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HPV分型分型检测在在宫颈疾病疾病检查中的中的应用及用及亚能能HPV基因基因分型分型检测HPV分型检测在宫颈疾病检查中的应用及亚能HPV基因分型1HPV发展展进程程70年代德国人哈拉尔德楚尔豪森提出人乳头瘤病毒与宫颈癌有关系2019年国际癌症学会确定：人乳头瘤病毒是宫颈癌的主要病因。2019年10月6号哈拉尔德楚尔豪森获得诺贝尔奖。HPV发展进程70年代德国人哈拉尔德楚尔豪森提出2宫颈癌生物学病因研究的进程宫颈癌生物学病因研究的进程3子宫颈癌子宫颈癌唯一病因明确唯一可以早期发现和治疗唯一可望消灭HPV感染，特别是高危性、持续性感染引起子宫颈癌前病变，子宫颈上皮内瘤变，CIN和宫颈癌 预防HPV感染就可以预防宫颈癌 没有HPV感染就可以不罹患宫颈癌子宫颈癌唯一病因明确4我国我国宫颈癌流行癌流行现状状我国妇女患宫颈癌的比例15/10万，是仅次于智利的宫颈癌高发国家目前患者约40万，每年新增15万，据女性生殖道肿瘤首位我国的宫颈癌死亡率为11.34%，据女性癌症死亡率第二位，特别在西部地区，宫颈癌居女性癌症死亡率之首我国已婚女性HPV感染率在10%左右。我国需惊醒宫颈癌相关筛查的适龄女性，不少于不少于1 1亿亿我国宫颈癌流行现状我国妇女患宫颈癌的比例15/10万，是仅次5HPV 病毒学基病毒学基础知知识 1.小环状双链 DNA 病毒 2.直径 50-55nm 3.癌基因E6E7HPV病毒学基础知识小环状双链DNA病毒61466低危型HPV高危型HPV1466低危型HPV高危型HPV7HPV16nL1:主要衣壳蛋白，是疫苗的主要成分L2:次要衣壳蛋白，是市售抗体的主要识别位点E4：结合并破坏细胞角蛋白网，形成挖空细胞的外观E2：负性调节E6和E7，维持凋亡和细胞周期的调控。通常在病毒发生整合（病毒整合时会破坏E2基因的结构）时失活HPV的主要致癌基因nE6通过抑制p53而阻断凋亡nE7通过抑制pRB使细胞周期失控XHPV16L1:主要衣壳蛋白，是疫苗的主要成分L2:8生殖道生殖道HPV 感染感染高危型HPV感染通常没有症状，为一过性并可自愈。90%以上的病人两年内可痊愈。常见其他亚型继发或并发感染 多重多重HPV亚型感染极型感染极为常常见 自然免疫力差感染后只有50%-60%的女性产生抗HPV抗体，因此对同种基因型的HPV可再度感染！生殖道HPV感染9E6&E7E2良性湿疣在上皮分化的终末阶段L1&L2开始表达，并组装形成病毒衣壳最后完整的病毒颗粒从细胞内释放出来大量E4聚集溶解细胞骨架蛋白呈现挖空细胞的外观低水平表达，以维持病毒基因组和细胞的生长负性调节E6&E7保持细胞的分化和成熟确保能够产生完整的病毒颗粒一过性一过性 HPV 感染感染E6&E7E2良性湿疣在上皮分化的终末阶段一过性HPV感10E6&E7在细胞发生恶变时丧失分化的能力不同程度的细胞不成熟性DNA多倍体的出现核的非典型性持续的增生能力分裂相增多高高级别 CIN蛋白表达水平增高凋亡被阻断、细胞周期失控细胞开始发生恶变在病毒整合时被破坏持持 续续 性性 HPV 感感 染染E2E6&E7在细胞发生恶变时高级别CIN蛋白表达水平增高在11宫颈癌防治癌防治现状状宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，也是严重影响妇女身心健康，威胁妇女生命的重要原因之一。流行病学的调查显示，从50年代以来，由于子宫颈细胞学的广泛应用，全球子宫颈癌的发病率明显下降，但在发展中国家仍居妇科恶性肿瘤首位调查数字显示：我国25岁以上的妇女中，有超过70的人 数从未做过宫颈防癌检查！宫颈癌防治现状宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，也12hpv培训课件13hpv培训课件14筛 查 的的 重重 要要 性性 宫颈癌筛查不只是医师行为，更是政府的职责，是艰难的宫颈癌筛查不只是医师行为，更是政府的职责，是艰难的系统工程系统工程我国目前不可能做到像美国、澳大利亚那样建立规范化的我国目前不可能做到像美国、澳大利亚那样建立规范化的筛查制度筛查制度可以根据各地情况做区域性筛查，定点筛查，机会性筛查可以根据各地情况做区域性筛查，定点筛查，机会性筛查 所有到妇产科门诊就诊者和各种体检者，都应做子所有到妇产科门诊就诊者和各种体检者，都应做子 宫颈细胞学检查宫颈细胞学检查/HPV/HPV检查，这需要妇产科医生的工检查，这需要妇产科医生的工 作之一作之一 高危人群者更应行定期的检查和随诊高危人群者更应行定期的检查和随诊筛查的重要性宫颈癌筛查不只是医师行为，更是政府的15筛查的目的是筛查的目的是识别和检出子宫颈癌前病变，识别和检出子宫颈癌前病变，而不是子宫颈癌而不是子宫颈癌；子宫颈癌多半有症状，是及时诊断问题子宫颈癌多半有症状，是及时诊断问题子宫颈癌在癌前病变未被诊断，是没有进行检查和筛查：子宫颈癌在癌前病变未被诊断，是没有进行检查和筛查：1/4 1/4 患者从未进行细胞学检查患者从未进行细胞学检查 1/41/4患者子宫颈癌前患者子宫颈癌前5 5年未进行细胞学检查年未进行细胞学检查筛查的准确性取决于：筛查的准确性取决于：筛查方法的敏感性、特异性筛查方法的敏感性、特异性 细胞学和细胞学和HPVHPV检查质量检查质量 筛查的目的是识别和检出子宫颈癌前病变，而不是子宫颈癌；16子宫颈癌合并妊娠，是非常棘手的妊娠合并症。准备怀孕时仍要按照规范进行定期的细胞学检查。如孕前有高危因素，建议孕期及产后定期做宫颈细胞学检查。怀孕过程中若出现异常症状至医院 就诊，由医生根据情况决定是 否进行细胞学检查以及如 何处理。妊妊 娠娠 期期 也也 应 进 行行 宫 颈 癌癌 筛 查子宫颈癌合并妊娠，是非常棘手的妊娠合并症。妊娠期也应17筛 查 应 从从 何何 时 开开 始始？