动物实验的基本技术和方法ppt课件

动物实验基本知识动物实验基本知识和操作和操作技术技术上海中医药大学实验动物中心上海中医药大学实验动物中心汤家铭汤家铭动物实验基本知识和操作技术上海中医药大学实验动物中心1进行动物实验操作前必须注意的事进行动物实验操作前必须注意的事一、动物福利和动物实验伦理问题一、动物福利和动物实验伦理问题 什么是动物福利？什么是动物福利？动物福利是指动物在整个生命过程中应得到人类的保护，动物福利是指动物在整个生命过程中应得到人类的保护，其基本原则是要善待动物，保证动物的健康和快乐。其基本原则是要善待动物，保证动物的健康和快乐。动物福利的提出是基于这样一个观点，即动物与人一样，动物福利的提出是基于这样一个观点，即动物与人一样，有思维、有情感，应当给予与人一样的生存权。有思维、有情感，应当给予与人一样的生存权。台湾学者夏良宙（台湾学者夏良宙（19901990年）把动物福利概括成两句话：年）把动物福利概括成两句话：善待活着的动物，善待活着的动物，减少动物死亡的痛苦。减少动物死亡的痛苦。应该再加一句：应该再加一句：动物动物死后应得到妥善处理。死后应得到妥善处理。进行动物实验操作前必须注意的事一、动物福利和动物实验伦理问题2 在国际上被普遍认可的动物福利包括以下在国际上被普遍认可的动物福利包括以下5 5个个内容，即：内容，即：1.1.应提供给动物满足生长发育和繁衍后代的营养食应提供给动物满足生长发育和繁衍后代的营养食物和清洁的饮水，使其免受饥渴。物和清洁的饮水，使其免受饥渴。（吃好喝好）（吃好喝好）2.2.应提供给动物适当的栖息之地和饲养场所，使其应提供给动物适当的栖息之地和饲养场所，使其能休息和睡眠。能休息和睡眠。（休息好）（休息好）3.3.应提供预防动物疾病和患病后及时诊疗的措施，应提供预防动物疾病和患病后及时诊疗的措施，使其免受疾病和伤害的痛苦。使其免受疾病和伤害的痛苦。（健康成长）（健康成长）4.4.应提供给动物安静的饲养环境，无刺激动物发生应提供给动物安静的饲养环境，无刺激动物发生应激和恐惧的场面和声音。应激和恐惧的场面和声音。（平静生活）（平静生活）5.5.应提供给动物同类一起自由玩耍、表达天性的空应提供给动物同类一起自由玩耍、表达天性的空间和自由。间和自由。（表达天性）（表达天性）在国际上被普遍认可的动物福利包括以下5个内容，即3饲养繁殖实验动物的目的是用实验动物作饲养繁殖实验动物的目的是用实验动物作为人类的替难者进行各种生物医学研究。为人类的替难者进行各种生物医学研究。一方面随着生物医学的发展，实验动物的一方面随着生物医学的发展，实验动物的使用量逐年增加，使用种类也逐年扩大；使用量逐年增加，使用种类也逐年扩大；另一方面从动物福利和动物实验伦理学考另一方面从动物福利和动物实验伦理学考虑，又需要虑，又需要尽量尽量减少一些不必要的动物实减少一些不必要的动物实验，特别是人类的宠物诸如验，特别是人类的宠物诸如猫、犬、猴猫、犬、猴等，等，或者在不得不做的动物实验中尽可能将动或者在不得不做的动物实验中尽可能将动物的痛苦、压迫和不适降到最低。物的痛苦、压迫和不适降到最低。饲养繁殖实验动物的目的是用实验动物作为人类的替难者进行各种生4动物实验的伦理判断标准：动物实验的伦理判断标准：1.1.必须权衡实验的目和得出的结论与动物由必须权衡实验的目和得出的结论与动物由此而受到的伤害和死亡。此而受到的伤害和死亡。2.2.必須清楚而且明确沒有任何替代方法可必須清楚而且明确沒有任何替代方法可达到所做的动物实验的目的这个前提。达到所做的动物实验的目的这个前提。3.3.必须将动物的痛苦、压迫和不适减到最低必须将动物的痛苦、压迫和不适减到最低程度。程度。动物实验的伦理判断标准：5二、二、动物实验是实践性非常强的技术动物实验是实践性非常强的技术和方法，不能仅靠书本理论知识，需和方法，不能仅靠书本理论知识，需要通过反复实践加以掌握。