小鼠胚胎操作ppt课件

无无忧忧PPTPPT整理整理发发布布小小鼠鼠胚胚胎胎操操作作苏铁18296252671小鼠胚胎操作苏铁18296252671小鼠发育须知的数据小鼠发育须知的数据小鼠发育须知的数据小鼠发育须知的数据 实验室用的一些欧洲家养小鼠的一些重要的统计数据实验室用的一些欧洲家养小鼠的一些重要的统计数据妊娠时间1920d断奶时间3周性成熟时间约6周大约的体重出生时：1g 断奶时：812g 成熟时：3040g（雄性雌性）实验室的寿命1.52.5年平均的窝仔数约68每个繁殖雌鼠所产的窝仔数48小鼠发育须知的数据 第一章第一章第一章第一章 小鼠发育概要小鼠发育概要小鼠发育概要小鼠发育概要1 1-细胞细胞合子合子桑葚胚桑葚胚416416细细胞胞2 2-细胞细胞胚胎胚胎桑葚胚桑葚胚 胚泡胚泡01dpc1dpc2dpc3dpc4dpc4.5dpc5dpc6dpc孵化胚孵化胚胎，无胎，无透明带透明带前原条前原条期期植入胚植入胚胎胎原始外原始外胚层中胚层中形成前形成前羊膜腔羊膜腔第一章 小鼠发育概要1-细胞合子桑葚胚416细胞2-细胞形成形形成形态明显态明显的胚胎的胚胎轴轴晚原条晚原条期期早早-中原中原条期条期1 177体体节节8 81212体体节，胚节，胚胎旋转胎旋转21212929体节体节13132020体节体节30303434体体节；后肢节；后肢芽在第芽在第23282328体体节段出现节段出现7dpc7.5dpc9.5dpc8.5dpc8dpc10dpc9dpc6.5dpc形成形态明显的胚胎轴晚原条期早-中原条期17体节812体9 910m10mmm，毛，毛基基12121414mmmm11111212mmmm14141717mmmm35353939体节，体节，尾基尾基6 67mm7mm，前肢，前肢板板40404444体节体节7 79mm9mm，后肢，后肢板板11.5dpc11.0dpc12dpc13dpc16dpc15dpc14dpc10.5dpc910mm，毛基1214mm1112mm1417mm17172020mmmm23272327mmmm1919.52.522.5mm2.5mm18dpc19dpc17dpc1720mm2327mm19.522.5mm18dpc第一节第一节第一节第一节 生殖细胞系的起源生殖细胞系的起源生殖细胞系的起源生殖细胞系的起源 PGC起源于临近前原条期胚胎表胚层区域1在在7.0dpc可以在原肠期的后羊膜褶区域检测到可以在原肠期的后羊膜褶区域检测到PGC 在在10.5dpc-11.5dpc，PGC到达生殖嵴到达生殖嵴 13.0dpc，每个生殖嵴原基中约有，每个生殖嵴原基中约有25000个个PGC 4235进入生殖嵴后，进入生殖嵴后，PGC继续发育，最终形成精子和卵子继续发育，最终形成精子和卵子第一节 生殖细胞系的起源 PGC起源于临近前原PGCPGCPGCPGC的大致迁移路径的大致迁移路径的大致迁移路径的大致迁移路径尿囊基部后肠上皮羊膜褶表胚层起源7.0dpc接下来8.0dpc8.0dpc11.0dpc11.0dpc生殖嵴睾丸卵巢12.5dpc雄性雌性PGC的大致迁移路径尿囊基部后肠上皮羊膜褶表胚层起源7.0d第二节第二节第二节第二节 精子发生精子发生精子发生精子发生1.精子发生的特点精子发生的特点 (1)精子发生是连续同步和空间有序分化的精子发生是连续同步和空间有序分化的 (2)精子发生依赖干细胞群体，这种干细胞群体精子发生依赖干细胞群体，这种干细胞群体 具有自我更新和产生后代为精子的能力具有自我更新和产生后代为精子的能力 (3)Y染色体在精子发生过程中，对性别决定起染色体在精子发生过程中，对性别决定起着着 十分重要的作用十分重要的作用第二节 精子发生1.精子发生的特点2 2.精子发生的过程精子发生的过程2.精子发生的过程第三节第三节第三节第三节 卵子发生卵子发生卵子发生卵子发生1.卵子发生的特点卵子发生的特点 (1)在第一次减数分裂前，卵母细胞会在双线在第一次减数分裂前，卵母细胞会在双线期停滞很长时间期停滞很长时间 (2)11.5dpc11.5dpc的卵母细胞中，只有一条染色体是的卵母细胞中，只有一条染色体是有活性的，但是到了有活性的，但是到了12.5dpc12.5dpc，两条都变得活跃，两条都变得活跃 (3)卵母细胞的基因组去甲基化程度高卵母细胞的基因组去甲基化程度高第三节 卵子发生1.卵子发生的特点2.2.卵子发生的过程卵子发生的过程2.卵子发生的过程第四节第四节第四节第四节 排卵排卵排卵排卵1.1.