性生活开始后性生活开始后3 3年左右年左右不晚于不晚于2121岁岁Practice Guidelines in Oncology,2019,NCCN筛查应从何时开始？PracticeGuide18何何 时 终 止止 筛 查？年龄年龄 7070岁，在岁，在1010年内已有年内已有3 3次以上之满意的细胞学检查次以上之满意的细胞学检查正常者，可停止筛查。正常者，可停止筛查。但若无上述筛查历史，或有不正常者，则建议继续筛但若无上述筛查历史，或有不正常者，则建议继续筛 查。有宫颈癌历史、雌激素暴露、免疫功能障碍查。有宫颈癌历史、雌激素暴露、免疫功能障碍 （HIVHIV），应继续长期筛查。），应继续长期筛查。Practice Guidelines in Oncology,2019,NCCN何时终止筛查？年龄70岁，在10年内已有3次以19筛 查 的的 时 间 间 隔隔 传统细胞涂片检查传统细胞涂片检查 每年一次每年一次 TCT TCT每每2 2年一次年一次 30 30岁以后，连续岁以后，连续3 3次正常者，每次正常者，每2 2-3-3年一次年一次 FDA FDA批准批准HPV DNAHPV DNA检测用于检测用于3030岁以上的妇女联合细胞学检查岁以上的妇女联合细胞学检查 同时使用同时使用 细胞学和细胞学和HPV DNAHPV DNA检测同时为阴性，筛查间隔可以检测同时为阴性，筛查间隔可以 3 3年一次年一次注意对注意对HPVHPV感染的评估感染的评估Practice Guidelines in Oncology,2019,NCCN筛查的时间间隔传统细胞涂片检查20HPV 检 测 应 用用 于于 宫 颈 癌癌 筛 查HPVHPV病毒的发现病毒的发现明确高危型明确高危型HPVHPV病毒持续感染为宫病毒持续感染为宫颈癌治病因颈癌治病因p高危型HPV感染通常为一过性感染并可自行清除p但如自身免疫力较差，则会造成持续感染p不同地区人群的宫颈癌患者中感染的HPV型别不同p不同HPV型别致病类型及强弱不同HPV检测应用于宫颈癌筛查HPV病毒的发21HPV 检 测 的的 临 床床 应 用用细胞学结果为ASC的病例管理宫颈病变手术的术后随访与细胞学联合，应用于3030岁以上岁以上女性的宫颈癌筛查指导HPV疫苗的使用（两种疫苗：4价、2价疫苗针对16/18）现有的HPV疫苗只能对HPV16、18、6、11型这四种型别的 感染进行预防，且都以国外的研究数据进行研发 对于中国女性的HPV感染型别的研究，有助于研发适合于 中国女性的 HPV疫苗HPV检测的临床应用细胞学结果为ASC的病例管22美国ASCCP 2019年版HPV（+）及细胞学正常HPV 16/18(+)HPV 16/18(+)其他高危型阳性阴道镜阴道镜重复细胞学和HPV 检测（间隔12个月）两者均阴性细胞学阴性HPV（+）阴道镜细胞学异常HPV（）参照ASCCP指南常规筛查（3年后）美国ASCCP2019年版HPV（+）及细胞学正常HP23美国美国ASCCP：30岁妇女的女的宫颈筛查中中联合合筛查更更为重要重要HPV(-)TCT(-)HPV(+)1年重复TCT和HPV检查都为(-)TCT(-)HPV(+)TCT(+)不管HPV是否正常3年常规筛查阴道镜3年常规筛查TCT结果为ASCUS及其以上病变按ASCCP指南处理美国ASCCP：30岁妇女的宫颈筛查中联合筛查更为重要24TCT与与HPV 检测的的联合合应用于用于宫颈癌癌筛查TCT与HPV检测联合使用几乎可以100%防止漏诊，同时也可监测HPV感染的转归现有HPV疫苗仅针对四种型别HPV病毒的感染，更多的HPV型别感染仍需通过定期的联合筛查来防治临床处理仍需遵循TBS诊断结果和三阶梯诊治流程TCT联合HPV检测有助于宫颈病变的个体化处理TCT与HPV检测的联合应用于宫颈癌筛查TCT与HPV检测25 美国美国ACOG2009年版年版 2009年年11月月20日日,美国美国妇产科大学（科大学（ACOG）发表关于表关于宫颈癌癌筛查的最的最新指南意新指南意见对于30岁以上的妇女，最佳的筛查方式是同时进行细胞学筛查（TCT）和宫颈HPV DNA检测如果两项结果都正常，属于宫颈癌的低危人群，筛查的间隔最好在三年以上 美国ACOG2009年版2009年1126HPV 分分 型型 检 测分分型才能区分持续或型才能区分持续或反复感染反复感染分分型才能区分单一和多重感染型才能区分单一和多重感染 后者危险更后者危险更大大不不同型别不同的患病风险同型别不同的患病风险 致病性致病性差异差异不不同型别不同的处理同型别不同的处理方案方案相同细胞及组织学类型HPV阳性与阴性要区别对待不同HPV感染型别要区别对待根据ASCCP指南，细胞学阳性，HPV16、18阳性可选择阴道镜检不不同型别不同的致病同型别不同的致病类类不不同型别转归和愈后不同同型别转归和愈后不同Pap阴性HPV 阳性HPV 阴性三年内复检双相检查16/18 基因分型阳性阴性阴道镜检查一年内复检双相检查*美国美国ASCCP2019版版HPV分型检测分型才能区分持续或反复感染Pap阴性H27HPV 分分型检测应用（型检测应用（1）-筛查筛查 WHO建议HPV-DNA检测不能用于30岁以下的女性。HPV DNA 检测虽然对HPV很敏感，但是并不能预测它的病程和发展，要预测高危HPV是否 可致癌，需要作基因分型测试基因分型测试 虽然复查显示同型HPV阳性，但不能预 料这个女性的宫颈疾病病程。仅增加了危险性HPV分型检测应用（1）-筛查2823890(筛查人数)细胞学(-)HPV(-)21409细胞学(+)HPV(-)488细胞学(-)HPV(+)370细胞学(+)HPV(+)523阴道镜检查533无病例发现发现3例发现59例发现114例HPV 分分型检测应用（型检测应用（1）-筛查筛查23890(筛查人数)细胞学(-)细胞学(+)细胞学(-)29北美和欧洲的筛查研究显示，在35岁的女性人群中，HPV试验检测CIN2病变的敏感性和特异性分别为95%和93%。