吩噻嗪类药物课件

第九章第九章杂环类杂环类药物的分析药物的分析药物分析教研室药物分析教研室Analytical of Heterocyclic drugs第九章杂环类药物的分析药物分析教研室Analytical1吡啶类喹啉类托烷类吩噻嗪类苯并二氮杂卓类杂杂杂杂环环环环类类类类Contents吡啶类喹啉类托烷类吩噻嗪类苯并二氮杂卓类杂环类Content第一节 吡啶类药物的分析123456吡 啶(Pyridine)异烟肼(Isoniazid)尼可刹米(Nikethamide)硝苯地平(Nifedipine)第一节 吡啶类药物的分析123456吡 啶一、主要性质与鉴别试验第一节 吡啶类药物的分析1.吡啶环的特性吡啶环开环适用于适用于、位无取代，位无取代，或或位被羧酸衍生物取代的异烟肼、位被羧酸衍生物取代的异烟肼、尼克刹米尼克刹米A.戊烯二醛反应（kning反应）尼克刹米戊醛二烯一、主要性质与鉴别试验第一节 吡啶类药物的分析1.吡啶环的特第一节 吡啶类药物的分析在无水的条件下，吡啶及其衍生物与在无水的条件下，吡啶及其衍生物与3,4-二硝基氯苯混合共二硝基氯苯混合共热或加热至熔融，冷却后，加醇制氢氧化钾溶液将残渣溶解，热或加热至熔融，冷却后，加醇制氢氧化钾溶液将残渣溶解，溶液呈紫红色。溶液呈紫红色。B.二硝基氯苯反应（Vongerichten反应）异烟肼氧化成羧基；尼克刹米水解成羧基第一节 吡啶类药物的分析在无水的条件下，吡啶及其衍生物与3,2.弱碱性：吡啶环吡啶环N N原子为碱性原子，吡啶环原子为碱性原子，吡啶环pKpKb b为为8.88.8（水中），可用于（水中），可用于鉴别和非水滴定。鉴别和非水滴定。尼克刹米：除了吡啶环上的N原子外，吡啶环位被酰氨基取代，遇碱水解释放二乙胺。Chp2005Chp2005鉴别：取本品鉴别：取本品1010滴，加氢氧化钠试液滴，加氢氧化钠试液3ml 3ml，加热，即，加热，即发生二乙胺的臭气，发生二乙胺的臭气，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。第一节 吡啶类药物的分析2.弱碱性：第一节 吡啶类药物的分析3.还原性第一节 吡啶类药物的分析异烟肼吡啶环异烟肼吡啶环位被酰肼所取代，有较强的位被酰肼所取代，有较强的还原性还原性，可被不同，可被不同的氧化剂的氧化剂氧化氧化，也可与某些含有羰基的化合物发生，也可与某些含有羰基的化合物发生缩合反应缩合反应。异烟肼与硝酸银银镜反应Chp2005：取本品约10mg，置试管中，加水2ml 溶解后，加氨制硝酸银试液1ml，即发生 气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。A.还原反应3.还原性第一节 吡啶类药物的分析异烟肼吡啶环位被酰肼所取B.缩合反应第一节 吡啶类药物的分析香草醛异烟腙异烟腙(黄色结晶黄色结晶)取本品约取本品约0.1g0.1g，加水，加水5ml 5ml 溶解后，加溶解后，加1010香草醛的乙醇溶香草醛的乙醇溶液液 1ml1ml，摇匀，微热，放冷，即析出黄色结晶；滤过，用摇匀，微热，放冷，即析出黄色结晶；滤过，用稀乙醇重结晶，在稀乙醇重结晶，在105 105 干燥后，依法测定（附录干燥后，依法测定（附录 C C），），熔点为熔点为228 228 231 231，熔融时同时分解。，熔融时同时分解。B.缩合反应第一节 吡啶类药物的分析香草醛异烟腙取本品约0第一节 吡啶类药物的分析异烟肼的其它鉴别反应与亚硒酸作用，可将其还原为红色硒的沉淀与亚硒酸作用，可将其还原为红色硒的沉淀与与1,2-1,2-萘醌萘醌-4-4-磺酸在碱性介质中，可缩合呈红色。磺酸在碱性介质中，可缩合呈红色。显红色第一节 吡啶类药物的分析异烟肼的其它鉴别反应与亚硒酸作用，第一节 吡啶类药物的分析4.形成沉淀(重金属盐类或苦味酸重金属盐类或苦味酸)尼克刹米的鉴别：取本品2滴，加水1ml，摇匀，加硫酸铜试液2滴与硫氰酸铵试液3 滴，即生 成草绿色沉淀。异烟肼、尼克刹米可与氯化汞形成白色沉淀。5.分解产物异烟肼、尼克刹米等与无水碳酸钠或氢氧化钙共热，可发生异烟肼、尼克刹米等与无水碳酸钠或氢氧化钙共热，可发生脱羧降解，并有吡啶臭味逸出。