要通过反复实践加以掌握。目的：目的：保证实验的顺利进行。保证实验的顺利进行。减少动物承受的痛苦。减少动物承受的痛苦。二、动物实验是实践性非常强的技术和方法，不能仅靠书本理论知6成为熟练掌握成为熟练掌握动物实验操作技动物实验操作技术的能手或专家术的能手或专家应该是大学应该是大学/研研究所每一个动物饲养管理人员究所每一个动物饲养管理人员所追求的目标。所追求的目标。成为熟练掌握动物实验操作技术的能手或专家应该是大学/研究所每7动物实验前的准备动物实验前的准备1.1.所用动物实验设施是否符合本实验要求所用动物实验设施是否符合本实验要求 普通设施，清洁级、普通设施，清洁级、SPFSPF设施，感染性设施，设施，感染性设施，有毒有害供试品设施，放射性设施有毒有害供试品设施，放射性设施 实验室、手术室实验室、手术室2.2.所用实验动物的品种、品系、性别、数量等能所用实验动物的品种、品系、性别、数量等能否得到否得到3.3.所需要的动物实验技术是否熟练掌握所需要的动物实验技术是否熟练掌握4.4.所用动物实验器具、试剂是否准备好所用动物实验器具、试剂是否准备好5.5.所用的仪器设备是否处于可运行状态所用的仪器设备是否处于可运行状态动物实验前的准备1.所用动物实验设施是否符合本实验要求86.6.预实验预实验 正式实验前的演习正式实验前的演习 预实验可用少量动物进行预实验可用少量动物进行 预实验结果不能并入正式实验结果一预实验结果不能并入正式实验结果一起分析。起分析。6.预实验9一、动物的抓取一、动物的抓取动物的抓取是顺利进行各项动物实验操作最动物的抓取是顺利进行各项动物实验操作最基本的一个环节。基本的一个环节。应熟练掌握各种实验动物的抓取方法，用轻应熟练掌握各种实验动物的抓取方法，用轻柔的手法把对动物施加的恐惧和痛苦降到最柔的手法把对动物施加的恐惧和痛苦降到最低。低。一般说来动物是不会主动攻击人的。一般说来动物是不会主动攻击人的。1.1.小鼠抓取的注意点小鼠抓取的注意点2.2.大鼠抓取的注意点大鼠抓取的注意点3.3.豚鼠抓取的注意点豚鼠抓取的注意点一、动物的抓取动物的抓取是顺利进行各项动物实验操作最基本的一104.4.兔抓取的注意点兔抓取的注意点最好戴人造革围裙和袖套，以免爪子抓伤。最好戴人造革围裙和袖套，以免爪子抓伤。采用正确地抓取方法。采用正确地抓取方法。可采用兔固定器固定进行实验操作，或一人抓可采用兔固定器固定进行实验操作，或一人抓取固定，一人实验操作。取固定，一人实验操作。4.兔抓取的注意点11豚鼠和兔的抓取豚鼠和兔的抓取豚鼠和兔的抓取125.5.犬抓取注意点犬抓取注意点实验用犬有专用的实验用犬有专用的比格犬比格犬和农村收购来的和农村收购来的草犬草犬。犬是通人性的，草犬购入后，饲养人员和实验犬是通人性的，草犬购入后，饲养人员和实验人员要经常亲近它们，使它放松对你的警惕，人员要经常亲近它们，使它放松对你的警惕，容易直接抓取它们。容易直接抓取它们。不要轻易使用长柄铁钳不要轻易使用长柄铁钳，钳伤造成的伤害会使，钳伤造成的伤害会使它对你更加恐惧，影响以后实验的进行。它对你更加恐惧，影响以后实验的进行。抓取后用绳子将嘴绑住。抓取后用绳子将嘴绑住。5.犬抓取注意点13二、动物实验分组设计二、动物实验分组设计（一）一般动物试验分组设计的基本原则：（一）一般动物试验分组设计的基本原则：随机、对照和重复。随机、对照和重复。随机：随机：就是按照机遇均等的原则来进行分就是按照机遇均等的原则来进行分组。其目的是尽量减少各种干扰因素造成组。其目的是尽量减少各种干扰因素造成的实验误差，不受实验者主观因素或其他的实验误差，不受实验者主观因素或其他偏性误差的影响。偏性误差的影响。随机化的手段可采用编号卡片抽签法，随随机化的手段可采用编号卡片抽签法，随机数字表或采用计算器的随机数字键。机数字表或采用计算器的随机数字键。