血液一般检验-血涂片制备和染色

第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 第二章 血液一般检验第一节第一节第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 血涂片制备和染色血涂片制备和染色第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 本本 节节 内内 容容 一一.血涂片制备血涂片制备 载玻片要求载玻片要求 血涂片制备方法血涂片制备方法 方法学评价方法学评价 质量保证质量保证 二二.血涂片染色血涂片染色 染料染料 染色方法染色方法 方法学评价方法学评价 质量保证质量保证 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 一一.血涂片的制血涂片的制备备 载玻片的要求载玻片的要求 新玻片上有新玻片上有游离碱质游离碱质，须清洗后使用。，须清洗后使用。使用时切勿用手触及玻片表面。使用时切勿用手触及玻片表面。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 血涂片的制备方法血涂片的制备方法 薄血膜推片法薄血膜推片法 制制 手工涂片法手工涂片法 备备 方方 法法 自动涂片法自动涂片法 厚血膜涂片法厚血膜涂片法 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 手工薄血涂片法手工薄血涂片法 取取EDTAEDTA抗凝血抗凝血 滴血约滴血约推片推片 干燥干燥 50l50l 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 两玻片的角度以两玻片的角度以 30-4530-45为宜，轻轻将双凹片向为宜，轻轻将双凹片向前匀速推进，即涂成血液薄膜。前匀速推进，即涂成血液薄膜。3045 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 血涂片血涂片 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 手工厚血涂片法手工厚血涂片法 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 全自动推片染片机全自动推片染片机 根据根据HCTHCT可以设定可以设定8 8个水平的推片方案个水平的推片方案 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 血涂片制备的方法学评价血涂片制备的方法学评价 方法方法 薄血膜推片法薄血膜推片法 评价评价 用血量少、操作简单，临床应用最广，主要用于观察血细用血量少、操作简单，临床应用最广，主要用于观察血细胞形态及仪器法检测结果异常时的复查胞形态及仪器法检测结果异常时的复查。某些抗凝剂可使。某些抗凝剂可使血细胞形态发生变化，分类时应注意鉴别。白细胞减低患血细胞形态发生变化，分类时应注意鉴别。白细胞减低患者的标本经离心后取棕黄层（有核细胞和血小板集中层）者的标本经离心后取棕黄层（有核细胞和血小板集中层）涂片，可提高异常细胞的阳性检出率。涂片，可提高异常细胞的阳性检出率。对疟原虫、微丝蚴等的阳性检出率高。对疟原虫、微丝蚴等的阳性检出率高。厚血膜涂片法厚血膜涂片法 仪器自动涂片法仪器自动涂片法 血涂片中细胞分布均匀、形态完好，且推片与染色可和血血涂片中细胞分布均匀、形态完好，且推片与染色可和血液分析仪构成流水线作业，液分析仪构成流水线作业，适用于大批量标本的处理适用于大批量标本的处理。但。但需要较高的投入。需要较高的投入。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 血涂片制备的质量保证血涂片制备的质量保证 总体要求：总体要求：血膜由厚到薄逐渐过度血膜由厚到薄逐渐过度，应厚薄适宜，头、体、尾分明，应厚薄适宜，头、体、尾分明 良好血涂片的良好血涂片的“标准标准”血膜至少长血膜至少长25mm，至玻片两，至玻片两侧边缘的距离约为侧边缘的距离约为5mm。血膜边缘要比玻片边缘窄，且血膜边缘要比玻片边缘窄，且边缘光滑，适用于油镜检查。边缘光滑，适用于油镜检查。血细胞从厚区到薄区逐步均匀血细胞从厚区到薄区逐步均匀分布，末端呈方形或羽毛状。分布，末端呈方形或羽毛状。