血液成分分离基本知识

血液成分分离基本知识血液成分分离机的应用主要内容一、血液成分分离相关基础知识简介二、血液成分分离方法三、血液成分分离方法相关技术简介一、血液成分分离相关基础知识简介血站的职能血站是指不以营利为目的，采集、提供临床用血的且经国家授权、由国家拨款运行的公益性卫生机构。血站成分科的职责负责制备各种成分的血液制品。血液制品的分类血液制品全血 成分血红细胞类病院体灭火血浆浓缩血小板新鲜冰冻血浆冷凝沉淀凝血因子辐照成分血单采成分浓缩红细胞悬浮红细胞浓缩少白细胞红细胞悬浮少白细胞红细胞洗涤红细胞冰冻解冻去甘油红细胞单采血小板单采少白细胞血小板单采粒细胞单采新鲜冰冻血浆单采红细胞成分科分离的血液制品血液制品全血 成分血红细胞类病原体灭火血浆浓缩血小板新鲜冰冻血浆冷凝沉淀凝血因子辐照成分血单采成分浓缩红细胞悬浮红细胞浓缩少白细胞红细胞悬浮少白细胞红细胞洗涤红细胞冰冻解冻去甘油红细胞单采血小板单采少白细胞血小板单采粒细胞单采新鲜冰冻血浆单采红细胞浓缩红细胞 将采集到多联袋内的全血中大部分血浆在全封闭的条件下分离出后剩余的部分所制成的红细胞成分血。1.制备方法：（1）原料全血的要求：有效保存期内的全血均可，建议采血后68小时内内制备。（2）塑料袋要求：双联袋、三联袋均可。（3）联袋全血平衡后对称装入离心机中。（4）离心条件设置：5000g，7min,温度26，刹车56min。（5）离心后的血液应轻轻拿出，放入分浆夹内或用虹吸方式将血浆分出。2.浓缩红细胞的特点：（1）体积大约是全血的一半左右；（2）血细胞比容0.650.80；（3）红细胞含量几乎和全血相同；（4）白细胞的含量也和全血基本相同；3.用途：（1）一般用于各种血容量正常的贫血病人；（2）急性出血或手术病人失血低于1500ml者；（3）心肝肾功能不全者；（4）小儿或老人输血；（5）妊娠晚期伴有贫血者和一氧化碳中毒者等。4.输入剂量及方法：对于一个60公斤体重的成年人，每输入2个单位浓缩红细胞（每单位由200ml全血制备）可以提高血红蛋白10g/L。输注前需交叉配血，必要时可用生理盐水稀释后输注。悬浮红细胞也称为红细胞悬液，是全血经离心除去大部分血浆后，加入红细胞保存液制备而成。是目前临床上用量最大的一种红细胞制剂。1.制备方法基本与浓缩红细胞相同，只是最后血浆分出后，将红细胞添加剂加入到浓缩红细胞袋中并混匀。2.悬浮红细胞的特点：（1）血细胞比容0.500.65；（2）红细胞含量和浓缩红细胞相同；（3）白细胞的含量也和浓缩红细胞基本相同；（4）它是在浓缩红细胞的基础上加入红细胞添加液,降低了红细胞的粘稠度使输注时更加顺利,全部操作在密闭条件下完成。3.用途：与浓缩红细胞相同。4.输入剂量及方法：与浓缩红细胞相同。悬浮少白细胞红细胞1.制备方法：（1）离心去白膜法：先按制备浓缩红细胞的程序离心，然后将红细胞与血浆交界处的白膜层与血浆一起挤出。（2）过滤法：过滤的方式基本上分为以下三种：一个是血液采集后24小时内过滤，我们称为贮存前过滤；另一个是血液输注前先过滤；第三种是在输血时过滤；后两种都可以称为保存后过滤。（研究数据表明最好的过滤时机应该是血液贮存前，它不但可以减除白细胞的数量，还可以防止由于细胞因子和炎性因子应起的发热反应。）2.少白细胞红细胞的特点：它是在浓缩红细胞或悬浮红细胞的基础上去除绝大部分的白细胞从而降低了由白细胞引起的免疫性输血反应和疾病的传播。用过滤法制备的少白细胞红细胞残存白细胞数量2.5106/200ml全血。3.用途：（1）该成分适用于各类需要输注红细胞的病人；（2）特别适合于已有白细胞抗体的病人、骨髓移植和器官移植的病人洗涤红细胞1.