疟疾血检技术培训课件

全球基金疟疾项目全球基金疟疾项目镜检技术培训（二）镜检技术培训（二）户县疾病预防控制中心户县疾病预防控制中心2012年年3月月28日日全球基金疟疾项目镜检技术培训（二）户县疾病预防控制中心疟原虫检验技术疟原虫检验技术v采集血样v血片制作v血片染色v疟原虫镜检疟原虫检验技术采集血样采集血样采集血样采血部位：采血部位：耳垂耳垂或无名指，或无名指，取血方法：通常在耳垂取血，先取血方法：通常在耳垂取血，先用用75%75%酒精棉球消毒取血部位，酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，指紧捏耳垂上方或无名指指尖，右手持消毒针迅速刺入皮肤，右手持消毒针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅。然后用右手不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻挤压出血。厚血膜血中指轻轻挤压出血。厚血膜血量约一粒米大小量约一粒米大小,薄血膜血量为薄血膜血量为厚血膜的一半或厚血膜的一半或1/31/3。采集血样采血部位：耳垂或无名指，厚血膜：用推片的一角，取血厚血膜：用推片的一角，取血一小滴（约一小滴（约44.5微升），微升），置于平置的载玻片上，由置于平置的载玻片上，由里向外一个方向旋转，涂里向外一个方向旋转，涂成直径成直径0.81厘米大小圆形厘米大小圆形厚血膜。厚血膜。薄血膜：以推片一端的中部取薄血膜：以推片一端的中部取血一小滴，使血滴与载玻血一小滴，使血滴与载玻片接触，血液沿推片边缘片接触，血液沿推片边缘向两侧展开，将推片与载向两侧展开，将推片与载玻片保持玻片保持300-450，均匀而，均匀而迅速适当地用力向前推成迅速适当地用力向前推成舌形薄血膜。舌形薄血膜。血片制作（一）血片制作（一）厚血膜厚血膜薄血膜薄血膜厚血膜：用推片的一角，取血一小滴（约44.5微升），置于平血片制作（二）血片制作（二）标准的疟疾厚薄血膜片：标准的疟疾厚薄血膜片：v把载玻片分成六等份，把厚血膜涂在从右到左的第三格中把载玻片分成六等份，把厚血膜涂在从右到左的第三格中央，薄血膜涂在第四格前缘至第六格中部，第一、二格备央，薄血膜涂在第四格前缘至第六格中部，第一、二格备贴标签编号用。厚、薄血膜间用蜡笔划线分开贴标签编号用。厚、薄血膜间用蜡笔划线分开v厚血膜血量不宜过多或过少厚血膜血量不宜过多或过少v薄薄血膜平整血膜平整,无皱折和空泡无皱折和空泡.显微镜下红细胞单层排列显微镜下红细胞单层排列血片制作（二）标准的疟疾厚薄血膜片：血片制作（三）血片制作（三）不同血片涂布法：不同血片涂布法：v标准血片标准血片v门诊发热病人血片门诊发热病人血片v居民普查血片居民普查血片血片制作（三）不同血片涂布法：血片染色（一）血片染色（一）染色方法染色方法:v吉氏染色法吉氏染色法v瑞氏染色法瑞氏染色法 WHO推荐使用吉氏染色法推荐使用吉氏染色法血片染色（一）染色方法:血片染色（二）血片染色（二）吉氏原液的配制：吉氏原液的配制：吉氏染粉吉氏染粉(Azure B type)g 甘油甘油(纯纯)50ml 甲醇甲醇(纯纯)50mlv把吉氏粉置于研钵中，加少量甘油充分研磨把吉氏粉置于研钵中，加少量甘油充分研磨,然后边加然后边加边磨，直至边磨，直至50ml甘油完全加入，倒入棕色瓶中。然后在甘油完全加入，倒入棕色瓶中。然后在 研钵中加入少许甲醇清洗研钵，洗液倒入棕色瓶中，再研钵中加入少许甲醇清洗研钵，洗液倒入棕色瓶中，再放入甲醇清洗，反复数次，直至甲醇用完。盖好瓶盖，放入甲醇清洗，反复数次，直至甲醇用完。盖好瓶盖，充分摇匀，置于充分摇匀，置于65温箱中温箱中24小时，或室温阴暗处小时，或室温阴暗处1-2周后周后过滤，过滤，备用。备用。v整个染色液配制时间不能少于整个染色液配制时间不能少于5个小时个小时v时间越长染色效果越好。时间越长染色效果越好。血片染色（二）吉氏原液的配制：吉氏染粉(Azure B 血片染色（三）血片染色（三）吉氏染液的配制：吉氏染液的配制：v把吉氏原液用把吉氏原液用PH7.00.2缓冲液稀释，比例缓冲液稀释，比例约为约为1:1520，稀释后方可用于厚薄血片，稀释后方可用于厚薄血片染色。染色。v吸取原液时，不要晃动瓶子吸取原液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物泛以免沉淀物泛起影响染色效果起影响染色效果.血片染色（三）吉氏染液的配制：血片染色（四）血片染色（四）v血膜固定：血膜固定：血膜充分晾干后，用甲醇固定薄血膜。