当内容要适当内容要适当内容要适当确保研究周期内完成确保研究周期内完成确保研究周期内完成确保研究周期内完成 为目标服务为目标服务为目标服务为目标服务与目标相辅相成与目标相辅相成与目标相辅相成与目标相辅相成 要重点阐述要重点阐述要重点阐述要重点阐述注意与技术路线区别注意与技术路线区别注意与技术路线区别注意与技术路线区别 2、研究内容：2929 举例举例举例举例：（1 1 1 1）筛选白内障相关基因：）筛选白内障相关基因：）筛选白内障相关基因：）筛选白内障相关基因：采用改良的消减杂交采用改良的消减杂交采用改良的消减杂交采用改良的消减杂交技术，获得人老年性白内障晶状体上皮细胞和正常晶技术，获得人老年性白内障晶状体上皮细胞和正常晶技术，获得人老年性白内障晶状体上皮细胞和正常晶技术，获得人老年性白内障晶状体上皮细胞和正常晶状体上皮细胞差异表达的基因片段，建立状体上皮细胞差异表达的基因片段，建立状体上皮细胞差异表达的基因片段，建立状体上皮细胞差异表达的基因片段，建立cDNAcDNAcDNAcDNA文库。文库。文库。文库。制备差异表达基因的基因芯片，利用基因芯片技术从制备差异表达基因的基因芯片，利用基因芯片技术从制备差异表达基因的基因芯片，利用基因芯片技术从制备差异表达基因的基因芯片，利用基因芯片技术从多个标本的老年性白内障晶状体上皮细胞中筛选出白多个标本的老年性白内障晶状体上皮细胞中筛选出白多个标本的老年性白内障晶状体上皮细胞中筛选出白多个标本的老年性白内障晶状体上皮细胞中筛选出白内障相关基因。内障相关基因。内障相关基因。内障相关基因。举例：3030 （2 2 2 2）研究白内障相关基因的结构）研究白内障相关基因的结构）研究白内障相关基因的结构）研究白内障相关基因的结构：（3 3 3 3）研究白内障相关基因在晶状体上皮细胞变化中）研究白内障相关基因在晶状体上皮细胞变化中）研究白内障相关基因在晶状体上皮细胞变化中）研究白内障相关基因在晶状体上皮细胞变化中的作用的作用的作用的作用：观察指标如下：观察指标如下：观察指标如下：观察指标如下：存活细胞数存活细胞数存活细胞