中药制剂的检查1课件

第四章第四章 中药制剂的检查中药制剂的检查 第一节第一节 中药制剂中的杂质检查中药制剂中的杂质检查 一、杂质及其来源一、杂质及其来源 中中药药制制剂剂评评价价：首首先先是是效效力力及及其其副副作作用用；其其次次是是所所含含杂杂质质的的程程度及其影响。度及其影响。杂质的分类：一般杂质，检查方法均在药典附录中加以规定。杂质的分类：一般杂质，检查方法均在药典附录中加以规定。特殊杂质，在药典中列入个别制剂的检查项下。特殊杂质，在药典中列入个别制剂的检查项下。杂质来源：杂质来源：一是由中药材原料中带入；一是由中药材原料中带入；二是在生产制备过程中引入；二是在生产制备过程中引入；三是贮存过程中，制剂的理化性质改变而产生。三是贮存过程中，制剂的理化性质改变而产生。二、杂质限量的控制二、杂质限量的控制 药典中规定的杂质检查均为限量药典中规定的杂质检查均为限量(或限度或限度)检查检查(Limit Test)Limit Test)，杂质限量是指药物中所含杂质的最大允许量。杂质限量是指药物中所含杂质的最大允许量。限量检查：取一定量与被检杂质相同的纯物质或其它对照品配限量检查：取一定量与被检杂质相同的纯物质或其它对照品配制成标准溶液，与一定量供试药物的溶液，在相同处理条件下，比制成标准溶液，与一定量供试药物的溶液，在相同处理条件下，比较反应结果，从而确定杂质限量是否超过规定。较反应结果，从而确定杂质限量是否超过规定。三、一般杂质的检查方法三、一般杂质的检查方法 (一一)重金属检查法重金属检查法 重重金金属属是是指指在在一一定定条条件件下下的的溶溶液液中中，能能与与硫硫代代乙乙酰酰胺胺或或硫硫化化钠钠作用，生成不溶性硫化物的金属杂质。作用，生成不溶性硫化物的金属杂质。在酸性溶液中检查重金属，以硫代乙酰胺作为显色剂；在酸性溶液中检查重金属，以硫代乙酰胺作为显色剂；在碱性溶液中，则用硫化钠试剂作为显色剂；在碱性溶液中，则用硫化钠试剂作为显色剂；凡凡溶溶于于碱碱不不溶溶于于稀稀酸酸的的药药物物，均均在在碱碱性性溶溶液液中中以以硫硫化化钠钠试试液液作作为显色剂。为显色剂。标准铅溶液的制备标准铅溶液的制备 称取硝酸铅称取硝酸铅0.1600.160g g，置置10001000mlml量瓶中，量瓶中，加硝酸加硝酸5 5mlml与水与水5050mlml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液临用前，精密量取贮备液lOmllOml，置置lOOmllOOml量瓶中，加水稀释至量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得刻度，摇匀，即得(每每1 1mlml相当于相当于lOuglOug的的PbPb)。配制与配制与贮存用的玻璃容器均不得含存用的玻璃容器均不得含铅。第一法第一法 除除另另有有规定定外外，取取2525mlml纳氏氏比比色色管管两两支支，甲甲管管中中加加一一定定量量标准准铅溶溶液液与与醋醋酸酸盐缓冲冲液液(pH3.5)2mlpH3.5)2ml后后，加加水水或或该药品品项下下规定定的的溶溶剂稀稀释成成2525mlml，乙乙管管中中加加入入该药品品项下下规定定的的方方法法制制成成的的供供试液液2525mlml；若若供供试液液带颜色色，可可在在甲甲管管中中滴滴加加少少量量的的稀稀焦焦糖糖溶溶液液或或其其他他无无干干扰的的有有色色溶溶液液，使使之之与与乙乙管管一一致致；再再在在甲甲乙乙两两管管中中分分别加加硫硫代代乙乙酰胺胺试液液各各2 2mlml，摇摇匀匀，放放置置2 2分分钟，同同置置白白纸上上，自自上上向向下下透透视，乙乙管管中中显出的出的颜色与甲管比色与甲管比较，不得更深。，不得更深。供供试品品如如含含高高铁盐影影响响重重金金属属检查时，可可取取该药品品项下下规定定方方法法制制成成的的供供试液液，加加抗抗坏坏血血酸酸0.5-1.00.5-1.0g g，并并在在对照照液液中中加加入入相相同同量量的的抗坏血酸，再照上述方法抗坏血酸，再照上述方法检查。配配制制供供试品品溶溶液液时，如如使使用用的的盐酸酸超超过1.01.0ml(ml(或或与与盐酸酸1.01.0mlml相相当当的的稀稀盐酸酸)，氨氨试液液超超过2 2mlml，或或加加入入其其他他试剂进行行处理理者者，除除另另有有规定定外外，对照照液液中中应取取同同样同同量量的的试剂量量瓷瓷皿皿中中蒸蒸干干后后，加加醋醋酸酸盐缓冲冲液液(pH3.5)2mlpH3.5)2ml与与水水1515mlml，微微热溶溶解解后后，移移置置纳氏氏比比色色管管中中，加加一一定定量量标准准铅溶液，再用水稀溶液，再用水稀释成成2525ml ml 第二法第二法 除除另另有有规规定定外外，取取炽炽灼灼残残渣渣项项下下遗遗留留的的残残渣渣，加加硝硝酸酸0.50.5mlml，蒸蒸干干，至至氧氧化化氮氮蒸蒸气气除除尽尽后后(或或取取供供试试品品一一定定量量，缓缓缓缓炽炽灼灼至至完完全全炭化，放冷，加硫酸炭化，放冷，加硫酸0.50.51.01.0mlml，使恰湿润，用低温加热至硫酸使恰湿润，用低温加热至硫酸除除尽尽后后，加加硝硝酸酸0.50.5mlml，蒸蒸干干，至至氧氧化化氮氮蒸蒸气气除除尽尽后后，放放冷冷，在在500500600600炽炽灼灼使使完完全全灰灰化化)，放放冷冷，加加盐盐酸酸2 2m1m1，置置水水浴浴上上蒸蒸干干后后加加水水1515mlml，滴滴加加氨氨试试液液至至对对酚酚酞酞指指示示液液显显中中性性，再再加加醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液 (pH3.5)2mlpH3.5)2ml，微微热热溶溶解解后后，移移置置纳纳氏氏比比色色管管中中，加加水水稀稀释释成成2525mlml，另另取取配配制制供供试试品品溶溶液液的的试试剂剂，置置瓷瓷皿皿中中蒸蒸干干后后，加加醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液(pH3.5)2mlpH3.5)2ml与与水水1515mlml，微微热热溶溶解解后后，移移置置纳纳氏氏比比色色管管中中，加加标标准准铅铅溶液一定量，再用水稀释成溶液一定量，再用水稀释成2525mlml；照第一法检查即得。