细胞学检查发现ASCUS的敏感性和特异性分别为60%和97%联合使用HPV检测和细胞学检查的敏感性比单独使用任何一种都显著提高，阴性预测值达99%-100%HPV分型检测应用（分型检测应用（1）-筛查筛查北美和欧洲的筛查研究显示，在35岁的HPV分型检测应用（130HPV分型检测应用（2）-阴道镜适应征 30妇女，细胞学未见上皮内病变和恶性细胞，HPV16，18建议阴道镜。2019 consensus guidelines for management of women with abnormal cervical cancer screening tests AJOG.ORGPap阴性HPV 阳性HPV 阴性三年内复检双相检查16/18 基因分型阳性阴性阴道镜检查一年内复检双相检查HPV分型检测应用（2）-阴道镜适应征31波特兰的一项研究表明，30岁细胞学阴性的女性中，HPV16或18阳性的女性在10年随访中出现CIN3的比率分别为21%和18%。与此相比，其他高危型HPV阳性的女性中，CIN3的风险性仅1.5%。HPV分型检测应用（分型检测应用（2）阴道镜阴道镜适应征适应征波特兰的一项研究表明，30岁细胞学阴性的女32Plummer et al10058例宫颈癌，8550宫颈鳞癌，1508宫颈腺癌和宫颈腺鳞癌HPV16 感染与宫颈癌的相关具有普遍意义 宫颈鳞癌：HPV16占46-63%；HPV18占10-14%宫颈腺癌和宫颈腺鳞癌：HPV18占37-41%；HPV16占26-36%。HPV分型检测应用（分型检测应用（2）阴道镜阴道镜适应征适应征PlummeretalHPV分型检测应用（2）33 CIN23 HR-HPV:94.0%常常见亚型型：HPV16、33、58、31和52型Logistic Regression分析：HPV16、33和31与CIN23相关，是主要致病型国家十五科研攻关项目 HPV分型检测应用（分型检测应用（2）阴道镜适应征阴道镜适应征CIN23HR-HPV:94.0%34 四四种种HPV亚型在亚型在 30岁妇女宫颈癌筛查中的作用岁妇女宫颈癌筛查中的作用四种HPV亚型在30岁妇女宫颈癌筛查中的作用35HPV16亚型在亚型在 30岁妇女宫颈癌筛查中的作用岁妇女宫颈癌筛查中的作用HPV16亚型在30岁妇女宫颈癌筛查中的作用362009年（年（ASCCP）最新）最新HPV检测指南指南HPV 阳性及细胞学正常HPV 16/18(+)其他高危型阳性阴道镜重复细胞学和HPV 检测（间隔12个月）两者均阴性细胞学阴性HPV（+）阴道镜细胞学异常HPV（）参照ASCCP指南常规筛查（3年后）2009年（ASCCP）最新HPV检测指南HPV阳性及细37HPV分型检测应用（分型检测应用（3）-ASCUS分层分层ASC病例的管理(2019ASCCP)大于大于2020岁人群岁人群 6 6个月后重复细胞学检查个月后重复细胞学检查 高危高危型型HPVHPV检测（可以用残留的液基做）检测（可以用残留的液基做）阴道镜检查阴道镜检查（40-60%40-60%）2019consensusguidelinesformanagementofwomenwithabnormalcervicalcancerscreeningtestsAJOG.ORGHPV分型检测应用（3）-ASCUS 分层ASC病例38HPV分型检测应用（分型检测应用（3）-ASCUS分层分层316例ASCUS患者中,CIN级以上的阳性检出率为18.99%（60316）,宫颈细胞学诊断为ASCUS中,HR-HPV阳性率为 68.99%（218316），ASCUS 组中HR-HPV阳性患者CIN级以上 宫颈病变的检出率高于HPV阴性者，差 异有统计学意义（P0.001）HPV分型检测应用（3）-ASCUS 分层316例39HPV分型检测应用（分型检测应用（4）-绝经期妇女绝经期妇女LSIL2019consensusguidelinesformanagementofwomenwithabnormalcervicalcancerscreeningtestsAJOG.ORG“reflex”HPV检测6和12个月时细胞学阴道镜HPV阴性或阴道镜未发现CIN12个月时细胞学是推荐的HPV阳性或细胞学ASC-US阴道镜是推荐的HPV阴性或连续2次细胞学“阴性”常规细胞学筛查是推荐的HPV分型检测应用（4）-绝经期妇女LSIL40消融或切除治疗CIN失败的比率在1%25%之间。系统性的综述表明，不同方法的整体失败率为5%15%，不同方法间无显著差异。大多数失败发生在治疗2年后。一个系统性综述报道，在治疗后20年内女性浸润癌的罹患率约10万分之56，高于美国普通人群（5.6每10万人年）。HPV分型检测应用（分型检测应用（5）-宫颈病变的随访宫颈病变的随访消融或切除治疗CIN失败的比率在1%25%之间。系统41治疗后随访中应用HPVDNA检测的系统性综述表明，其性能优于细胞学随访方法。治疗后6个月HPV检测鉴别复发/持续性CIN的敏感性达90%，而且保持这种水平到24个月。与此相比，细胞学的敏感性大约为70%。一些研究（不是所有研究）中，联合使用HPV检测和细胞学可以增加敏感性。HPV分型检测应用（分型检测应用（5）-宫颈病变的随访宫颈病变的随访治疗后随访中应用HPVDNA检测的系统性综述HPV分型检测42对细胞学ASC-US、ASC-H或LSIL的CIN1推荐的管理方案是，12个月时HPVDNA检测或6个月、12个月时重复细胞学检测对CIN2、3女性治疗后的管理方法包括6-12个月时进行HPVDNA检测、单独6个月采用细胞学或联合使用细胞学和阴道镜 HPV分型检测应用（分型检测应用（5）-宫颈病变的随访宫颈病变的随访对细胞学ASC-US、ASC-H或LSIL的CIN143AIS的管理方案6个月时联合使用细胞学HPV检测宫颈管采样阴道镜 HPV分型检测应用（分型检测应用（5）-宫颈病变的随访宫颈病变的随访AIS的管理方案HPV分型检测应用（44HPV分型检测应用（分型检测应用（6）-指导疫苗的使用指导疫苗的使用疫苗是模拟HPV16/18的L1蛋白衣壳（一种病毒样颗粒-病毒脂蛋白）给HPV阴性的女性接种这两种疫苗后，有90%以上的人不会产生由HPV16/18型引起的癌前病变到目前为止，这种高浓度，长效抗HPV持续感染的预防疫苗才开展了六年如果接受预防者在接种时已经HPV16/18阳性，是否有治疗作用尚未明了HPV分型检测应用（6）-指导疫苗的使用疫苗是模拟45下生殖道下生殖道HPV感染的干预治疗感染的干预治疗 HPV的感染是非系统性感染，只局限于最初的感染的部位，感染部位的局部细胞因子和非特异性的效应细胞，如单核细胞、巨噬细胞和NK细胞是阻止感染的第一道防线。