第十九章-药物研究的生物化学基础-课件

第十九章第十九章药物研究的生物化学基础药物研究的生物化学基础第十九章药物研究的生物化学基础1第一节第一节生物药物制造的生物化学基础生物药物制造的生物化学基础第一节 生物药物制造的生物化学基础2生物药物生物药物主要包括生化药物、微生物药物、生主要包括生化药物、微生物药物、生物技术药物和生物制品。物技术药物和生物制品。制造技术的特点：制造技术的特点：1.目的物存在于组成非常复杂的生物材料中目的物存在于组成非常复杂的生物材料中一种生物材料含有成千上万种成分，各种化合物一种生物材料含有成千上万种成分，各种化合物的形状、大小、分子形式和理化性质各不相同，其中的形状、大小、分子形式和理化性质各不相同，其中不少还是未知物，而且有效物质在制备过程尚处于代不少还是未知物，而且有效物质在制备过程尚处于代谢动态中，故常常无固定工艺可循。谢动态中，故常常无固定工艺可循。一、一、生物药物制备方法的特点生物药物制备方法的特点 生物药物主要包括生化药物、微生物药物、生物技术药物32.有些目的物在生物材料中含量极微有些目的物在生物材料中含量极微只达万分之一、十万分之一、甚至百万分之一，因只达万分之一、十万分之一、甚至百万分之一，因此分离纯化步骤多，难于获得高收率。此分离纯化步骤多，难于获得高收率。3.生物活性成分易变性、破坏生物活性成分易变性、破坏4.生物药物制造受理化因素和生物学因素影响生物药物制造受理化因素和生物学因素影响生物活性成分离开生物体后，易变性破坏，分离生物活性成分离开生物体后，易变性破坏，分离过程必须十分小心，以保护有效物质的生物活性。过程必须十分小心，以保护有效物质的生物活性。以致许多工艺设计理论性不强以致许多工艺设计理论性不强制造工艺几乎都在溶液中进行制造工艺几乎都在溶液中进行温度、温度、pH、离子强度、离子强度对溶液中各种组分的综合影响常常难于固定对溶液中各种组分的综合影响常常难于固定2.有些目的物在生物材料中含量极微 只达万分之一、45.生物药物常采用生物药物常采用“多阶式多阶式”法法纯化一种有效物质常常要联用几个，甚至十几个步纯化一种有效物质常常要联用几个，甚至十几个步骤并变换不同类型的分离方法交互进行才能达到目骤并变换不同类型的分离方法交互进行才能达到目的。的。为了保护目的物的活性及结构完整性为了保护目的物的活性及结构完整性即即“逐级分离逐级分离”法。法。6.生物药物的均一性检测与化学上的纯度概念生物药物的均一性检测与化学上的纯度概念7.不完全相同不完全相同5.生物药物常采用“多阶式”法纯化一种有效物质常常要联用5生物大分子类药物的分离纯化主要原理是：生物大分子类药物的分离纯化主要原理是：1）根据分子形状和分子大小不同的分离方法）根据分子形状和分子大小不同的分离方法如，差速离心，超速离心，膜分离透析。电如，差速离心，超速离心，膜分离透析。电透析、超滤和凝胶过滤等。透析、超滤和凝胶过滤等。2）根据分子电离性质（带电性）不同的分离方法）根据分子电离性质（带电性）不同的分离方法如，离子交换法、电泳法和电聚焦法等。如，离子交换法、电泳法和电聚焦法等。3）根据分子极性大小与溶解度不同的分离方法）根据分子极性大小与溶解度不同的分离方法如，溶剂提取法、逆流分配法、分配层析法、如，溶剂提取法、逆流分配法、分配层析法、盐析法、等电点沉淀法和有机溶剂分级沉淀盐析法、等电点沉淀法和有机溶剂分级沉淀法。法。4）根据配基特异性不同的分离方法）根据配基特异性不同的分离方法亲和层析亲和层析生物大分子类药物的分离纯化主要原理是：1）根据分子形状和分子6是指利用生物细胞的代谢反应（更多的是利用微生是指利用生物细胞的代谢反应（更多的是利用微生物转化反应）来合成化学方法难于合成的药物或药物物转化反应）来合成化学方法难于合成的药物或药物中间体。中间体。生物合成：生物合成：微生物转化反应：微生物转化反应：是指利用微生物的代谢作用来进行某些化学反应，是指利用微生物的代谢作用来进行某些化学反应，确切地说就是利用微生物代谢过程中某种酶对底物进确切地说就是利用微生物代谢过程中某种酶对底物进行催化反应，以生成所需要的活性物质。行催化反应，以生成所需要的活性物质。二、二、生物合成技术原理生物合成技术原理 是指利用生物细胞的代谢反应（更多的是利用微生物转化7微生物转化产物特点：微生物转化产物特点：转化条件温和转化条件温和具有立体构型单一具有立体构型单一公害少公害少后处理简便后处理简便能进行某些化学反应难于进行能进行某些化学反应难于进行或不能合成的反应或不能合成的反应为此，在制药工业中得到愈来愈广泛的应用，现已形为此，在制药工业中得到愈来愈广泛的应用，现已形成一个以遗传工程为指导，以发酵工程为基础，包括细胞成一个以遗传工程为指导，以发酵工程为基础，包括细胞工程和酶工程有机结合的生物合成技术体系，工程和酶工程有机结合的生物合成技术体系，微生物转化产物特点：转化条件温和 具有立体8半合成技术：半合成技术：1）药物其部分结构由天然资源得到）药物其部分结构由天然资源得到化学合成法制得最终产品化学合成法制得最终产品2）化学合成的中间产物）化学合成的中间产物微生物转化法获得最终有效化合物微生物转化法获得最终有效化合物半合成技术：1）药物其部分结构由天然资源得到化学合成法制得最9生物技术（生物技术（biotechnology）又称为生物工程（又称为生物工程（bioengineering），是利用），是利用生物有机体（动物、植物和微生物）或其组成部生物有机体（动物、植物和微生物）或其组成部分（包括器官、组织、细胞或细胞器等）发展新分（包括器官、组织、细胞或细胞器等）发展新产品或新工艺的一种技术体系。产品或新工艺的一种技术体系。三、三、生物技术原理（前述）生物技术原理（前述）生物技术（biotechnology）10包括：包括：发酵工程发酵工程基因工程基因工程细胞工程细胞工程酶工程酶工程包括：发酵工程基因工程细胞工程酶工程11基因工程技术的定义基因工程技术的定义用用人人工工方方法法，提提取取或或制制备备某某种种细细胞胞的的某某种种基基因因，在在体体外外把把它它和和一一种种载载体体连连接接构构造造杂杂种种DNA分分子子，然然后后导导入入受受体体细细胞胞，让让其其复复制制与与表表达达，以以改改变变受受体体细细胞胞的的某某些些性性状状或或产产生生人们所需的产物的工程技术。