照第一法检查即得。第三法第三法 除除另另有有规规定定外外，取取供供试试品品适适量量，加加氢氢氧氧化化钠钠试试液液5 5mlml与与水水2020mlml溶溶解解后后，置置纳纳氏氏比比色色管管中中，加加硫硫化化钠钠试试液液5 5滴滴，摇摇匀匀，与与一一定定量量的的标准铅溶液同样处理后的颜色比较，不得更深。标准铅溶液同样处理后的颜色比较，不得更深。第四法第四法 标准铅斑法见标准铅斑法见“中药制剂分析中药制剂分析”P98-99P98-99。(二二)砷盐检查法砷盐检查法 标准砷溶液的制备标准砷溶液的制备 称取三氧化二砷称取三氧化二砷0.1320.132g g，置置10001000mlml量瓶中，量瓶中，加加2020氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5 5mlml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸酸1010mlml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液临用前，精密量取贮备液1010mlml，置置10001000mlml量瓶中，加稀硫酸量瓶中，加稀硫酸1010mlml，用水稀释至刻度，摇匀，即得用水稀释至刻度，摇匀，即得(每每lmllml相当于相当于1 1ugug的的As)As)。1 1古蔡法古蔡法 (1)(1)原原理理：采采用用锌锌和和酸酸作作用用产产生生的的初初生生态态氢氢与与供供试试品品中中微微量量砷砷盐盐化化合合物物反反应应生生成成挥挥发发性性砷砷化化氢氢，再再与与溴溴化化汞汞或或氧氧化化汞汞试试纸纸作作用用生生成成黄黄色色或或棕棕黄黄色色砷砷斑斑。比比较较供供试试品品与与标标准准砷砷溶溶液液在在同同一一条条件件下下所所显显的的砷斑的颜色深浅，以测得供试品的含砷限度。反应式如下：砷斑的颜色深浅，以测得供试品的含砷限度。反应式如下：As0As03 33-3-+3+3Zn+9HZn+9H+AsH AsH3 3+3Zn+3Zn2 2+3+3H H2 20 0 As0 As03 33 3-+4+4Zn+Zn+llHllH+AsH AsH3 3 +4Zn+4Zn2 2+4+4H H2 20 0产生砷化氢与溴化汞试纸作用产生砷化氢与溴化汞试纸作用 AsHAsH3 3+3HgBr+3HgBr2 2 3HBr+As(3HBr+As(HgBrHgBr)3 3(黄色黄色)2 2As(As(HgBrHgBr)3 3+AsH+AsH3 3 3AsH(3AsH(HgBrHgBr)2 2 (棕色棕色)As(As(HgBrHgBr)3 3+AsH+AsH3 3 3HBr+As 3HBr+As2 2HgHg3 3 (黑色黑色)(2)(2)仪器装置仪器装置 A A为为100100mlml标准磨口锥形瓶，标准磨口锥形瓶，B B为标准磨口塞，为标准磨口塞，C C为为导气管导气管(外径外径8.08.0mmmm，内径内径6.06.0mm)mm)，长约长约180180mmmm，D D为有为有机玻璃旋塞，其上部为圆形平面，中央有一孔径与机玻璃旋塞，其上部为圆形平面，中央有一孔径与C C内内径一致的圆孔，其下部孔径与径一致的圆孔，其下部孔径与C C的外径相适应，将的外径相适应，将C C的的顶端套入顶端套入D D下部孔内，粘合固定，下部孔内，粘合固定，E E为中央具有圆孔为中央具有圆孔(孔径孔径6.06.0mm)mm)的有机玻璃旋塞盖，与的有机玻璃旋塞盖，与D D紧密吻合。紧密吻合。测试时，于测试时，于C C中装入醋酸铅棉花中装入醋酸铅棉花6060mg(mg(装管高度为装管高度为60608080mm)mm)，再于再于D D的顶端平面上放一片溴化汞试纸，的顶端平面上放一片溴化汞试纸，盖上旋塞盖盖上旋塞盖E E并旋紧，即得。并旋紧，即得。(3)(3)标准砷斑的制备标准砷斑的制备 精密量取标准砷溶液精密量取标准砷溶液2 2mlml，置置A A瓶中，加瓶中，加盐酸盐酸5 5mlml与水与水2121mlml，再加碘化钾试液再加碘化钾试液5 5mlml与酸性氯化亚锡试液与酸性氯化亚锡试液5 5滴，滴，在室温放置在室温放置1010分钟后，加锌粒分钟后，加锌粒2 2g g，立即将照上法装妥的导气管立即将照上法装妥的导气管C C密密塞于塞于A A瓶上，并将瓶上，并将A A瓶置瓶置25254040水浴中，反应水浴中，反应4545分钟，取出溴化汞分钟，取出溴化汞纸试，即得。纸试，即得。若供试品需经有机破坏后再行检砷，则应取标准砷溶液代替供若供试品需经有机破坏后再行检砷，则应取标准砷溶液代替供试品，照各药品项下规定的方法同法处理后，依法制备标准砷斑。试品，照各药品项下规定的方法同法处理后，依法制备标准砷斑。（4 4）检查法检查法 取照各药品项下规定方法制成的供试液，置取照各药品项下规定方法制成的供试液，置A A瓶瓶中，照标准砷斑的制备，自中，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液再加碘化钾试液5 5mlml”起，依法操作。起，依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，不得更深。将生成的砷斑与标准砷斑比较，不得更深。（5 5）注意事项）注意事项 中国药典中规定砷斑为中国药典中规定砷斑为2ugAs(即取即取2ml标准标准砷液砷液)。供试品中砷的限度各有不同，可按规定，改变供试品的取供试品中砷的限度各有不同，可按规定，改变供试品的取用量，来与标准砷斑比较。但不宜改变标准砷的量用量，来与标准砷斑比较。但不宜改变标准砷的量(如未指明时，如未指明时，一般常以一般常以2ml标准砷液标准砷液)。碘化钾试液不得超过碘化钾试液不得超过10日，酸性氯化亚锡不得超过日，酸性氯化亚锡不得超过3个月，锌个月，锌粒应无砷，以能通过一号筛的细粒为宜粒应无砷，以能通过一号筛的细粒为宜。