宣讲相关知识，调动患者免疫功能 增强生殖道局部免疫力，可加速对HPV的清除 用避孕套控制HPV在性伴间传播是有效和必要的 下生殖道HPV感染的干预治疗HPV的感染是非系统性感染，46 HPV是人类癌瘤发病中唯一可以完全确认的致癌病毒。现今的研究甚至可以证实：预防预防HPV感染就可以预防宫颈癌，感染就可以预防宫颈癌，没有没有HPV感染就可以不罹患宫颈癌。感染就可以不罹患宫颈癌。HPV是人类癌瘤发病中唯一可以完全确认的致癌病47HPV DNA 检测常用技术HPVDNA检测常用技术48HPV DNA 检 测 技技 术n n常用常用常用常用方法：方法：方法：方法：n n 其他其他其他其他方法：方法：方法：方法：普通普通PCRPCR，原位杂交，原位杂交，SPRSPR，DNADNA测序测序等等 基因芯片技术 二代杂交捕获 荧光定量PCR HPVDNA检测技术常用方法：49(一一)基因芯片技基因芯片技术玻璃芯片膜芯片流式荧光杂交法（液态芯片）固相芯片(一)基因芯片技术玻璃芯片固相芯片50玻璃芯片与膜芯片（固相芯片）玻璃芯片与膜芯片（固相芯片）玻璃玻璃芯片芯片 应用应用领域领域：主要用于科研领域，如基因表达谱分析、基因多态性分析、大 规模序列分析、药物筛选、基因诊断的研究等 目前仅极少数用于临床检验等领域 局限：制作工艺相对复杂 信号检测需专门的仪器设备（激光扫描仪）阅读设备的成本局限（费用高昂）玻璃芯片与膜芯片（固相芯片）玻璃芯片51 应用领域应用领域：高密度芯片目前仍主要用于科研领域 低密度芯片已经用于临床检验领域低密度芯片的低密度芯片的特点：特点：工艺相对简便 信号检测简便 投入费用较低 现状现状：目前临床检测中，往往还不需要使用到大规模探针阵列，从实用性、使用成本、方便性等角度考虑，低密度芯片 （十几个至几十个探针）更易于被接受膜芯片膜芯片膜芯片52亚能能HPV基因芯片基因芯片检测系系统 PCR扩增结合DNA反向点杂交技术灵敏度更高实验室设置及操作流程应当符和规范PCR的检测结果是可靠的 检测通量大，可同时检测15种HPV亚型，包括13种高危型 探针设计，特异性强 膜条显示检测结果，读取更方便 采用dUTP-UNG防污染体系，有效避免假阳性结果 检测数量随需而变，单人份、多人份检测任选 有力的临床试验数据证明 WHO国际癌症研究所在中国的研究项目显示，亚能对于高度病变 的检测灵敏度达100%100%、阴性预测值达99.7%99.7%，特异性、准确性和阳性预测值和都很高。对约3000人份的临床数据显示，普通人群的HPV高危型感染率 为11%11%左右，医院高危人群的HPV高危型感染率为20%20%左右，这 与文献报道相当。亚能HPV基因芯片检测系统PCR扩增结合DNA反向点杂交技53亚能能HPV 基因分型技基因分型技术原理（原理（PCR-反向点反向点杂交法）交法）一次杂交反应可以检测多种靶序列一次杂交反应可以检测多种靶序列 亚能HPV基因分型技术原理（PCR-反向点杂交法）一次杂交54PCR技技术Kary B.MullisKary B.Mullis（穆利斯）（穆利斯）聚合酶链式反应（PCR）：利用DNA碱基互补配对原则及半保留复制的特性，将目的DNA在体外进行大量复制美国PECetus公司的KaryMullis于1983年创建1989年美国Science杂志将PCR列为十余项重大科学发明之首19931993年度年度诺贝尔诺贝尔化学化学奖奖Polymerase Chain Reaction PCR技术KaryB.Mullis（穆利斯）聚合酶链55PCR技技术原理原理高温高温变性性低温低温退退火火中中温温延延伸伸PCR三步曲：三步曲：PCR产物的生成量以指数方式增加PCR技术原理高温变性PCR三步曲：PCR产物的生56 PCR技技术特点特点-高度的灵敏性高度的灵敏性PCR产物的生成量是以指数方式增加的3535轮轮循循环环，扩扩增量理增量理论论上达上达2 23535个拷个拷贝贝（680680亿亿！）！）PCR技术特点-高度的灵敏性PCR产物的57核酸分子核酸分子杂交交核酸分子核酸分子杂交是指具有一定同源性的两交是指具有一定同源性的两条条核酸核酸单链在一定的条件下可按在一定的条件下可按碱基互碱基互补原原则退火形成双退火形成双链的的过程。分子程。分子杂交具有交具有高高度度的的特异性特异性。探针杂交体核酸分子杂交核酸分子杂交是指具有一定同源性的两条探针杂交体58亚能能HPV 基因分型基因分型检测流程流程亚能HPV基因分型检测流程59结果判果判读HPV16HPV6,52阴性样本单一感染多重感染结果判读HPV16HPV6,52阴性样本单一感染多重感染60亚能能HPV产品品卖点点详见F:英硕力（三）亚能HPV产品卖点.ppt亚能HPV产品卖点详见F:英硕力（三）亚能HPV产品卖点61HPV检测耗材列表及示意耗材列表及示意图详见F:英硕力HPV 基因分型检测常用耗材图示.docHPV检测耗材列表及示意图详见F:英硕力HPV基因分62实验室室仪器器设备清清单详见F:英硕力实验室仪器设备清单-20191227.xls实验室仪器设备清单详见F:英硕力实验室仪器设备清单-2063HPV主要主要竞争争产品介品介绍HPV主要竞争产品介绍64PCR-PCR-反向点反向点杂交法特点交法特点 高灵敏度-PCR 高特异性-核酸分子杂交 高通量-膜上固定多种探针 安全无毒-生物素标记PCR-反向点杂交法特点高灵敏度-PCR65流式流式流式流式荧荧光光光光杂杂交法交法交法交法-液液液液态态芯片芯片芯片芯片首先首先PCRPCR扩扩增待增待测样测样品品，得到的，得到的PCRPCR产产物和微球上交物和微球上交联联的探的探针杂针杂交，加入交，加入荧荧光光标记标记反反应应，最后在，最后在流式流式荧荧光光检测仪检测仪上上检测检测荧荧光信号光信号。