人们所需的产物的工程技术。基因工程技术的定义 12细胞工程的定义细胞工程的定义应应用用细细胞胞生生物物学学和和分分子子生生物物学学的的方方法法,通通过过类类似似于于工工程程学学的的步步骤骤,在在细细胞胞整整体体水水平平或或细细胞胞器器水水平平上上按按照照人人们们的的意意愿愿来来改改变变细细胞胞内内的的遗遗传传物物质质以以获获得得新新型型生生物物或或一一定定细细胞胞产产品品的的一一门门综综合合性性科科学学技技术术。其其技技术术涉涉及及细细胞胞融融合合技技术术、细细胞胞拆拆和和技技术术、染染色色体体导导入入技技术术、基基因因转转移移技技术术、胚胚胎胎移移植植技技术术、细胞与组织培养技术等。细胞与组织培养技术等。细胞工程的定义 应用细胞13酶工程的定义酶工程的定义在在酶酶反反应应器器中中,利利用用酶酶的的生生物物催催化化作作用用,生生产产出出人人类类所所需需要要产产品品的的一一门门科科学学技技术术。例例如如过过去去蔗蔗糖糖几几乎乎全全部部通通过过加加工工甘甘蔗蔗或或甜甜菜菜获获得得,但但现现在在科科学学家家利利用用-淀淀粉粉酶酶等等多多种种酶酶的的催催化化作作用用,在在酶酶反反应应器器中将淀粉转化成和蔗糖具有同样甜度的高果糖浆中将淀粉转化成和蔗糖具有同样甜度的高果糖浆。酶工程的定义 在酶反应14发酵工程发酵工程发酵工程也称为微生物工程，是在最适合条发酵工程也称为微生物工程，是在最适合条件下，对单一菌种进行培养，是生物特定产品件下，对单一菌种进行培养，是生物特定产品的一种生物工艺。的一种生物工艺。发酵工程 发酵工程也称为微生物工程，是在15单克隆抗体技术单克隆抗体技术现代生物技术核心现代生物技术核心重组重组DNA技术技术生物工程药物生物工程药物是指运用重组是指运用重组DNA技术和单克隆抗体技术技术和单克隆抗体技术生产的多肽、蛋白质、激素和酶类药物以及生产的多肽、蛋白质、激素和酶类药物以及疫苗、单抗和细胞生长因子类药物。疫苗、单抗和细胞生长因子类药物。单克隆抗体技术 现代生物技术核心重组DNA技术生物工程药物 16工程菌（或细胞）的大量培养与目的蛋白的生产工程菌（或细胞）的大量培养与目的蛋白的生产基因工程是生物技术中最重要的一种。基因工程是生物技术中最重要的一种。目的基因制备目的基因制备载体的选择和制备载体的选择和制备DNA片段重组连接片段重组连接重组重组DNA导入受体细胞导入受体细胞转化子的筛选转化子的筛选DNA重组体的筛选重组体的筛选DNA重组体的鉴定重组体的鉴定工程菌（或细胞）的大量培养与目的蛋白的生产基因工程是生物技术17(一一)基因载体基因载体（VectorVector）1 1 1 1、定义：携带目的基因片段进入受体细胞的、定义：携带目的基因片段进入受体细胞的、定义：携带目的基因片段进入受体细胞的、定义：携带目的基因片段进入受体细胞的DNADNA 一个理想的载体应具备以下几个条件：一个理想的载体应具备以下几个条件：（a a）本本身身是是一一个个复复制制子子，能能自自我我复复制制。载载体体在在进进入入受受体体细细胞胞后后，可自身复制或插入到基因组中，随受体细胞的基因组一起复制。可自身复制或插入到基因组中，随受体细胞的基因组一起复制。（b b）分分子子量量小小，小小分分子子的的DNADNA制制备备时时不不易易损损伤伤，小小分分子子DNADNA限限制制酶酶的切点少。的切点少。（c c）目的基因与载体连结后，可在受体细胞内转录，翻）目的基因与载体连结后，可在受体细胞内转录，翻 译成蛋白质产物（表达载体）。译成蛋白质产物（表达载体）。（d d）能能给给寄寄主主（受受体体）细细胞胞提提供供可可选选择择的的标标记记：如如抗抗药药性性，营营养养缺陷型或显色表型等，以利于筛选。缺陷型或显色表型等，以利于筛选。（E）具有多克隆位点，便于目的基因片段与载体连接。）具有多克隆位点，便于目的基因片段与载体连接。(F)拷贝数多，便于分离提纯。拷贝数多，便于分离提纯。(一)基因载体（Vector）1、定义：携带目的182、载体的分类、载体的分类功能分类：功能分类：功能分类：功能分类：克隆载体克隆载体 表达载体表达载体 转移载体转移载体 探针载体探针载体组成元件的来源分类组成元件的来源分类:质粒（质粒（plasmidplasmid）载体）载体 噬菌体载体：如噬菌体载体：如噬菌体载体、噬菌体载体、M13M13噬菌体载体噬菌体载体 杂合载体杂合载体(如粘粒如粘粒cosmid)cosmid)病毒性载体：逆转录病毒载体、腺病毒载体等病毒性载体：逆转录病毒载体、腺病毒载体等人工染色体载体人工染色体载体 2、载体的分类 功能分类：克193 3、克隆载体（、克隆载体（cloning vectorcloning vector）（1 1 1 1）克克克克隆隆隆隆载载载载体体体体的的的的功功功功能能能能：用用用用来来来来克克克克隆隆隆隆和和和和扩扩扩扩增增增增DNADNADNADNA片片片片段段段段 （目的基因）的载体（目的基因）的载体（目的基因）的载体（目的基因）的载体具备条件：具备条件：具备条件：具备条件：（a a）必须是一个复制子，能在受体细胞中复制。）必须是一个复制子，能在受体细胞中复制。复制起点复制起点 Ori Ori 复制区复制区 复制终点复制终点 term term （b b）带有抗药性基因）带有抗药性基因 Tet Tet r r：编码膜蛋白，阻止：编码膜蛋白，阻止TetTet进入细胞进入细胞 Amp Amp r r：-内酰胺环水解酶。内酰胺环水解酶。