单克隆抗体制备课件

合肥十三中合肥十三中合肥十三中合肥十三中 王立新王立新王立新王立新合肥十三中 王立新1 20022002年年月日，月日，两场筹备了两场筹备了1010年的年的“太空婚礼太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，首次在神舟四号飞船上举行，植物细植物细胞胞“新人新人”黄花烟草黄花烟草和和革新一号烟草革新一号烟草叶肉细胞叶肉细胞原生质体原生质体，动物细胞动物细胞“新人新人”是小鼠是小鼠B B淋巴细胞淋巴细胞和和骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞，两批新人同时在，两批新人同时在“产房产房”电电融合仪内孕育新生命。一段时间后，我国首批融合仪内孕育新生命。一段时间后，我国首批”太空娃娃太空娃娃”终于顺利诞生。终于顺利诞生。对照实验结果表明，对照实验结果表明，细胞融合率大大提高。细胞融合率大大提高。STS“太空婚礼太空婚礼”2002年月日，两场筹备了102太空中处于失重太空中处于失重状态，不同种细状态，不同种细胞胞（原生质体）（原生质体）更容易亲近更容易亲近为什么在太空，细为什么在太空，细胞的原生质体融合胞的原生质体融合率会大大上升？率会大大上升？太空中处于失重状态，不同种细胞（原生质体）更容易亲近为什么在3神舟放飞强国梦神舟放飞强国梦神舟放飞强国梦4“太空婚礼”科研项目一：“太空婚礼”科研项目二：挑战自我挑战自我植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术“太空婚礼”科研项目一：“太空婚礼”科研项目二：挑战自我植物5(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图植物体细胞杂交过程示意图(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图6同核体同核体同核体同核体异核体（杂交细胞）异核体（杂交细胞）人工诱导人工诱导还有还有3个个3个以上细胞的融合个以上细胞的融合-AB同核体同核体异核体（杂交细胞）人工诱导AAABBB还有37“太空婚礼太空婚礼”植物科研项目计划植物科研项目计划书书项目项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交原理原理融合前处理融合前处理促融方法促融方法用途用途细胞膜流动性、细胞全能性细胞膜流动性、细胞全能性酶解法去壁酶解法去壁物理法化学法物理法化学法 克服远缘杂交障碍克服远缘杂交障碍获得具优良性状的杂种植株获得具优良性状的杂种植株“太空婚礼”植物科研项目计划书项目植物体细胞杂交原理融合前8请同学们阅读课本请同学们阅读课本P52动物细胞融合内容动物细胞融合内容 问题：问题：1 1、什么是什么是动物细胞融合？动物细胞融合？2 2、它相当于植物体细胞杂交过它相当于植物体细胞杂交过 程的哪一步？程的哪一步？3 3、它们的它们的过程、基本原理、诱过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同？导融合方法和意义是否相同？请同学们阅读课本P52动物细胞融合内容9鼠鼠B淋巴细胞淋巴细胞鼠骨髓瘤细胞鼠骨髓瘤细胞人工诱导人工诱导1.11.1动物动物细胞融合的概念细胞融合的概念杂交瘤细胞杂交瘤细胞 动物细胞融合（动物细胞融合（细胞杂交细胞杂交）是指（是指（在一定的条件下在一定的条件下）两）两个或多个细胞结合形成一个个或多个细胞结合形成一个细胞（细胞（该单核细胞称为杂交该单核细胞称为杂交细胞细胞）的过程。）的过程。鼠B淋巴细胞鼠骨髓瘤细胞人工诱导1.1动物细胞融合的概念杂交10 问题：问题：1 1、它相当于植物体细胞杂交过它相当于植物体细胞杂交过 程的哪一步？程的哪一步？2 2、它们的它们的过程、基本原理、诱过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同？导融合方法和意义是否相同？单克隆抗体制备课件111.21.2动物细胞融合过程、诱导方法与原理动物细胞融合过程、诱导方法与原理为什么灭活的病为什么灭活的病毒能作诱导剂毒能作诱导剂？灭活丧失感染性灭活丧失感染性保留促融合活性保留促融合活性过过 程程1.2动物细胞融合过程、诱导方法与原理为什么灭活的病毒能作诱121.21.2动物细胞融合过程、诱导方法与原理动物细胞融合过程、诱导方法与原理原理：细胞膜的流动性原理：细胞膜的流动性1.2动物细胞融合过程、诱导方法与原理原理：细胞膜的流动性131.31.3动物动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用1.3动物细胞融合技术的意义和应用14 问题：问题：抗体由什抗体由什么细胞产生？其化么细胞产生？其化学本质是什么？与学本质是什么？与抗原作用的特点？抗原作用的特点？主要分布在哪里？主要分布在哪里？1、抗体抗体 问题：抗体由什么细胞产生？其化学本质是什么？与抗原作用15 一个天然抗原物质可有一个天然抗原物质可有多种和多多种和多个决定簇个决定簇。教材中所说的抗原分子刺。教材中所说的抗原分子刺激淋巴细胞，说的也就是激淋巴细胞，说的也就是抗原决定簇抗原决定簇刺激刺激B B淋巴细胞，使其分裂分化出淋巴细胞，使其分裂分化出特特异性的浆细胞异性的浆细胞，分泌分泌特异性抗体。特异性抗体。一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。教材中所说的抗162、抗体的传统生产方法、抗体的传统生产方法从从血血清清中中分分离离抗抗体体该法制备抗体的特点：该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。的特异性差、灵敏度低。