如果PCR产物和探针配对，则微球上相应探针捕获到标有Biotin的PCR产物，加入荧光标记StrepAvidin-PE后，形成微球-探针-PCR产物-Biotin-StrepAvidin-PE复合物。在检测仪上即可检测到对应微球的荧光信号。如果PCR产物与探针不配对，则对应微球的荧光信号为背景信号。流式荧光杂交法-液态芯片首先PCR扩增待测样品，得到的66流式流式荧光光杂交法操作流程交法操作流程PCR扩增DNA提取编码微球与探针混合向检测板中加入微球-探针杂交液，加入PCR产物PCR产物变性杂交，48，30min加入链霉亲和素标记的藻红蛋白，15minLuminex100多功能流式分析仪检测流式荧光杂交法操作流程PCR扩增D67代表厂家代表厂家：上海透景人乳人乳头瘤病毒核酸分型瘤病毒核酸分型检测试剂盒盒检测的的基因型：基因型：19种高危型：16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68,73,83，26,55,61,66种低危型：6,11,40,42,44,53,54 认证：国食药监械(准)字2009第3400020号进口口专用用仪器器(美国Luminex多功能流式点阵分析仪）流式流式荧光光杂交法交法HPV 61 型为低危型！参照：N Engl J Med 2019;348:518-27代表厂家：上海透景流式荧光杂交法HPV61型为低危型！参68Luminex 100Luminex 100TMTM多功能流式点阵仪多功能流式点阵仪Luminex100TM多功能流式点阵仪69hpv培训课件70hpv培训课件71流式流式荧光光杂交法交法-不不定量定量流式荧光杂交法-不定量72流式流式荧光光杂交法交法总结结合普通PCR技术，核酸分子杂交技术和荧光标记技术尚不成熟，灵敏度和特异性有待提高无洗涤步骤，无法去除非特异性杂交，且有背景荧光信号干扰技术难点为探针与微球的交联，产品性能上存在不稳定性只分型，不定量需价格昂贵的流式荧光检测仪流式荧光杂交法总结73 （二）二代二代杂交捕交捕获 Hybrid Capture 2,HC2 基本原理基本原理：利用：利用对对抗体捕抗体捕获获信号的放大信号的放大 和化学和化学发发光信号的光信号的检测检测 检测检测通量通量：1313种高危种高危HPVHPV基因型基因型,不能不能提示具体的基因型提示具体的基因型（二）二代杂交捕获H74计算机判读15 min杂交60 min抗体捕获60 min第二抗体结合，化学发光30 minDNA变性45 minHC2 实验步步骤图示示计算机杂交抗体第二抗体结合，DNAHC2实验步骤图示75吸取变性剂于对照和样本管中旋涡振荡10秒65孵育45分钟，采用MicroplateheaterIHC2操作步操作步骤-DNA 变性性吸取变性剂于对照和样本管中旋涡振荡10秒65孵育45分钟，76将已变性的样本混匀，吸取75ul于“杂交微孔板”中20-25孵育10分钟加入25ul高危HPV探针于微孔板中65孵育60分钟置于RotaryShakerI中，1100rpm，32分钟准备HPV探针混合物HC2操作步操作步骤-杂交交将已变性的样本混匀，吸取75ul于“杂交微孔板”中20-77将杂交产物转移至“捕获微孔板”相应的小孔中20-25孵育30-45分钟20-25孵育60分钟，1100rpm加入75ulDetectionReagent1（碱性磷酸酶偶联的抗体）于“捕获”微孔板相应的小孔中HC2操作步操作步骤-抗体捕抗体捕获及及酶标将杂交产物转移至“捕获微孔板”相应的小孔中20-25孵育378洗涤微孔板：采用AutomatedPlateWasherI或进行手动洗板，重复洗6次加入75ulDetectionReagent2（化学显色底物）于“捕获”微孔板相应的小孔中20-25孵育15-30分钟采用Digenemicroplateluminometer(DML2000)读数 HC2操作步操作步骤-洗板及化学洗板及化学显色色洗涤微孔板：采用AutomatedPlateWasher79HC2如何如何进行行结果判果判读?1、阴性、阴性对照照每次实验必须同时做3份阴性份阴性对照照。阴性对照的结果必须为10-250 RLU（相对光单位）。变异系数异系数（%CV）应该25%，如果25%，那么去掉偏离平均值最远的一个阴性对照，用剩下的两个阴性对照计算平均值以及变异系数。%CV必须25%，否则，本次实验结果无效，必须重做，无法给病人出报告HC2如何进行结果判读?1、阴性对照802.标准品准品每次实验必须同时做3份高危份高危HPV标准品准品。%CV应该15%，如果15%，那么去掉偏离平均值最远的一个标准品，用剩下的两个标准品计算平均值以及变异系数。%CV必须15%，否则，本次实验结果无效，必须重做，无法给病人出报告3.用用标准品平均准品平均值（MHRC）以及阴性）以及阴性对照平均照平均值MNC计算算MHRC/MNC比比值.2.0MHRC/MNC15。如果2.0或15，本次实验结果无效，必须重做。4.如果符合以上的如果符合以上的标准，准，检测结果是可靠的。果是可靠的。此时的Cutoff值（阳性标本评判的标准）就是MHRC2.