二、动物实验分组设计（一）一般动物试验分组设计的基本原则：随14对照：对照：是要求在实验中设立可与实验组比较，用以消是要求在实验中设立可与实验组比较，用以消除各种无关因素影响的对照组。除各种无关因素影响的对照组。对照应有可比性：同时同地同条件对照应有可比性：同时同地同条件 对照设立有两种方式：对照设立有两种方式：自体对照自体对照1.1.实验前后对照实验前后对照2.2.身体左右对照身体左右对照组间对照组间对照（以手术造成兔腹主动脉损伤动脉粥样硬化模型为例）（以手术造成兔腹主动脉损伤动脉粥样硬化模型为例）1.1.正常（空白）对照组：正常饮食，不做手术正常（空白）对照组：正常饮食，不做手术2.2.假手术组：正常饮食，做手术假手术组：正常饮食，做手术3.3.模型组：手术模型组：手术+高脂饲料高脂饲料4.4.已知疗效药物组：手术已知疗效药物组：手术+高脂饲料高脂饲料+已知疗效药物已知疗效药物5.5.未知疗效药物组：手术未知疗效药物组：手术+高脂饲料高脂饲料+未知疗效药物未知疗效药物6.6.赋型剂对照：手术赋型剂对照：手术+高脂饲料高脂饲料+赋型剂赋型剂对照：是要求在实验中设立可与实验组比较，用以消除各种无关因素15重复：重复：是指同一处理要设置多个样本数。是指同一处理要设置多个样本数。重复的主要作用是估计试验误差、降低试重复的主要作用是估计试验误差、降低试验误差和增强代表性，提高实验结果的精验误差和增强代表性，提高实验结果的精确度，保证实验结果能在不同个体中稳定确度，保证实验结果能在不同个体中稳定地重复出来。地重复出来。样本数过少，实验处理效应不能充分显样本数过少，实验处理效应不能充分显示；样本数过多，又会增加实际工作中的示；样本数过多，又会增加实际工作中的困难。因此在进行实验前必须确定最少的困难。因此在进行实验前必须确定最少的样本例数。最少的样本例数可按一般估测样本例数。最少的样本例数可按一般估测方法确定，也可通过统计学方法进行测算方法确定，也可通过统计学方法进行测算确定。确定。重复：是指同一处理要设置多个样本数。重复的主要作用是估计试验16（二）动物实验分组设计的基本类型（二）动物实验分组设计的基本类型1.1.完全随机化设计完全随机化设计2.2.按体重分层随机区组设计按体重分层随机区组设计3.3.配对设计配对设计（二）动物实验分组设计的基本类型17（二）按体重分层随机区组设计（二）按体重分层随机区组设计 先先确确定定实实验验的的组组数数，将将动动物物称称重重，按按体体重重的的轻轻重重顺顺序序编编号号，再再用用随随机机化化工具，如随机数字表等，将动物随机分配至处理组及对照组。工具，如随机数字表等，将动物随机分配至处理组及对照组。随机区组法举例随机区组法举例以用四氧嘧啶诱发小鼠糖尿病模型，用药物进行治疗观察疗效为例，实以用四氧嘧啶诱发小鼠糖尿病模型，用药物进行治疗观察疗效为例，实验中可分为验中可分为5 5组：正常对照组、模型组、药物治疗低剂量组、高剂量组组：正常对照组、模型组、药物治疗低剂量组、高剂量组和已知可治疗糖尿病药物组，每组和已知可治疗糖尿病药物组，每组1010只，只，5 5雌雌5 5雄。按下列步骤进行分组：雄。按下列步骤进行分组：1 1）雌雄分开：分组时雌、雄动物分开分别进行。）雌雄分开：分组时雌、雄动物分开分别进行。2 2）用记号笔在小鼠尾巴上随机编）用记号笔在小鼠尾巴上随机编1-251-25号。号。3 3）按编号称重，记录每只小鼠的体重。）按编号称重，记录每只小鼠的体重。4 4）按动物体重顺序依次重新编号。）按动物体重顺序依次重新编号。5 5）共）共5 5个实验组分成个实验组分成5 5个区组，每个区组都有个区组，每个区组都有5 5只体重相近的动物。第一区只体重相近的动物。第一区组组5 5只动物为只动物为1 1、2 2、3 3、4 4、5 5号，第二区组为号，第二区组为6 6、7 7、8 8、9 9、1010号，余类推。号，余类推。