洗涤红细胞的特点：洗涤红细胞是在少白细胞红细胞的基础上用无菌生理盐水反复洗涤三遍以上制备而成。经过洗涤的红细胞去除了80以上的白细胞和98的血浆蛋白，也去除了大量的细胞碎屑、代谢产物、抗凝剂、乳酸盐、钾、氨和微聚物，同时也损失了大约20以上的红细胞。2.适应证：（1）该成分适用于各类需要输注红细胞的病人；（2）更适合于对血浆蛋白有严重过敏反应的病人；（3）自身免疫性溶血性贫血；（4）阵发性血红蛋白尿；（5）高血钾症及肝肾功能障碍者以及新生儿换血等。3.注意事项：（1）开放制备的洗涤红细胞应在制备后24小时内输注。（2）由于该成分内已基本不含抗A抗B抗体，输注前可只做主侧配血。（3）输注剂量要比浓缩红细胞增加30左右。冰冻解冻去甘油红细胞红细胞加入甘油保护剂后，在80或196低温条件下保存，最长保存期可达10年。使用前将贮存的红细胞放在37水浴中解冻,然后洗净甘油，再用生理盐水悬浮，24小时内输注。该成分主要用于稀有血型血液的贮存也可用于自体血液的长期贮存。该成分内也基本不含抗A抗B抗体，输注前可只做主侧配血。在输注剂量上应考虑到红细胞损失部分。浓缩血小板1.制备方法：先使用多联采血袋采集全血,然后68小时内在2024的条件下，用大容量的离心机将血小板分离出，并悬浮在血浆内制成浓缩血小板。200ml全血制备的血小板含量是2.01010，容量为2535ml。2.用途：浓缩血小板在临床上主要用于止血或预防出血。血小板数量减少如：白血病、再生障碍性贫血、恶性肿瘤、特发性血小板减少性紫癜、多发性骨髓瘤、感染、化疗或放疗后、大量输注库存血等；血小板功能障碍而如：血小板无力症、药物（阿斯匹林类）、白血病、DIC、尿毒症、发热、感染以及创伤和手术病人等。3.注意事项：患有血栓性血小板减少性紫癜（TTP）患者不易输血小板。血小板在输注时无需交叉配血,要求ABO血型相同输注。新鲜冰冻血浆（FFP）1.制备方法：血液采集后68小时内将血浆分离出，并在-30以下，用具有风冷装置的速冻冰箱或在酒精浴中速冻而制成，也可用-196液氮快速冻结。2.特点：FFP中几乎含有血浆中的全部蛋白成分和凝血因子,包括不稳定的第V因子和第因子。未经特殊处理的血浆中还含有各种抗体和一些致病物质，如肝炎病毒。1ml新鲜正常人血浆大约含有1单位的凝血因子活性。新鲜冰冻血浆在-18以下可以保存1年。3.用途：它主要用于各种凝血因子缺乏引起的出血，同时需要补充血容量或血浆蛋白的患者：肝衰竭伴获得性凝血障碍者；肝移植；口服香豆素类药物过量引起出血者；抗凝血酶III缺乏；血栓性血小板减少性紫癜（TTP）；免疫缺陷综合征等。4.血浆输注剂量:每公斤体重1015ml,可使大多数凝血因子提高到正常人的25以上，并可达到止血效果，剂量过大可造成循环超负荷。输注速度一般不超过10ml/min。5.注意事项：应按ABO血型相容原则输注，不需做交叉配血。普通冰冻血浆新鲜冰冻血浆保存一年以上，或制备新鲜冰冻血浆冷沉淀后所剩余的血浆以及全血在有效期内分离出的血浆统称为普通血浆。它主要特点是缺乏凝血因子V和凝血因子。可以在-18以下继续保存5年。普通冰冻血浆主要用于凝血因子V和凝血因子以外的凝血因子缺乏的患者。输成分血的好处输成分血有以下几点好处：1.对病情需要选择，缺什么输什么，提高治疗效果。如：贫血输红细胞，粒细胞缺乏输粒细胞、血小板减少输浓缩血小板，烧伤患者输血浆等。2.减少输血不良反应，提高输血安全性。因为输入不需要的血液成分不仅是浪费，而且可引发输血不良反应。3.便于保存，使用方便。不同的血液成分可以有不同的保存方式，长期的如新鲜冰冻血浆、冷沉淀物可以保存1年；短期的如血小板在22C震荡箱内保存35天随时可用。4.一血多用，节省血源。