标准品81阴性对照阴性对照（NC）高危高危HPV标准品标准品(HRC)9731210133591307平均值平均值96318%CV4.94.7HRC/NC3.31Cutoff值=318，所有标本的相对光单位（RLU）应该转换为与Cutoff值的比值，比值大于1为阳性，比值小于1则为阴性阳性阳性结果的判定果的判定阴性对照（NC）高危HPV标准品(HRC)9731210182质控控对照对照HPV 基因基因型型预期的结果预期的结果（RLU/Cutoff值）值）最小值最小值最大值最大值QC1-LRHPV 60.0010.999QC2-HRHPV 1628质控对照HPV基因型预期的结果（RLU83HC2技技术总结技术上，采用核酸分子杂交，抗体捕获（吸附杂交体），化学显色不分型不能检测HPV多重感染不定量有交叉杂交反应每次需要消耗8个参考品，试剂成本高手动操作很多，步骤繁琐需价格昂贵的基因杂交信号放大系统HC2技术总结技术上，采用核酸分子杂交，抗体捕获（吸附杂交体84(三三)荧光定量光定量PCR技技术原理：在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的积累,实时监控整个PCR过程,最后通过标准曲线对起始模板量进行定量分析.定量，不分型(三)荧光定量PCR技术原理：85荧光基光基团的分的分类化化 学学 原原 理理荧光基团的分类化学原理86荧光定量光定量PCR-基于基于Taqman探探针化化 学学 原原 理理荧光定量PCR-基于Taqman探针化学原理87荧光定量光定量PCR技技术总结能定量检测HPV拷贝数灵敏度高不分型不能检测HPV多重感染检测通量有限，目前最多检测13种高危型需价格昂贵的荧光定量PCR仪荧光定量PCR技术总结能定量检测HPV拷贝数88（四）原位（四）原位杂交交采用荧光、生物素、地高辛等标记的探针，依据碱基互补配对原理，与组织切片、细胞涂片等标本中的靶序列特异杂交，经信号放大及显色后，显微镜下观察结果（四）原位杂交采用荧光、生物素、地高辛等标记的89原位原位杂交交试剂盒盒代表厂家：北京中杉金桥生物技术有限公司原位杂交试剂盒代表厂家：北京中杉金桥生物技术有限公司90原位原位杂交交实验步步骤以地高辛以地高辛标记HPV DNA探探针为例例4-6mm切片，用处理过的玻片捞片。56-60烤片，2-16小时。新鲜二甲苯脱蜡，10分钟2次。100%乙醇5分钟2次，空气干燥。加入50ml胃酶工作液，37消化30分钟。弃去胃酶工作液，逐级酒精脱水1分钟3次，空气干燥。加10-20ml探针，加盖玻片。用橡胶水泥将盖片周围密封（目录编号ZLI-9601）。变性955-7分钟。杂交372-16小时。揭去橡胶水泥，将切片插入PBS/TBS缓冲液中以便去掉盖玻片，约5-10分钟。每张切片加入2-3滴杂交后洗液，37孵育15分钟。PBS/TBS缓冲液洗，1分钟3次。每张切片加入适量辣根酶标记抗地高辛抗体，37孵育30分钟。PBS/TBS缓冲液洗，1分钟3次。滴加适量DAB工作液，镜下观察显色结果，约3-10分钟。弃去显色液，蒸馏水或自来水冲洗。选择：每张切片加入1滴复染剂，5-10秒钟。蒸馏水或自来水冲洗。脱水、透明、封片。原位杂交实验步骤以地高辛标记HPVDNA探针为例91原位原位杂交技交技术总结灵敏度低（无PCR扩增）特异性高检测通量低不能分型不能定量操作步骤繁琐非常费时，需要两天HPV检测产品无注册证，仅仅用于科研原位杂交技术总结灵敏度低（无PCR扩增）92 （五）表面等离子体谐振 （SPR）技术93（五）表面等离子体谐振93表面等离子表面等离子谐振振现象象Surface Plasmon Resonance，SPR入射光(单波长偏振光)在玻片-金膜界面全反射，激发金膜中的自由电子产生表面等离子体。当光波激发频率与表面等离子体的振动频率相等时，二者发生谐振，光能被吸收,反射光几乎完全消失,此时入射光的角度被称作SPR角（谐振角角（谐振角）。表面等离子谐振现象SurfacePlasmonReson94分析SPR曲线谐振角变化芯片表面质量改变(折射率变化)分子相互作用分析SPR曲线谐振角变化芯片表面质量改变(折射率变化)分子相95 SPR检测核酸原理示意核酸原理示意图反应曲线Time(s)SPR角(m)SSSS传感芯片寡核苷酸探针PCR 产物变性dsDNAssDNA杂交SPR检测核酸原理示意图反应曲线Time(s)SPR961）核酸提取试剂2）PCR反应试剂3）SPR检测试剂和芯片 北京金菩嘉北京金菩嘉-HPV分型分型检测试剂盒盒组成成1）核酸提取试剂北京金菩嘉-HPV分型检测试剂盒组成97HPV基因检测芯片，共26个通道，一个阴性，一个IC，24个hpv探针通道通道14151617181920212223242526类型类型51816835611427044435440阴性阴性通道217：高危HPV;通道1825：低危HPV SPR检测芯片探芯片探针点点阵通道通道12345678910111213类型类型IC161831335258565966455339SPRHPV检测芯片HPV基因检测芯片，共26个通道，一个阴性，一个IC，24个98 S SP PR R技技术术检检测测 H H P P V V流流程程图图样品制备DNADNAPCR扩增产物线上检测输出报告成品芯片包被分型探针固定包被芯片芯片基片SPR技术检测HPV流程图样品制备DNAPC99SPR SPR 设设 备备 简简 介介W2600型生物型生物传感芯片感芯片阅读仪SPR设备简介W2600型生物传感芯片阅读仪100W2600工作流程开始检测后系统自动进行以下动作：清空机器内部样品匣更换样品匣更换芯片匣清洗采样针、buffer针扫描芯片注入系统buffer注入系统buffer扫描芯片采样等待30min（杂交）扫描芯片输出检测结果W2600工作流程开始检测后系统自动进行以下动作：清空机器内101SPR技技术检测HPV 总结同样需要DNA提取采用普通PCR扩增，核酸分子杂交采用SPR技术（物理手段）检测杂交信号无临床应用文献无注册证SPR技术检测HPV总结同样需要DNA提取102（六）HPV DNA 序列测定 经典方法:Sanger双脱氧链终止法(Sanger,1977)Maxam-GilbertDNA化学降解法(Maxam&Gilbert,1977)（六）HPVDNA序列测定经典方法:103与与 PCRPCR反反应类似似反反应体系中包含体系中包含：模板模板 DNA,TaqDNA,Taq酶,dNTPsdNTPs,ddNTPsddNTPs和和测序序引物引物反反应过程：程：变性性复性延伸复性延伸终止止Sanger双脱氧双脱氧链终止法止法与PCR反应类似Sanger双脱氧链终止法104Dideoxynucleotides（双脱氧核苷酸）（双脱氧核苷酸）ddNTPs是反应终止剂可以当作正常碱基参与复制，一旦掺入DNA中，其后延伸反应就不能继续。