药药典典采采用用碱碱破破坏坏法法石石灰灰法法：取取一一定定量量的的供供试试品品，加加入入等等量量的的无无砷砷氢氢氧氧化化钙钙混混匀匀后后，加加水水湿湿润润，烘烘干干，在在小小火火上上小小心心炽炽灼灼至至烟烟雾雾除除尽尽，移移入入高高温温炉炉中中在在500600炽炽灼灼至至灰灰化化，取取出出放放冷冷，加加蒸蒸馏馏水水5ml，再再缓缓缓缓加加入入盐盐酸酸5ml及及浓浓溴溴液液数数滴滴，置置水水浴浴上上加加热热至至溶溶液液中中的的红红色色溴溴驱驱尽尽，滴滴加加氯氯化化亚亚锡锡试试液液数数滴滴，再再全全部部转转入入测测砷砷瓶瓶中中，一一般般不不含含硫硫的的检检品品可可不不加加浓浓溴溴液液，只只需需加加盐盐酸酸5ml即即转转入入测测砷砷瓶瓶中中，依法测定，作空白试验校正。依法测定，作空白试验校正。操作注意点：炽灼温度以操作注意点：炽灼温度以600左右较为合适；一定要灰化完全。左右较为合适；一定要灰化完全。2.2.二乙基二硫代氨基甲酸银法（二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDCAg-DDC法）法）1）原原理理 利利用用砷砷化化氢氢与与Ag-DDC吡吡啶啶溶溶液液作作用用，使使Ag-DDC中中银银还原为红色的胶态银，其反应如下：还原为红色的胶态银，其反应如下：AsH3+6Ag-DDC AsAg33Ag-DDC+3HDDC AsAg33Ag-DDC+3C5H5N+3HDDC Ag(DDC)3+6Ag+3 C5H5N-HDDC 2 2）仪器装置）仪器装置 A A为为100100mlml标准磨口锥形标准磨口锥形瓶，瓶，B B为中空的标准磨口塞，上连导气管为中空的标准磨口塞，上连导气管C C(一端的外径为一端的外径为8 8mmmm，内径为内径为6 6mmmm，另一端长另一端长180180mmmm，外径外径4 4mmmm，内径内径1.61.6mmmm，尖端内径为尖端内径为lmmlmm)。D D为平底玻璃管为平底玻璃管(180(180mmmm，内径内径1010mmmm，于于5.05.0mlml处有一刻度处有一刻度)。测试时，于导气管测试时，于导气管C C中装入醋酸铅棉花中装入醋酸铅棉花6060mg(mg(装管高度约装管高度约8080mm)mm)，并于并于D D管中精密加管中精密加入入Ag-DDC试液试液5ml。标准砷对照液的制备标准砷对照液的制备 精密量取标准砷溶液精密量取标准砷溶液5 5mlml，置置A A瓶中，加瓶中，加盐酸盐酸5 5mlml与水与水2121mlml，再加碘化钾试液再加碘化钾试液5 5mlml与酸性氯化亚锡试液与酸性氯化亚锡试液5 5滴，滴，在室温放置在室温放置1010分钟后，加锌粒分钟后，加锌粒2 2g g，立即将导气管立即将导气管C C与与A A瓶密塞，使生瓶密塞，使生成的砷化氢气体导入成的砷化氢气体导入D D管中，并将管中，并将A A瓶置瓶置25254040水浴中反应水浴中反应4545分钟，分钟，取出取出D D管，添加氯仿至刻度，混匀，即得。管，添加氯仿至刻度，混匀，即得。若若供供试试品品需需经经有有机机破破坏坏后后再再行行检检砷砷，则则应应取取标标准准砷砷溶溶液液代代替替供供试试品品，照照各各药药品品项项下下规规定定的的方方法法同同法法处处理理后后，依依法法制制备备标标准准砷砷对对照照液。液。检检查查法法 取取照照各各药药品品项项下下规规定定方方法法制制成成的的供供试试液液，置置A A瓶瓶中中，照照标标准准砷砷对对照照液液的的制制备备，自自 “再再加加碘碘化化钾钾试试液液5 5ml”ml”起起，依依法法操操作作。将将所所得得溶溶液液与与标标准准砷砷对对照照液液同同置置白白色色背背景景上上，从从D D管管上上方方向向下下观观察察、比比较较，所所得得溶溶液液的的颜颜色色不不得得比比标标准准砷砷对对照照液液更更深深。必必要要时时，可可将将所所得得溶溶液液转转移移至至lcmlcm吸吸收收池池中中，用用适适宜宜的的分分光光光光度度计计或或比比色色计计在在510510nmnm波波长长处处以以二二乙乙基基二二硫硫代代氨氨基基甲甲酸酸银银试试液液作作空空白白，测测定定吸吸收收度度，与与标标准砷对照液按同法测得的吸收度比较，即得。准砷对照液按同法测得的吸收度比较，即得。(三）铁盐检查法三）铁盐检查法 标准铁溶液的制备标准铁溶液的制备 称取硫酸铁铵称取硫酸铁铵0.8630.863g g，置置10001000mlml量瓶中，量瓶中，加水溶解后，加硫酸加水溶解后，加硫酸2.52.5mlml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液临用前，精密量取贮备液1010mlml，置置100100mlml量瓶中，加水稀释至量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得刻度，摇匀，即得(每每1 1mlml相当于相当于1010ugug的的Fe)Fe)。检查法检查法 除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成水溶解使成2525mlml，移置移置5050mlml纳氏比色管中，加稀盐酸纳氏比色管中，加稀盐酸4 4mlml与过硫酸与过硫酸铵铵5050mgmg，用水稀释使成用水稀释使成3535mlml后，加后，加3030硫氰酸铵溶液硫氰酸铵溶液3 3mlml，再加水再加水适量稀释成适量稀释成5050mlml，摇匀；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的摇匀；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液对照溶液(取各药品项下规定量的标准铁溶液，置取各药品项下规定量的标准铁溶液，置5050mlml纳氏比色管纳氏比色管中，加水使成中，加水使成2525mlml，)比较，即得。比较，即得。如供试管与对照管色调不一致时，可分别移至分液漏斗中，各如供试管与对照管色调不一致时，可分别移至分液漏斗中，各加正丁醇加正丁醇2020mlml提取，分层后，将正丁醇层移置提取，分层后，将正丁醇层移置5050mlml纳氏比色管中，纳氏比色管中，再用正丁醇稀释至再用正丁醇稀释至2525mlml，比较，即得。比较，即得。第二节第二节 药典规定中药制剂的检查项目药典规定中药制剂的检查项目 一、干燥失重测定法一、干燥失重测定法 取取供供试试品品，混混合合均均匀匀（若若供供试试品品为为较较大大结结晶晶，应应先先迅迅速速捣捣碎碎成成2 2mmmm以以下下的的小小粒粒）。