厚血膜上滴加蒸馏水进行溶血，到血膜呈灰白色时，将水倒去，晾干后再用甲醇固定。注意：薄血膜固定时，甲醇不可触碰未溶血的厚血膜。厚血膜溶血时，蒸馏水不可触碰薄血膜。血片染色（四）血膜固定：血膜充分晾干后，用甲醇固定薄血膜。厚血片染色（五）血片染色（五）v血片染色：血片染色：1.吉氏染色法：把吉氏染液滴加于已固定的厚、薄血膜上，室温染色30分钟，用缓冲液冲洗干净。血片晾干后镜检。2.快速吉氏染色法：取吉氏原液1ml，加缓冲液5ml，混匀后，滴加于厚、薄血膜上染色5分钟，用缓冲液冲洗，晾干后镜检。血片染色（五）血片染色：血片染色（六）血片染色（六）3.成批血片染色：将已固定的血片插入染色缸，加入吉氏染液浸没血片，对厚、薄血膜同时染色30分钟。注意：如果吉氏染液是从市场上购置的成品试剂，请严格按照说明书操作。血片染色（六）3.成批血片染色：将已固定的血片插入染色缸，加血片染色（七）血片染色（七）血片染色结果：血片染色结果：v染色质量好的血片：显微镜下核呈红色，胞浆呈蓝色，薄血膜平整，红细胞单层排列。v如果血片偏红,说明染液偏酸性v如果血片偏蓝,说明染液偏碱性 吉氏染色血片外观吉氏染色血片外观血片染色（七）血片染色结果：吉氏染色血片外观血片染色（八）血片染色（八）v血片制作与染色注意事项：血片制作与染色注意事项：、载玻片必须清洁无油污；、固定薄血膜时，甲醇不要触碰到厚血膜；、厚血膜在染色之前先用清水滴加在上面进行溶血，以防厚血膜染色后颜色发黑，影响镜检；、血片充分干燥后方可染色，防止冲洗染液时厚血膜脱落。5、未染色血膜的放置时间夏天不宜超过48小时，冬天不宜超过72小时，否则厚血膜会自然固定，影响镜检。血片染色（八）血片制作与染色注意事项：疟原虫镜检（一）厚血膜 薄血膜 优点点血量多，面血量多，面积小，原小，原虫虫较为集中。集中。原虫原虫检出率高出率高血量少，面血量少，面积大，干燥快大，干燥快红细胞完整，原虫形胞完整，原虫形态极少极少变形。用于形。用于观察察原虫形原虫形态与与鉴别虫种。虫种。缺点缺点原虫在干燥原虫在干燥过程中程中皱缩，红细胞消失，原胞消失，原虫虫变形形较大，大，原虫原虫鉴定困定困难血量比厚血膜少血量比厚血膜少许多，但面多，但面积是厚血膜的是厚血膜的8-10倍。倍。检查费时，原虫，原虫检出率出率较低低用途用途用于用于疟疾病人疾病人检查虫种、虫期虫种、虫期鉴定及初学者教定及初学者教学学标本本疟原虫厚、薄血膜镜检优缺点疟原虫厚、薄血膜镜检优缺点疟原虫镜检（一）血量多，面积小，原虫较为集中。原虫检出率高显微镜下厚血膜读片顺序疟原虫镜检（二）v读片顺序读片顺序：显微镜镜下按由上而下、之字形顺序读片显微镜下厚血膜读片顺序疟原虫镜检（二）疟原虫镜检（三）镜检疟原虫结果判断：镜检疟原虫结果判断：v阴性血片：检查全部厚血膜视野未查见疟原虫；最少检查100个厚血膜视野未查见疟原虫（临床病人）。v阳性血片：检出各期疟原虫（环状体、裂殖体、配子体）。v混合感染：在一个血膜上有2种以上疟原虫感染称为混合感染，较常见的是间日疟原虫与恶性疟原虫混合。v镜检判断P.v+P.f混合感染：必须是看到P.v各期原虫和P.f的配子体。疟原虫镜检（三）镜检疟原虫结果判断：间日疟和恶性疟的鉴定要点疟原虫镜检（四）间日疟和恶性疟的鉴定要点疟原虫镜检（四）疟原虫镜检（五）v疟原虫形态特征：间日疟（P.vivax）鉴定要点1.红细胞通常涨大红细胞通常涨大 2.薛氏点明显薛氏点明显 3.成熟环状体粗大成熟环状体粗大4.滋养体胞浆有阿滋养体胞浆有阿米巴样伪足米巴样伪足5.血片中可见各期血片中可见各期的原虫形态的原虫形态6.成熟裂殖体约含成熟裂殖体约含12-24个裂殖子个裂殖子 疟原虫镜检（五）疟原虫形态特征：间日疟（P.vivax）疟原虫镜检（六）v疟原虫形态特征：恶性疟（P.falciparum）鉴定要点：1.红细胞不涨大红细胞不涨大2.小滋养体（环状体）小滋养体（环状体）纤细纤细,常有多重感染，常有多重感染，环状体环状体内可有内可有2个核个核 3.环状体可贴在红细胞环状体可贴在红细胞边缘边缘 4.血片中没有其他发育血片中没有其他发育期的大滋养体期的大滋养体 5.配子体呈新月形或腊配子体呈新月形或腊肠形肠形6.成熟裂殖体约含成熟裂殖体约含16-32个裂殖子个裂殖子7.可出现茂氏点可出现茂氏点疟原虫镜检（六）疟原虫形态特征：恶性疟（P.falcipar镜检示教镜检示教v以下血片采自现症病例以下血片采自现症病例疟原虫镜检（七）镜检示教以下血片采自现症病例疟原虫镜检（七）疟疾血检技术培训课件疟疾血检技术培训课件间日疟环状体间日疟环状体间日疟环状体2.Intermittent fever;arrived from India 2 months ago.