6 6）抄录随机数表。抄录数字的个数等于区组数减）抄录随机数表。抄录数字的个数等于区组数减1 1，如，如5 5个区组就抄录个区组就抄录4 4个个数字。第数字。第5 5个动物无随机数字，其分组为调剂。以后的区组按顺序依次个动物无随机数字，其分组为调剂。以后的区组按顺序依次抄录数字。抄录数字。7 7）将小鼠分到各组中。）将小鼠分到各组中。（二）按体重分层随机区组设计18按体重分层随机区组分组按体重分层随机区组分组按体重分层随机区组分组19三、动物编号常用的标记方法三、动物编号常用的标记方法 适用需要个体识别的实验适用需要个体识别的实验1.1.染料标记法：适合白色被毛的动物，如小鼠、染料标记法：适合白色被毛的动物，如小鼠、大鼠、豚鼠、兔等。大鼠、豚鼠、兔等。黄色：常用黄色：常用35%35%苦味酸溶液苦味酸溶液 红色：常用红色：常用0.5%0.5%中性红溶液中性红溶液 咖啡色咖啡色:2%:2%硝酸银溶液硝酸银溶液 黑色：煤焦油酒精溶液黑色：煤焦油酒精溶液 优点：简单、易识别优点：简单、易识别 缺点：长期易退色；不能编大号码。缺点：长期易退色；不能编大号码。三、动物编号常用的标记方法 适用需要个体识别的实验20动物实验的基本技术和方法ppt课件212.2.剪耳（打孔）法：啮齿类小动物剪耳（打孔）法：啮齿类小动物3.3.号码钳法：适用于兔、犬等大动物号码钳法：适用于兔、犬等大动物4.4.耳牌法：适用于羊、牛等大家畜耳牌法：适用于羊、牛等大家畜5.5.电子芯片植入法：电子芯片植入法：2.剪耳（打孔）法：啮齿类小动物22四、动物被毛的去除方法四、动物被毛的去除方法1.1.剪毛法：用剪毛法：用弯头剪弯头剪逆毛方向剪逆毛方向剪 适用于各种实验动物适用于各种实验动物2.2.拔毛法：常用于兔的耳缘静脉注射拔毛法：常用于兔的耳缘静脉注射3.3.剃毛法：剃须刀、手术刀剃毛法：剃须刀、手术刀 适用于大动物适用于大动物4.4.脱毛法：脱毛剂脱毛法：脱毛剂四、动物被毛的去除方法1.剪毛法：用弯头剪逆毛方向剪23常用脱毛剂配方常用脱毛剂配方 配方配方1 1：硫化钠：硫化钠8g8g溶于溶于100mL100mL水中。水中。配配方方2 2：硫硫化化钠钠：肥肥皂皂粉粉：淀淀粉粉的的比比例例为为3 3：1 1：7 7，再加水调成糊状。，再加水调成糊状。配方配方3 3：硫化钠：硫化钠10g10g和生石灰和生石灰15g15g溶于溶于100mL100mL水中。水中。配方配方1 1和和2 2适用于家兔和啮齿类动物的脱适用于家兔和啮齿类动物的脱毛，配方毛，配方3 3适合给犬脱毛。适合给犬脱毛。脱毛后用清水将脱毛区清洗干净。脱毛后用清水将脱毛区清洗干净。常用脱毛剂配方24五、实验动物的麻醉方法五、实验动物的麻醉方法 对对实实验验动动物物进进行行麻麻醉醉的的目目的的是是，消消除除实实验验过过程程中中引引起起的的痛痛苦苦和和不不适适，确确保保实实验验动动物物的的安安全全和和动动物物实实验验的的顺顺利利进进行行，是是动动物物实实验验伦伦理理的的一一个个重重要要方面。方面。麻麻醉醉方方法法有有全全身身麻麻醉醉和和局局部部麻麻醉醉两两种种。在在实实验验动动物的麻醉中绝大多数采用全身麻醉。物的麻醉中绝大多数采用全身麻醉。应应结结合合实实验验目目的的、实实验验动动物物种种类类、日日龄龄及及健健康康状状况况等等因因素素进进行行综综合合考考虑虑，决决定定选选用用的的麻麻醉醉剂剂和和麻麻醉方法。醉方法。五、实验动物的麻醉方法 对实验动物进行麻醉的目的是，消除实验25全身麻醉简称全麻。全麻是指麻醉药通全身麻醉简称全麻。全麻是指麻醉药通过过呼吸道吸入、静脉和肌肉注射呼吸道吸入、静脉和肌肉注射等途径，等途径，进入实验动物体内，使其产生短时间意进入实验动物体内，使其产生短时间意识丧失、痛觉消失、肌肉松弛和反射抑识丧失、痛觉消失、肌肉松弛和反射抑制等中枢神经系统抑制现象。当麻醉药制等中枢神经系统抑制现象。