分分取取约约1 1g g或或各各药药品品项项下下规规定定重重量量，置置与与供供试试品品同同样样条条件件下下干干燥燥至至恒恒重重的的扁扁形形称称瓶瓶中中，精精密密称称定定，除除另另有有规规定定外外，照照各各药药品品项项下下规规定定的的条条件件干干燥燥至至恒恒重重。从从减减失失的的重重量量和和取取样样量量计计算算供试品的干燥失重。供试品的干燥失重。供供试试品品干干燥燥时时，应应平平铺铺在在扁扁形形称称量量瓶瓶中中，厚厚度度不不可可超超过过5 5mmmm，如如为为疏疏松松物物质质，厚厚度度不不可可超超过过1010mmmm，干干燥燥时时应应将将瓶瓶盖盖取取下下，置置于于称称量量瓶瓶旁旁，或或将将瓶瓶盖盖半半开开进进行行干干燥燥；取取出出时时，须须将将瓶瓶盖盖好好。在在每每次次干干燥后应先置干燥器内放冷至室温，然后称定重量。燥后应先置干燥器内放冷至室温，然后称定重量。如如供供试试品品未未达达到到规规定定的的干干燥燥温温度度即即融融化化时时，应应先先将将供供试试品品置置较较低的温度中低的温度中，干燥至大部分水份除去后，再按规定条件下干燥。，干燥至大部分水份除去后，再按规定条件下干燥。当用减压干燥器时，除除另另有有规规定定外外，压压力力应应在在2.672.67kPakPa以以下下；干干燥燥器器中中常常用用的的干干燥燥剂剂为为无无水水氯氯化化钙钙、硅硅胶胶或或五五氧氧化化二二磷磷，减压干燥器中常用的干燥剂为五氧化二磷。常用的干燥剂为五氧化二磷。二、水分测定法二、水分测定法 中国药典一部收载三种方法：烘干法，甲苯法，减压干燥法。中国药典一部收载三种方法：烘干法，甲苯法，减压干燥法。药药典典规规定定，一一般般将将供供试试品品先先破破碎碎成成直直径径不不超超过过3 3mmmm的的颗颗粒粒或或碎碎片片(破破碎碎时时不不得得用用高高速速粉粉碎碎机机)。直直径径和和长长度度在在3 3mmmm以以下下者者不不可可破破碎碎。如使用减压干燥法需先经二号筛。如使用减压干燥法需先经二号筛。1 1烘烘干干法法 本本法法适适用用于于不不含含或或含含少少量量挥挥发发性性成成分分的的药药品品。取取供供试试品品2 25 5g g，平平铺铺于于干干燥燥至至恒恒重重的的扁扁形形称称量量瓶瓶中中，厚厚度度不不超超过过5 5mmmm，疏疏松松样样品品不不超超过过1010mmmm，精精密密称称定定，打打开开瓶瓶盖盖在在100100105105干干燥燥5 5小小时时，将将瓶瓶盖盖盖盖好好，移移置置干干燥燥器器中中，冷冷却却3030分分钟钟，精精密密称称定定重重量量，再再在在上上述述温温度度干干燥燥1 1小小时时，冷冷却却，称称重重，至至连连续续两两次次称称重重的的差差异异不不超超过过5 5mgmg为止。根据减失的重量。计算供试品中含有水分的百分数。为止。根据减失的重量。计算供试品中含有水分的百分数。2 2甲苯法甲苯法 本法适用于含挥发性成分的药材。本法适用于含挥发性成分的药材。仪器装置仪器装置 如图。如图。A A为为500500mLmL的短颈圆底烧瓶，的短颈圆底烧瓶，B B为水分测定管；为水分测定管；C C为直形冷凝管，外管长为直形冷凝管，外管长4040cmcm。使用前，全部仪器应清洁，并置烘箱中烘干。使用前，全部仪器应清洁，并置烘箱中烘干。测定法测定法：取供试品适量取供试品适量(约相当于含水量约相当于含水量1 14 4mLmL)精密称定，置精密称定，置A A瓶中，加甲苯约瓶中，加甲苯约200200mLmL，必必要时加入玻璃珠数粒，将仪器各部分连接，自冷要时加入玻璃珠数粒，将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满凝管顶端加入甲苯，至充满B B管的狭细部分。将管的狭细部分。将A A瓶置电热套中或其它适当方法缓缓加热，待甲苯瓶置电热套中或其它适当方法缓缓加热，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2 2滴。待滴。待水分完全馏出，将冷凝管内部先用甲苯冲洗，再水分完全馏出，将冷凝管内部先用甲苯冲洗，再用饱蘸甲苯的长刷或其他适当方法，将管壁上附用饱蘸甲苯的长刷或其他适当方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏着的甲苯推下，继续蒸馏5 5分钟，放冷至室温，分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水粘附在拆卸装置，如有水粘附在B B管的管壁上，可用蘸管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离。甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离。检读水量，并计算成供试品中含有水分的百分数。检读水量，并计算成供试品中含有水分的百分数。3 3减压干燥法减压干燥法 本法适用于含有挥发性成分的贵重药品。本法适用于含有挥发性成分的贵重药品。先取直径先取直径1212cmcm的培养皿，加入新鲜五氧化二磷的培养皿，加入新鲜五氧化二磷 干燥剂适量，干燥剂适量，使铺成使铺成0.50.51 1cmcm的厚度，放入直径的厚度，放入直径3030cmcm的减压干燥器中。然后取供的减压干燥器中。然后取供试品试品2-42-4g g，混合均匀。分取约混合均匀。分取约0.5-10.5-1g g，置已在与供试品相同条件下置已在与供试品相同条件下干燥并称重的瓶中，精密称定，打开瓶盖，放入上述减压干燥器中，干燥并称重的瓶中，精密称定，打开瓶盖，放入上述减压干燥器中，减压至减压至2.672.67kPakPa以下持续半小时，室温放置以下持续半小时，室温放置2424小时，在减压干燥器小时，在减压干燥器出口连接新鲜无水氯化钙干燥管，打开活塞，待内外压一致，关闭出口连接新鲜无水氯化钙干燥管，打开活塞，待内外压一致，关闭活塞，打开干燥器，盖上瓶盖，取出称量瓶迅速精密称定重量，计活塞，打开干燥器，盖上瓶盖，取出称量瓶迅速精密称定重量，计算供试品中含有水分的百分数。算供试品中含有水分的百分数。三、灰分测定法三、灰分测定法 1.1.