间日疟滋养体间日疟滋养体2.Intermittent fever;arrived3.History of round the world safari including S.America,Asia and Africa.General malaise.恶性疟雄配子体恶性疟雄配子体3.History of round the world 4.Unspecified overseas travel.Presented with temperature 38.4C 三日疟裂殖体三日疟裂殖体4.Unspecified overseas travel5.Male recently returned to Australia after backpacking through Asia.History of flu like symptoms.白细胞白细胞5.Male recently returned to A6.New Australian previously from Malaysia.Intermittent temperatures and headaches.白细胞白细胞6.New Australian previously7.Aches and pains,with fever.?Glandular Fever,?malaria.间日疟裂殖体间日疟裂殖体7.Aches and pains,with fever恶性疟环状体恶性疟环状体恶性疟环状体18.Recent trip to Southern India-headaches and vaguely unwell.间日疟裂殖体间日疟裂殖体18.Recent trip to Southern In19.Patient has been holidaying in the Dominican Republic,now feverish.恶性疟雄配子体恶性疟雄配子体19.Patient has been holidayin21.A member of the UN forces in East Timor.Presented with high temperature.恶性疟雌雄配子体恶性疟雌雄配子体21.A member of the UN forces 间日疟裂殖体间日疟裂殖体间日疟裂殖体恶性疟雌配子体恶性疟雌配子体恶性疟雌配子体间日疟裂殖体间日疟裂殖体间日疟裂殖体血检质量考核v 实验室条件v 血检工作要求v 考核标准血检质量考核 实验室条件实验室条件v人员：人员：各单位至少有各单位至少有1名专职或兼职的经过疟原虫检名专职或兼职的经过疟原虫检验技术培训的人员。熟悉疟疾血片的制作，疟原验技术培训的人员。熟悉疟疾血片的制作，疟原虫的镜下特征，能承担疟疾血检工作。虫的镜下特征，能承担疟疾血检工作。v环境：环境：实验室相对独立，可做疟疾血检。实验室相对独立，可做疟疾血检。v设备：设备：显微镜、玻片、玻片架、玻片合、染色缸。显微镜、玻片、玻片架、玻片合、染色缸。v试剂：试剂：吉氏染液、甲醇、二甲苯、镜油。吉氏染液、甲醇、二甲苯、镜油。实验室条件人员：血检工作要求血检工作要求v制定疟原虫镜检实验室管理制度、疟原虫镜检操作规程v对血检对象进行认真登记，填写疟原虫镜检登记表，按接样顺序编号。编号：医院名称代码序号。v保留镜检过的所有血片，以备上级抽样复查，经上一级机构同意后方可清洗。阳性血片须专人管理。v血液标本有潜在生物危害，在实验室血检工作、标本保存中应严格遵守实验室生物安全通用要求。血检工作要求制定疟原虫镜检实验室管理制度、疟原虫镜检操 县（市县（市/区）全球基金疟疾项目发热病人疟原虫血检登记表区）全球基金疟疾项目发热病人疟原虫血检登记表 血检单位：血检单位：、序序号号姓名姓名年年龄性性别居住地址居住地址外出外出史及史及地点地点职业发病病日日期期体体温温（o oC)C)临床床初初诊血血检日日期期血血检方法方法血血检结果果检验人人签名名血血样编号号镜检RDRDT T阴阴性性PfPfPvPvPmPmPoPo混混合合1234合合计 县（市/区）全球基金疟疾项目发热疟原虫血原虫血检考核考核标准准(1)(1)项目目检查内容内容质量量标准准考核考核分分值好好分分值中中分分值差差分分值血血片片制制作作厚血膜厚血膜(25(25分）分）血量（5分）45l5略多或略少3过多或过少1位置（5分）玻片右1/3 5稍偏右4偏右过多3直径（5分）0.81.0cm50.70.8 