血膜末端无粒状、划线或裂隙。血膜末端无粒状、划线或裂隙。在镜检区域内，白细胞形态应在镜检区域内，白细胞形态应无人为异常改变。无人为异常改变。无人为污染。无人为污染。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 血涂片制备的质量保证血涂片制备的质量保证 疟原虫检查血涂片要求疟原虫检查血涂片要求 1）厚血膜：血量）厚血膜：血量4.05.0l，位于右，位于右1/3处，直径处，直径0.81.0cm，外出圆形厚薄，外出圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。2）薄血膜：血量）薄血膜：血量1.01.5l，位于，位于1/21/3处，外观舌状厚薄均匀，无划痕。处，外观舌状厚薄均匀，无划痕。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 血涂片制备操作要求血涂片制备操作要求 涂片前：载玻片中性、洁净、无油腻，边缘无破碎。涂片前：载玻片中性、洁净、无油腻，边缘无破碎。血液标本推荐用非抗凝静脉血或毛细管血，也可血液标本推荐用非抗凝静脉血或毛细管血，也可 用用EDTA抗凝静脉血。抗凝静脉血。标本采集后标本采集后4小时内制片。小时内制片。涂片中：控制好血滴量、推片速度和角度。涂片中：控制好血滴量、推片速度和角度。血滴越大、推片角度大、速度越快，血膜越厚血滴越大、推片角度大、速度越快，血膜越厚 涂片后：血涂片需及时干燥、固定，妥善保存涂片后：血涂片需及时干燥、固定，妥善保存。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 不良血涂片不良血涂片 刷尖，推片边缘不光滑刷尖，推片边缘不光滑 用力不均，厚薄不均用力不均，厚薄不均 血量多，血滴未展开血量多，血滴未展开 载玻片有油腻载玻片有油腻 角度大角度大,速度快速度快,太厚太厚,太短太短 血滴展开不均匀血滴展开不均匀 玻片中间未干燥玻片中间未干燥 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 血涂片质量问题及可能的原因血涂片质量问题及可能的原因 血涂片质量问题血涂片质量问题 有空泡（空洞）有空泡（空洞）血膜偏长或偏短血膜偏长或偏短 原因原因 载玻片被油脂污染载玻片被油脂污染 推片角度小、血滴未完全展开即开始推片推片角度小、血滴未完全展开即开始推片时血膜偏长；推片角度大、血滴太小时血时血膜偏长；推片角度大、血滴太小时血膜偏短膜偏短 血滴太大血滴太大 推片太宽或血滴展开太宽推片太宽或血滴展开太宽 血滴大、血液黏度高、推片角度大、推片血滴大、血液黏度高、推片角度大、推片速度快，血膜厚；相反则血膜偏薄速度快，血膜厚；相反则血膜偏薄 不规则的间断和尾部过长不规则的间断和尾部过长 推片污染、推片速度不均匀、载玻片污染推片污染、推片速度不均匀、载玻片污染 血膜无尾部血膜无尾部 两侧无空隙两侧无空隙 血膜偏厚或偏薄血膜偏厚或偏薄 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 二二.血涂片染色血涂片染色 染料染料 染料染料 性质性质 常见品种常见品种 亚甲蓝、天亚甲蓝、天青、苏木素青、苏木素 作用作用 细胞内的酸性成分结细胞内的酸性成分结合，用于细胞核染色合，用于细胞核染色 碱性染料碱性染料 阳离子染料阳离子染料 酸性染料酸性染料 阴离子染料阴离子染料 伊红伊红Y、伊红、伊红 与细胞内碱性成分结与细胞内碱性成分结B 合并染色合并染色 细胞染色后可获得红细胞染色后可获得红蓝分明、色泽艳丽的蓝分明、色泽艳丽的染色效果染色效果 复合染料复合染料 同时具有阴离同时具有阴离Wright染料染料子型、阳离子子型、阳离子、Giemsa型的染料型的染料 染料染料 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 染色方法染色方法 瑞氏染色法（瑞氏染色法（WrightWrights stains stain）吉姆萨染色法（吉姆萨染色法（GiemsaGiemsas stains stain）瑞氏瑞氏-吉姆萨复合染色法吉姆萨复合染色法 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 瑞氏染色法（瑞氏染色法（Wrights stainWrights stain）瑞氏染料瑞氏染料:酸性染料伊红酸性染料伊红和和碱性染料美蓝碱性染料美蓝组成组成的复合染料。