脱羧降解，并有吡啶臭味逸出。第一节 吡啶类药物的分析4.形成沉淀(重金属盐类或苦味酸)尼第一节 吡啶类药物的分析UV和IR第一节 吡啶类药物的分析UV和IR二、二、Detection of specific impurities一、异烟肼中游离肼的检查异烟肼不稳定，游离肼即可能在原料中引入，又可能在贮藏异烟肼不稳定，游离肼即可能在原料中引入，又可能在贮藏过程中降解诱变剂和致癌物质过程中降解诱变剂和致癌物质1、TLC(BP、Ch.P)肼对二甲基苯甲醛腙(显色)2、比浊法(JP)专属性差肼水杨醛乙醇液混浊二、Detection of specific impuri二、二、Detection of specific impurities二、尼克刹米中有关物质的检查检查方法：取本品，加甲醇制成每检查方法：取本品，加甲醇制成每1ml1ml中含中含40mg40mg的溶液，作的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加甲醇分别稀释成每为供试品溶液；精密量取适量，加甲醇分别稀释成每1ml 1ml 中中含含0.4mg 0.4mg 和和40g40g的溶液，作为对照溶液的溶液，作为对照溶液(1)(1)和和(2)(2)。照薄层。照薄层色谱法（附录色谱法（附录 B B）试验，吸取上述三种溶液各）试验，吸取上述三种溶液各10l 10l，分，分别点于同一硅胶别点于同一硅胶GF254GF254薄层板上，以氯仿丙醇薄层板上，以氯仿丙醇(75:25)(75:25)为展为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯开剂，展开后，晾干，置紫外光灯(254nm)(254nm)下检视。供试品下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液溶液如显杂质斑点，与对照溶液(2)(2)的主斑点比较，不得更的主斑点比较，不得更深深 ；如有；如有1 1点超过时，应不深于对照溶液点超过时，应不深于对照溶液(1)(1)的主斑点。的主斑点。TLC(无杂质对照品高低浓度对比法)二、Detection of specific impuri二、二、Detection of specific impurities三、二氢吡啶类有关物质的检查HPLC法测定，避光操作硝苯地平二、Detection of specific impuri第二节第二节 喹啉类药物的分析喹啉类药物的分析硫酸奎宁(Quinine sulfate)硫酸奎尼丁(quinidine sulfate)盐酸环丙沙星(ciprofloxacin hydrochloride)第二节 喹啉类药物的分析硫酸奎宁硫酸奎尼丁(quinidin第二节第二节 喹啉类药物的分析喹啉类药物的分析一、主要性质1.碱性 环丙沙星：盐酸；环丙沙星：盐酸；奎宁、奎尼丁：二元酸硫酸（喹核碱含脂环氮，碱性强）奎宁、奎尼丁：二元酸硫酸（喹核碱含脂环氮，碱性强）奎宁奎宁 (左旋体左旋体)：pKpKb1b1为为5.07 pK5.07 pKb2b2为为9.79.7，饱和水溶液，饱和水溶液pHpH为为8.88.8，易溶于氯仿无水乙醇，易溶于氯仿无水乙醇(2:1)(2:1)奎尼丁奎尼丁 (右旋体右旋体)：pKpKb1b1为为5.45.4pKpKb2b2为为1010，易溶于沸水或乙醇，易溶于沸水或乙醇喹啉环上的喹啉环上的N N原子具有碱性，与强酸成盐原子具有碱性，与强酸成盐2.旋光性硫酸奎宁硫酸奎宁 (左旋体左旋体)硫酸奎尼丁硫酸奎尼丁(右旋体右旋体)3.荧光特性硫酸奎宁和硫酸奎宁丁在稀硫酸中显蓝色荧光，盐酸环丙沙星硫酸奎宁和硫酸奎宁丁在稀硫酸中显蓝色荧光，盐酸环丙沙星无荧光。无荧光。第二节 喹啉类药物的分析一、主要性质1.碱性 环丙沙星：盐酸二、二、Identification一、绿奎宁反应（Thalleioquin）奎宁和奎尼丁鉴别二醌基亚胺的胺盐u 取其水溶液加溴试液取其水溶液加溴试液2 23 3滴滴和氨试液和氨试液1ml1ml，即显，即显翠绿色翠绿色；u 加酸至加酸至中性中性显蓝色；显蓝色；u 酸性酸性则呈则呈紫红色紫红色；u 翠绿色可转溶于醇、氯仿中翠绿色可转溶于醇、氯仿中不溶于醚。