排卵的过程排卵的过程v少数卵泡在少数卵泡在FSHFSH的刺激下，积累液体，体积膨胀，向卵巢外的刺激下，积累液体，体积膨胀，向卵巢外周移动，为卵母细胞最后的成熟和排放做好准备周移动，为卵母细胞最后的成熟和排放做好准备v卵母细胞在卵母细胞在LHLH的刺激下，发生核的成熟，即：细胞核失去的刺激下，发生核的成熟，即：细胞核失去核膜，染色体组装在纺锤体中核膜，染色体组装在纺锤体中 ，向细胞外周移动，完成第，向细胞外周移动，完成第一次减数分裂一次减数分裂.第一次减数分裂后的阻滞时期，卵母细胞最终从卵泡中第一次减数分裂后的阻滞时期，卵母细胞最终从卵泡中排放出来，知道受精以后，才能刺激第二次减数分裂排放出来，知道受精以后，才能刺激第二次减数分裂第四节 排卵1.排卵的过程即将排除的卵子即将排除的卵子即将排除的卵子第五节第五节第五节第五节 受精受精受精受精1.1.精子的获能：精子进入输卵管壶腹部以后，经过一精子的获能：精子进入输卵管壶腹部以后，经过一段时间的成熟，获得了受精的能力。精子获能后将段时间的成熟，获得了受精的能力。精子获能后将穿透卵丘团和透明带，达到卵母细胞表面穿透卵丘团和透明带，达到卵母细胞表面2.2.顶体反应：顶体是覆盖于精子头部细胞核前方、介顶体反应：顶体是覆盖于精子头部细胞核前方、介于核与质膜间的囊状细胞器。顶体与精子头部质膜于核与质膜间的囊状细胞器。顶体与精子头部质膜融合，释放出各种水解酶，称之为顶体反应融合，释放出各种水解酶，称之为顶体反应3.3.受精：精子头后区与卵母细胞膜的融合促进了一系受精：精子头后区与卵母细胞膜的融合促进了一系列反映的级联发生，称之为受精列反映的级联发生，称之为受精4.4.透明带反映：受精后，卵母细胞表面发生阻止后来透明带反映：受精后，卵母细胞表面发生阻止后来精子入卵的变化，这有助于阻止多精受精的发生精子入卵的变化，这有助于阻止多精受精的发生第五节 受精1.精子的获能：精子进入输卵管壶腹部以后，经过第六节第六节第六节第六节 胚胎的早期发育胚胎的早期发育胚胎的早期发育胚胎的早期发育1.卵裂：卵子受精后形成受精卵，受精卵发生核膜解卵裂：卵子受精后形成受精卵，受精卵发生核膜解 体，染色体重组等变化后，开始发生卵裂。卵裂所体，染色体重组等变化后，开始发生卵裂。卵裂所产生的细胞称为卵裂球，每个卵裂秋都具有全能性产生的细胞称为卵裂球，每个卵裂秋都具有全能性2.桑葚胚：桑葚胚：3次卵裂后的胚胎，各卵裂球相互靠近，次卵裂后的胚胎，各卵裂球相互靠近，形成一个紧密的细胞球，这样的细胞球称为桑葚胚。形成一个紧密的细胞球，这样的细胞球称为桑葚胚。桑葚胚内部的细胞与外界环境隔开，可以起到稳定桑葚胚内部的细胞与外界环境隔开，可以起到稳定细胞球的作用细胞球的作用第六节 胚胎的早期发育1.卵裂：卵子受精后形成受精卵，受精3.囊胚的形成：桑葚胚形成后，卵裂球分泌的液体聚囊胚的形成：桑葚胚形成后，卵裂球分泌的液体聚集在细胞间隙，最后在胚胎的中央形成一个充满液集在细胞间隙，最后在胚胎的中央形成一个充满液体的腔，这个腔称为囊胚腔。随着囊胚腔的扩张，体的腔，这个腔称为囊胚腔。随着囊胚腔的扩张，细胞的分化逐渐明显：小而分裂活跃的细胞聚集在细胞的分化逐渐明显：小而分裂活跃的细胞聚集在外周，形成胚胎外层，继而成为滋养层；大而分裂外周，形成胚胎外层，继而成为滋养层；大而分裂慢的细胞聚集在内侧，称为内细胞团。此时的胚胎慢的细胞聚集在内侧，称为内细胞团。此时的胚胎称为囊胚称为囊胚3.囊胚的形成：桑葚胚形成后，卵裂球分泌的液体聚集在细胞间隙囊胚桑葚胚卵裂球8细胞期以后胚胎的早期发育卵裂开始16细胞期以后滋养外胚层内细胞团外侧内侧囊胚桑葚胚卵裂球8细胞期以后胚胎的早期发育卵裂开始16细胞期第七节第七节第七节第七节 胚胎植入子宫胚胎植入子宫胚胎植入子宫胚胎植入子宫1.1.在在5.0dpc5.0dpc时，滋养层细胞合成的蛋白酶消化透明带，时，滋养层细胞合成的蛋白酶消化透明带，使胚泡从透明带中孵化出来，为附植做好准备使胚泡从透明带中孵化出来，为附植做好准备2.2.在胚胎植入时，子宫壁紧密闭合，使子宫腔密闭，在胚胎植入时，子宫壁紧密闭合，使子宫腔密闭，子宫上皮表面也发生变化，使之接受胚泡的附植。子宫上皮表面也发生变化，使之接受胚泡的附植。胚泡通过胚胎对侧极附着到子宫系膜对侧的子宫壁胚泡通过胚胎对侧极附着到子宫系膜对侧的子宫壁上。胚泡植入子宫大致的分布受到子宫蠕动的影响上。胚泡植入子宫大致的分布受到子宫蠕动的影响第七节 胚胎植入子宫1.在5.0dpc时，滋养层细胞合成的第八节第八节第八节第八节 滋养外胚层及其衍生物滋养外胚层及其衍生物滋养外胚层及其衍生物滋养外胚层及其衍生物1.