的复合染料。瑞氏染液是瑞氏染料溶于瑞氏染液是瑞氏染料溶于 甲醇甲醇而成。而成。细胞染色原理：物理吸附作用；细胞染色原理：物理吸附作用；化学亲和作用。化学亲和作用。染色易受染色易受pHpH影响：偏酸环境染色偏红，偏碱影响：偏酸环境染色偏红，偏碱环境偏蓝。环境偏蓝。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 WrightWright染色血细胞着色的原理染色血细胞着色的原理 成分成分 着色原理着色原理 碱性物质碱性物质 与伊红结合染成红色，该物质称为嗜酸性物质，如血红蛋白及嗜酸性颗粒与伊红结合染成红色，该物质称为嗜酸性物质，如血红蛋白及嗜酸性颗粒等等 酸性物质酸性物质 与亚甲蓝结合而染成蓝紫色，该物质称为嗜碱性物质，如淋巴细胞胞质及与亚甲蓝结合而染成蓝紫色，该物质称为嗜碱性物质，如淋巴细胞胞质及嗜碱性颗粒等嗜碱性颗粒等 中性颗粒中性颗粒 呈等电状态，与伊红、亚甲蓝均结合，染成淡紫红色，该物质称为嗜中性呈等电状态，与伊红、亚甲蓝均结合，染成淡紫红色，该物质称为嗜中性物质物质 细胞核细胞核 主要由主要由DNA和碱性强的组蛋白等组成，后者与伊红结合染成红色，但因细和碱性强的组蛋白等组成，后者与伊红结合染成红色，但因细胞核中含有少量的弱酸性物质，与亚甲蓝作用染成蓝色，因含量太少胞核中含有少量的弱酸性物质，与亚甲蓝作用染成蓝色，因含量太少，蓝色反应极弱，故细胞核染成紫红色，蓝色反应极弱，故细胞核染成紫红色 原始红细胞和早幼红细胞胞质含有较多的酸性物质，与亚甲蓝亲和力强原始红细胞和早幼红细胞胞质含有较多的酸性物质，与亚甲蓝亲和力强，故染成较浓厚的蓝色，故染成较浓厚的蓝色 晚幼红细胞和晚幼红细胞和Ret含有酸性物质和碱性物质，可同时与亚甲蓝和伊红结含有酸性物质和碱性物质，可同时与亚甲蓝和伊红结合，故染成红蓝色或灰红色合，故染成红蓝色或灰红色 成熟红细胞的酸性物质完全消失，只与伊红结合，染成橙红色成熟红细胞的酸性物质完全消失，只与伊红结合，染成橙红色 红细胞红细胞 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 WrightWright染色步骤染色步骤 用蜡笔在已干的血膜两端划线。用蜡笔在已干的血膜两端划线。瑞氏染液瑞氏染液2 25 5滴，染滴，染 0.5 0.51min1min。加等量或稍多的缓冲液，混匀，染加等量或稍多的缓冲液，混匀，染101015min15min。流水冲去染液，干后镜检。流水冲去染液，干后镜检。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 WrightWright染色法染色结果染色法染色结果 正常血膜外观为淡紫红色。正常血膜外观为淡紫红色。镜下镜下RBCRBC和嗜酸性颗粒染粉红色，嗜碱性颗粒染紫和嗜酸性颗粒染粉红色，嗜碱性颗粒染紫黑色，中性颗粒染淡紫红色，细胞核染紫红色。黑色，中性颗粒染淡紫红色，细胞核染紫红色。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 WrightWright染色法质量保证染色法质量保证 血涂片的染色效果与血涂片中细胞数量血涂片的染色效果与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染液质量、染色时间、染液、血膜厚度、染液质量、染色时间、染液浓度、浓度、pHpH等密切相关等密切相关，在染色的全过程（，在染色的全过程（前、中、后）均需严格按要求操作，否则前、中、后）均需严格按要求操作，否则将导致染色效果不佳。将导致染色效果不佳。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 WrightWright染色法质量保证染色法质量保证-染色前染色前 血涂片：血涂片血涂片：血涂片 血膜厚度、细胞数量血膜厚度、细胞数量 要恰当。要恰当。血膜彻底干透后方可染色。血膜彻底干透后方可染色。涂片后涂片后1 1小时内染色小时内染色。染液质量染液质量：染液放置时间越久，亚甲蓝转变为：染液放置时间越久，亚甲蓝转变为 天青天青B B越多，染色效果越好。越多，染色效果越好。