Kan Kan r r：KanKan P ,neo P ,neo p p Cam Cam r r：氯霉素乙酰基转移酶：氯霉素乙酰基转移酶3、克隆载体（cloning vector）（1）克隆载体的20（C C C C）具具有有多多克克隆隆位位点点（multiple multiple cloning cloning sitssits，MCS MCS）载载体体上上含含有有的的一一个个人人工工合合成成的的DNADNA片片段段，其其上上含有数个单一酶切位点，是外源含有数个单一酶切位点，是外源DNADNA的插入部位的插入部位具备条件：具备条件：具备条件：具备条件：是是载载体体中中的的一一段段碱碱基基序序列列，由由数数个个酶酶切切位位点点组成。这些位点在载体上都是单一位点组成。这些位点在载体上都是单一位点（d d）可导入受体细胞）可导入受体细胞 （C）具有多克隆位点（multiple cloni21pBR322质粒质粒有两个抗药性基因，每个抗性基因中均含有单有两个抗药性基因，每个抗性基因中均含有单克隆位点，外源克隆位点，外源DNA插入后使相应的抗性基因失活，插入后使相应的抗性基因失活，宿主细胞失去相应的抗药性，不能在含相应抗生素的宿主细胞失去相应的抗药性，不能在含相应抗生素的培养基中生长，这一现象称为插入失活。培养基中生长，这一现象称为插入失活。pBR322质粒 有两个抗药性基因，22质粒质粒pBR322的抗性基因筛选示意图的抗性基因筛选示意图质粒pBR322的抗性基因筛选示意图234、表达载体（、表达载体（expressingvector）（1 1）表达载体的功能：在受体细胞中表达外源基因的）表达载体的功能：在受体细胞中表达外源基因的）表达载体的功能：在受体细胞中表达外源基因的）表达载体的功能：在受体细胞中表达外源基因的载体载体载体载体 结构：结构：克隆载体克隆载体+表达构件表达构件 原核生物表达原核生物表达 真核生物表达真核生物表达 oriampr基础上加转录和翻译相关基础上加转录和翻译相关elementMCS（2 2）原核（）原核（）原核（）原核（大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌）表达载体）表达载体）表达载体）表达载体表达载体表达载体=克隆载体克隆载体+表达元件表达元件“启动子启动子核糖体结合位点核糖体结合位点克隆位点克隆位点转录终止信号转录终止信号”“PRBSMCSterm”“PRBSMCSterm”4、表达载体（expressing vector）（1）表达24原核表达载体结构示意图原核表达载体结构示意图用用用用T7T7表达系表达系表达系表达系统质粒的基统质粒的基统质粒的基统质粒的基本结构元件本结构元件本结构元件本结构元件原核表达载体结构示意图用T7 表达系统质粒的基本结构元件25(3)(3)哺乳动物表达载体哺乳动物表达载体（1）病毒载体）病毒载体整合性载体：外源基因通过这种载体与宿主细胞整合性载体：外源基因通过这种载体与宿主细胞的染色体整合。如的染色体整合。如pSV系列载体系列载体游离型载体：外源基因与这种载体重组后，以病游离型载体：外源基因与这种载体重组后，以病毒颗粒形式在宿主细胞内自行复制或在辅助病毒存毒颗粒形式在宿主细胞内自行复制或在辅助病毒存在下进行复制。如痘苗病毒、腺病毒、杆状病毒和在下进行复制。如痘苗病毒、腺病毒、杆状病毒和逆转录病毒等。逆转录病毒等。（2）质粒载体）质粒载体常常是穿梭质粒载体。既含原核的复制位点和常常是穿梭质粒载体。既含原核的复制位点和筛选标记，又含真核的复制位点筛选标记和表达构筛选标记，又含真核的复制位点筛选标记和表达构件。件。(3)哺乳动物表达载体（1）病毒载体261.直接从染色体直接从染色体DNA分离分离如果物理图谱已确定，可用限制酶直接从原核如果物理图谱已确定，可用限制酶直接从原核生物，噬菌体及动物病毒基因组切取目的基因。生物，噬菌体及动物病毒基因组切取目的基因。（二）目的基因的来源（二）目的基因的来源（Isolation）1.直接从染色体DNA分离 如果物理图谱已确定，272.化学合成化学合成要求：要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产物的已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列氨基酸序列基因小基因小2.化学合成要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸283.从从cDNA文库（文库（cDNA文库）筛选目的基因文库）筛选目的基因将不同细胞类型或不同阶段细胞的将不同细胞类型或不同阶段细胞的mRNAmRNA逆转录成逆转录成cDNAcDNA后后,将所有将所有cDNAcDNA混合体混合体与载体进行连接后，将所有的重组体分子与载体进行连接后，将所有的重组体分子都引入宿主细胞并进行扩增，所得到的分都引入宿主细胞并进行扩增，所得到的分子克隆的混合体称为子克隆的混合体称为 cDNA cDNA文库。文库。3.从cDNA文库（cDNA文库）筛选目的基因 29mRNAcDNA双链双链cDNA重组重组DNA分子分子cDNA文库文库反转录酶反转录酶载体载体受体菌受体菌复制复制*从从cDNA文库获取目的基因文库获取目的基因逆转录酶逆转录酶AAAATTTTAAAASISI核酸酶核酸酶DNA聚合酶聚合酶碱水解碱水解TTTTmRNA cDNA 双链cDNA 重组DNA分子 30 4.4.4.4.从基因组文库（从基因组文库（从基因组文库（从基因组文库（genomic librarygenomic librarygenomic librarygenomic library）筛选目的基）筛选目的基）筛选目的基）筛选目的基因因因因 采用限制酶将基因组采用限制酶将基因组DNADNA切成片段，每一个切成片段，每一个DNADNA片段都片段都与一个载体分子拼接成重组与一个载体分子拼接成重组DNADNA，然后将所有的重组体都，然后将所有的重组体都引入宿主细胞并进行扩增，得到的分子克隆的混合体称为引入宿主细胞并进行扩增，得到的分子克隆的混合体称为“基因组文库基因组文库”。