当麻醉药从体内排出或在体内代谢破坏后，实验从体内排出或在体内代谢破坏后，实验动物逐渐清醒，不留后遗症。动物逐渐清醒，不留后遗症。全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法两种途全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法两种途径，吸入麻醉法用挥发性麻醉药，注射径，吸入麻醉法用挥发性麻醉药，注射麻醉法用非挥发性麻醉药。麻醉法用非挥发性麻醉药。全身麻醉简称全麻。全麻是指麻醉药通过呼吸道吸入、静脉和肌肉注26（1 1）吸入麻醉法）吸入麻醉法常常用用药药物物为为乙乙醚醚、氟氟烷烷和和异异氟氟烷烷等等。吸吸入入麻麻醉醉法法有有开开放放吸入和气管内插管吸入两种方法。吸入和气管内插管吸入两种方法。开放吸入：适用于啮齿类小动物，可用乙醚、氯仿开放吸入：适用于啮齿类小动物，可用乙醚、氯仿 小动物吸入麻醉机国外已有售。小动物吸入麻醉机国外已有售。气气管管内内插插管管：适适用用于于犬犬、猴猴、羊羊等等大大动动物物，氟氟烷烷和和异异氟氟烷是最常用的麻醉药。烷是最常用的麻醉药。吸入麻醉的优点：吸入麻醉的优点：麻醉平稳、安全可靠、麻醉平稳、安全可靠、停止吸入后很快苏醒停止吸入后很快苏醒缺点：缺点：需要一定的仪器设备，需要一定的仪器设备，注意自身防护。注意自身防护。（1）吸入麻醉法27大小鼠麻醉法大小鼠麻醉法28（2 2）注射麻醉法）注射麻醉法 注注射射麻麻醉醉法法是是使使用用非非挥挥发发性性麻麻醉醉药药进进行行全全麻麻的方法。在动物实验中比较常用。的方法。在动物实验中比较常用。常用麻醉药：常用麻醉药：戊巴比妥钠戊巴比妥钠 硫喷妥钠硫喷妥钠 氯氨酮氯氨酮 乌拉坦乌拉坦 大动物：静脉注射或肌肉注射大动物：静脉注射或肌肉注射 啮齿类动物：腹腔注射啮齿类动物：腹腔注射（2）注射麻醉法29实验动物麻醉应注意的事项实验动物麻醉应注意的事项1.1.大动物麻醉之前应禁食。大动物麻醉之前应禁食。2.2.麻醉之前应准确称量动物体重，作为计算麻麻醉之前应准确称量动物体重，作为计算麻醉剂用量的依据。醉剂用量的依据。3.3.应注意不同麻醉药对动物的作用是不同的，应注意不同麻醉药对动物的作用是不同的，如戊巴比妥钠、硫贲妥钠等能抑制心肌收缩如戊巴比妥钠、硫贲妥钠等能抑制心肌收缩力，使肌肉松弛，而氯胺酮则相反。力，使肌肉松弛，而氯胺酮则相反。4.4.大动物犬、猴、羊等麻醉前半小时应注射麻大动物犬、猴、羊等麻醉前半小时应注射麻醉前给药如阿托品和苯巴比妥钠。醉前给药如阿托品和苯巴比妥钠。5.5.静脉注射麻醉药是必须缓慢，边注射边观察静脉注射麻醉药是必须缓慢，边注射边观察动物的意识、角膜反射、肌肉紧张性和对疼动物的意识、角膜反射、肌肉紧张性和对疼痛的反应，达到麻醉要求时应停止注射。痛的反应，达到麻醉要求时应停止注射。实验动物麻醉应注意的事项306.6.大动物手术时应配备麻醉师，在麻醉过大动物手术时应配备麻醉师，在麻醉过程中密切观察动物的反应，如血压、脉程中密切观察动物的反应，如血压、脉搏、呼吸和体温，及时调节麻醉药剂量，搏、呼吸和体温，及时调节麻醉药剂量，保证手术顺利进行。保证手术顺利进行。7.7.动物在麻醉期间、手术后至苏醒期体温动物在麻醉期间、手术后至苏醒期体温会下降，应注意手术室的室温。会下降，应注意手术室的室温。8.8.注意术后护理。注意术后护理。6.大动物手术时应配备麻醉师，在麻醉过程中密切观察动物的反应31麻醉意外的抢救麻醉意外的抢救 原因：原因：麻醉药速度过快、剂量过大、麻醉过深麻醉药速度过快、剂量过大、麻醉过深 后果：后果：中中枢枢神神经经系系统统抑抑制制导导致致呼呼吸吸系系统统、循循环环系系统统功功能能障障碍，引起呼吸、心跳停止。碍，引起呼吸、心跳停止。抢救方法：抢救方法：要针对具体情况，采取对症治疗的措施。