不溶于醚。二、Identification一、绿奎宁反应（Thalle二、二、Identification二、光谱特征 UV盐酸环丙沙星：取本品，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml中含8g的溶液，照分光光度法(附录 A)测定，在 277nm与315nm的波长处有最大吸收。FLD硫酸奎宁：取本品约20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即显蓝色荧光。三、无机酸盐 硫酸奎宁、硫酸奎尼丁硫酸根氯化钡白色沉淀 盐酸环丙沙星盐酸根硝酸银白色沉淀二、Identification二、光谱特征 UV盐酸环丙三、三、Detection of specific impurities一、硫酸奎宁1.酸度酸性杂质 取本品取本品0.2g0.2g，加水，加水20ml20ml溶解后，测定溶解后，测定pHpH值应为值应为5.75.76.6 6.6。2.氯仿乙醇不溶物 取本品取本品2g2g，加氯仿无水乙醇，加氯仿无水乙醇 (2:1)(2:1)的混合液的混合液15ml15ml，在，在5050加热加热10min10min后，用称定重量的垂熔坩埚滤过，滤渣用上述混合液后，用称定重量的垂熔坩埚滤过，滤渣用上述混合液分分5 5 次洗涤，每次次洗涤，每次10ml 10ml，在，在105 105 干燥至恒重，遗留残渣不得干燥至恒重，遗留残渣不得过过2mg2mg。3.其他金鸡纳碱(TLC、HPLC)三、Detection of specific impuri三、三、Detection of specific impurities1.酸度 取本品，加水制成每取本品，加水制成每1ml1ml中含中含25mg25mg的溶液，测定的溶液，测定pHpH值应为值应为3.03.04.54.5。2.溶液的澄清度和颜色 取本品取本品0.1g0.1g，加水，加水10ml10ml溶解后，溶液应澄清；如显色，与溶解后，溶液应澄清；如显色，与黄色或黄绿色黄色或黄绿色4 4号标准比色液号标准比色液(附录附录 A)A)比较，不得更深。比较，不得更深。3.有关物质（HPLC）二、盐酸环丙沙星中特殊杂质检查三、Detection of specific impuri第三节第三节 托烷类药物托烷类药物莨菪烷(Tropane)莨菪醇(Tropine)硫酸阿托品(atropine)氢溴酸东莨菪碱 (scopolamine hydrochloride)*第三节 托烷类药物莨菪烷(Tropane)莨菪醇(Trop第三节第三节 托烷类药物托烷类药物一、主要性质1.水解性（酯水解生成醇和酸）（酯水解生成醇和酸）阿托品 莨菪醇 莨菪酸2.碱性阿托品和东莨菪碱结构中，五元脂环含有叔胺氮原子，阿托品和东莨菪碱结构中，五元脂环含有叔胺氮原子，较强的碱性，易于酸成盐，如阿托品较强的碱性，易于酸成盐，如阿托品pKpKb1b1为为4.354.353.旋光性第三节 托烷类药物一、主要性质1.水解性（酯水解生成醇和酸一、托烷生物碱一般鉴别试验(Vitaili反应)取供试品约取供试品约10mg10mg，加发烟硝酸，加发烟硝酸5 5滴，置水浴上蒸干，得黄色的残渣，滴，置水浴上蒸干，得黄色的残渣，放冷，加乙醇放冷，加乙醇2 23 3滴，加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。滴，加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。