滋养外胚层：胚胎在植入子宫后，滋养外胚层不滋养外胚层：胚胎在植入子宫后，滋养外胚层不再维持单层上皮状态，而是在形态学和生长潜能上再维持单层上皮状态，而是在形态学和生长潜能上发生区域性的分化发生区域性的分化2.壁滋养外胚层：起源于围绕胚泡腔的细胞，这些壁滋养外胚层：起源于围绕胚泡腔的细胞，这些细胞停止分裂，体积变大，形成含有细胞停止分裂，体积变大，形成含有1000倍于单倍于单倍体倍体DNA的多线染色体，他们也被称为初级滋养的多线染色体，他们也被称为初级滋养层巨细胞层巨细胞第八节 滋养外胚层及其衍生物1.滋养外胚层：胚胎在植入子宫3.极滋养外胚层：胚胎植入子宫后，极滋养外层向极滋养外胚层：胚胎植入子宫后，极滋养外层向着多个方向扩展着多个方向扩展首先，一些细胞围绕胚胎迁移，取代初级壁滋养层巨细胞，并且它们也成为多倍体然后，极滋养外胚层形成一个指状突起，穿入胚泡腔，形成原肠期以前的胚外外胚层，并把ICM衍生物推向它的前方，这个突起发育成中心腔并形成上皮。胚外中胚层形成以后，胚外外胚层向胎盘退缩，在那里形成绒毛膜最后，一些滋养外胚层细胞继续穿入子宫内膜，形成胎盘的主体，一些胎盘细胞和绒毛膜细胞也变为多倍体3.极滋养外胚层：胚胎植入子宫后，极滋养外层向着多个方向扩展极滋养外胚层原始内胚层壁滋养外胚层4.5dpc时的胚胎极滋养外胚层原始内胚层壁滋养外胚层4.5dpc时的胚胎第九节第九节第九节第九节 原始内胚层和外胚层的分化原始内胚层和外胚层的分化原始内胚层和外胚层的分化原始内胚层和外胚层的分化1.原始内胚层首先出现在无极性的内细胞团表面，原始内胚层首先出现在无极性的内细胞团表面，而剩下的内细胞团核心细胞形成原始外胚层细胞而剩下的内细胞团核心细胞形成原始外胚层细胞2.原始内胚层细胞并不形成胚胎的内胚层组织，而原始内胚层细胞并不形成胚胎的内胚层组织，而是只形成卵黄囊的胚外侧壁内胚层和脏内胚层是只形成卵黄囊的胚外侧壁内胚层和脏内胚层3原始外胚层细胞系形成胚胎的外胚层，中胚层，内原始外胚层细胞系形成胚胎的外胚层，中胚层，内胚层组织，生殖细胞以及胚外膜和胚胎的中胚层成胚层组织，生殖细胞以及胚外膜和胚胎的中胚层成分分第九节 原始内胚层和外胚层的分化1.原始内胚层首先出现在无内细胞团内胚层外胚层脏内胚层壁内胚层原始外胚层原始内胚层中胚层卵黄囊胚外侧胚胎内细胞团内胚层外胚层脏内胚层壁内胚层原始外胚层原始内胚层中胚第十节第十节第十节第十节 表胚层表胚层表胚层表胚层1.在胚胎植入时，胚泡由三种组织细胞系组成，即在胚胎植入时，胚泡由三种组织细胞系组成，即滋养外胚层、原始内胚层和表胚层。表胚层细胞最滋养外胚层、原始内胚层和表胚层。表胚层细胞最少，位于极滋养外胚层和原始内胚层之间少，位于极滋养外胚层和原始内胚层之间2.胚胎植入后不久，表胚层细胞组织成一单层上皮，胚胎植入后不久，表胚层细胞组织成一单层上皮，围绕着其中心一个小的空腔围绕着其中心一个小的空腔前羊膜腔前羊膜腔3.表胚层是多发育潜能的组织，实验表明，表胚层表胚层是多发育潜能的组织，实验表明，表胚层是未来胎儿组织的唯一来源，包括体细胞组织，也是未来胎儿组织的唯一来源，包括体细胞组织，也包括生殖细胞系包括生殖细胞系第十节 表胚层1.在胚胎植入时，胚泡由三种组织细胞系组成，第十一节原肠作用：中胚层和终末第十一节原肠作用：中胚层和终末第十一节原肠作用：中胚层和终末第十一节原肠作用：中胚层和终末内胚层的形成内胚层的形成内胚层的形成内胚层的形成1.原肠作用：指囊胚细胞有规则的移动，使未来的原肠作用：指囊胚细胞有规则的移动，使未来的内胚层和中胚层细胞迁入胚胎内部，而未来的外胚内胚层和中胚层细胞迁入胚胎内部，而未来的外胚层细胞铺展在胚胎的表面，从而形成原肠胚。其结层细胞铺展在胚胎的表面，从而形成原肠胚。其结果是产生了三个胚层果是产生了三个胚层外胚层、内胚层、中胚层外胚层、内胚层、中胚层的分化，作为进一步分化的基础的分化，作为进一步分化的基础2.原条：从后端缘区向前伸展的条带，是由表胚层原条：从后端缘区向前伸展的条带，是由表胚层细胞向囊胚腔下陷造成的，引导表胚层细胞的迁移，细胞向囊胚腔下陷造成的，引导表胚层细胞的迁移，形成中胚层组织和部分内胚层组织。小鼠胚胎中最形成中胚层组织和部分内胚层组织。小鼠胚胎中最早能够识别的原始生殖细胞位于原条后端早能够识别的原始生殖细胞位于原条后端第十一节原肠作用：中胚层和终末内胚层的形成1.原肠作用：指囊3.