要针对具体情况，采取对症治疗的措施。1.1.立即停止供给麻醉剂立即停止供给麻醉剂 2.2.人工呼吸，吸氧人工呼吸，吸氧 3.3.苏醒剂苏醒剂 4.4.呼吸中枢兴奋剂如可拉明等和心脏和呼吸兴奋剂，呼吸中枢兴奋剂如可拉明等和心脏和呼吸兴奋剂，如如0.1%0.1%肾上腺素适量作心内或静脉注射，静脉滴注肾上腺素适量作心内或静脉注射，静脉滴注50%50%葡萄糖溶液等。葡萄糖溶液等。麻醉意外的抢救32六、实验动物的给药方法六、实验动物的给药方法经口给药法经口给药法注射法注射法其它途径给药方法其它途径给药方法1.1.呼吸道给药呼吸道给药2.2.皮肤给药皮肤给药3.3.脊髓腔内给药脊髓腔内给药4.4.脑内给药脑内给药5.5.直肠内给药直肠内给药6.6.关节腔内给药关节腔内给药六、实验动物的给药方法经口给药法33经口给药经口给药1.1.拌入饲料、饮水中自由摄取拌入饲料、饮水中自由摄取 优点：省人力优点：省人力 缺点：因个体差异，摄入量不等缺点：因个体差异，摄入量不等2.2.灌胃灌胃 优点：能准确定量优点：能准确定量 缺点：给动物造成一定的痛苦，需缺点：给动物造成一定的痛苦，需熟练掌握技术熟练掌握技术经口给药34大小鼠灌胃注意点大小鼠灌胃注意点1.1.用灌胃针。用灌胃针。2.2.从嘴角处插入，到达咽部后从嘴角处插入，到达咽部后改变灌胃针的方向，使其与改变灌胃针的方向，使其与食管的走向一致，然后顺利食管的走向一致，然后顺利插入。插入。3.3.成年大鼠由于体型较大，不成年大鼠由于体型较大，不易保定。办法：易保定。办法：1 1）一人保定，一人灌胃）一人保定，一人灌胃2 2）操作者抓取后，将大鼠尾部按）操作者抓取后，将大鼠尾部按在自己的胸部，达到固定尾在自己的胸部，达到固定尾部的目的，然后灌胃。部的目的，然后灌胃。灌胃量：小鼠灌胃量：小鼠0.2-0.4ml/100.2-0.4ml/10克，克，大鼠大鼠1.0ml/1001.0ml/100克克大小鼠灌胃大小鼠灌胃大小鼠灌胃注意点大小鼠灌胃35 兔灌胃法兔灌胃法 采用用固定器一人操作，或采用用固定器一人操作，或一人保定一人操作法。一人保定一人操作法。操作者用左手拇指和中指挤操作者用左手拇指和中指挤压家兔两颊，将下颌挤开使兔压家兔两颊，将下颌挤开使兔被动张口，右手将开口器从一被动张口，右手将开口器从一侧口角插入口腔并固定，用泡侧口角插入口腔并固定，用泡在水中的在水中的1414号细导尿管，经开号细导尿管，经开口器的孔插入，向前推进约口器的孔插入，向前推进约15cm15cm，可达胃内，确认泡在水，可达胃内，确认泡在水中的导管另一端没有冒气泡，中的导管另一端没有冒气泡，说明没有误入气管，即可注入说明没有误入气管，即可注入药液。灌胃量为每只每次药液。灌胃量为每只每次80-80-150mL150mL。兔灌胃法兔灌胃法 兔灌胃法 兔灌胃法36 1.1.口服给药口服给药 用用右右手手将将口口服服药药片片夹夹在在拇拇指指和和食食指指之之间间，把把左左手手放放在在犬犬的的圈圈套套上上，用用拇拇指指和和食食指指压压着着犬犬的的上上唇唇，用用力力使使犬犬的的头头向向后后仰仰，继继而而把把右右手手中中指指放放在在犬犬的的下下颌颌向向下下压压。当当犬犬的的嘴嘴张张大大时时，快快速速把把药药片片放放在在舌舌根根隆隆起起的的部部位位，合合上上犬犬的的嘴嘴，维维持持头头后后仰仰姿姿势势，右右手手在在咽咽喉喉部部轻轻轻轻按按摩摩。借借助助犬犬本本能能的的吞吞咽咽动动作作服服下下药片。药片。犬的胶囊给药法犬的胶囊给药法 1.口服给药犬的胶囊给药法37 2.2.灌胃给药灌胃给药 在在给给犬犬灌灌胃胃时时，将将犬犬固固定定于于特特制制的的固固定定架架上上，实实验验时时将将木木制制开开口口器器从从一一侧侧口口角角放放入入犬犬的的口口腔腔，用用左左手手或或绳绳子子固固定定，右右手手持持1212号号胃胃管管由由开开口口器器的的小小圆圆孔孔向向咽咽后后壁壁方方向向不不断断插插入入，导导管管另另一一端端置置于于一一杯杯清清水水中中，若若连连续续出出现现气气泡泡，说说明明插插入入呼呼吸吸道道，应应立立即即拔拔出出胃胃管管，重重新新操操作作。