二、二、Identification一、托烷生物碱一般鉴别试验(Vitaili反应)取供试品约1二、氧化反应三、沉淀反应生物碱与生物碱沉淀剂生成沉淀阿托品氯化汞醇试液阿托品氯化汞醇试液黄色沉淀黄色沉淀东莨菪碱氯化汞醇东莨菪碱氯化汞醇白色复盐沉淀白色复盐沉淀四、硫酸盐和溴化物反应二、二、Identification二、氧化反应三、沉淀反应生物碱与生物碱沉淀剂生成沉淀阿托品三、三、Detection of specific impurities一、氢溴酸东莨菪碱洋金花粗粉洋金花粗粉乙醇乙醇/渗漉渗漉渗漉液渗漉液减压蒸馏减压蒸馏浸膏浸膏H H2 2SOSO4 4/提取提取酸性提取液酸性提取液NaNa2 2COCO3 3,CHCl,CHCl3 3/提取提取总生物碱总生物碱NaNa2 2COCO3 3,CHCl,CHCl3 3/分离分离东莨菪碱东莨菪碱HBr/HBr/成盐成盐氢溴酸东莨菪碱（粗品）氢溴酸东莨菪碱（粗品）75%C75%C2 2H H5 5OH/OH/精制精制成品成品酸度易氧化物阿扑阿托品、颠茄碱 其它生物碱阿扑阿托品、其他含有不饱和双键的有机物质二、硫酸阿托品三、Detection of specific impuri第四节第四节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物为苯并噻嗪的衍生物，分子结构中均含有硫氮杂蒽母核，基本结构如下：R:-HR:-H、-Cl-Cl、-CF-CF3 3、-COCH-COCH3 3、-SCH-SCH2 2CHCH3 3R:R:具有具有2 23 3碳链的二碳链的二甲或二乙胺基，或含氮甲或二乙胺基，或含氮杂环如哌嗪和哌啶的衍杂环如哌嗪和哌啶的衍生物生物第四节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物为苯并噻嗪的衍生物，分子结一、主要性质与鉴别第四节第四节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物1.UV 硫氮杂蒽母核为硫氮杂蒽母核为共轭三环共轭三环的的系统，紫外区三个吸收系统，紫外区三个吸收峰值，约峰值，约205nm205nm、254nm254nm、300nm300nm，最强多在，最强多在254nm254nm附近，根据附近，根据2 2位、位、1010位取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。位取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。当母核的二价硫被当母核的二价硫被氧化为砜或亚砜，则呈现四个峰值。氧化为砜或亚砜，则呈现四个峰值。药物溶剂C(g/ml)max(nm)A盐酸氯丙嗪盐酸(91000)52540.46915306盐酸异丙嗪盐酸(0.1mol/L)6249883937奋乃静无水乙醇72580.65盐酸氟奋乃静盐酸(91000)10255553593盐酸三氟拉嗪盐酸(120)10256630盐酸硫利达嗪乙醇8264与315一、主要性质与鉴别第四节 吩噻嗪类药物1.UV 2.IR第四节第四节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物3.氧化呈色 硫氮杂蒽母核中的二价硫易氧化，母核易被不硫氮杂蒽母核中的二价硫易氧化，母核易被不同的氧化剂氧化成亚砜、砜等不同的产物，随取代基的不同，同的氧化剂氧化成亚砜、砜等不同的产物，随取代基的不同，呈现不同的颜色。呈现不同的颜色。药物药物硫酸硫酸硝酸硝酸过氧化氢过氧化氢盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪显红色，渐变为淡黄色显红色，渐变为淡黄色盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪显樱桃红色，放显樱桃红色，放置后颜色渐变深置后颜色渐变深生成红色沉淀，加热即溶解，溶生成红色沉淀，加热即溶解，溶液由红色转变为橙黄色液由红色转变为橙黄色奋乃静奋乃静显深红色，放置显深红色，放置后红色渐褪去后红色渐褪去盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静显淡红色，温热显淡红色，温热后变成红褐色后变成红褐色盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪生成微带红色的白色沉淀；放置生成微带红色的白色沉淀；放置后，红色变深，加热后变黄色后，红色变深，加热后变黄色盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪显蓝色显蓝色2.IR第四节 吩噻嗪类药物3.