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 WrightWright染色法质量保证染色法质量保证-染色中染色中 项目项目 时间与浓度时间与浓度 染色过程染色过程 质量保证质量保证 染液浓度低、室温低、细胞多、有核细胞多，则染色时间要长；反之，则染染液浓度低、室温低、细胞多、有核细胞多，则染色时间要长；反之，则染色时间要相应短。色时间要相应短。血涂片应水平放置；染液不能过少，以免蒸发后染料沉淀，不易冲洗掉，使血涂片应水平放置；染液不能过少，以免蒸发后染料沉淀，不易冲洗掉，使细胞深染或胞浆中有大量碱性颗粒出现；加染料后可用洗耳球轻吹，让染细胞深染或胞浆中有大量碱性颗粒出现；加染料后可用洗耳球轻吹，让染液覆盖全部血膜；加缓冲液后要让缓冲液和染液充分混匀，两者比例约为液覆盖全部血膜；加缓冲液后要让缓冲液和染液充分混匀，两者比例约为（11.5）:1 pHpH值值 冲洗染液冲洗染液 偏酸或偏碱均可导致染色效果不佳偏酸或偏碱均可导致染色效果不佳 应用流水将染液与缓冲液冲去，而不能先倒掉染液后再用流水冲洗，以免应用流水将染液与缓冲液冲去，而不能先倒掉染液后再用流水冲洗，以免染料沉着于血涂片上，干扰检查染料沉着于血涂片上，干扰检查 水流不宜太快，水压不宜太高，避免水流垂直冲到血膜上，而导致血膜脱水流不宜太快，水压不宜太高，避免水流垂直冲到血膜上，而导致血膜脱落落 冲洗时间不宜过长，以免脱色冲洗时间不宜过长，以免脱色 冲洗后的血涂片应立即立于玻片架上，防止血涂片被剩余水分浸泡脱色冲洗后的血涂片应立即立于玻片架上，防止血涂片被剩余水分浸泡脱色 若见血膜上有染料颗粒沉积，用甲醇或若见血膜上有染料颗粒沉积，用甲醇或WrightWright染液溶解，但应立即用水冲染液溶解，但应立即用水冲洗洗 脱色与复染脱色与复染 染色过深：可用甲醇或染色过深：可用甲醇或 WrightWright染液适当脱色，也可用清水冲洗一定时间；染液适当脱色，也可用清水冲洗一定时间；染色过浅：可以复染，染色过浅：可以复染，复染时应先加缓冲液，后加染液，或加染液与缓冲复染时应先加缓冲液，后加染液，或加染液与缓冲液的混合液，不可先加染液液的混合液，不可先加染液 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 WrightWright染色法质量保证染色法质量保证-染色后染色后 血涂片染色良好特征血涂片染色良好特征 评价方式评价方式 肉眼观察 染色良好特征染色良好特征 血膜外观为淡紫红色 显微镜观察 细胞分布均匀，血细胞无人为形态改变，红细 胞呈淡粉红色，白细胞胞质能显示各自特有的 色彩，白细胞核呈红色或紫红色，核染色质清 晰可见，细胞内外无或少见染料沉着 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 血涂片染色不佳的原因及纠正措施血涂片染色不佳的原因及纠正措施 染色效果染色效果 原因原因 纠正措施纠正措施 染色偏蓝染色偏蓝 血膜偏厚、染色时间长、冲洗用水血膜偏厚、染色时间长、冲洗用水的的pHpH过高、冲洗时间过短、稀释染过高、冲洗时间过短、稀释染液未用缓冲液、贮存的染液暴露于液未用缓冲液、贮存的染液暴露于阳光下阳光下 染色偏红染色偏红 储存染液质量不佳、冲洗时间过长储存染液质量不佳、冲洗时间过长、冲洗用水的、冲洗用水的pHpH过低、血涂片干燥过低、血涂片干燥前加封片前加封片 染色偏浅染色偏浅 染色时间偏短、冲洗时间过长染色时间偏短、冲洗时间过长 染料沉积染料沉积 染料沉淀、染料陈旧、甲醇浓度偏染料沉淀、染料陈旧、甲醇浓度偏低、染液未过滤、涂片被污染、温低、染液未过滤、涂片被污染、温度较高度较高 蓝色背景蓝色背景 固定不当、血涂片未固定而储存过固定不当、血涂片未固定而储存过久、使用肝素抗凝剂久、使用肝素抗凝剂 用含用含1%硼酸的硼酸的95%乙醇溶液乙醇溶液冲洗冲洗2次，再用中性蒸馏水冲次，再用中性蒸馏水冲洗，待干后镜检洗，待干后镜检 规范操作，使用中性蒸馏水规范操作，使用中性蒸馏水，保证染液质量，保证染液质量 复染复染 用甲醇冲洗用甲醇冲洗2次，并立即用水次，并立即用水冲掉甲醇，持干后复染冲掉甲醇，持干后复染 注意血涂片的固定，使用注意血涂片的固定，使用EDTA抗凝剂抗凝剂 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 GiemsaGiemsa染色法染色法 染色原理染色原理：与Wright染色法基本相同，Giemsa染色法加强了天青的作用，提高了噻加强了天青的作用，提高了噻嗪类染料的效果嗪类染料的效果。试剂试剂：Giemsa染料1.0g;甘油66 ml;甲醇66ml。