或1.01.2cm31.2cm1外观(10分)圆形厚膜均匀,边缘整齐10圆形稍不均不整齐8厚薄不匀影响着色5薄血膜薄血膜(25(25分）分）血量（5分）11.5l5略多或略少3过多或过少1位置（5分）直径（5分）外观(10分）玻片1/21/3处5稍偏右或偏左4偏右或偏左过多32.52.0cm5稍大或稍小 3过多或过少1舌状厚薄均匀10舌状稍不均 5厚薄不匀呈波浪型3考核标准疟原虫血检考核标准(1)项目检查内容质量标准考核好分中分差分疟原虫血检考核标准（疟原虫血检考核标准（2）项目目检查内容内容质量标准质量标准考核考核分分值好好分分值中中分分值差差分分值血片染血片染色色质量量(15(15分分)外观（5分）蓝紫色5深蓝色3红色或灰白色2镜下(10分)白细胞、疟原虫胞浆蓝色，核红色10染色过深，原虫胞浆与核均呈深蓝色8染色过浅，胞浆蓝色不易显见，核淡红5血片清血片清洁度度(10(10分分)外观（5分）光洁无油灰5稍有油污2油灰粘连2镜下（5分）无沉渣5稍有沉渣2沉渣多或有杂菌2疟原虫血检考核标准（2）项目检查质量标准考核分值好分中分差分疟原虫血检考核标准（疟原虫血检考核标准（3）项目目检查内容内容使用使用标准准扣分扣分标准准考核考核分分值显微微镜使用使用（2525分）分）使用前（10分）显微镜干净，有绸布遮盖，接物镜不与聚光器对接显微镜稍有灰（-2分），无绸布遮盖（-4分），接物镜与聚光器对接（-4分）镜检时（10分）打开光源，调节亮度，聚光器上升至最高位置，油镜与聚光器对接，放入待检血片，镜台上升直至油镜与血膜接触，然后镜台徐徐下降，出现视野用微调调节 聚光器未上升至最高位置即放血片（-2分），镜台上升或下降过快（-3分），压破玻片（-10分）使用后（5分）擦拭干净油镜，物镜转离聚光器，绸布遮盖未擦拭油镜（-1分），物镜未转离聚光器（-2分），未用绸布遮盖（-2分）合合计100分疟原虫血检考核标准（3）项目检查使用标准扣分标准考核分值显微谢谢大家1、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。5月-245月-24Sunday,May 19,20242、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。13:29:0013:29:0013:295/19/2024 1:29:00 PM3、越是没有本领的就越加自命不凡。5月-2413:29:0013:29May-2419-May-244、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。13:29:0013:29:0013:29Sunday,May 19,20245、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。5月-245月-2413:29:0013:29:00May 19,20246、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。19五月20241:29:00下午13:29:005月-247、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。五月241:29下午5月-2413:29May 19,20248、业余生活要有意义，不要越轨。2024/5/1913:29:0013:29:0019 May 20249、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。1:29:00下午1:29下午13:29:005月-2410、你要做多大的事情，就该承受多大的压力。5/19/2024 1:29:00 PM13:29:0019-5月-2411、自己要先看得起自己，别人才会看得起你。5/19/2024 1:29 PM5/19/2024 1:29 PM5月-245月-2412、这一秒不放弃，下一秒就会有希望。19-May-2419 May 20245月-2413、无论才能知识多么卓著，如果缺乏热情，则无异纸上画饼充饥，无补于事。Sunday,May 19,202419-May-245月-2414、我只是自己不放过自己而已，现在我不会再逼自己眷恋了。5月-2413:29:0019 May 202413:29谢谢大家谢谢大家1、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。8月-238月-246