原条的作用：原肠作用大约在原条的作用：原肠作用大约在6.5dpc开始，此时开始，此时原条在胚胎与胚外组织交界的表胚层区域形成，原原条在胚胎与胚外组织交界的表胚层区域形成，原条的位置标志着未来胚胎的后部条的位置标志着未来胚胎的后部4中胚层的形成：在原条区，表胚层细胞失去上皮的中胚层的形成：在原条区，表胚层细胞失去上皮的连续性，细胞通过运动或分层移动到表胚层和脏内连续性，细胞通过运动或分层移动到表胚层和脏内胚层之间，形成一个新的胚层，即中胚层胚层之间，形成一个新的胚层，即中胚层5.终末内胚层的形成：一些细胞也被内卷到脏内胚终末内胚层的形成：一些细胞也被内卷到脏内胚层外侧，形成最初的一群终末内胚层，也称为肠内层外侧，形成最初的一群终末内胚层，也称为肠内胚层胚层3.原条的作用：原肠作用大约在6.5dpc开始，此时原条在胚6.原条的伸展：之后，中胚层细胞和终末内胚层细原条的伸展：之后，中胚层细胞和终末内胚层细胞会随着原条细胞的扩展而进行移动，最终导致胚胞会随着原条细胞的扩展而进行移动，最终导致胚胎前后体轴不均等形态变化胎前后体轴不均等形态变化7.羊膜褶的形成：扩展的中胚层细胞群推动表胚层羊膜褶的形成：扩展的中胚层细胞群推动表胚层的近端和外胚层的远端向前羊膜腔的中部移动，这的近端和外胚层的远端向前羊膜腔的中部移动，这导致形成了一个显著的嵴，被称为羊膜褶导致形成了一个显著的嵴，被称为羊膜褶6.原条的伸展：之后，中胚层细胞和终末内胚层细胞会随着原条细8.尿囊的形成：随着体腔的形成，一些从原条后部尿囊的形成：随着体腔的形成，一些从原条后部新生的胚外中胚层形成一个特殊的结构新生的胚外中胚层形成一个特殊的结构尿囊。尿囊。尿囊在中胚层中生长，贯穿体腔并与绒毛膜融合。尿囊在中胚层中生长，贯穿体腔并与绒毛膜融合。这就形成了尿囊绒毛膜胎盘的主要成分，并在这就形成了尿囊绒毛膜胎盘的主要成分，并在胎儿和母体之间提供了营养和废物交换的直接途径胎儿和母体之间提供了营养和废物交换的直接途径8.尿囊的形成：随着体腔的形成，一些从原条后部新生的胚外中胚第十二节第十二节第十二节第十二节 尾芽尾芽尾芽尾芽1.在原肠作用第十天，尾芽取代原条成为新组织的在原肠作用第十天，尾芽取代原条成为新组织的来源来源2.尾芽组织分裂迅速，在胚胎的后部发育形成体节尾芽组织分裂迅速，在胚胎的后部发育形成体节和侧板中胚层、神经管、脊索和原肠内胚层和侧板中胚层、神经管、脊索和原肠内胚层第十二节 尾芽1.在原肠作用第十天，尾芽取代原条成为新组织第十三节第十三节第十三节第十三节 胚胎旋转胚胎旋转胚胎旋转胚胎旋转在早体节期，小鼠胚胎呈在早体节期，小鼠胚胎呈U形，相对于羊膜腔而言，形，相对于羊膜腔而言，各个胚层在胚胎中是倒转的。外胚层位于胚体的内各个胚层在胚胎中是倒转的。外胚层位于胚体的内部，而内胚层位于外部和卵黄囊腔中。胚胎旋转有部，而内胚层位于外部和卵黄囊腔中。胚胎旋转有效地逆转了这种位置关系，使胚胎形成包括动物胚效地逆转了这种位置关系，使胚胎形成包括动物胚胎经典的胎经典的C形结构。它包括胚胎的头、尾部分别向形结构。它包括胚胎的头、尾部分别向相反的方向旋转，也包括同时发生的胚体逆时针相反的方向旋转，也包括同时发生的胚体逆时针180旋转。这些旋转运动同时也代表着胚胎外膜旋转。这些旋转运动同时也代表着胚胎外膜的完全发育的完全发育第十三节 胚胎旋转在早体节期，小鼠胚胎呈U形，相对于羊膜腔第十四节第十四节第十四节第十四节 体节及其衍生物体节及其衍生物体节及其衍生物体节及其衍生物1.体节及其衍生物代表着脊椎动物胚胎最为明显的体节及其衍生物代表着脊椎动物胚胎最为明显的分节特征分节特征2.体节起源于中胚层的一条称为前体节中胚层或体体节起源于中胚层的一条称为前体节中胚层或体节板的结构前体节中胚层及其衍生物被统称为轴旁节板的结构前体节中胚层及其衍生物被统称为轴旁中胚层中胚层3.体节的发生起始于体节的发生起始于7.75dpc，并持续到原肠作用，并持续到原肠作用的第的第14d，一共有大约，一共有大约65对体节出现，它们沿着对体节出现，它们沿着胚胎前后轴先后形成胚胎前后轴先后形成第十四节 体节及其衍生物1.体节及其衍生物代表着脊椎动物胚4.大部分的头骨起源于神经嵴，头部轴旁中胚层的大部分的头骨起源于神经嵴，头部轴旁中胚层的主要衍生物是眼睛和腮弓的肌肉组织主要衍生物是眼睛和腮弓的肌肉组织5.身体两侧的前体节中胚层周期性地同时形成一个身体两侧的前体节中胚层周期性地同时形成一个上皮围绕的球体，从而产生一对新的体节。所以，上皮围绕的球体，从而产生一对新的体节。所以，体节区的伸长是由末端不断添加新的体节而导致的体节区的伸长是由末端不断添加新的体节而导致的6每个体节一旦形成以后即经历大致相同的成熟过程。每个体节一旦形成以后即经历大致相同的成熟过程。