氧化呈色 硫氮杂蒽第四节第四节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物4.金属离子络合显色未氧化的硫可与金属未氧化的硫可与金属钯离子钯离子形成配位化合物，而氧化产物亚砜、形成配位化合物，而氧化产物亚砜、砜则不能，可用于鉴别和含有测定，具有专属性。砜则不能，可用于鉴别和含有测定，具有专属性。取本品约50mg，加甲醇2ml溶解后，加0.1%氯化钯溶液3ml，既有沉淀生成，并显红色，再加过量的氯化钯溶液，颜色变深。第四节 吩噻嗪类药物4.金属离子络合显色未氧化的硫可与金1-二甲氨基-2-氯丙烷第四节第四节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物5.分解产物特性（如氟奋乃静等含氟有机药物）红色黄色二、有关物质鉴别1.盐酸异丙嗪1-二甲氨基-2-氯丙烷第四节 吩噻嗪类药物5.分解产物第四节第四节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物1-二甲氨基-2-氯丙烷2-二甲氨基-1-丙醇异丙美沙嗪 此异构体在丙酮中溶解度大，精制也不易除去。异丙嗪不太稳定，易氧化，贮藏过程可能分解。第四节 吩噻嗪类药物1-二甲氨基-2-氯丙烷2-二甲氨基-第四节第四节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物方法方法TLC法法以自身高低浓度对照法控制其限量。u 硅胶硅胶GF254GF254u 展开剂：环已烷展开剂：环已烷-丙酮丙酮-二乙胺二乙胺u 在紫外灯下检视。在紫外灯下检视。u 注射剂的检查中：采用二个限量的对照溶液注射剂的检查中：采用二个限量的对照溶液u 规定：供试品溶液如显杂质斑点，不得多于规定：供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3 3个；其杂质个；其杂质斑点与对照溶液斑点与对照溶液(2)(2)的主斑点比较，不得更深；如有一个超过，的主斑点比较，不得更深；如有一个超过，应不深于对照溶液应不深于对照溶液(1)(1)的主斑点。的主斑点。第四节 吩噻嗪类药物方法TLC法第五节第五节 苯并二氮杂卓类药物苯并二氮杂卓类药物NNClH3CO1234567892地西泮(diazepam)七元亚胺内酰胺环奥普唑仑奥沙西泮(Oxazepam)氯氮卓(Chlordiazepoxide)NNNCH3OC lH第五节 苯并二氮杂卓类药物NNClH3CO12345678第五节第五节 苯并二氮杂卓类药物苯并二氮杂卓类药物一、鉴别试验 (一一)化学鉴别试验化学鉴别试验 1 1.沉淀反应沉淀反应 氯氮卓氯氮卓 橙红色橙红色沉淀沉淀 阿普唑仑阿普唑仑 KBiI4 盐酸氟西泮盐酸氟西泮 也生成也生成橙红色橙红色沉淀沉淀 氯硝西泮氯硝西泮 放置后，沉淀颜色变深，放置后，沉淀颜色变深，因此可以相互区别。因此可以相互区别。阿普唑仑阿普唑仑+遇硅钨酸遇硅钨酸 白色沉淀，药典中也用于鉴别。白色沉淀，药典中也用于鉴别。第五节 苯并二氮杂卓类药物一、鉴别试验 (一)化学鉴第五节第五节 苯并二氮杂卓类药物苯并二氮杂卓类药物2.水解后呈芳伯胺反应水解后呈芳伯胺反应 氯氮卓和奥沙西泮的盐酸溶液氯氮卓和奥沙西泮的盐酸溶液(12)(12)，缓缓加热煮沸，放冷，缓缓加热煮沸，放冷，加亚硝酸钠和碱性加亚硝酸钠和碱性-萘酚试液，生成橙红色沉淀，后者放置后萘酚试液，生成橙红色沉淀，后者放置后颜色变暗。颜色变暗。3.分解产物的反应分解产物的反应 有机氯化合物，氧瓶燃烧法破坏，生成有机氯化合物，氧瓶燃烧法破坏，生成HClHCl，以，以5%5%氢氧化钠溶氢氧化钠溶液吸收，硝酸酸化，显氯化物反应。