总灰分测定法总灰分测定法 测定前先将供试品称取适量粉碎，使其能测定前先将供试品称取适量粉碎，使其能通过通过2 2号筛，将粉末混合均匀后，称取供试品号筛，将粉末混合均匀后，称取供试品2 23 3g(g(如需测定酸不如需测定酸不溶性灰分，可取供试品溶性灰分，可取供试品3 35 5g)g)，置于炽灼至恒重的坩埚中，称定重置于炽灼至恒重的坩埚中，称定重量量(准确至准确至0.010.01g)g)，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至渐升高温度至500500600600，使完全炭化并至恒重，根据残渣重量，使完全炭化并至恒重，根据残渣重量，即可计算供试品中含灰分的百分数。即可计算供试品中含灰分的百分数。如如供供试试品品不不易易灰灰化化，可可将将坩坩埚埚放放冷冷，加加热热水水或或1010硝硝酸酸铵铵溶溶液液2 2mLmL；使使残残渣渣湿湿润润，然然后后置置水水浴浴上上蒸蒸干干，残残渣渣照照前前法法炽炽灼灼至至坩坩埚埚内内容物完全灰化。容物完全灰化。2.2.酸酸不不溶溶性性灰灰分分测测定定法法 取取上上项项所所得得灰灰分分，在在坩坩埚埚中中小小心心加加入入稀稀盐盐酸酸1010mLmL，用用表表面面皿皿覆覆盖盖坩坩埚埚，置置水水浴浴上上加加热热1010分分钟钟，表表面面皿皿用用热热水水5 5mLmL冲冲洗洗，洗洗液液并并入入坩坩埚埚中中，用用无无灰灰滤滤纸纸滤滤过过，坩坩埚埚内内的的残残渣渣用用水水洗洗于于滤滤纸纸上上，并并洗洗涤涤至至洗洗液液不不显显氯氯化化物物反反应应为为止止。滤滤渣渣连连同同滤滤纸纸移移至至同同一一坩坩埚埚中中，干干燥燥，炽炽灼灼至至恒恒重重。根根据据残残渣渣重重量量，计计算算供供试试品中含酸不溶性灰分的百分数。品中含酸不溶性灰分的百分数。四、炽灼残渣检查法四、炽灼残渣检查法 取取供供试试品品1.0 1.0 2.02.0g g或或各各药药品品项项下下规规定定的的重重量量，置置已已炽炽灼灼至至恒恒重重的的坩坩埚埚中中，精精密密称称定定，缓缓缓缓炽炽灼灼至至完完全全炭炭化化，放放冷冷，除除另另有有规规定定外外，加加硫硫酸酸0.50.51 1mLmL使使湿湿润润，低低温温加加热热至至硫硫酸酸蒸蒸气气除除尽尽后后，在在700700800800使使完完全全灰灰化化，移移置置干干燥燥器器内内，放放冷冷，精精密密称称定定后后，再再在在700 700 800 800炽灼至恒重，即可。炽灼至恒重，即可。如如需需将将残残渣渣留留作作重重金金属属检检查查，则则炽炽灼灼温温度度必必须须控控制制在在500500600600。五、乙醇量测定法五、乙醇量测定法 本法系用气相色谱法测定各种制剂中在本法系用气相色谱法测定各种制剂中在2020时含有乙醇的容量时含有乙醇的容量百分数。除另有规定外，按下列方法测定。百分数。除另有规定外，按下列方法测定。色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用直径为用直径为0.250.250.180.18mmmm的二乙烯的二乙烯苯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为载体，柱温为乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为载体，柱温为120 120 150 150；另精密量取无水乙醇；另精密量取无水乙醇4 4、5 5、6 6mlml，分别精密加入正丙醇分别精密加入正丙醇(内标物内标物)5)5mlml，加水稀释成加水稀释成100100mlml，混匀混匀(必要时可进一步稀释必要时可进一步稀释)，照气相色，照气相色谱法测定，应符合下列要求：谱法测定，应符合下列要求：(1)(1)用正丙醇计算的理论板数应大于用正丙醇计算的理论板数应大于700700；(2)(2)乙醇和正丙醇两峰的分离度应大于乙醇和正丙醇两峰的分离度应大于2 2；(3)(3)上述上述3 3份溶液各注样份溶液各注样5 5次，所得次，所得1515个校正因子的变异系数不个校正因子的变异系数不得大于得大于2.02.0。标准溶液的制备标准溶液的制备 精密量取恒温至精密量取恒温至2020的无水乙醇和正丙醇各的无水乙醇和正丙醇各5 5mlml，加水稀释成加水稀释成lOOmllOOml，混匀，即得。混匀，即得。供试溶液的制备供试溶液的制备 精密量取恒温至精密量取恒温至2020的供试品适量的供试品适量(相当于相当于乙醇约乙醇约5 5m1)m1)和正丙醇和正丙醇5 5mlml，加水稀释成加水稀释成lOOmllOOml，混匀，即得。混匀，即得。上述两溶液必要时可进一步稀释。上述两溶液必要时可进一步稀释。测定法测定法 取标准溶液和供试溶液适量，分别连续注样取标准溶液和供试溶液适量，分别连续注样3 3次，并次，并计算出校正因子和供试品的乙醇含量，取计算出校正因子和供试品的乙醇含量，取3 3次计算的平均值作为结次计算的平均值作为结果。果。附注附注 (1)(1)在不含内标物质的供试溶液的色谱图中，与内标物质峰相在不含内标物质的供试溶液的色谱图中，与内标物质峰相应的位置处应不出现杂质峰，应的位置处应不出现杂质峰，(2)(2)标准溶液和供试溶液各连续标准溶液和供试溶液各连续3 3次注样所得各次校正因子和乙次注样所得各次校正因子和乙醇含量与其相应的平均值的相对偏差，均不得大于醇含量与其相应的平均值的相对偏差，均不得大于1.51.5，否则应，否则应重新测定。重新测定。(3)(3)选用其他载体时，系统适用性试验必须符合本法规定。选用其他载体时，系统适用性试验必须符合本法规定。六、相对密度测定法六、相对密度测定法 相对密度相对密度系指在共同特定的条件下，某物质的密度与水的密度系指在共同特定的条件下，某物质的密度与水的密度之比。除另有规定外，温度为之比。除另有规定外，温度为2020。液体药品的相对密度，一般用比重瓶进行测定，测定易挥发的液体药品的相对密度，一般用比重瓶进行测定，测定易挥发的液体的相对密度时，可用韦氏比重秤进行测定。液体的相对密度时，可用韦氏比重秤进行测定。