从基因组文库中通过杂交筛选得到目的。从基因组文库中通过杂交筛选得到目的基因片段。基因片段。从细胞中分离基因组从细胞中分离基因组DNADNA、用、用SauSau3A3A或或MboMboI I部分消化、部分消化、回收大小在一定范围内的片段、构建重组体。回收大小在一定范围内的片段、构建重组体。4.从基因组文库（genomic library）筛选目31组织或细胞染色体组织或细胞染色体DNA基因片断基因片断克隆载体克隆载体重组重组DNA分子分子含重组分子的转化菌含重组分子的转化菌限制性内切酶限制性内切酶受体菌受体菌基因组基因组DNA文库：文库：存在于转化细胞内存在于转化细胞内由克隆载体所携带的所由克隆载体所携带的所有基因组有基因组DNA的集合的集合*从基因组从基因组DNA文文库获取目的基因库获取目的基因组织或细胞染色体DNA基因片断克隆载体重组DNA分子含重组分325.PCR5.PCR或或RT-PCRRT-PCR根据目的基因的核苷酸序列设计一对引物以根据目的基因的核苷酸序列设计一对引物以基因组基因组DNADNA为模板经为模板经PCRPCR扩增目的基因。扩增目的基因。以以mRNAmRNA或或RNARNA为模板经为模板经RT-PCRRT-PCR扩增目的基因。扩增目的基因。5.PCR或RT-PCR 33（三）限制酶的应用限制酶的应用限制酶限制酶(restriction enzyme):(restriction enzyme):一类专门切割一类专门切割DNADNA的酶。是的酶。是一类能识别双链一类能识别双链DNADNA分子中分子中 的某种特定核苷酸序列，并与其的某种特定核苷酸序列，并与其特异结合，并在识别位点或其周围切割双链特异结合，并在识别位点或其周围切割双链DNADNA的一类核酸的一类核酸内切酶。内切酶。“Restriction endonucleases are bacteria“Restriction endonucleases are bacteria“Restriction endonucleases are bacteria“Restriction endonucleases are bacteria enzyme which cut(hydrolyze)DNA into defined and enzyme which cut(hydrolyze)DNA into defined and enzyme which cut(hydrolyze)DNA into defined and enzyme which cut(hydrolyze)DNA into defined and reproducible fragments.In bacteria they form part reproducible fragments.In bacteria they form part reproducible fragments.In bacteria they form part reproducible fragments.In bacteria they form part of the restrictionmodification defense mechanism of the restrictionmodification defense mechanism of the restrictionmodification defense mechanism of the restrictionmodification defense mechanism against foreign DNA.They are basic gene cloning against foreign DNA.They are basic gene cloning against foreign DNA.They are basic gene cloning against foreign DNA.They are basic gene cloning tools.”tools.”tools.”tools.”1.定义：定义：（三）限制酶的应用1.定义：342.限制酶的识别和切割位点限制酶的识别和切割位点识别：识别：4 46 6 碱基对，多具有回文结构碱基对，多具有回文结构（palindrom），），少数识别长序列少数识别长序列为为8 8个或个或8 8个以上碱基对，有的存在简并序列（个以上碱基对，有的存在简并序列（有的核苷酸位点可以不有的核苷酸位点可以不同同 ）。）。Sau3AI EcoRI PstSma5GATCGAATTCCTGCAGCCCGGG33CTAGCTTAAGGACGTCGGGCCC5简并序列：简并序列：GTYRACY=C/TR=G/AYR=CG/CA/TG/TAHind可识别可识别4个特定序列个特定序列2.限制酶的识别和切割位点识别：46 碱基对，多具有回文353.限制酶的切割方式限制酶的切割方式(1)(1)识识别别序序列列内内两两条条链链上上交交错错切切割割，产产生生单单链链突出的粘性末端突出的粘性末端(2)(2)对对称称处处同同时时切切断断DNADNA的的两两条条链链，产产生生平平端端DNADNA片段片段3.限制酶的切割方式(1)识别序列内两条链上交错切割，产生单364.限制酶的切割结果限制酶的切割结果切割的结果：切割的结果：产生三种不同的末端产生三种不同的末端平末端平末端bluntend5突出突出5-protruding（cohesiveend）3突出突出3-protruding（overhangtail）切切割割的的化化学学本本质质：磷磷酸酸二二酯酯键键的的断断裂裂,形形成成含含5P和和3OH末端的两个末端的两个DNA片段。片段。对对一一特特定定的的DNA而而言言，识识别别序序列列碱碱基基对对少少的的，则则切切点点数数多，产生的片段小。多，产生的片段小。4.限制酶的切割结果切割的结果：产生三种不同的末端37第十九章-药物研究的生物化学基础-课件38(四四)重组体的构建重组体的构建1.