液吸收，硝酸酸化，显氯化物反应。第五节 苯并二氮杂卓类药物2.水解后呈芳伯胺反应3.分解产第五节第五节 苯并二氮杂卓类药物苯并二氮杂卓类药物4.硫酸荧光反应：硫酸荧光反应：苯并二氮杂卓类药物溶于硫酸苯并二氮杂卓类药物溶于硫酸/稀硫酸在紫外光稀硫酸在紫外光(365nm)(365nm)下显下显不同的颜色。不同的颜色。药物硫酸稀硫酸地西泮黄绿色黄色氯氮卓黄色紫色艾司唑仑亮绿色天蓝色硝西泮淡蓝色蓝绿色第五节 苯并二氮杂卓类药物4.硫酸荧光反应：药物硫酸稀硫(二二)UV第五节第五节 苯并二氮杂卓类药物苯并二氮杂卓类药物药物溶剂C(g/ml)max(nm)A地西泮0.5%0.5%硫酸甲醇溶硫酸甲醇溶液液5 5242242约约0.510.51282282约约0.230.23366366氯氮卓盐酸盐酸 (91000)(91000)7 7245245、3083080.650.65阿普唑仑盐酸盐酸 (91000)(91000)1212264264盐酸氟西泮硫酸甲醇硫酸甲醇(136)(136)101023922392、28422842比值比值1.952.501.952.5036223622氯硝西泮0.5%0.5%硫酸甲醇溶硫酸甲醇溶液液101023922392，30723072奥沙西泮乙醇乙醇1010229229，3152 3152(较弱较弱)(二)UV第五节 苯并二氮杂卓类药物药物溶剂C(g第五节第五节 苯并二氮杂卓类药物苯并二氮杂卓类药物(三三)TLC硅胶硅胶G G薄层板，苯丙酮薄层板，苯丙酮(3:2)(3:2)为展开剂，稀硫酸喷雾，为展开剂，稀硫酸喷雾，105105干干燥燥30min30min，紫外灯下检视荧光斑点，紫外灯下检视荧光斑点药物Rf值斑点颜色*单一点样混合点样自然光254nm365nm地西泮0.800.78无色无色黄色黄色(m)黄色黄色(m)氯氮卓0.340.34无色无色蓝紫色蓝紫色(s)蓝紫色蓝紫色(w)艾司唑仑0.220.20无色无色灰紫色灰紫色(m)蓝紫色蓝紫色(m)硝西泮0.720.72黄色黄色紫色紫色(w)紫色紫色(w)奥沙西泮0.490.52黄色黄色亮灰蓝色亮灰蓝色(s)亮灰蓝色亮灰蓝色(s)*s,m,w*s,m,w分别表示荧光的强、中、弱分别表示荧光的强、中、弱第五节 苯并二氮杂卓类药物(三)TLC硅胶G薄层板，二、有关物质检查第五节第五节 苯并二氮杂卓类药物苯并二氮杂卓类药物 TLC HPLC GC二、有关物质检查第五节 苯并二氮杂卓类药物 TLC第六节第六节 含量测定含量测定v 非水溶液滴定法v 氧化还原滴定法v 酸性染料比色法v 紫外分光光度法v 气相色谱法v 高效液相色谱法v 液质联用法第六节 含量测定 非水溶液滴定法第六节第六节 含量测定含量测定一、非水溶液滴定法当当HAHA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HAHA的的酸性，使反应顺利地完成。酸性，使反应顺利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游离碱类盐游离碱类盐被置换出的弱酸被置换出的弱酸第六节 含量测定一、非水溶液滴定法当HA酸性较强时，反应不第六节第六节 含量测定含量测定供供试试品品+冰冰醋醋酸酸10ml30ml若供试品为氢卤酸盐再若供试品为氢卤酸盐再加加5%5%醋酸汞的冰醋酸液醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml结结果果HClO4滴定滴定空白试验空白试验校正校正指示剂碱性溶液碱性溶液pKpKb b1010，冰醋酸中滴，冰醋酸中滴定突跃不明显，需加入醋酐，定突跃不明显，需加入醋酐，使碱性增强，突跃更明显使碱性增强，突跃更明显第六节 含量测定供试品+冰醋酸10ml30ml若供试品为第六节第六节 含量测定含量测定问题讨论1.1.适用范围适用范围 主要用于主要用于K Kb b1010-8-8的有机碱盐的含量测定。