上皮性结构大约维持上皮性结构大约维持10h，然后位于腹侧边缘的，然后位于腹侧边缘的细胞扩散开来并向脊索移动；这些细胞代表着生骨细胞扩散开来并向脊索移动；这些细胞代表着生骨节，即脊椎骨和肋骨的前体节，即脊椎骨和肋骨的前体4.大部分的头骨起源于神经嵴，头部轴旁中胚层的主要衍生物是眼7.在背侧，体节的上皮性组织在生皮肌节中得以维在背侧，体节的上皮性组织在生皮肌节中得以维持。中间的生肌节成为将来形成背部和脊椎骨周围持。中间的生肌节成为将来形成背部和脊椎骨周围的肌肉，而侧部的生肌节细胞形成体壁和四肢的的的肌肉，而侧部的生肌节细胞形成体壁和四肢的的肌肉肌肉8.生皮节将来形成躯干和尾巴皮肤的真皮部分生皮节将来形成躯干和尾巴皮肤的真皮部分7.在背侧，体节的上皮性组织在生皮肌节中得以维持。中间的生肌第十五节第十五节第十五节第十五节 侧板和间介中胚层以及它们侧板和间介中胚层以及它们侧板和间介中胚层以及它们侧板和间介中胚层以及它们 的衍生物的衍生物的衍生物的衍生物1.体节侧面的中胚层被进一步分为间介中胚层和侧体节侧面的中胚层被进一步分为间介中胚层和侧中胚层中胚层2.侧中胚层分裂为两个部分，形成体腔。在背面，侧中胚层分裂为两个部分，形成体腔。在背面，胚体壁被外胚层覆盖并与羊膜中胚层相连；在腹面，胚体壁被外胚层覆盖并与羊膜中胚层相连；在腹面，胚胎壁与内胚层相邻并与卵黄囊中胚层相连胚胎壁与内胚层相邻并与卵黄囊中胚层相连3.侧中胚层发育成参与内脏和四肢结缔组织发育的侧中胚层发育成参与内脏和四肢结缔组织发育的间充质细胞、体腔的间皮以及肠系膜间充质细胞、体腔的间皮以及肠系膜第十五节 侧板和间介中胚层以及它们 的衍生物1.体4.在在9.09.5的小鼠胚胎中，躯干后部和临近尾巴的小鼠胚胎中，躯干后部和临近尾巴的间介中胚层分化成原肾管肾原基的间介中胚层分化成原肾管肾原基5.紧接着，肾生殖嵴在躯干中部到尾中部区域出现。紧接着，肾生殖嵴在躯干中部到尾中部区域出现。尿生殖嵴的侧部形成中肾，而中部成分则形成生殖尿生殖嵴的侧部形成中肾，而中部成分则形成生殖腺腺6.此外，后部的中肾管形成了一个重要的分支此外，后部的中肾管形成了一个重要的分支输尿管芽，它是诱导形成后肾所必需的。被诱导形输尿管芽，它是诱导形成后肾所必需的。被诱导形成肾原基的中胚层是躯体后部的间接中胚层成肾原基的中胚层是躯体后部的间接中胚层4.在9.09.5的小鼠胚胎中，躯干后部和临近尾巴的间介中第十六节第十六节第十六节第十六节 四肢发生四肢发生四肢发生四肢发生1.组织切除和嫁接等实验确定了肢芽中三个负责建组织切除和嫁接等实验确定了肢芽中三个负责建立成体四肢形态特征的重要区域：顶端外胚层嵴、立成体四肢形态特征的重要区域：顶端外胚层嵴、顶端外胚层下的前进区和极化活性区顶端外胚层下的前进区和极化活性区2.肢芽是由表面外胚层包绕的侧中胚层向外生长而肢芽是由表面外胚层包绕的侧中胚层向外生长而产生的产生的3.前肢芽最早在大约前肢芽最早在大约9.09.5dpc出现在临近第出现在临近第712对体节处对体节处4.后肢芽在后肢芽在9.510.0dpc出现在出现在2328对体节处对体节处出现出现第十六节 四肢发生1.组织切除和嫁接等实验确定了肢芽中三个第十七节第十七节第十七节第十七节 神经化：神经系统的发生神经化：神经系统的发生神经化：神经系统的发生神经化：神经系统的发生1.脑和脊髓起源于外胚层原条前部增厚的一条细胞，脑和脊髓起源于外胚层原条前部增厚的一条细胞，即神经板，它最早在即神经板，它最早在7.5dpc的小鼠胚胎中出现，的小鼠胚胎中出现，并且伸长分化成为神经外胚层并且伸长分化成为神经外胚层2.神经板形成以后，其形态随之发生剧烈的变化，神经板形成以后，其形态随之发生剧烈的变化，它的两侧边缘逐渐升高，形成神经褶它的两侧边缘逐渐升高，形成神经褶3.神经褶的两侧边缘上卷并相互接触，最终融合形神经褶的两侧边缘上卷并相互接触，最终融合形成神经管成神经管第十七节 神经化：神经系统的发生1.脑和脊髓起源于外胚层原第十八节第十八节第十八节第十八节 神经嵴神经嵴神经嵴神经嵴1.神经嵴是起源于神经管背侧、神经上皮和表皮外神经嵴是起源于神经管背侧、神经上皮和表皮外胚层连接部的一个临时细胞群体。神经嵴细胞以单胚层连接部的一个临时细胞群体。神经嵴细胞以单细胞形式进行广泛的迁移，从神经管迁移到背部和细胞形式进行广泛的迁移，从神经管迁移到背部和腹部的很多部位，并同时分化为多种细胞类型腹部的很多部位，并同时分化为多种细胞类型2.