粘性末端连接：粘性末端连接：粘性末端连接：粘性末端连接：用同一种酶裂解后，产生相同用同一种酶裂解后，产生相同的粘性末端，很容易按照碱基配对的原则以氢键结合，的粘性末端，很容易按照碱基配对的原则以氢键结合，在在T T4 4DNADNA连接酶的作用下，共价闭合。连接酶的作用下，共价闭合。连接方式：连接方式：连接方式：连接方式：定向取代定向取代定向取代定向取代 双向插入（正向双向插入（正向双向插入（正向双向插入（正向/反向）反向）反向）反向）（双酶切）（双酶切）（单酶切）（单酶切）措施：措施：载体酶切后，用载体酶切后，用APAP（碱性磷酸酶）水解（碱性磷酸酶）水解55端的端的磷酸基团防止载体的自身环化。磷酸基团防止载体的自身环化。(四)重组体的构建 1.粘性末端连接：用39同一种限制酶切割同一种限制酶切割同一种限制酶切割同一种限制酶切割DNADNADNADNA产生的粘性末端的连接产生的粘性末端的连接产生的粘性末端的连接产生的粘性末端的连接GGATCCCCTAGGBamH 的 识 别 序列 及 切 割 部 位GGATCCCCTAGGBamH含 目 的 基 因 的 DNA片 段BamHGCCTAG535335535353GGATCCCC TAGGGATCC G目 的 基 因 片 段混 合、退 火GCCTAGGATCCGGATCCGGCCTAG质 粒 载 体含 目 的 基 因 的 重 组 质 粒GCCTAGGATCC GDNA连 接 酶 同一种限制酶切割DNA产生的粘性末端的连接 G G A T40双酶切双酶切DNADNA片段粘性末端的连接片段粘性末端的连接GGATCCCCTAGGBamHBamHBamHGCCTAG53535553533GAATTCCTTAAGAATTC G目 的 基 因 片 段混 合、退 火GCTTAAGATCCGAATTCGGCCTAG重 组 质 粒DNA连 接 酶EcoRIEcoRI5GATCCGGCT TAAAATT CGGCCTAGGATCCGGCTTAAEcoRIGATCCGGCCTAG35载 体双酶切DNA片段粘性末端的连接 G G A T C CC C41加入同聚体尾（加入同聚体尾（homopolymeric tailhomopolymeric tail）连接）连接 TdTTdTTdTTdT：末端转移酶，可将某种单一脱氧核苷酸逐一加到：末端转移酶，可将某种单一脱氧核苷酸逐一加到：末端转移酶，可将某种单一脱氧核苷酸逐一加到：末端转移酶，可将某种单一脱氧核苷酸逐一加到 3-3-3-3-OH OH OH OH上去。上去。上去。上去。底物：底物：底物：底物：3 3 3 3 粘性突出末端粘性突出末端粘性突出末端粘性突出末端 加入同聚体尾（homopolymeric tail）连接 422.平端连接平端连接不同方式产生的平端不同方式产生的平端DNADNA片段可以在片段可以在T4DNAT4DNA连接酶的作用下，与某些限制酶产生连接酶的作用下，与某些限制酶产生的平端载体相连接。在连接时，所用的的平端载体相连接。在连接时，所用的ATPATP及及T4DNAT4DNA连接酶的浓度要比连接粘末端的高连接酶的浓度要比连接粘末端的高些。些。2.平端连接 43(五五)重组体的转化重组体的转化受体细胞应具备下列条件受体细胞应具备下列条件受体细胞应具备下列条件受体细胞应具备下列条件:1.1.1.1.安全宿主菌安全宿主菌安全宿主菌安全宿主菌（或宿主细胞）在人肠道几无存活或存活率极低（或宿主细胞）在人肠道几无存活或存活率极低（或宿主细胞）在人肠道几无存活或存活率极低（或宿主细胞）在人肠道几无存活或存活率极低2.2.2.2.限制酶缺陷型限制酶缺陷型限制酶缺陷型限制酶缺陷型，外源，外源，外源，外源DNADNADNADNA进入受体菌不被降解进入受体菌不被降解进入受体菌不被降解进入受体菌不被降解3.3.3.3.重组缺陷型重组缺陷型重组缺陷型重组缺陷型，保证外源，保证外源，保证外源，保证外源DNADNADNADNA不与细菌基因组不与细菌基因组不与细菌基因组不与细菌基因组DNADNADNADNA重组，独立存重组，独立存重组，独立存重组，独立存在在在在4.4.4.4.能发展成感受态细胞的菌株能发展成感受态细胞的菌株能发展成感受态细胞的菌株能发展成感受态细胞的菌株感受态：是受体菌能接受外源感受态：是受体菌能接受外源感受态：是受体菌能接受外源感受态：是受体菌能接受外源DNADNADNADNA能力的一种生理状态能力的一种生理状态能力的一种生理状态能力的一种生理状态 感受态细胞：指经过一定方法处理后具备接受外源感受态细胞：指经过一定方法处理后具备接受外源感受态细胞：指经过一定方法处理后具备接受外源感受态细胞：指经过一定方法处理后具备接受外源DNADNADNADNA能力的细能力的细能力的细能力的细胞胞胞胞(五)重组体的转化受体细胞应具备下列条件:44(五五)重组体的转化重组体的转化（transformationtransformation）定义：定义：定义：定义：将质粒或其它外源将质粒或其它外源将质粒或其它外源将质粒或其它外源DNADNADNADNA导入处于感受态的宿导入处于感受态的宿导入处于感受态的宿导入处于感受态的宿主细胞，并使其获得新的表型的过程。主细胞，并使其获得新的表型的过程。主细胞，并使其获得新的表型的过程。主细胞，并使其获得新的表型的过程。过程：过程：过程：过程：细胞细胞细胞细胞低温低温低温低温CaCl2CaCl2CaCl2CaCl2处理处理处理处理感受态细胞感受态细胞感受态细胞感受态细胞加重组加重组加重组加重组DNA42DNA42DNA42DNA42热休克热休克热休克热休克重组体吸入细胞重组体吸入细胞重组体吸入细胞重组体吸入细胞复苏复苏复苏复苏涂板涂板涂板涂板（含抗生素）（含抗生素）（含抗生素）（含抗生素）筛选转化菌落。筛选转化菌落。筛选转化菌落。筛选转化菌落。其它方法：其它方法：其它方法：其它方法：电转化、电转化、电转化、电转化、PEGPEGPEGPEG法等。法等。法等。法等。