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 染色染色：1 1）标记血涂片：用蜡笔在的血涂片一端编号。）标记血涂片：用蜡笔在的血涂片一端编号。2 2）固定血膜：用甲醇固定）固定血膜：用甲醇固定 3 35 5分钟。分钟。3 3）血膜染色：将固定的血涂片置于被）血膜染色：将固定的血涂片置于被 pH6.4pH6.46.86.8磷酸盐缓冲液稀释磷酸盐缓冲液稀释 10102020倍的倍的GiemsaGiemsa染液中，染液中，浸染浸染10103030分钟，取出后用流水冲洗，干燥后备用。分钟，取出后用流水冲洗，干燥后备用。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 Wright-GiemsaWright-Giemsa染色法染色法 在Wright染色过程中，以稀释以稀释GiemsaGiemsa染液染液代替缓冲液，或先用代替缓冲液，或先用WrightWright染色法染色后，染色法染色后，再用稀释的再用稀释的GiemsaGiemsa染液复染染液复染，或者在Wright染液配方的基础上，每1.0g Wright染料添加0.3g Giemsa染料，染色步骤同Wright染色法。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 血涂片染色的方法学评价血涂片染色的方法学评价 方法方法 评价评价 WrightWright染色法染色法 最常用的染色方法，染色时间短，对胞最常用的染色方法，染色时间短，对胞质成分及中性颗粒等染色效果好质成分及中性颗粒等染色效果好，但对，但对胞核的染色不如胞核的染色不如GiemsaGiemsa染色法染色法 GiemsaGiemsa染色法染色法 染色过程易控制，不易被污染，染色过程易控制，不易被污染，对胞核对胞核和寄生虫等着色较好，结构更清晰和寄生虫等着色较好，结构更清晰，而，而胞质和中性颗粒着色较差，染色保存时胞质和中性颗粒着色较差，染色保存时间久，但染色时间长，价格高。间久，但染色时间长，价格高。Wright-Wright-对胞质、颗粒、胞核均着色鲜艳，对比对胞质、颗粒、胞核均着色鲜艳，对比GiemsaGiemsa染色法染色法 鲜明，鲜明，但此法染液变性快、易污染，为但此法染液变性快、易污染，为临床一般检验次选方法临床一般检验次选方法 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 第二节第二节 改良牛鲍血细胞改良牛鲍血细胞计数板的结构和使用计数板的结构和使用 本本 节节 内内 容容 一一.计数板结构计数板结构 结构结构 区域划分区域划分 二二.计数板使用计数板使用 使用使用 计数顺序与原则计数顺序与原则质量保证质量保证 评价评价 考核方法考核方法 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 一、改良一、改良NeubauerNeubauer计数板结构计数板结构 计数板上下各一个计数池计数板上下各一个计数池 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 计数板结构区域划分计数板结构区域划分 1mm 1mm 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 二、计数板使用二、计数板使用 准备计数扳准备计数扳 稀释血液稀释血液 充液充液 静置静置 显微镜计数显微镜计数 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 计数顺序与原则计数顺序与原则 计数顺序计数顺序 计数原则计数原则 “数上不数下，数左不数右数上不数下，数左不数右”第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 计数板使用质量保证计数板使用质量保证 1 1计数板计数板 （1 1）计数板合格性鉴定）计数板合格性鉴定 鉴定周期：每隔鉴定周期：每隔1 1年，要求计数室的玻面光滑、透明、年，要求计数室的玻面光滑、透明、划线清晰，划线面积准确。划线清晰，划线面积准确。1 1）盖玻片检查：）盖玻片检查：包括厚度和平整度，要求盖玻片应具有包括厚度和平整度，要求盖玻片应具有一定的重量，平整、光滑、无裂痕，厚薄均匀一致。