它们的衍生物包括肾上腺髓质细胞、骨和软骨、它们的衍生物包括肾上腺髓质细胞、骨和软骨、黑色素细胞、神经胶质细胞和雪旺细胞，以及不同黑色素细胞、神经胶质细胞和雪旺细胞，以及不同类型的神经元类型的神经元第十八节 神经嵴1.神经嵴是起源于神经管背侧、神经上皮和表第十九节第十九节第十九节第十九节 腮弓和咽区的发生腮弓和咽区的发生腮弓和咽区的发生腮弓和咽区的发生1.从从8.0dpc开始，六对咽弓在胚胎咽区以头尾顺序开始，六对咽弓在胚胎咽区以头尾顺序依次发生，它们组成了头颈部的主要构造元件。每依次发生，它们组成了头颈部的主要构造元件。每一个咽弓都是由外胚层覆盖的间充质条带，它们以一个咽弓都是由外胚层覆盖的间充质条带，它们以弧形围绕着未来的口腔侧面和底面弧形围绕着未来的口腔侧面和底面2.最前端的以对腮弓最早形成，并且在远端分叉，最前端的以对腮弓最早形成，并且在远端分叉，分别形成上颌骨和下颌骨的原基。上颌骨和下颌骨分别形成上颌骨和下颌骨的原基。上颌骨和下颌骨的原基在的原基在11dpc分离，分别形成上颌和下颌分离，分别形成上颌和下颌3.第二对腮弓的生长超过第三对和第四对腮弓，是第二对腮弓的生长超过第三对和第四对腮弓，是颈部的主要构成成分颈部的主要构成成分第十九节 腮弓和咽区的发生1.从8.0dpc开始，六对咽弓第二十节第二十节第二十节第二十节 肠的发育肠的发育肠的发育肠的发育1.胚胎的肠来自于表胚层，大多数的表胚层细胞通胚胎的肠来自于表胚层，大多数的表胚层细胞通过原条前部参与形成肠原基过原条前部参与形成肠原基2.在肠成为一个与其他组织分离的管道以前，终末在肠成为一个与其他组织分离的管道以前，终末内胚层的两侧边缘是与腹部的卵黄囊内胚层向连续内胚层的两侧边缘是与腹部的卵黄囊内胚层向连续的，而且脊索插入在肠的顶壁之内的，而且脊索插入在肠的顶壁之内3.然后，脊索与内胚层分离开来，形成一个独立的然后，脊索与内胚层分离开来，形成一个独立的器官。在前方，肠管在咽部的盲端与外胚层形成的器官。在前方，肠管在咽部的盲端与外胚层形成的原始口腔想接触。由外胚层和内胚层共同形成的膜原始口腔想接触。由外胚层和内胚层共同形成的膜在在9.0dpc由于细胞死亡和细胞重新组织而破裂，由于细胞死亡和细胞重新组织而破裂，从而使肠管开口于羊膜腔中从而使肠管开口于羊膜腔中第二十节 肠的发育1.胚胎的肠来自于表胚层，大多数的表胚层4.随后，在同样的时间后肠发生，并形成泄殖腔膜。随后，在同样的时间后肠发生，并形成泄殖腔膜。泄殖腔膜后来破裂形成肛门开口。泄殖腔膜后来破裂形成肛门开口。4.随后，在同样的时间后肠发生，并形成泄殖腔膜。泄殖腔膜后来第二十一节第二十一节第二十一节第二十一节 胚外组织胚外组织胚外组织胚外组织1.各种胚外组织形成一个统一的生命支持系统，在各种胚外组织形成一个统一的生命支持系统，在子宫中维持、营养并保护胚胎子宫中维持、营养并保护胚胎2.这些胚外组织形成胎盘、壁卵黄囊、脏卵黄囊以这些胚外组织形成胎盘、壁卵黄囊、脏卵黄囊以及羊膜及羊膜3.胚外组织中合成蛋白质的速率很高，用以执行某胚外组织中合成蛋白质的速率很高，用以执行某些特定功能，包括：胎儿血清蛋白、脏内胚层的载些特定功能，包括：胎儿血清蛋白、脏内胚层的载脂蛋白、细胞外基质糖蛋白等脂蛋白、细胞外基质糖蛋白等第二十一节 胚外组织1.各种胚外组织形成一个统一的生命支持第二十二节第二十二节第二十二节第二十二节 胎盘的结构与功能胎盘的结构与功能胎盘的结构与功能胎盘的结构与功能1.滋养层滋养层:分为海绵状滋养层和合体滋养层。海绵状分为海绵状滋养层和合体滋养层。海绵状滋养层中许多细胞是二倍体，而合体滋养层中大多滋养层中许多细胞是二倍体，而合体滋养层中大多数细胞是多倍体。两层中都具有包含母体血细胞的数细胞是多倍体。两层中都具有包含母体血细胞的血窦血窦2.中胚层：在尿囊与绒毛膜融合以后，中胚层形成中胚层：在尿囊与绒毛膜融合以后，中胚层形成胚胎的血管。毛细血管与滋养层细胞交互盘绕在一胚胎的血管。毛细血管与滋养层细胞交互盘绕在一起，从母体血窦中获得营养起，从母体血窦中获得营养3.脏内胚层和壁内胚层：胎盘的裂隙中既有脏内层脏内胚层和壁内胚层：胎盘的裂隙中既有脏内层也有壁内胚层，脏内胚层合成甲胎蛋白，壁内胚层也有壁内胚层，脏内胚层合成甲胎蛋白，壁内胚层形成基膜形成基膜第二十二节 胎盘的结构与功能1.滋养层:分为海绵状滋养层和第二章第二章第二章第二章 转基因小鼠和嵌合体小鼠的生产转基因小鼠和嵌合体小鼠的生产转基因小鼠和嵌合体小鼠的生产转基因小鼠和嵌合体小鼠的生产绪论：要成功和高效的生产基因工程小鼠，就必须能绪论：要成功和高效的生产基因工程小鼠，就必须能够获得大量的着床前胚胎和大量的假孕受体。