(五)重组体的转化（transformation）45重组重组DNADNA转化过程示意图转化过程示意图 重组DNA转化过程示意图46 感染（感染（fectionfection）以噬菌体、粘粒和真核病毒为载体的重组以噬菌体、粘粒和真核病毒为载体的重组DNADNA分子，体外经包装成为具有感染能力的病毒或噬分子，体外经包装成为具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染相应的细胞，并在其中扩增。菌体颗粒，才能感染相应的细胞，并在其中扩增。此过程又叫转导（此过程又叫转导（transductiontransduction）。）。感染效率转化效率感染效率转化效率感染效率转化效率感染效率转化效率 感染（fection）47（六）重组体的筛选和鉴定（六）重组体的筛选和鉴定涉及遗传学方法、免疫学方法、核酸杂交和涉及遗传学方法、免疫学方法、核酸杂交和涉及遗传学方法、免疫学方法、核酸杂交和涉及遗传学方法、免疫学方法、核酸杂交和PCRPCRPCRPCR方法方法方法方法1.1.1.1.根据重组体的表型进行筛选根据重组体的表型进行筛选根据重组体的表型进行筛选根据重组体的表型进行筛选 （1 1 1 1）抗生素抗性筛选：）抗生素抗性筛选：）抗生素抗性筛选：）抗生素抗性筛选：所有的克隆载体均带有可供所有的克隆载体均带有可供所有的克隆载体均带有可供所有的克隆载体均带有可供选择的遗传学标志或特征，如某种抗生素的抗性基因，选择的遗传学标志或特征，如某种抗生素的抗性基因，选择的遗传学标志或特征，如某种抗生素的抗性基因，选择的遗传学标志或特征，如某种抗生素的抗性基因，为选择提供方便。为选择提供方便。为选择提供方便。为选择提供方便。（六）重组体的筛选和鉴定 涉及遗传学方法、免疫学方法482.酶切鉴定酶切鉴定挑选单个菌落挑选单个菌落挑选单个菌落挑选单个菌落扩大培养扩大培养扩大培养扩大培养小量快速提取质小量快速提取质小量快速提取质小量快速提取质粒粒粒粒酶切（根据插入片段上的酶切位点选定）酶切（根据插入片段上的酶切位点选定）酶切（根据插入片段上的酶切位点选定）酶切（根据插入片段上的酶切位点选定）分析有无插入片段、插入片段大小及数量、分析有无插入片段、插入片段大小及数量、分析有无插入片段、插入片段大小及数量、分析有无插入片段、插入片段大小及数量、插入方向等。插入方向等。插入方向等。插入方向等。2.酶切鉴定 挑选单个菌落扩大培养小量49（三）核酸杂交法（三）核酸杂交法菌落原位杂交菌落原位杂交从基因文库、从基因文库、从基因文库、从基因文库、cDNAcDNAcDNAcDNA文库或重组质粒中筛选文库或重组质粒中筛选文库或重组质粒中筛选文库或重组质粒中筛选目的基因的最有效的方法之一，它与目的基因目的基因的最有效的方法之一，它与目的基因目的基因的最有效的方法之一，它与目的基因目的基因的最有效的方法之一，它与目的基因的表达与否无关。的表达与否无关。的表达与否无关。的表达与否无关。（三）核酸杂交法菌落原位杂交 50原位原位杂交杂交原位杂交 51基因工程的基本过程基因工程的基本过程基因工程的基本过程 52重组重组DNADNA技术在药学中的应用技术在药学中的应用 生产基因工程药物生产基因工程药物生产基因工程药物生产基因工程药物 定向改造生物的基因结构，构建高产定向改造生物的基因结构，构建高产定向改造生物的基因结构，构建高产定向改造生物的基因结构，构建高产菌株，用于改造传统制药工业菌株，用于改造传统制药工业菌株，用于改造传统制药工业菌株，用于改造传统制药工业 用于基础研究用于基础研究用于基础研究用于基础研究重组DNA技术在药学中的应用 生产基因工程药物53单克隆抗体（单克隆抗体（biotechnology）是由一个杂交瘤细胞及其后代产生的抗体，具是由一个杂交瘤细胞及其后代产生的抗体，具有单一、特异与纯化的特性。有单一、特异与纯化的特性。单克隆抗体主要用于免疫诊断、定向给药及家单克隆抗体主要用于免疫诊断、定向给药及家庭诊断检测试剂盒的配制，在治疗上也具有良好庭诊断检测试剂盒的配制，在治疗上也具有良好应用前景。应用前景。单克隆抗体（biotechnology）是由54抗原注入小鼠体内用PEG促使细胞融合得到杂交瘤细胞收集骨髓瘤细胞分离受免淋巴细胞培养骨髓培养骨髓瘤细胞瘤细胞单抗产品单抗产品单抗产品单抗产品在HAT培养基中培养克隆杂交瘤细胞扩大组织培养或生成腹水瘤分离纯化筛选产生专一抗体的杂交瘤细胞分离纯化杂交瘤细胞与杂交瘤细胞与单克隆抗体制单克隆抗体制造示意图造示意图抗原注入小鼠体内用PEG促使细胞融合得到杂交瘤细胞收集骨髓瘤55第二节第二节药物质量控制的生物化学基础药物质量控制的生物化学基础第二节 药物质量控制的生物化学基础56一、药物质量控制的常用生化分析法一、药物质量控制的常用生化分析法一、药物质量控制的常用生化分析法57生化分析法的优点：生化分析法的优点：操作简便，取样少，灵敏度高，专一性强。操作简便，取样少，灵敏度高，专一性强。微量凯氏定氮法微量凯氏定氮法测定含氮有机药物测定含氮有机药物酶法酶法分析具有旋光异构体或几何异分析具有旋光异构体或几何异构体的药物构体的药物免疫法免疫法分析具有抗原或半抗原性质的药物分析具有抗原或半抗原性质的药物放射酶法放射酶法检测微生物药品等检测微生物药品等生化分析法的优点：操作简便，取样少，灵敏度高，专一性强。微量58（一）免疫分析法（一）免疫分析法基于抗原抗体特异性结合反应发展起来的分析基于抗原抗体特异性结合反应发展起来的分析方法。方法。1.免疫扩散法免疫扩散法2.免疫电泳法免疫电泳法3.放射免疫测定法（放射免疫测定法（RIA）4.酶联免疫测定法（酶联免疫测定法（ELISA）（一）免疫分析法 基于抗原抗体特异性结合反应发展起来591.免疫扩散法免疫扩散法本法可用于未知样品的抗原组成及不同样品的本法可用于未知样品的抗原组成及不同样品的抗原特性比较鉴定。抗原特性比较鉴定。1.免疫扩散法 本法可用于未知样品的抗原602.