比重瓶法比重瓶法 (1)(1)取洁净、干燥并精密称定重量的取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶，装满供试品比重瓶，装满供试品(温度应低于温度应低于2020或各药品项下或各药品项下规定的温度规定的温度)后，装上温度计后，装上温度计(瓶中应无气泡瓶中应无气泡)，置，置2020(或各药品项下规定的温度或各药品项下规定的温度)的水浴中放置的水浴中放置10-2010-20分钟，使内容物的温度达到分钟，使内容物的温度达到2020(或各药品项下规定或各药品项下规定的温度的温度)，用滤纸除去溢出侧管的液体，立即盖上罩。，用滤纸除去溢出侧管的液体，立即盖上罩。然后将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸将比重瓶的外然后将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸将比重瓶的外面擦干，精密称定，减去比重瓶的重量，求得供试品面擦干，精密称定，减去比重瓶的重量，求得供试品的重量后，将供试品倾去，洗净比的重量后，将供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过重瓶，装满新沸过的冷水，再照上法测得同一温度时水的重量，按下式的冷水，再照上法测得同一温度时水的重量，按下式计算，即得。计算，即得。供供试品品的相的相对密度供密度供试品重量品重量/水重量水重量 (2)(2)取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶，取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶，装满供试品装满供试品(温度应低于温度应低于2020或各药品项下规定的或各药品项下规定的温度温度)后，置后，置2020(或各药品项下规定的温度或各药品项下规定的温度)的水的水浴中，放置浴中，放置10102020分钟，插入中心有毛细孔的瓶塞，分钟，插入中心有毛细孔的瓶塞，使过多的液体从塞孔溢出，并用滤纸将瓶塞顶端擦使过多的液体从塞孔溢出，并用滤纸将瓶塞顶端擦干，照上述干，照上述(1)(1)法，自法，自“然后将比重瓶自水浴中取出然后将比重瓶自水浴中取出”起测定，即得。起测定，即得。韦氏比重秤法韦氏比重秤法 取取2020时相对密时相对密度为度为1 1的韦氏比重秤，用新沸过的冷水的韦氏比重秤，用新沸过的冷水将所附玻璃圆筒装至八分满，置将所附玻璃圆筒装至八分满，置2020(或各药品项下规定的温度或各药品项下规定的温度)的水浴中，的水浴中，搅动玻璃圆筒内的水，调节温度至搅动玻璃圆筒内的水，调节温度至2020(或各药品项下规定的温度或各药品项下规定的温度)，将，将悬于秤端的玻璃锤浸入圆筒内的水中，悬于秤端的玻璃锤浸入圆筒内的水中，秤臂右端悬挂游码于秤臂右端悬挂游码于1.00001.0000处，调节处，调节秤臂左端平衡用的螺旋使平衡，然后秤臂左端平衡用的螺旋使平衡，然后将玻璃圆筒内的水倾去，拭干，装入将玻璃圆筒内的水倾去，拭干，装入供试液至相同的高度，并用同法调节温度后，再把拭干的玻璃锤浸供试液至相同的高度，并用同法调节温度后，再把拭干的玻璃锤浸入供试液中，调节秤臂上游码的数量与位置使平衡，读取数值，即入供试液中，调节秤臂上游码的数量与位置使平衡，读取数值，即得供试品的相对密度。得供试品的相对密度。如如该该比比重重秤秤系系在在44时时相相对对密密度度为为1 1，则则用用水水校校准准时时游游码码应应悬悬挂挂于于0.99820.9982处，并应将在处，并应将在2020测得的供试品相对密度除以测得的供试品相对密度除以0.99820.9982。第三节 黄曲霉毒素B1检查法 黄黄曲曲霉霉毒毒素素的的测测定定方方法法，目目前前采采用用薄薄层层色色谱谱法法、微微柱柱色色谱谱法法和和薄薄层色谱结合荧光分光光度法，还采用高压液相色谱法测定。层色谱结合荧光分光光度法，还采用高压液相色谱法测定。一般采用薄层色谱法和微柱色谱法。一般采用薄层色谱法和微柱色谱法。微微柱柱法法主主要要用用作作大大批批样样品品的的筛筛选选用用。若若微微柱柱法法测测定定结结果果发发现现毒毒素素可能超过允许含量，紧接着应该做薄层色谱怯的确证实验。可能超过允许含量，紧接着应该做薄层色谱怯的确证实验。一、微柱法一、微柱法 本本法法简简便便，快快速速，灵灵敏敏度度为为1010g/kgg/kg。主主要要做做中中药药制制剂剂中中黄黄曲曲霉毒素筛选用，测得结果为黄曲霉毒素的总量。霉毒素筛选用，测得结果为黄曲霉毒素的总量。1 1原原理理 将将样样品品提提取取液液通通过过氧氧化化铝铝-硅硅镁镁型型吸吸附附剂剂填填充充的的微微柱柱，样样品品中中的的杂杂质质被被氧氧化化铝铝吸吸附附，黄黄曲曲霉霉毒毒素素则则被被硅硅镁镁型型吸吸附附剂剂吸吸附附。在紫外分析灯下观察荧光环与标准比较定量。在紫外分析灯下观察荧光环与标准比较定量。2.2.玻玻璃璃微微柱柱管管制制法法 玻玻璃璃微微柱柱管管长长1212cmcm，内内径径0.40.4cmcm玻玻璃璃管管。在在微微柱柱管管下下端端塞塞入入棉棉花花一一小小团团，使使松松紧紧适适宜宜，作作为为支支持持物物。依依次次从从管管的的上上口口加加入入无无水水硫硫酸酸钠钠0.50.5cmcm，硅硅镁镁型型吸吸附附剂剂0.50.5cmcm，无无水水硫硫酸酸钠钠0.50.5cmcm，中中性性氧氧化化铝铝2.52.5cmcm，无无水水硫硫酸酸钠钠1 1cmcm厚厚，再再铺铺一一层层棉棉花花。装装管管时时，管管要要垂垂直直放放置置在在层层析析架架上上，每每装装一一种种试试剂剂要要轻轻轻轻敲敲击击使使之之紧紧密密。微微柱柱管管应应在在临临用用前前装装填填或或保保存存于于干干燥燥器器中中供供用用，以以免免减减低低活活性性，活化后可干燥保存活化后可干燥保存3 3天。天。3 3黄黄曲曲霉霉毒毒素素标标准准液液 准准确确吸吸取取标标准准贮贮备备液液适适量量于于棕棕色色具具塞塞量量筒筒中中，用用氯氯仿仿稀稀释释至至1.01.0mlml含含毒毒素素B B1 10.20.2g g。准准确确吸吸取取上上述述溶溶液液适适量量，用用氯氯仿仿分分别别稀稀释释至至1.01.0mlml含含黄黄曲曲霉霉毒毒素素B B1 10.0050.005、0.010.01、0.0250.025、0.050.05g g等四种浓度的标准液。