如如无无气气泡泡，说说明明没没有有插插入入气气管管，插插至至约约20cm20cm，即即可可到到达达胃胃内内。犬犬的的灌灌药药量量为为每每只只每每次次200-500mL200-500mL。犬的灌胃给药法犬的灌胃给药法 2.灌胃给药 犬的灌胃给药法38各种动物一次灌胃能耐受的最大容积各种动物一次灌胃能耐受的最大容积各种动物一次灌胃能耐受的最大容积39注射法注射法 注射法有皮下注射、腹腔注射、静脉注射、注射法有皮下注射、腹腔注射、静脉注射、肌肉注射以及皮内注射、脑内注射等。肌肉注射以及皮内注射、脑内注射等。药物吸收速度：药物吸收速度：静脉注射腹腔注射肌肉注射静脉注射腹腔注射肌肉注射 皮下注射。皮下注射。皮内注射常用于观察皮肤血管通透性变化或皮内注射常用于观察皮肤血管通透性变化或反应，如过敏试验反应，如过敏试验 脑内注射常用于病毒学接种脑内注射常用于病毒学接种注射法40静脉注射静脉注射1.1.大小鼠尾静脉和足背正中静脉注射大小鼠尾静脉和足背正中静脉注射尾静脉尾静脉大小鼠尾静脉注射大小鼠尾静脉注射静脉注射尾静脉大小鼠尾静脉注射41豚鼠阴茎静脉注射豚鼠阴茎静脉注射豚鼠足背正中静脉注射豚鼠足背正中静脉注射豚鼠阴茎静脉注射豚鼠足背正中静脉注射42兔耳缘静脉注射兔耳缘静脉注射犬前肢头静脉和后犬前肢头静脉和后肢小隐静脉注射肢小隐静脉注射兔耳缘静脉注射犬前肢头静脉和后肢小隐静脉注射43其它途径给药方法其它途径给药方法1.1.呼吸道给药：呼吸道给药：2.2.皮肤给药：皮肤给药：3.3.脊髓腔内给药：脊髓腔内给药：4.4.脑内给药：脑内给药：5.5.直肠内给药：直肠内给药：6.6.关节腔内给药：关节腔内给药：其它途径给药方法44动物间以及动物与人之间动物间以及动物与人之间给药等效剂量的换算给药等效剂量的换算 在药理学毒理学上常涉及到给动物多少剂在药理学毒理学上常涉及到给动物多少剂量的问题：量的问题：不同种属动物间的剂量换算不同种属动物间的剂量换算动物与人之间的剂量换算动物与人之间的剂量换算人与动物间的计量换算人与动物间的计量换算等效剂量：不同动物间或动物与人之间可能等效剂量：不同动物间或动物与人之间可能产生相同药效的剂量。产生相同药效的剂量。等效剂量与单位体重的动物体表面积成正比等效剂量与单位体重的动物体表面积成正比动物间以及动物与人之间给药等效剂量的换算 在药理学毒45表表1.1.标准体重动物由动物标准体重动物由动物a a到动物到动物b b的的mg/kgmg/kg换算系数换算系数:剂量剂量换算系数换算系数动物剂量换算成人剂量：动物剂量换算成人剂量：例例1 1：已知：已知150g150g大鼠用大鼠用5mg/kg5mg/kg，换算成成，换算成成人的用药剂量：查表大鼠人的用药剂量：查表大鼠a a行，成人行，成人b b列的列的换算系数为换算系数为0.1620.162，故成人的剂量，故成人的剂量=50.162=0.81mg/kg=50.162=0.81mg/kg。一种动物剂量换算成另一种动物剂量：一种动物剂量换算成另一种动物剂量：例例2 2：已知：已知20g20g小鼠用小鼠用4mg/kg4mg/kg，换算成，换算成8kg8kg比格犬的用药剂量：查表小鼠比格犬的用药剂量：查表小鼠a a行，比格行，比格犬犬b b列的换算系数为列的换算系数为0.150.15，故比格犬的剂，故比格犬的剂量量=40.15=0.60mg/kg=40.15=0.60mg/kg表1.标准体重动物由动物a到动物b的mg/kg换算系数:剂量46非标准动物的换算非标准动物的换算1.1.