免疫电泳法免疫电泳法本法可用以检查抗原制剂的纯度和分析抗原混合本法可用以检查抗原制剂的纯度和分析抗原混合物的组分。物的组分。2.免疫电泳法 本法可用以检查抗原制剂的纯度613.放射免疫测定法（放射免疫测定法（RIA）Ag-AbAgAg*-AbAbAg*3.放射免疫测定法（RIA）Ag-AbAgAg*-624.酶联免疫测定法（酶联免疫测定法（RIA）4.酶联免疫测定法（RIA）63（二）电泳分析法（二）电泳分析法电泳是带点颗粒在电场作用下，向着电泳是带点颗粒在电场作用下，向着与其所带电荷相反的电极方向移动。与其所带电荷相反的电极方向移动。各种物质由于所带净电荷的种类和数量各种物质由于所带净电荷的种类和数量不同，因而在电场中的迁移方向和速度不不同，因而在电场中的迁移方向和速度不同。利用物质的这种性质可以对物质进行同。利用物质的这种性质可以对物质进行分离和鉴定。分离和鉴定。（二）电泳分析法 电泳是带点颗粒在电场作用下，向着与64电泳分析法电泳分析法电泳分析法65影响颗粒电泳迁移率的因素主要有：影响颗粒电泳迁移率的因素主要有：1.缓冲液的种类和性质缓冲液的种类和性质2.电场电场3.支持介质支持介质 影响颗粒电泳迁移率的因素主要有：1.66（三）酶法分析（三）酶法分析酶法分析的原理是借助酶促反应（包括单酶酶法分析的原理是借助酶促反应（包括单酶或多酶耦联反应）对酶或酶所作用的底物或参与或多酶耦联反应）对酶或酶所作用的底物或参与酶促反应的辅酶、激动剂和抑制剂等进行定性、酶促反应的辅酶、激动剂和抑制剂等进行定性、定量分析。定量分析。（三）酶法分析 酶法分析的原理是借助酶促反应（包67酶法分析的特点酶法分析的特点酶法分析的特点68酶法分析主要有三类测定法：酶法分析主要有三类测定法：1.中止反应法中止反应法2.连续测定法连续测定法3.循环放大法循环放大法酶法分析主要有三类测定法：1.中止反应法2.连续测定法369第十九章-药物研究的生物化学基础-课件70二、生物药物质量控制的生化分析法二、生物药物质量控制的生化分析法二、生物药物质量控制的生化分析法71（一）多肽与蛋白质类药物的主要分析方法（一）多肽与蛋白质类药物的主要分析方法1.蛋白质药物的纯度分析蛋白质药物的纯度分析蛋白质纯度一般是指样品有无含其他杂蛋白，而不蛋白质纯度一般是指样品有无含其他杂蛋白，而不包括盐类、缓冲液离子、包括盐类、缓冲液离子、SDS等小分子在内。等小分子在内。蛋白质纯度检测方法：蛋白质纯度检测方法：聚丙烯酰胺凝胶电泳（聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）SDS-PAGE毛细管电泳（毛细管电泳（CE）等点聚焦（等点聚焦（IEF）HPLC（包括凝胶排阻层析，各种反相（包括凝胶排阻层析，各种反相HPLC，离子交换色谱，疏水色谱等）离子交换色谱，疏水色谱等）化学法化学法（一）多肽与蛋白质类药物的主要分析方法1.蛋白质药物的纯722.多肽与蛋白质的分子量的测定多肽与蛋白质的分子量的测定2.多肽与蛋白质的分子量的测定733.蛋白质的定量测定蛋白质的定量测定3.蛋白质的定量测定74第十九章-药物研究的生物化学基础-课件754.生物质谱法生物质谱法4.生物质谱法76（二）核酸类药物的主要分析方法（二）核酸类药物的主要分析方法核酸、核苷酸及其衍生物的分子中含有碱基，具有核酸、核苷酸及其衍生物的分子中含有碱基，具有共轭双键结构，对紫外光有特征吸收，共轭双键结构，对紫外光有特征吸收，RNA和和DNA对对紫外光的特征吸收位于紫外光的特征吸收位于260nm处。处。核酸分子中含有碱基、戊糖和磷酸。定量核酸的核酸分子中含有碱基、戊糖和磷酸。定量核酸的方法可测定三者中任何一种，从而计算样品中的核方法可测定三者中任何一种，从而计算样品中的核酸含量。酸含量。每每1ml含含1gRNA溶液的光吸收值为溶液的光吸收值为0.022，每每1ml含含1gDNA溶液的光吸收值为溶液的光吸收值为0.020。1.紫外分光光度法测定紫外分光光度法测定RNA与与DNA含量含量（二）核酸类药物的主要分析方法 核酸、核苷酸及其衍生77当当RNA与浓盐酸在与浓盐酸在100下煮沸后，即发生降下煮沸后，即发生降解产生核糖，并进而转变为糠醛，在解产生核糖，并进而转变为糠醛，在FeCl3或或CuCl2催化下，糠醛与催化下，糠醛与3，5-二羟基甲苯（地衣酚二羟基甲苯（地衣酚）反应）反应生成绿色复合物，在生成绿色复合物，在670nm处有最大吸收。处有最大吸收。2.地衣酚显色法测定地衣酚显色法测定RNA 当RNA与浓盐酸在100下煮沸后，即发生降783.二苯胺法测定二苯胺法测定DNA含量含量3.二苯胺法测定DNA含量79（三）酶类药物的分析（三）酶类药物的分析酶类药物的主要质量指标是它的催化活力。酶类药物的主要质量指标是它的催化活力。适宜的测定酶活力的方法至少适宜的测定酶活力的方法至少应满足如下条件：应满足如下条件：1.有可被检测且能反映酶反应进行程度的信号物有可被检测且能反映酶反应进行程度的信号物2.底物对酶远远过量底物对酶远远过量3.适宜的反应温度适宜的反应温度4.最适的最适的pH反应体系反应体系5.被测的酶量适当被测的酶量适当6.测定时间在酶促反应初速度范围内。测定时间在酶促反应初速度范围内。（三）酶类药物的分析 酶类药物的主要质量指标是它的催80（四）重组（四）重组DNA药物中的可能杂质检查药物中的可能杂质检查（四）重组DNA药物中的可能杂质检查811.外源性外源性DNA重组重组DNA药物中残留的外源性药物中残留的外源性DNA来源来源于宿主细胞，每种制品都有其独特的残留于宿主细胞，每种制品都有其独特的残留DNA，因此产品中必须控制外源性，因此产品中必须控制外源性DNA残留残留量。量。测定残留测定残留DNA的有效方法：的有效方法：DNA分子杂交技术。1.外源性DNA重组DNA药物中残留的外源性DNA822.宿主细胞蛋白质宿主细胞蛋白质宿主细胞蛋白质简称宿主蛋白，是指生宿主细胞蛋白质简称宿主蛋白，是指生成过程中来自宿主或培养基中的残留蛋白或成过程中来自宿主或培养基中的残留蛋白或多肽等杂质。