的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱的杂环类药物，只要选择合对碱性较弱的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，可使可使pKpKb b为为8 81313的弱碱性药物采用本法滴的弱碱性药物采用本法滴定。定。K Kb b为为1010-8-81010-10-10时，宜选冰醋酸作为时，宜选冰醋酸作为溶剂；溶剂；K Kb b为为1010-10-101010-12-12时，宜选冰醋酸与醋时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；酐的混合溶液；K Kb b1010-12-12时，应用醋酐作为溶剂。时，应用醋酐作为溶剂。冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突跃显著增大。滴定突跃显著增大。咖啡因(pKb=14.2)第六节 含量测定问题讨论1.适用范围 咖啡因(pKb=14第六节第六节 含量测定含量测定 2.酸根的影响酸根的影响高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸消除消除HXHX干扰的方法：干扰的方法：加加Hg(Ac)Hg(Ac)2 2 量不足终点不明显，结果偏低。量不足终点不明显，结果偏低。2 2BHX +Hg(Ac)BHX +Hg(Ac)2 2 2BHAc +HgX 2BHAc +HgX2 2 过量过量(1(13 3倍倍)不影响测定结果不影响测定结果3.滴定剂的稳定性滴定剂的稳定性4.终点指示方法终点指示方法常用电位法和指示剂法常用电位法和指示剂法第六节 含量测定 2.酸根的影响高氯酸氢溴酸硫酸盐酸应用实例游离弱碱性药物：地西泮、尼克刹米或氯氮卓，基于氮原子的弱碱性可以结晶紫为指示剂，非水溶液直接滴定，终点颜色绿色蓝绿色蓝色不等。氢卤酸盐类药物：加入过量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成难电离的卤化汞，再用高氯酸滴定，可用结晶紫、橙黄作为指示剂，或用电位法指示终点。硫酸盐类药物：硫酸为二元酸，但在非水介质中只显示一元酸解离为HSO4-第六节第六节 含量测定含量测定应用实例第六节 含量测定第六节第六节 含量测定含量测定 硝酸盐类：滴定反应完全，硝酸破坏指示剂，使用电位滴定法指示终点。磷酸盐类：冰醋酸中酸性极弱，直接滴定。A.硫酸阿托品测定(BHBH+)2 2SOSO4 42-2-+HClO+HClO4 4 (BH (BH+)ClO)ClO4 4-+(BH(BH+)HSO)HSO4 4-一元强碱直接滴定冰醋酸、醋酐混合溶剂结晶紫第六节 含量测定 硝酸盐类：滴定反应完全，硝酸破坏指示剂第六节第六节 含量测定含量测定B.硫酸奎宁测定3H+H+第六节 含量测定B.硫酸奎宁测定3H+H+第六节第六节 含量测定含量测定二、氧化还原滴定法1.铈量法 吩噻嗪类药物自身颜色的变化吩噻嗪类药物自身颜色的变化+Free radical 红色自由基红色自由基Bivalent cation 二价阳离子，无色二价阳离子，无色 邻二氮菲指示剂邻二氮菲指示剂(邻二氮菲亚铁盐溶液邻二氮菲亚铁盐溶液)(还原型还原型)红色红色 (氧化型氧化型)浅蓝色浅蓝色 电位法、永停法电位法、永停法第六节 含量测定二、氧化还原滴定法1.铈量法 吩噻嗪类药物第六节第六节 含量测定含量测定硝苯地平2.溴酸钾法粉红色消失第六节 含量测定硝苯地平2.溴酸钾法粉红色消失第六节第六节 含量测定含量测定三、酸性染料比色法UV 第六节 含量测定三、酸性染料比色法UV 第六节第六节 含量测定含量测定应用示例氢溴酸东莨菪碱片的含量测定精密量取对照品溶液和供试品溶液各精密量取对照品溶液和供试品溶液各2ml2ml，分别置预先精密，分别置预先精密加入加入三氯甲烷三氯甲烷10ml10ml的分液漏斗中，各加的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溴甲酚绿溶液溶液4ml4ml，振摇提取后，静置使分层；分取三氯甲烷液，照紫外振摇提取后，静置使分层；分取三氯甲烷液，照紫外-可见可见分光光度法，在分光光度法，在420nm420nm波长处分别测定吸光度，计算，即得。