一定的重量，平整、光滑、无裂痕，厚薄均匀一致。2 2）计数室深度：）计数室深度：高度误差应在高度误差应在2%2%（2m2m）以内。）以内。3 3）计数室划线：）计数室划线：每个大方格边长的误差应小于每个大方格边长的误差应小于1%1%。1计数板 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 计数板使用质量保证计数板使用质量保证 （2 2）保证计数板和盖玻片清洁）保证计数板和盖玻片清洁：防止计数板污染，致使：防止计数板污染，致使充液时产生气泡。如使用血液充液，计数板和盖玻片使用充液时产生气泡。如使用血液充液，计数板和盖玻片使用后应依次用后应依次用95%95%（V/VV/V）乙醇、蒸馏水棉球擦拭，最后用清）乙醇、蒸馏水棉球擦拭，最后用清洁纱布手揩净。洁纱布手揩净。（3 3）加盖玻片）加盖玻片：WHOWHO推荐采用推式法，以保证充液的高度推荐采用推式法，以保证充液的高度 为为0.10mm0.10mm。当盖玻片盖在计数板上时，若两层玻璃之间见。当盖玻片盖在计数板上时，若两层玻璃之间见 到彩色条带（到彩色条带（NewtonNewton环），说明计数板和盖玻片清洁良好。环），说明计数板和盖玻片清洁良好。1计数板 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 计数板使用质量保证计数板使用质量保证 2 2充液充液 （1 1）平放计数板。）平放计数板。充液前应适当用力、快速振荡细胞悬充液前应适当用力、快速振荡细胞悬 液液3030秒，使其充分混匀秒，使其充分混匀，但不能产生过多气泡，以免影响，但不能产生过多气泡，以免影响 充液和准确计数，也要防止剧烈振荡以免破坏细胞。充液和准确计数，也要防止剧烈振荡以免破坏细胞。（2 2）一次完成充液一次完成充液，如充液过少、过多、有气泡或出，如充液过少、过多、有气泡或出 现任何碎片，应拭净计数板及盖玻片后重新操作。现任何碎片，应拭净计数板及盖玻片后重新操作。（3 3）充液后不能移动盖玻片充液后不能移动盖玻片。1计数板 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 计数板使用质量保证计数板使用质量保证 3 3静置计数板静置计数板 白细胞和红细胞计数一般需沉淀白细胞和红细胞计数一般需沉淀2 23 3分钟，血小板计分钟，血小板计数应沉淀数应沉淀10101515分钟，同时需注意保湿。分钟，同时需注意保湿。4 4计数计数 （1 1）如果细胞严重分布不均，应重新充液计数。如白细）如果细胞严重分布不均，应重新充液计数。如白细胞总数在正常范围内时，各大方格的细胞数不得相差胞总数在正常范围内时，各大方格的细胞数不得相差8 8个个以上。两次重复计数误差：以上。两次重复计数误差：白细胞不超过白细胞不超过10%10%，红细胞不，红细胞不超过超过5%5%。（2 2）计数原则）计数原则 计数细胞时应遵循计数原则，并注意与计数细胞时应遵循计数原则，并注意与非细胞成分相区别。非细胞成分相区别。1计数板 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 计数板使用质量保证计数板使用质量保证 5 5计数误差计数误差 （1 1）技术误差（）技术误差（technical errortechnical error）：由于操作不规范：由于操作不规范或使用器材不准确造成的误差称为技术误差。这类误差通或使用器材不准确造成的误差称为技术误差。这类误差通过主观努力可以避免或显著减小，属系统误差。过主观努力可以避免或显著减小，属系统误差。（2 2）固有误差（）固有误差（inherent errorinherent error）：包括计数域误差、：包括计数域误差、计数室误差和吸管误差。计数室误差和吸管误差。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 血细胞计数常见的技术误差与原因血细胞计数常见的技术误差与原因 校正后白细胞数/L?100?校正后白细胞数100?有核红细胞数第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 计数板使用质量保证计数板使用质量保证 1 1）计数域误差（）计数域误差（field errorfield error）：又称分布误差，属于：又称分布误差，属于偶然误差。根据统计学原理，血细胞在计数室内分布的不偶然误差。