多多种种浆浆细细胞胞动动物物体体内内多多种种抗抗体体抗抗原原 2、抗体的传统生产方法从血清中分离抗体该法制备抗体的特点：多17读下面一段文字资料，读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念找出单克隆抗体的概念发现：在动物发生免疫反应的过程中，体内的发现：在动物发生免疫反应的过程中，体内的B B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个是每个B B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个个B B细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。3、单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念 单单:单个细胞单个细胞 克隆克隆:无性繁殖无性繁殖单克隆单克隆抗体抗体:单个细胞单个细胞克隆产生的克隆产生的化学化学 性质单一特异性强性质单一特异性强的抗体的抗体读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念发现：在动物发生免疫18提示提示1 1：对：对B B细胞进行细胞培养可行吗？细胞进行细胞培养可行吗？提示提示2 2：所学哪种细胞可以无限增殖？：所学哪种细胞可以无限增殖？问题：如何大量生产单克隆抗体？问题：如何大量生产单克隆抗体？提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？提示2：所学哪种细胞可以19 一个效应一个效应B B细胞细胞（只分泌一种特异性抗体只分泌一种特异性抗体）杂交瘤杂交瘤 细胞细胞动物细胞动物细胞培养技术培养技术4 4、单克隆抗体的制备方案、单克隆抗体的制备方案动物细胞动物细胞融合技术融合技术单克隆单克隆 抗体抗体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞又能大量繁殖的细胞 一个骨髓瘤细胞一个骨髓瘤细胞（能无限增殖能无限增殖）+一个效应B细胞杂交瘤 动物细胞培养技术4、单克隆20制制 备备 单单 克克 隆隆 抗抗 体体19751975年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦和和柯勒柯勒的实验的实验制 备 单 克 隆 抗 体1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒215、单克隆、单克隆抗体制备抗体制备过程步骤过程步骤5、单克隆抗体制备过程步骤22注射抗原注射抗原效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1抗原抗原-抗体抗体杂交法杂交法克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体 筛选筛选2 2（有限稀释）（有限稀释）1.注射抗原的目的注射抗原的目的是什么？是什么？注射抗原效应B细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基 筛23注射抗原注射抗原效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1抗原抗原-抗体抗体杂交法杂交法克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体 筛选筛选2 2（有限稀释）（有限稀释）2.诱导细胞融合的诱导细胞融合的手段有哪些？手段有哪些？注射抗原效应B细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基 筛24注射抗原注射抗原效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1抗原抗原-抗体抗体杂交法杂交法克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体 筛选筛选2 2（有限稀释）（有限稀释）3.若细胞两两融合后，若细胞两两融合后，有几种融合情况？有几种融合情况？注射抗原效应B细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基 筛25注射抗原注射抗原效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1抗原抗原-抗体抗体杂交法杂交法克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体 筛选筛选2 2（有限稀释）（有限稀释）4.第一次筛选出的杂交瘤第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？养和专一抗体检测？注射抗原效应B细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基 筛265.5.实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞？性抗体的杂交瘤细胞？5.实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细27效应效应B B细胞细胞B B淋巴细胞淋巴细胞注射抗原注射抗原骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合B B-B-B细胞细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞瘤瘤-瘤细胞瘤细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1多种杂交瘤细胞多种杂交瘤细胞符合要求的符合要求的杂交瘤细胞杂交瘤细胞抗原抗原-抗体抗体杂交法杂交法 筛选筛选2 2（有限稀释）（有限稀释）幻灯片幻灯片 3434克隆化克隆化体外培养体外培养小鼠腹腔内增殖小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体 克隆单个杂交克隆单个杂交瘤细胞，可制备瘤细胞，可制备抗一种抗原决定抗一种抗原决定簇的簇的特异单克隆特异单克隆抗体。抗体。