此外，够获得大量的着床前胚胎和大量的假孕受体。此外，还必须确保动物健康和实施合理的育种计划。本章还必须确保动物健康和实施合理的育种计划。本章所描述的内容适用于转基因和基因打靶实验的鼠群，所描述的内容适用于转基因和基因打靶实验的鼠群，要求畜舍具备能够控制通风、湿度、温度、光照的要求畜舍具备能够控制通风、湿度、温度、光照的设施，具备能够进行笼具洗刷、饲料储存、充足供设施，具备能够进行笼具洗刷、饲料储存、充足供水和兽医服务等条件。可根据实验者的实验需要，水和兽医服务等条件。可根据实验者的实验需要，对我们所叙述的小鼠品系、年龄和数量进行调整。对我们所叙述的小鼠品系、年龄和数量进行调整。第二章 转基因小鼠和嵌合体小鼠的生产绪论：要成功和高效的生第一节第一节第一节第一节 实验鼠群的病原控制实验鼠群的病原控制实验鼠群的病原控制实验鼠群的病原控制1.实验鼠群一般都应该饲养在无特定病原体实验鼠群一般都应该饲养在无特定病原体（SPF）的环境中）的环境中2.越来越多的动物舍被建成越来越多的动物舍被建成SPF舍并实行封闭管理。舍并实行封闭管理。一般在动物舍，所有人员在入舍前都必须先经过淋一般在动物舍，所有人员在入舍前都必须先经过淋浴和换上无菌的装备，所有进入的物品都必须经过浴和换上无菌的装备，所有进入的物品都必须经过高压或其他方法灭菌，笔记本和其他个人物品一般高压或其他方法灭菌，笔记本和其他个人物品一般不允许带入舍内不允许带入舍内3.所有用于转基因动物的小鼠都要在规定的封闭区所有用于转基因动物的小鼠都要在规定的封闭区内配种，所有实验操作都必须在舍内进行。在检疫内配种，所有实验操作都必须在舍内进行。在检疫后，断奶的幼鼠才能进入封闭区后，断奶的幼鼠才能进入封闭区第一节 实验鼠群的病原控制1.实验鼠群一般都应该饲养在无特4.有三种方法可以解决胚胎在体外操作后又移植到有三种方法可以解决胚胎在体外操作后又移植到SPF培养母体内的实验室和清洁问题培养母体内的实验室和清洁问题2.为方便对外面引进，胚胎供体可位于封闭之外，受体在封闭区内配种，收集的胚胎在洗净后进入封闭区内进行操作3.实验室位于封闭区之外，操作后的胚胎通过胚胎移植而进入封闭区1.把实验室设置在封闭管理的动物舍内，设备、人员等都在经过净化后才能进入封闭区内。胚胎供体和受体都在封闭区内进行配种4.有三种方法可以解决胚胎在体外操作后又移植到SPF培养母体5.关于关于SPF和非和非SPF鼠群应该考虑的重要问题包括鼠群应该考虑的重要问题包括一下一下5个方面个方面1.饲养管理与存活率：SPF的小鼠更健康，存活时间更久2.实验结果：特别是关于免疫系统的实验，即使小鼠表面上看是健康的，病毒等感染也会影响实验结果3.方便性：在SPF鼠群，接触小鼠往往程序繁琐且费时，必须要有周密的安排活动时间表4.费用：在封闭的条件下对小鼠要求更精细的管理步骤，因而需要更多的劳动和额外的设备5.小鼠品系的运输：从其他研究单位获得的小鼠品系可能携带病原体，因而必须通过胚胎移植或者剖腹产重生，才能进入SPF舍5.关于SPF和非SPF鼠群应该考虑的重要问题包括一下5个方第二节第二节第二节第二节 提供供体和（或）受体小鼠的提供供体和（或）受体小鼠的提供供体和（或）受体小鼠的提供供体和（或）受体小鼠的育种群育种群育种群育种群1.为提供供体小鼠和受体小鼠，应准备若干个配种为提供供体小鼠和受体小鼠，应准备若干个配种鼠笼，每只笼内放公鼠和母鼠各一只。幼鼠出生后鼠笼，每只笼内放公鼠和母鼠各一只。幼鼠出生后3周龄时断奶并把公母分开周龄时断奶并把公母分开2要想尽可能多地生产小鼠，幼鼠应该在下一窝小鼠要想尽可能多地生产小鼠，幼鼠应该在下一窝小鼠出生之前断奶，以防年龄大的践踏年龄小的和不让出生之前断奶，以防年龄大的践踏年龄小的和不让它们吃奶。一个有它们吃奶。一个有4050对公母鼠的育种群，依对公母鼠的育种群，依品系不同，每周应该生产品系不同，每周应该生产2030只母鼠只母鼠3.为增加每笼产雌性幼鼠的数量，一个笼内可放置为增加每笼产雌性幼鼠的数量，一个笼内可放置2只母鼠，一只公鼠只母鼠，一只公鼠第二节 提供供体和（或）受体小鼠的育种群1.为提供供体小鼠第三节第三节第三节第三节 自然交配的安排自然交配的安排自然交配的安排自然交配的安排1.获得用于显微镜操作或者其他实验的着床前胚胎获得用于显微镜操作或者其他实验的着床前胚胎的方法之一是通过自然交配，即排卵和受精的时间的方法之一是通过自然交配，即排卵和受精的时间完全由环境条件控制完全由环境条件控制2.在恒大的光照在恒大的光照黑暗周期下饲养的磁鼠一般黑暗周期下饲养的磁鼠一般45d排卵一次，时间是黑暗开始后排卵一次，时间是黑暗开始后35h。