Dideoxynucleotides（双脱氧核苷酸）105*少一个OH脱氧脱氧核甘核甘酸与酸与双脱双脱氧核氧核甘甘酸酸结构构比比较*少一个OH脱氧核甘酸与双脱氧核甘酸结构比较106双脱氧双脱氧链终止法止法测序原理序原理反应体系中含有ddNTPs,因此，在复制的延伸过程中，在DNA任何碱基位置都可能出现终止反应，从而形成不同长度的寡核苷酸混合物。所以，每条寡核苷酸都有固定的起点，但有不同的终点，长度由ddNTPs掺入的位置决定。双脱氧链终止法测序原理反应体系中含有ddNTPs,因此，在107在高分辨率的电泳条件下（如毛细管电泳），能够将长度相差一个碱基的寡核苷酸分离开。ddNTPs包含4中双脱氧核苷酸，分别带有不同的荧光标记，当带有不同荧光标记的寡核苷酸依据长度大小先后通过荧光检测仪时，检测仪可以自动读取DNA上的核苷酸顺序在高分辨率的电泳条件下（如毛细管电泳），108凝凝 胶胶 电 泳泳DNA在电泳中的迁移率与其片段长度有关，片段小的跑得快，片段大的跑得慢，因而彼此分离开。凝胶电泳DNA在电泳中109双脱氧双脱氧链终止法止法测序原理示意序原理示意图双脱氧链终止法测序原理示意图110DNA全自全自动分析分析仪ABI 3100遗传分析仪3700型全自动遗传分析仪安玛西亚DNA序列分析系统 377型遗传分析仪DNA全自动分析仪ABI3100遗传分析仪3700型111DNA提取PCR扩增PCR产物纯化（电泳或专用试剂盒）读取序列及分析测序仪检测产物纯化测序反应HPVDNA测序流程DNA提取PCR扩增PCR产物纯化（电泳或专用试剂盒）读取序112测序法序法检测HPV的局限性的局限性首先必须对待测样本进行PCR扩增，由于事先不知道是哪一种HPV基因型的感染，所以必须采用通用引物进行PCR扩增单一感染（如HPV16）多重感染（如HPV16，18，52，58）鉴定无法鉴定基因型！测序法检测HPV的局限性首先必须对待测样单一感染多重感染鉴定113DNA 测序技序技术总结测序之前必须做对待测样本进行PCR扩增或DNA克隆测序技术的准确性依赖于引物的特异性难以对HPV多重感染进行测序鉴定操作复杂，耗时测序仪价格昂贵国内开展基因测序的机构或企业非常少无注册证，仅仅用于科研DNA测序技术总结测序之前必须做对待测样本进行PCR114各种各种HPV DNA 检测技技术总结膜芯片膜芯片流式荧光流式荧光杂交法杂交法杂交捕获杂交捕获二代二代荧光定量荧光定量PCR原位杂交原位杂交SPR测序测序原理原理PCR+反向点杂交+化学显色PCR+杂交+荧光标记杂交+抗体捕获+化学显色PCR+荧光标记杂交+化学显色PCR+杂交+光学检测PCR+双脱氧链终止法探针固定探针固定方式方式固定于膜芯片上固定于微球上不固定无不固定金膜无能否分型能否分型分型分型不分型不分型不分型分型分型能否鉴定能否鉴定多重感染多重感染能能不能不能不能能难信号检测信号检测手段手段化学显色荧光扫描化学显色荧光扫描化学显色SPR角荧光扫描灵敏度灵敏度高低低高低无文献高特异度特异度高低交叉反应高高无文献高检测通量检测通量高高低低极低高低仪器设备仪器设备要求要求低很高很高高低高很高有无注册有无注册证证有有有有无无无各种HPVDNA检测技术总结膜芯片流式荧光杂交法杂交捕获115基因芯片技基因芯片技术特点特点n 高高灵敏度灵敏度-PCR-PCRn 高高特异性特异性-核酸核酸分子分子杂交交n 高高通量通量-膜膜上固定多种探上固定多种探针n 安全安全无毒无毒-生物素生物素标记 基因芯片技术特点高灵敏度-PCR116 二、二、HPV HPV 主要主要竞争争产品品n 基因芯片技术 代表厂家：亚能、凯普、达安n二代杂交捕获代表厂家：Qiagen（凯杰）n荧光定量PCR代表厂家：港龙，达安，凯普，复星，匹基n流式荧光杂交法代表厂家：上海透景二、HPV主要竞争产品基因芯片技术117 三、三、亚能能HPVHPV与与竞争争产品的品的对比比1、亚能和凯普HPV基因分型产品对比2、亚能基因芯片技术与二代杂交捕获对比3、亚能基因芯片技术与荧光定量PCR对比4、亚能基因芯片技术与流式荧光杂交法对比三、亚能HPV与竞争产品的对比1、亚能和凯普HPV基因分118 亚 能 凯 普技术原理PCR+反向点杂交PCR+导流杂交（实质也是反向点杂交）经典杂交方法导流杂交是通过外力抽吸加压，人为缩短杂交时间杂交操作时间1份 标本 70min15份 75min25份 80min 48份 90min96份 100min样本量越多，时间优势越明显！1份 标本 40min15份 60min1630份 60min23145份 60min34660份 60min46175份 60min5 7690份 60min696份 60min7 