等四种浓度的标准液。4.4.操作步骤操作步骤 (1)(1)样样品品处处理理：称称取取磨磨细细并并过过2020目目筛筛的的样样品品2020g g，置置于于250250mLmL具具塞塞锥锥形形瓶瓶中中，加加水水4 4mLmL润润湿湿样样品品后后，加加入入氯氯仿仿4040mLmL(为为加加水水量量的的1010倍倍)，振振摇摇3030分分钟钟，加加入入1010g g无无水水硫硫酸酸钠钠脱脱水水，过过滤滤入入5050mLmL具具塞塞锥锥形形瓶瓶中中，滤滤液液如如混混浊浊(含含水水)，可可加加入入少少许许无无水水硫硫酸酸钠钠振振摇摇匀匀，放放置置1010分分钟，此为样品提取液。钟，此为样品提取液。(2)(2)微微柱柱色色谱谱：取取上上述述制制备备的的微微柱柱6 6支支，垂垂直直插插入入微微柱柱架架上上。一一支支加加入入样样品品提提取取液液1.01.0mLmL(相相当当于于样样品品0.50.5g)g)，4 4支支分分别别加加入入含含黄黄曲曲霉霉毒毒素素B B1 10.0050.005、0.010.01、0.0250.025、0.050.05g g的的标标准准溶溶液液各各1.01.0mLmL(相相当当于于样样品品管管的的浓浓度度依依次次为为1010、2020、5050和和100100g gkg)kg)，一一支支微微柱柱加加入入氯氯仿仿1.01.0mLmL作作为为空空白白管管。当当各各管管液液面面流流至至近近上上层层棉棉花花层层时时，立立即即加加入入1.01.0mLmL展展开开剂剂，加加试试剂剂及及展展开开剂剂时时，微微柱柱管管均均要要竖竖直直，待待展展开开剂剂流流完后即可观察结果。完后即可观察结果。(3)(3)观观察察结结果果与与结结论论：将将层层析析后后的的微微柱柱置置于于365365nmnm波波长长的的紫紫外外灯灯下下，观观察察样样品品柱柱的的硅硅镁镁型型吸吸附附剂剂层层是是否否有有荧荧光光，并并与与空空白白柱柱比比较较定定性，与标准各柱比较蓝色荧光强度即测得黄曲霉毒素含量。性，与标准各柱比较蓝色荧光强度即测得黄曲霉毒素含量。二、双向展开法二、双向展开法 1.1.原原理理 样样品品中中的的黄黄曲曲霉霉毒毒素素B B1 1被被提提取取，浓浓缩缩后后在在薄薄层层板板上上点点样样。先先用用无无水水乙乙醚醚做做横横向向展展开开，将将干干扰扰的的杂杂质质推推到到样样品品点点的的一一侧侧而而黄黄曲曲霉霉毒毒素素B B1 1留留在在点点样样处处。然然后后再再用用丙丙酮酮氯氯仿仿混混合合液液做做纵纵向向展展开开，黄黄曲曲霉毒素霉毒素B B1 1所在位置的杂质底色大大减少，因而有利于观察。所在位置的杂质底色大大减少，因而有利于观察。2.2.样样品品处处理理：称称取取经经粉粉碎碎并并过过2020目目筛筛的的样样品品2020g g于于250250mLmL具具塞塞锥锥形形瓶瓶中中，加加正正己己烷烷或或石石油油醚醚3030mLmL和和甲甲醇醇水水溶溶液液(55(5545)10045)100mLmL，在在瓶瓶塞塞上上涂涂一一层层水水，盖盖严严防防漏漏。振振荡荡3030分分钟钟，静静止止片片刻刻，以以脱脱脂脂棉棉过过滤滤于于分分液液漏漏斗斗中中，待待下下层层甲甲醇醇水水溶溶液液澄澄清清后后放放出出甲甲醇醇水水溶溶液液于于另另一一具具塞塞锥锥形形瓶瓶内内。吸吸取取此此甲甲醇醇水水溶溶液液2020mLmL(相相当当于于样样品品4 4g)g)于于另另一一125125mLmL分分液液漏漏斗斗中中，加加氯氯仿仿2020mLmL，振振摇摇2 2分分钟钟，静静止止分分层层后后，使使氯氯仿仿层层通通过过颈颈部部铺铺有有少少量量脱脱脂脂棉棉及及上上面面盛盛无无水水硫硫酸酸钠钠1010g g的的小小漏漏斗斗，过过滤滤于于5050mLmL蒸蒸发发皿皿中中，无无水水硫硫酸酸钠钠先先用用氯氯仿仿润润湿湿。分分液液漏漏斗斗中中再再加加氯氯仿仿5 5mLmL重重复复振振摇摇提提取取，氯氯仿仿层层一一并并滤滤于于蒸蒸发发皿皿中中。将将蒸蒸发发皿皿放放在在通通风风处处，于于6565水水浴浴上上通通风风挥挥干干，置置冰冰盒盒上上充充分分冷冷却却后后，准准确确加加入入苯苯乙乙腈腈混混合合溶溶剂剂1.01.0mLmL。用用带带橡橡皮皮头头滴滴管管的的管管尖尖将将残残渣渣和和溶溶剂剂充充分分混混合合，再再用用此此滴滴管管吸吸取取上上清清液液转转于于2 2mLmL具具塞塞小小瓶瓶中中。若若溶溶液液不不够够澄澄清清，则离心或放置使澄清，上清液供薄层点样用。则离心或放置使澄清，上清液供薄层点样用。3.3.定性试验定性试验：点样点样，取薄层板，取薄层板3 3块，在距底边块，在距底边3 3cmcm的起始线的起始线上，滴上，滴加黄曲霉毒素加黄曲霉毒素B B1 1标准液和样品处理液。在三块板的距左边缘标准液和样品处理液。在三块板的距左边缘0.80.81 1cmcm处，各滴加黄曲霉毒素处，各滴加黄曲霉毒素B B1 1标准溶液标准溶液(0.04(0.04g/g/mLmL)10L)10L，在距右边缘在距右边缘2.8-32.8-3cmcm处，各滴加样品液处，各滴加样品液2020LL；然后在第二块板的然后在第二块板的样品液点上，滴加黄曲霉毒素样品液点上，滴加黄曲霉毒素B B1 1标准液标准液(0.2(0.2g/g/mLmL)10L)10L。在第在第三块板的样品液点上，滴加黄曲霉毒素三块板的样品液点上，滴加黄曲霉毒素B B1 1标准液标准液(0.04(0.04g/g/mLmL)10L)10L。展展开开，将将点点好好样样的的三三块块板板的的左左边边浸浸入入展展开开槽槽内内的的无无水水乙乙醚醚中中横横向向展展开开，至至乙乙醚醚达达到到顶顶端端后后继继续续展展开开1 1分分钟钟，取取出出挥挥干干；再再用用丙丙酮氯仿混合液纵向展开酮氯仿混合液纵向展开至至1010cmcm以上。以上。观观察察结结果果与与评评定定，在在紫紫外外线线分分析析灯灯下下观观察察第第一一、二二板板，若若第第二二板板的的第第二二点点在在黄黄曲曲霉霉毒毒素素B B1 1标标准准点点的的相相应应处处出出现现最最低低检检出出量量，而而第第一一板板的的样样品品点点在在与与第第二二板板的的相相同同位位置置上上未未出出现现荧荧光光点点，则则样样品品中中黄曲霉毒素黄曲霉毒素B B1 1含量在含量在5 5ggkgkg以下。