多肽等杂质。测定制品中宿主蛋白含量的方法：测定制品中宿主蛋白含量的方法：酶联免疫吸附测定法（ELISA）；Westernblot法。2.宿主细胞蛋白质宿主细胞蛋白质简称宿主蛋白，是指83.二聚体或多聚体的测定二聚体或多聚体的测定一般采用分子排阻色谱法测定二聚体或一般采用分子排阻色谱法测定二聚体或多聚体的含量限度。多聚体的含量限度。4.降解产物的测定降解产物的测定鉴于降解产物的基本结构通常与未降解鉴于降解产物的基本结构通常与未降解的重组药物相似，因此，对降解产物的测定的重组药物相似，因此，对降解产物的测定多采用离子对反相色谱。多采用离子对反相色谱。.二聚体或多聚体的测定一般采用分子排阻色谱法测定84第三节第三节药理学研究的生物化学基础药理学研究的生物化学基础第三节 药理学研究的生物化学基础85现代药理学研究已从整体、系统、器官、现代药理学研究已从整体、系统、器官、现代药理学研究已从整体、系统、器官、现代药理学研究已从整体、系统、器官、组织、细胞进入到亚细胞、分子甚至量子组织、细胞进入到亚细胞、分子甚至量子组织、细胞进入到亚细胞、分子甚至量子组织、细胞进入到亚细胞、分子甚至量子水平，因此生物化学和分子生物学已成为水平，因此生物化学和分子生物学已成为水平，因此生物化学和分子生物学已成为水平，因此生物化学和分子生物学已成为现代药理学的重要理论基础。现代药理学的重要理论基础。现代药理学的重要理论基础。现代药理学的重要理论基础。现代药理学研究已从整体、系统、器官、组织、细胞进入86一、一、药物作用的生物化学基础药物作用的生物化学基础（一）神经传导与神经递质（一）神经传导与神经递质当两个神经元的突触当两个神经元的突触20nm时，动作电位仍时，动作电位仍可使突触后膜去极化，神经冲动继续向下传递。可使突触后膜去极化，神经冲动继续向下传递。如裂隙如裂隙20nm时，就必须由神经递质来传时，就必须由神经递质来传递信息。递信息。神经递质神经递质(突触分泌信号突触分泌信号)：神经元突触前膜释放神经元突触前膜释放起着信息传递作用的物质称为神经递质。一、药物作用的生物化学基础（一）神经传导与神经递质 87（二）受体的结构与功能（二）受体的结构与功能细胞中能识别配体并与其特异性结合，引起细胞中能识别配体并与其特异性结合，引起各种生物效应的分子称为各种生物效应的分子称为受体受体。为蛋白质，部分为糖蛋白或脂蛋白。为蛋白质，部分为糖蛋白或脂蛋白。受体的化学本质：受体的化学本质：（二）受体的结构与功能 细胞中能识别配体并与881.受体受体离子通道型离子通道型受体本身构成离子通道。受体本身构成离子通道。当受体的调节部位与配体结合后，受体变构，使当受体的调节部位与配体结合后，受体变构，使通道开放或关闭、引起或切断阳离子、阴离子的流通道开放或关闭、引起或切断阳离子、阴离子的流动，从而传递信息。动，从而传递信息。1.受体 离子通道型受体本身构成离子通道。892.受体受体G蛋白蛋白-效应蛋白型效应蛋白型在真核细胞，鸟苷三磷酸在真核细胞，鸟苷三磷酸-结合蛋白（结合蛋白（G蛋白）在蛋白）在联系细胞膜受体与效应蛋白质中起着重要的介导作联系细胞膜受体与效应蛋白质中起着重要的介导作用。用。2.受体 G蛋白-效应蛋白型 在真核细胞90第十九章-药物研究的生物化学基础-课件913.受体受体酪氨酸蛋白激酶型酪氨酸蛋白激酶型3.受体 酪氨酸蛋白激酶型924.受体受体转录因子型转录因子型4.受体 转录因子型93（三）药物作用的靶酶（三）药物作用的靶酶药物对靶酶的作用：药物对靶酶的作用：一是调节酶量一是调节酶量（酶的合成增加或减少）（酶的合成增加或减少），二是调节酶活力（二是调节酶活力（激动剂、抑制剂、辅酶或活力调节）激动剂、抑制剂、辅酶或活力调节）。有些重要治疗剂的作用在于它们能选择性有些重要治疗剂的作用在于它们能选择性地抑制一种靶酶。地抑制一种靶酶。（三）药物作用的靶酶 药物对靶酶的作用：一94一种酶抑制剂要成为应用于临床的有效药物一种酶抑制剂要成为应用于临床的有效药物应具备以下条件：应具备以下条件：1.被抑制的靶酶所催化的生化反应与某种疾病的发生被抑制的靶酶所催化的生化反应与某种疾病的发生2.有关，在患者体内这一生化途径的抑制具有治疗意义。有关，在患者体内这一生化途径的抑制具有治疗意义。2.这种酶抑制剂必须具有特异性，在治疗剂量内不对其它代谢途这种酶抑制剂必须具有特异性，在治疗剂量内不对其它代谢途径或受体发生抑制作用。径或受体发生抑制作用。3.这种抑制剂应具有某种药动学特征，如可被吸收并渗透到作这种抑制剂应具有某种药动学特征，如可被吸收并渗透到作用部位和具有合理，可预见的量效关系及作用持续时间。用部位和具有合理，可预见的量效关系及作用持续时间。4.抑制剂对人体毒性较小，疗效指数高。抑制剂对人体毒性较小，疗效指数高。5.抑制剂应符合药品标准。工艺、质量与价格在临床上与市场抑制剂应符合药品标准。工艺、质量与价格在临床上与市场上具有竞争性。上具有竞争性。一种酶抑制剂要成为应用于临床的有效药物应具备以下条件95（四）细胞生长调节因子（四）细胞生长调节因子细胞生长调节因子系在体内和体外对效应细胞的生细胞生长调节因子系在体内和体外对效应细胞的生长、增殖和分化起调控作用的一类生理活性物质，其中长、增殖和分化起调控作用的一类生理活性物质，其中大多数是蛋白质或多肽，亦有非蛋白质物质。大多数是蛋白质或多肽，亦有非蛋白质物质。许多生长因子在靶细胞上有特异性受体，它们是一许多生长因子在靶细胞上有特异性受体，它们是一类分泌性、可溶性介质，仅微量就具有生物活性。类分泌性、可溶性介质，仅微量就具有生物活性。（四）细胞生长调节因子 细胞生长调节因子系在体96细胞生长调节因子分为：细胞生长调节因子分为：1.细胞生长刺激因子类：细胞生长刺激因子类：如：促红细胞生长因子与集落细胞刺激因子等造血细胞生长因子和表皮生长因子、纤维细胞生长因子、神经生长因子、白细胞介素118、骨生长因子等。2.细胞生长抑制因子类：细胞生长抑制因