克隆克隆效应B细胞B淋巴细胞注射抗原骨髓瘤细胞融合B-B细胞杂交瘤细287 7、单克隆抗体的突出优点：、单克隆抗体的突出优点：特异性强、灵敏度高、纯度高、特异性强、灵敏度高、纯度高、产量大产量大、容易大规模生产容易大规模生产 6 6、原理：、原理：细胞膜的流动性、细胞增殖细胞膜的流动性、细胞增殖7、单克隆抗体的突出优点：特异性强、灵敏度高、纯度高298、单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用诊断试剂诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速8、单克隆抗体的应用诊断试剂最广泛应用30运载药物运载药物(“生物导弹生物导弹”单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头)治疗疾病治疗疾病治疗疾病31动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体1 1、动物细胞融合：、动物细胞融合：（1 1）概念：）概念：（2 2）诱导剂：）诱导剂：（3 3）主要用途：）主要用途：（4 4）意义：）意义：2 2、单克隆抗体：、单克隆抗体：（1 1）制备）制备（2 2）特点）特点（3 3）应用）应用动物细胞融合与单克隆抗体1、动物细胞融合：2、单克隆抗体：32现在你能主持现在你能主持“太空婚礼太空婚礼”动物科研项目了吗动物科研项目了吗？项目项目原理原理融合前处理融合前处理促融方法促融方法用途用途膜的流动性、细胞增殖膜的流动性、细胞增殖物理、化学、生物法物理、化学、生物法 单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备小鼠免疫处理、细胞分散小鼠免疫处理、细胞分散有助于疾病的诊断、治疗、预防有助于疾病的诊断、治疗、预防现在你能主持“太空婚礼”动物科研项目了吗？项目原理融合前处33下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图思考训练：思考训练：下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图思考训练：34（1）（）（）技术是单克隆抗体技术的基础。技术是单克隆抗体技术的基础。（2）在图中）在图中HAT培养上，未有融合的培养上，未有融合的（）和融合的（）和融合的（）都）都会死亡，会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长。只有融合的杂种细胞才能生长。动物细胞培养、动物细胞融合动物细胞培养、动物细胞融合 亲本细胞亲本细胞具有同种细胞核的细胞具有同种细胞核的细胞（1）（35（3）单克隆抗体与常规的血清抗体）单克隆抗体与常规的血清抗体 相比，最主要的优点是：相比，最主要的优点是：（）特异性强、灵敏度高，可大量制备特异性强、灵敏度高，可大量制备（3）单克隆抗体与常规的血清抗体特异性强、灵敏度高，可大量制36（4）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的迅速（迅速（）特点，又具备淋巴细胞）特点，又具备淋巴细胞的（的（）特点，经过选择性培养）特点，经过选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行（的杂交瘤细胞，还需进行（）和（和（），经多次筛选，就可获得足），经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后将杂够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或小交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或小鼠腹腔内增殖，从（鼠腹腔内增殖，从（）或）或（）中，就可以提取出大量的）中，就可以提取出大量的单克隆抗体了。单克隆抗体了。大量增殖大量增殖分泌专一抗体分泌专一抗体克隆化培养克隆化培养抗体检测抗体检测细胞培养液细胞培养液小鼠的腹水小鼠的腹水（4）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的迅速（37（5）淋巴细胞是由动物（）淋巴细胞是由动物（）中）中的（的（）细胞分化、发育而）细胞分化、发育而来。来。（6）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的方式（糖、氨基酸的方式（）骨髓骨髓造血干细胞造血干细胞主动运输主动运输（5）淋巴细胞是由动物（）中的（38课后作业 通过报刊、杂志、互联网或其他媒体搜集通过报刊、杂志、互联网或其他媒体搜集资料，了解细胞融合技术与单克隆抗体的新资料，了解细胞融合技术与单克隆抗体的新进展，就自己感兴趣的领域，自定选题，写进展，就自己感兴趣的领域，自定选题，写一篇综述报告。一篇综述报告。参考选题：参考选题：1 1、19841984年诺贝尔生理学或医学奖年诺贝尔生理学或医学奖 2 2、单克隆抗体的种类；、单克隆抗体的种类；3 3、单克隆抗体与疾病诊断；、单克隆抗体与疾病诊断；4 4、生物导弹；、生物导弹；课后作业 通过报刊、杂志、互联网或其他媒体搜集资料，了39单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备 看书上看书上53页图，讨论：单抗制备过程分哪几步？页图，讨论：单抗制备过程分哪几步？请用箭头把代表单克隆抗体制备过程步骤图解的字请用箭头把代表单克隆抗体制备过程步骤图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是母按正确顺序连接起来。顺序是 单克隆抗体的制备 看书上53页图，讨论：单抗制备40有限稀释法有限稀释法 稀释多次稀释多次稀释稀释将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。方法有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。有限稀释法稀释将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法41谢谢!42