3.小鼠的发情周期分为小鼠的发情周期分为4个阶段个阶段:发情前期（卵泡发发情前期（卵泡发育）、发情期（排卵）、发情后期（黄体形成）、育）、发情期（排卵）、发情后期（黄体形成）、发情间期（下次排卵的卵泡开始发育，清楚上一次发情间期（下次排卵的卵泡开始发育，清楚上一次的卵泡细胞）的卵泡细胞）4.在同样条件下饲养的雄鼠将于黑暗的中点前后与在同样条件下饲养的雄鼠将于黑暗的中点前后与发情发情(排卵排卵)雌鼠交配。这意味着受精在排卵后雌鼠交配。这意味着受精在排卵后12h发生发生第三节 自然交配的安排1.获得用于显微镜操作或者其他实验的第三章第三章第三章第三章 外科手术方法外科手术方法外科手术方法外科手术方法绪论：本章所介绍的外科手术方法是进行转基因和生绪论：本章所介绍的外科手术方法是进行转基因和生产嵌合体小鼠及其相关的各种试验研究所必需的基产嵌合体小鼠及其相关的各种试验研究所必需的基本手术方法。本手术方法。第三章 外科手术方法绪论：本章所介绍的外科手术方法是进行转第一节第一节第一节第一节 输精管及卵巢切除术输精管及卵巢切除术输精管及卵巢切除术输精管及卵巢切除术1.用切除输精管的雄性小鼠与雌性小鼠交配，可诱用切除输精管的雄性小鼠与雌性小鼠交配，可诱导产生用于输卵管或子宫胚胎移植的假孕受体导产生用于输卵管或子宫胚胎移植的假孕受体2.发情雌鼠与不育雄鼠交配后，尽管其自身产生的发情雌鼠与不育雄鼠交配后，尽管其自身产生的卵母细胞已经退化，但其子宫处于胚胎移植的接受卵母细胞已经退化，但其子宫处于胚胎移植的接受状态状态3.新形成的假孕雌鼠在新形成的假孕雌鼠在11d内不能恢复正常发情周内不能恢复正常发情周期期4摘除卵巢会引起胚胎发育停滞，故摘除卵巢后往往摘除卵巢会引起胚胎发育停滞，故摘除卵巢后往往需要补充孕酮。摘除卵巢后孕鼠体内的胚胎仍可存需要补充孕酮。摘除卵巢后孕鼠体内的胚胎仍可存活活10d左右。延迟发育的胚胎可用于左右。延迟发育的胚胎可用于ES细胞的生细胞的生产产第一节 输精管及卵巢切除术1.用切除输精管的雄性小鼠与雌性第二节第二节第二节第二节 胚胎移植胚胎移植胚胎移植胚胎移植1.交配后交配后0.53.5d形成的单细胞到囊胚阶段的胚形成的单细胞到囊胚阶段的胚胎，可以移植到假孕雌鼠的生殖道内以使其继续发胎，可以移植到假孕雌鼠的生殖道内以使其继续发育育2.这一时期的胚胎可以移植到假孕这一时期的胚胎可以移植到假孕0.5d小鼠的输卵小鼠的输卵管壶腹部，而管壶腹部，而3.5d的胚胎可以移植到的胚胎可以移植到2.5或或3.5d假孕雌鼠的子宫内。假孕雌鼠的子宫内。2.5d比比3.5d的假孕雌鼠更适的假孕雌鼠更适合于进行子宫胚胎移植，因为经过体外操作的胚胎合于进行子宫胚胎移植，因为经过体外操作的胚胎有足够的时间与子宫的发育相适应有足够的时间与子宫的发育相适应第二节 胚胎移植1.交配后0.53.5d形成的单细胞到囊第三节第三节第三节第三节 剖腹产手术和子鼠寄养剖腹产手术和子鼠寄养剖腹产手术和子鼠寄养剖腹产手术和子鼠寄养1.如果移植胚胎后的受体雌鼠或任何其他孕鼠，在如果移植胚胎后的受体雌鼠或任何其他孕鼠，在其品系特定的预产期内没有产下子鼠，则很有必要其品系特定的预产期内没有产下子鼠，则很有必要实施剖腹产手术。难产尤其会发生在只有实施剖腹产手术。难产尤其会发生在只有12个个胚胎着床时，由于胎儿长得过大而无法正常分娩的胚胎着床时，由于胎儿长得过大而无法正常分娩的情况下情况下2.如果转基因或基因突变的胎儿在分娩时死亡，为如果转基因或基因突变的胎儿在分娩时死亡，为了收集到所有的胎儿用于研究，可以在了收集到所有的胎儿用于研究，可以在18.5dpc实施剖腹产手术实施剖腹产手术第三节 剖腹产手术和子鼠寄养1.如果移植胚胎后的受体雌鼠或第四节第四节第四节第四节 实验方案实验方案实验方案实验方案1.制作不育雄鼠的输精管切除术制作不育雄鼠的输精管切除术2.诱导胚胎延迟着床的卵巢摘除术诱导胚胎延迟着床的卵巢摘除术3.输卵管内胚胎移植输卵管内胚胎移植4.子宫内胚胎移植子宫内胚胎移植5.剖腹产手术和子鼠寄养剖腹产手术和子鼠寄养第四节 实验方案1.制作不育雄鼠的输精管切除术6.肾囊下组织移植肾囊下组织移植7.ES细胞的皮下注射细胞的皮下注射8.肝脏的部分切除术肝脏的部分切除术9.脾切除术脾切除术10.肾切除术肾切除术6.肾囊下组织移植11.去势术去势术12.尾动脉采血尾动脉采血11.去势术无无忧忧PPTPPT整理整理发发布布小小鼠鼠胚胚胎胎操操作作 苏铁 18296252671小鼠胚胎操作 苏铁