基本设备离心机、PCR仪、普通杂交仪（价格低廉）离心机、PCR仪、专用杂交仪（价格较贵）样本来源宫颈脱落细胞，疣体组织，病理石蜡切片，液基细胞学样本宫颈脱落细胞、疣体组织（一）（一）亚能和能和凯普普HPV基因分型基因分型产品品对比比亚能凯普技119亚能凯普DNA提取提取提取试剂通过国家认证提取试剂只含裂解液一种成分提取试剂盒未通过国家认证提取试剂分溶液,PCRPCR反应液已分装扩增体系未分装，人工配制反应液杂交杂交杂交前准备工作简单常规杂交，常态性碰撞接触，多次接触，反应充分杂交仪中空气传导加热，温度均匀、准确，更高特异性独立杂交管内杂交，无交叉污染仪器运转中操作者可休息杂交前准备工作复杂，要通过一系列步骤人工分隔反应室导流杂交，人为外力作用，一过性接触，反应不充分杂交反应室之间温度有差异，特异性较差反应室分隔不严，交叉污染仪器运转中操作者不可休息亚能凯普DNA提取试剂通过国家认证提取试剂盒未通过国家认证P120凯普普导流流杂交交仪凯普导流杂交仪121亚能凯普洗膜洗膜洗膜充分，无杂交背景或浅背景洗膜不充分，且容易造成很深的杂交背景孵育孵育在孵育前无封阻步骤排出封阻液过程缓慢，且封阻效果对显色背景影响很大结果结果判读判读显色斑点大判读结果受背景颜色影响小膜条小，显色斑点小判读结果受背景颜色影响大,易造成错误判读检测检测通量通量23型无CP8304（81型），低危型21型无HPV73，83，MM4（82）而73、82型为IARC认定的15种常见高危型之一亚能凯普洗膜洗膜充分，无杂交背景或浅背景洗膜不充分，且容易造122导流杂交法杂交效率和灵敏度导流杂交法杂交效率和灵敏度膜条膜条目的目的DNAn基因型特异性探针固定在膜条的特定位置n探针只占据膜条面积的极小部分n目的DNA在膜条上均匀分布，定向流动，一过性接触！n杂交上的DNA只占目的DNA的极小部分n杂交效率低，灵敏度低！导流杂交法杂交效率和灵敏度膜条目的DNA基因型特异性探针固定123亚能和亚能和凯普膜凯普膜条显色对比条显色对比亚能能凯普普膜条尺寸：12mm78mm膜条尺寸：22mm22mm亚能和凯普膜条显色对比亚能凯普膜条尺寸：12mm78mm膜124亚能产品与凯普的亚能产品与凯普的比较优势比较优势使用普通杂交仪可检测更多来源的标本样本越多，时间优势越明显检测23型灵敏度、特异性、准确度高；重复性好交叉污染风险极低，假阳性率低提取试剂，芯片阅读仪均有证PCR扩增体系预分装仪器运转中操作者可休息显色斑点大，易于判读亚能产品与凯普的比较优势使用普通杂交仪125项目项目基因芯片（亚能）基因芯片（亚能）杂交捕获杂交捕获技术原理技术原理PCR+反向点杂交+化学显色分子杂交化学显色，无需基因扩增理理 论论 耗耗 时时6小时4.5小时标本来源标本来源宫颈脱落细胞、疣体组织、病理石蜡切片，液基细胞学样本等宫颈脱落细胞，液基细胞学样本等基基 本本 设设 备备离心机、普通PCR仪、普通杂交仪（价格低廉）基因杂交信号放大系统（价格昂贵）试剂盒规格试剂盒规格25或50人份/盒96人份/盒（二）（二）亚能与能与杂交捕交捕获二代二代对比比项目基因芯片（亚能）杂交捕获技术原理PCR+反向点杂交+化学126项目项目基因芯片（亚能）基因芯片（亚能）杂交捕获杂交捕获杂交时间杂交时间11.5小时1小时检测通量检测通量检测23种HPV基因型，18种高危，5种低危检测13种高危型，是否分型是否分型分型，确定具体的基因型不能分型不能分型，仅提示是否有HPV感染多重感染检测多重感染检测能检测多重感染不能检测多重感染灵敏度灵敏度1000 copies/mL100000 copies/mL交叉杂交交叉杂交无有分批使用分批使用可单人份使用,一次可检测标本量96个或更多每次需做8个参考品，分批使用不宜超过4次项目基因芯片（亚能）杂交捕获杂交时间11.5小时1小时检测1272019年，美国年，美国FDA公布了公布了HC2的四个批次的的四个批次的产品召回通告品召回通告召回原因：召回原因：可能可能产生假阳性生假阳性结果果accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/cfres/res.cfm?start_search=1&event_id=256782019年，美国FDA公布了HC2的四个批次的产品召回通告a128亚能亚能HPVHPV产品与产品与HC2HC2的的比较优势比较优势检测23种HPV基因型能分型能检测HPV多重感染可检测更多来源的标本对实验室仪器设备要求很低无交叉杂交现象可分批使用，单人份、多人份任选亚能HPV产品与HC2的比较优势检测23种HPV基因型129 项项 目目基因芯片（亚能生物）基因芯片（亚能生物）荧光定量荧光定量PCR技术原理技术原理PCR+反向点杂交+生化显色PCR+荧光标记+发光、读数理理 论论 耗耗 时时6小时3小时可可 检检 测测 物物宫颈脱落细胞、疣体组织、病理石蜡切片，液基细胞学标本等宫颈脱落细胞，液基细胞学标本等基基 本本 设设 备备普通PCR仪、普通杂交仪（价格低廉）荧光定量PCR仪（价格昂贵）检测通量检测通量23型2/8/10/13型(三三)亚能与能与荧光定量光定量PCR对比比项目基因芯片（亚能生物）荧光定量PCR技术原130项目项目基因芯片（亚能生物）基因芯片（亚能生物）荧光定量荧光定量PCR是否分型是否分型分型，确定具体的基因型不分型，仅提示是否有HPV感染多重感染检测多重感染检测能检测多重感染检测不能检测多重感染检测对照情况对照情况有质控对照有阴、阳性对照分批使用分批使用可单人份使用,一次可检测标本量96个或更多可单人份使用，每次需设置阳性、阴性对照并制作标准曲线(至少4个标准品)项目基因芯片（亚能生物）荧光定量PCR是否分型分型，确定具体131亚亚能产品与荧光定量能产品与荧光定量PCRPCR的的比较优势比较优势检测23种HPV基因型能分型能检测HPV多重感染可检测更多来源的标本使用普通PCR仪特异性更高可分批使用，单人份、多人份任选亚能产品与荧光定量PCR的比较优势检测23种HPV基因型132n代表厂家：上海透景n人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒n检测的基因型：19种高危型（16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68,73,83，26,55,61,66），种低危型（6,11,40,42,44,53,54）n认证：国食药监械(准)字2009第3400020号n进口专用仪器(美国Luminex多功能流式点阵分析仪）流式流式荧光光杂交法交法HPV61型为低危型！参照：NEnglJMed2019;348:518-27代表厂家：上海透景流式荧光杂交法HPV61型为低危型！参133项目亚能亚能透景