血液来自健康人的无私贡献，是宝贵的资源，将一袋血分成各种成分就可派多种用途，治疗多个患者。如某市每年献血35万单位，而制成成分血即有70100万单位。5.减少输血传染病。由于血液中一些致病因子多藏在白细胞、冷沉淀和凝血因子等制品中，大多数输血患者并不需要这些成分。二、血液成分分离的方法血液成分分离的方法全血全血分层血浆红细胞血小板白细胞离心机分浆夹/血液成分分离机多联袋多联袋血液成分分离机三联袋血分离流程示意图三联袋血分离流程示意图XXXXXXX离心分血浆保养液到原袋XXX四联袋血成分分离四联袋血成分分离XXXXX离心分血浆清洗白膜XXXXXXXXXXXX将保养液挤回母袋X多联袋血-红细胞和冰冻血浆的制备1）第1次重离心后将尽可能多的血浆转移至转移袋；2）将红细胞保存液袋内的红细胞保存液转移至红细胞袋，充分混合即为悬浮红细胞；3）核对血袋上的献血条形码，如一致则热合断离，生成1袋悬浮红细胞和1袋血浆；4）血浆红细胞混入量少（目视观察）即可将血浆袋热合断离；5）如血浆红细胞混入量较多，应当经过第2次重离心后，把上清血浆转移至已移空的红细胞保存液袋，热合断离（如欲制备冷沉淀，则不热合断离）；6）将血浆速冻，低温保存。红细胞和冰冻血浆的制备全血红细胞悬浮红细胞冰冻血浆重离心成分分离机或分浆夹成分分离保养液加保养液血浆目视红细胞较少，速冻目视红细胞较多，重离心红细胞沉淀丢弃(保养液空袋)成分分离血浆冰冻血浆速冻红细胞、浓缩血小板和冰冻血浆的制备富血小板血浆法富血小板血浆法1）第1次轻离心(280g)后将富含血小板血浆转移至转移袋；2）将红细胞保存液袋内的红细胞保存液保存液转移至红细胞袋；3）核对血袋上的献血条形码，如一致则热合断离，生成1袋悬浮红细胞和1袋富血小板血浆；4）将富含血小板血浆袋重离心（2100g），上清为血浆，沉淀物为血小板；5）留取适量血浆，将多余的血浆转移至已经移空的红细胞保存液袋，热合断离，生成1袋浓缩血小板和1袋血浆；6）将血浆袋速冻，低温保存；7）将浓缩血小板袋在室温静置12小时，待自然解聚后，轻轻均匀血袋，制成浓缩血小板混悬液，在222的环境下振荡保存。红细胞、浓缩血小板和冰冻血浆的制备富血小板血浆法富血小板血浆法全血红细胞悬浮红细胞轻离心成分分离机或分浆夹成分分离保养液加保养液重离心富血小板血浆上层血浆，下层血小板沉淀血浆(保养液空袋)冰冻血浆低温保存速冻浓缩血小板大部分血浆少量血浆+血小板成分分离浓缩血小板悬浮液室温静置12小时，自然解聚222的环境下振荡保存红细胞、浓缩血小板和冰冻血浆的制备红细胞、浓缩血小板和冰冻血浆的制备白膜法白膜法1）第1次重离心后，将血浆转移至第1个转移袋，将适量血浆及白膜层转移至第2个转移袋；2）将红细胞保存液袋内的红细胞保存液转移至红细胞袋，充分混合即为悬浮红细胞；3）核对血袋上的献血条形码，如一致则热合断离悬浮红细胞袋和血浆袋；4）将白膜成分袋和1个空袋一起进行轻离心，将富含血小板血浆（上层）转移至空袋，制成浓缩血小板，热合断离，弃去白细胞袋。红细胞、浓缩血小板和冰冻血浆的制备红细胞、浓缩血小板和冰冻血浆的制备白膜法白膜法全血红细胞悬浮红细胞重离心成分分离机或分浆夹成分分离富血小板血浆上层血浆，下层血小板沉淀白膜保养液加保养液轻离心富血小板血浆血浆(保养液空袋)冰冻血浆低温保存速冻浓缩血小板大部分血浆少量血浆+血小板成分分离浓缩血小板悬浮液室温静置12小时，自然解聚222的环境下振荡保存丢弃三、相关技术简介冷沉淀凝血因子制备离心法取出待制备冷沉淀的新鲜冰冻血浆，置42冰箱中过夜融化或在42水浴装置中融化。当血浆基本融化时，取出血浆，在42的环境下重离心。将大部分上层血浆移至空袋，制成冰冻血浆。将留下的2030ml血浆与沉淀物混合，制成冷沉淀凝血因子。