波长处分别测定吸光度，计算，即得。第六节 含量测定应用示例氢溴酸东莨菪碱片的含量测定精密量取第六节第六节 含量测定含量测定影响因素u 水性最佳pH值：使得使得BHBH+和和InIn-最多最多u 酸性染料及其浓度：定量结合，产物溶解性好；定量结合，产物溶解性好；可稍过量可稍过量u 有机溶剂的选择：提取效率高，氯仿最理想提取效率高，氯仿最理想u 水分的影响：影响结果，脱水剂或滤纸除去水分影响结果，脱水剂或滤纸除去水分u 酸性染料里面的有色杂质第六节 含量测定影响因素 水性最佳pH值：使得BH+和In四、UV第六节第六节 含量测定含量测定1.直接紫外测定奥沙西泮原料的测定奥沙西泮原料的测定229229nmnm采用标准对照法测定。采用标准对照法测定。盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪片片的测定的测定249249nmnm测定测定A A。盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪注射液注射液的测定的测定299299nmnm测定测定A A 2.萃取后紫外测定碱化，有机溶剂萃取游离型碱，使其与制剂辅料分离，再用分碱化，有机溶剂萃取游离型碱，使其与制剂辅料分离，再用分光光度法测定光光度法测定3.萃取-双波长分光光度法碱化，有机溶剂萃取，在碱化，有机溶剂萃取，在254nm254nm、277nm277nm波长处测定吸收，用波长处测定吸收，用吸收度之差计算含量，以消除抗氧剂的干扰。吸收度之差计算含量，以消除抗氧剂的干扰。四、UV第六节 含量测定1.直接紫外测定奥沙西泮原料的测定4.二阶导数分光光度法第六节第六节 含量测定含量测定5.钯离子比色法吩噻嗪类药物Pd2+pH 2.0红色配合物500nm通过空白试验对照法，可选择性地通过空白试验对照法，可选择性地消除吩噻嗪类药物中氧化物的干扰消除吩噻嗪类药物中氧化物的干扰，准确测定未被氧化的吩噻嗪药物，准确测定未被氧化的吩噻嗪药物的含量。的含量。4.二阶导数分光光度法第六节 含量测定5.钯离子比色法吩噻五、GC第六节第六节 含量测定含量测定分离效能好、灵敏度高、选择性好、用量少、分析速度快有机碱或其盐类均可直接有机碱或其盐类均可直接GCGC分析，但盐解离的酸对色分析，但盐解离的酸对色谱柱和检测器会损害，因此一般将生物碱盐的水溶液谱柱和检测器会损害，因此一般将生物碱盐的水溶液先碱化，用有机溶剂提取游离碱后再分析。先碱化，用有机溶剂提取游离碱后再分析。六、HPLC固定相：固定相：十八烷基硅烷键合硅胶（十八烷基硅烷键合硅胶（ODSODS）流动相：流动相：水甲醇或水乙腈系统，极性较强水甲醇或水乙腈系统，极性较强极性较强的组分在分离时先流出柱子，极性较弱的组分极性较强的组分在分离时先流出柱子，极性较弱的组分后流出柱子，适合于共存组分极性差异较大样品的分析。杂后流出柱子，适合于共存组分极性差异较大样品的分析。杂环类药物分析一般加入环类药物分析一般加入扫尾剂扫尾剂二乙胺或三乙胺。二乙胺或三乙胺。五、GC第六节 含量测定分离效能好、灵敏度高、选择性好、用第六节第六节 含量测定含量测定Ion-Pair HPLC测定杂环类药物中吡啶类、喹啉类等药物时，主要采用烷基测定杂环类药物中吡啶类、喹啉类等药物时，主要采用烷基磺酸盐（如戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠）或其他盐类。磺酸盐（如戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠）或其他盐类。影响条件：流动相一般呈酸性，以利于生物碱的离解；离子对试剂的非极性部分越大，形成的离子对分配系数越大，保留时间越长（十二烷基磺酸钠庚烷磺酸钠戊烷磺酸钠）。第六节 含量测定Ion-Pair HPLC测定杂环类药物中第六节第六节 含量测定含量测定七、LC-MS/MS三重四极杆(QQQ)第六节 含量测定七、LC-MS/MS三重四极杆(QQQ)Thank You!58