以下。如如果果观观察察到到第第一一板板在在与与第第二二板板的的相相同同位位置置上上出出现现荧荧光光点点，则则应应将将第第一一板板与与第第三三板板比比较较。看看第第三三板板上上第第二二点点与与第第一一板板上上第第二二点点的的相相同同位位置置上上的的荧荧光光点点是是否否与与黄黄曲曲霉霉毒毒素素B B1 1标标准准点点重重叠叠，再再进进行行确确证证试试验。验。4.4.确证试验：确证试验：另取两块薄层板，于第四、第五两板距左边缘另取两块薄层板，于第四、第五两板距左边缘0.80.81 1 cmcm处各加黄曲霉毒素处各加黄曲霉毒素B B1 1标准溶液标准溶液(0.04(0.04ggmLmL)10L)10L，三氟三氟乙酸乙酸1 1滴。距左边缘滴。距左边缘2.8-32.8-3cmcm处，第四板滴加样品液处，第四板滴加样品液2020LL，三氟乙三氟乙酸酸1 1滴，第五板滴加样品液滴，第五板滴加样品液2020LL、黄曲霉毒素黄曲霉毒素B B1 1标准溶液标准溶液(0.04(0.04g/g/mLmL)10L)10L，三氟乙酸三氟乙酸1 1滴。再用双向展开法展开后，观滴。再用双向展开法展开后，观察样品液点是否产生与黄曲霉毒素察样品液点是否产生与黄曲霉毒素B B1 1标准点重叠的衍生物。观察时，标准点重叠的衍生物。观察时，可将第一板作为样品液的衍生物空白板。可将第一板作为样品液的衍生物空白板。5.5.稀释定量：稀释定量：如果样品溶液黄曲霉毒素含量高，按单向展开如果样品溶液黄曲霉毒素含量高，按单向展开法稀释定量操作。如果黄曲霉毒素法稀释定量操作。如果黄曲霉毒素B B1 1含量低，稀释倍数小，在定量含量低，稀释倍数小，在定量的纵向板上仍有杂质干扰，影响结果的判断时，可将板上需要判断的纵向板上仍有杂质干扰，影响结果的判断时，可将板上需要判断的样品液点再分别做双向展开观察，以确定含量。的样品液点再分别做双向展开观察，以确定含量。第四节第四节 中药制剂的特殊杂质检查中药制剂的特殊杂质检查 特特殊殊杂杂质质的的检检查查原原则则一一般般是是利利用用药药品品和和杂杂质质的的理理化化性性质质及及生生理理作作用用的的差差异异，采采用用物物理理的的、化化学学的的、药药理理的的、微微生生物物的的方方法法来来检检查查杂质。杂质。一、土大黄甙的检查一、土大黄甙的检查 通通常常认认为为含含有有土土大大黄黄甙甙的的大大黄黄质质量量较较次次，19901990年年版版中中国国药药典典大大黄黄项项下下也也规规定定检检查查土土大大黄黄甙甙。土土大大黄黄甙甙在在紫紫外外灯灯下下观观察察呈呈亮亮蓝蓝紫紫色色荧光，此法简单但应注意假阳性的发生。荧光，此法简单但应注意假阳性的发生。检检查查 取取本本品品粉粉末末0.20.2g g，加加甲甲醇醇2 2mLmL，浸浸泡泡1010分分钟钟，放放冷冷，取取上上清清液液1010LL，点点于于滤滤纸纸上上，以以4545乙乙醇醇展展开开，取取出出，晾晾干干，放放置置1010分钟，置紫外灯分钟，置紫外灯(365(365nmnm)下检视，不得显持久的亮紫色荧光。下检视，不得显持久的亮紫色荧光。二、阿胶膏剂挥发性碱性物质的检查二、阿胶膏剂挥发性碱性物质的检查 药药典典规规定定100100g g样样品品中中挥挥发发性性碱碱性性物物质质的的含含量量以以氮氮(N)N)计计，不不得得超过超过100100mgmg。挥挥发发性性碱碱性性物物质质的的测测定定方方法法 精精密密称称取取本本品品5 5g g，置置100100mLmL量量瓶瓶中中，加加水水使使溶溶解解并并稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，精精密密量量取取5 5mLmL置置凯凯氏氏蒸蒸馏馏瓶瓶中中，立立刻刻加加1 1氧氧化化镁镁混混悬悬溶溶液液5 5mLmL。迅迅速速密密塞塞，通通入入水水蒸蒸气气进进行行蒸蒸馏馏，以以2 2硼硼酸酸溶溶液液为为接接受受液液，加加甲甲基基红红-溴溴甲甲酚酚绿绿混混合合指指示示液液5 5滴滴，从从滴滴出出第第一一滴滴凝凝结结水水珠珠时时起起，蒸蒸馏馏7 7分分钟钟停停止止，馏馏出出液液用用硫硫酸酸液液(0.005(0.005molmolL)L)滴滴定定至至溶溶液液由由蓝蓝绿绿色色变变为为灰灰紫紫色色，并并将将滴滴定定的的结结果果用空白试验用空白试验(空白和供试品所得馏液的容积应基本相同空白和供试品所得馏液的容积应基本相同)校正即得。校正即得。三、乌头酯型生物碱的检查三、乌头酯型生物碱的检查 乌乌头头中中含含有有乌乌头头碱碱、美美沙沙乌乌头头碱碱等等，这这些些双双酯酯型型生生物物碱碱有有麻麻辣辣味味，亲亲酯酯性性强强、毒毒性性大大，它它们们是是乌乌头头有有大大毒毒的的主主要要有有效效成成分分。药药典典制川乌项下规定了酯型生物碱的检查。制川乌项下规定了酯型生物碱的检查。原原理理：双双酯酯型型生生物物碱碱在在碱碱性性条条件件下下与与盐盐酸酸羟羟胺胺反反应应，生生成成异异羟羟肟肟酸酸，再再与与三三价价铁铁离离子子反反应应，生生成成红红色色的的异异羟羟肟肟酸酸铁铁，在在520520nmnm波长处有特征吸收，从而算出浓度而控制制川乌的毒性成分含量。波长处有特征吸收，从而算出浓度而控制制川乌的毒性成分含量。对对照照品品溶溶液液的的制制备备 精精密密称称取取乌乌头头碱碱对对照照品品2020mgmg，置置1010mLmL量量瓶瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度。中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度。标标准准曲曲线线的的制制备备 精精密密量量取取对对照照品品溶溶液液0 0、0.250.25、0.500.50、1.01.0、1.51.5、2.02.0、2.52.5mLmL，分分别别置置2525mLmL量量瓶瓶中中，均均加加无无水水乙乙醇醇使使成成2.52.5mLmL，各各精精密密加加入入碱碱性性盐盐酸酸羟羟胺胺试试液液1.51.5mLmL，摇摇匀匀，在在60606565水水浴浴中中保保温温1010分分钟钟，放放冷冷，加加高高氯氯酸酸铁铁试试液液1313mLmL，摇摇匀匀，放放置置5 5分分钟钟，