冷沉淀凝血因子制备虹吸法将新鲜冰冻血浆袋置于42水浴装置中，另一空袋悬于水浴箱外，位置低于血浆袋，两袋之间形成一定的高度落差。血浆融化后，随时被虹吸至空袋中，当融化至剩下4050ml血浆与沉淀物时，闭合导管，阻断虹吸。将血浆与沉淀物混合，制成冷沉淀凝血因子。将冰冻血浆袋和冷沉淀凝血因子袋热合断离。虹吸洗涤红细胞制备待用洗涤溶液联袋提前放置冷藏保存，无破损渗漏，溶液外观正常，在有效期内。将合格的红细胞悬液用作制备洗涤红细胞悬液的起始血液，无破损渗漏，血液外观正常，在有效期内。使用无菌接合机将待洗涤的红细胞悬液袋导管和洗涤溶液联袋进行无菌接合连通。将洗涤溶液移至红细胞袋内，液体量约为100ml/单位，夹紧导管，混匀。按照制备红细胞的离心程序进行离心操作。离心后将血袋取出，避免震荡，垂直放入分浆夹中，把上清液转移至空袋内，夹紧导管。重复步骤，洗涤3次。将适量（50ml/单位）保存液（生理盐水或红细胞保存液）移入已完成洗涤的红细胞，混匀。热合，贴签，入库。如果是在开放环境制备，应严格遵从无菌操作。如果在开放环境制备或最后以生理盐水混悬，洗涤红细胞保存期为24小时。如果是在闭合无菌环境中制备且最后以红细胞保存液混悬，洗涤红细胞保存期与洗涤前的红细胞悬液相同。去除白细胞使用白细胞过滤技术去除全血或红细胞悬液中的白细胞。根据白细胞过滤器生产方说明书的要求进行过滤操作。应当在密闭环境（使用白细胞过滤多联血袋或无菌接合技术）制备。应当在采血后2天内（采血次日为第1天）完成白细胞过滤。检查待滤过血液的外观，并充分混匀后进行过滤。如果在进行白细胞过滤操作前，血液已经处于保存温度（42），需要在室温进行过滤时，室温应26，而且应当尽快放回至既定保存温度的环境中，从取出到放回的时间应3小时。如果在白细胞过滤后，将血液转移至不属于原联体血袋的其他血袋，应当建立与实施标识控制机制，保证过滤后血液的正确标识。去除白细胞冰冻红细胞红细胞甘油化红细胞甘油化取拟冰冻保存的全血或悬浮红细胞，离心去除上清液，用无菌接合技术将红细胞转移至容量适当的、适宜于冰冻保存的转移袋内。在无菌条件下，缓慢滴加复方甘油溶液至红细胞袋内，边加边振荡，使其充分混匀。在室温中静置平衡30min，置-65以下保存。冰冻红细胞的解冻冰冻红细胞的解冻从低温冷冻保存箱中取出冰冻红细胞，立即放入3740恒温水浴箱中，轻轻振动使其快速融化，直至冰冻红细胞完全解冻。洗涤除去甘油洗涤除去甘油将专用洗涤盐液袋与解冻红细胞袋无菌接合，采取渗透压梯度递减方法洗涤。最后1次的洗涤上清液应无明显溶血迹象。使用自动化设备制备冰冻和解冻红细胞时，按照设备使用说明书进行操作。血浆病毒灭活亚甲蓝光化学法亚甲蓝光化学法根据设备操作说明书设置医用血浆病毒灭活光照柜的参数。根据血浆的规格选择相应病毒灭活血袋。用无菌导管连接设备或百级净化台内按无菌操作技术将血浆袋与病毒灭活血袋连接。将血袋悬挂于支架上，打开导管夹，使血浆经“亚甲蓝添加元件”，流入光照袋。在医用血浆病毒灭活光照柜中进行光照。光照处理后的血浆经病毒灭活装置配套用输血过滤器过滤，滤除亚甲蓝和绝大部分白细胞，即得病毒灭活血浆。血浆病毒灭活亚甲蓝光化学法亚甲蓝光化学法血液辐照辐照室应符合电离辐射防护与辐射源安全基本标准的要求。按照辐照仪使用说明书设置辐照参数。血液辐照最低剂量为25Gy，血液任何位点的辐照剂量不宜超过50Gy。红细胞在采集后14天内可辐照，辐照后可再储存14天。血小板在保存期内均可辐照，辐照后可保存至从采集算起的正常保存期限。粒细胞宜在采集后尽快辐照，辐照后宜尽快输注。在辐照过程中应严格区分未辐照和已辐照血液的标识。冰冻解冻去甘油红细胞和血浆不需辐照处理。谢谢！