根据统计学原理，血细胞在计数室内分布的不均一性符合泊松分布：均一性符合泊松分布：s?m（m为细胞多次计数的均值）为细胞多次计数的均值）s1CV?100%?100%mm计数域误差变异系数（计数域误差变异系数（CVCV）与细胞计数的数量成反比，）与细胞计数的数量成反比，细胞细胞计数数量越多，计数范围越广，误差越小计数数量越多，计数范围越广，误差越小；反之，误差越大；反之，误差越大 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 计数板使用质量保证计数板使用质量保证 2 2）计数室误差和吸管误差）计数室误差和吸管误差：同一稀释血液采用多支吸管：同一稀释血液采用多支吸管稀释，在多个计数板内计数，较同一稀释液在同一计数板稀释，在多个计数板内计数，较同一稀释液在同一计数板进行多次计数所得的结果更接近真值。进行多次计数所得的结果更接近真值。以白细胞计数为例，固有误差总变异系数的计数公式为：以白细胞计数为例，固有误差总变异系数的计数公式为：1004.64.7CV?nbncnp222nb：计数的白细胞总数，nc：计数板使用次数，np：吸管使用次数 第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 计数板使用评价计数板使用评价 优优点：点：为为WHO推荐的参考方法推荐的参考方法，设备简单设备简单、费费用低用低廉、廉、简简便易行，在便易行，在严严格格规规范条件下，可用于校准血液范条件下，可用于校准血液分析分析仪仪及其及其结结果异常的复果异常的复查查，多次重复（，多次重复（10-20次）次）测测定的均定的均值值可作可作为为校正血校正血细细胞分析胞分析仪仪的参考的参考值值。适用。适用于日于日检测检测量少的基量少的基层层医医疗单疗单位和分散位和分散检测检测。缺点：缺点：费时费时，受吸血量和血，受吸血量和血细细胞胞计计数板的数板的质质量、量、细细胞分布状胞分布状态态以及以及检验检验人人员员技技术术水平等因素的影响，精水平等因素的影响，精密度密度较较低。低。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 计数板使用考核方法计数板使用考核方法 1两差比值法 随机抽取1份标本重复计数，该份标本在短时间内2次计数细胞数之差与2次计数细胞数之和的标准差平方根之比，即为两次比值两次比值。r?x1?x2x1?x2r:两差比值；1、2分别为两次数得的细胞数。质量得分=100-（r20.1）适用于适用于个人技术考核个人技术考核，也可用于，也可用于复查与评价结果的复查与评价结果的准确性及治疗效果准确性及治疗效果。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 计数板使用考核方法计数板使用考核方法 血细胞计数质量得分与评价血细胞计数质量得分与评价 质量得分质量得分 9090100 100 808089 89 707079 79 606069 69 质量等级质量等级 A A B B C C D D 意义意义 优优 良良 中中 及格及格 60 1.991.99，则，则2 2次结果有显著性次结果有显著性差异，故失分系数为（差异，故失分系数为（100-60100-60）/1.99=20.1/1.99=20.1。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 计数板使用考核方法计数板使用考核方法 2双份计数标准差评价法 采用多个标本，每个标本均作双份计数，用每个标本的双份计数之差计算标准差，然后求得变异系数及质量得分。x?x1?x22ns?x1?x2?22nscv%?100%xn:标本数；1、2分别为同一样本两次计数的细胞数。质量得分=100-（CV2）本法适用于个人技术考核及室间质量评价本法适用于个人技术考核及室间质量评价。第二章第二章 血液一般血液一般检验检验 总总 结结 1.1.血涂片制备的方法评价血涂片制备的方法评价 2.2.良好薄血膜涂片的标准？良好薄血膜涂片的标准？3.3.熟悉血涂片质量问题及可能的原因。熟悉血涂片质量问题及可能的原因。4.Wrights4.Wrights染液组成、染色的原理及质量控制？染液组成、染色的原理及质量控制？5.5.血细胞计数板结构及区域划分血细胞计数板结构及区域划分 6.6.血细胞计数板计数原则血细胞计数板计数原则 7.7.血细胞计数常见的技术误差与原因血细胞计数常见的技术误差与原因