非标准动物换算成标准动物：非标准动物换算成标准动物：给药剂量给药剂量校正系数校正系数Sa Sa 换换算系数算系数标准动物换算成非标准动物：标准动物换算成非标准动物：给药剂量给药剂量换算系数换算系数校正系校正系数数SbSb非标准动物换算成非标准动物非标准动物换算成非标准动物:给药剂量给药剂量校正系数校正系数Sa Sa 换换算系数算系数校正系数校正系数SbSb例例3 3：长期毒性试验：长期毒性试验350g350g大鼠用大鼠用10mg/kg10mg/kg，换算成，换算成8kg8kg比格犬的比格犬的用药剂量：查表用药剂量：查表2 2，350/150=2.3350/150=2.3，校正系数，校正系数Sa=1.301Sa=1.301。再查表。再查表1 1大鼠大鼠a a行，行，比格犬比格犬b b列的换算系数为列的换算系数为0.300.30，故，故8kg8kg比格犬的剂量比格犬的剂量=101.3010.30=3.90mg/kg=101.3010.30=3.90mg/kg表表2.非标准体重动物的校正系数非标准体重动物的校正系数非标准动物的换算表2.非标准体重动物的校正系数47（一）采血法（一）采血法大小鼠大小鼠1.1.剪尾剪尾2.2.尾静脉切割尾静脉切割3.3.大鼠后肢足中静脉采血大鼠后肢足中静脉采血4.4.眼眶后静脉丛采血眼眶后静脉丛采血5.5.摘眼球采血摘眼球采血6.6.腋窝动静脉采血腋窝动静脉采血7.7.心脏采血心脏采血8.8.腹主动脉采血腹主动脉采血七、实验动物体液的采集方法七、实验动物体液的采集方法（一）采血法七、实验动物体液的采集方法48心心 脏脏 采采 血血眼眶后静脉丛采血眼眶后静脉丛采血足背正中静脉采血足背正中静脉采血腹主动脉采血腹主动脉采血心 脏 采 血眼眶后静脉丛采血足背正中静脉采血腹主动脉采血49小鼠颌下静脉采血法小鼠颌下静脉采血法50大小鼠不同采血方法的比较大小鼠不同采血方法的比较大小鼠不同采血方法的比较51豚鼠心脏采血豚鼠心脏采血兔耳缘静脉采血兔耳缘静脉采血兔心脏采血兔心脏采血兔颈总动脉采血兔颈总动脉采血豚鼠心脏采血兔耳缘静脉采血兔心脏采血兔颈总动脉采血52一个动物到底能采多少血，取决于动物一个动物到底能采多少血，取决于动物的体重、定期活体采血还是处死采血。的体重、定期活体采血还是处死采血。动物的全血量为动物体重的动物的全血量为动物体重的8%8%左右，其左右，其中约中约30%30%储藏在全身毛细血管内。全血中储藏在全身毛细血管内。全血中约约50%50%是有形成分。据此可测算处死后的是有形成分。据此可测算处死后的采血量和血清量。采血量和血清量。采血为全血量的采血为全血量的10%10%时，两个星期恢复；时，两个星期恢复；采血为全血量的采血为全血量的30%30%时，将危及生命。时，将危及生命。一个动物到底能采多少血，取决于动物的体重、定期活体采血还是处53血清和血浆的区别血清和血浆的区别不同的实验对血液样品的要求不同，有的要求不同的实验对血液样品的要求不同，有的要求全血，有的要求血清或血浆。全血，有的要求血清或血浆。血清血清是指血液凝是指血液凝固后析出的淡黄色的液体，固后析出的淡黄色的液体，血浆血浆是指血液经过是指血液经过抗凝后去除有形成份后的淡黄色液体。血清和抗凝后去除有形成份后的淡黄色液体。血清和血浆的区别在于血清中不含纤维蛋白，而血浆血浆的区别在于血清中不含纤维蛋白，而血浆中含有与凝血有关的许多酶原和纤维蛋白原。中含有与凝血有关的许多酶原和纤维蛋白原。常用的抗凝剂有肝素、枸橼酸钠、乙二胺四乙常用的抗凝剂有肝素、枸橼酸钠、乙二胺四乙酸（酸（EDTAEDTA）钠盐或钾盐。）钠盐或钾盐。血清和血浆的区别54各种实验动物活体安全采血量和致死采血量各种实验动物活体安全采血量和致死采血量各种实验动物活体安全采血量和致死采血量各种实验动物活体安全采血量和致死采血量各种实验动物活体安全采血量和致死采血量55（二）采尿法（二）采尿法反射排尿法反射排尿法代谢笼法代谢笼法导尿法导尿法膀胱穿刺法膀胱穿刺法兔采粪尿兔采粪尿比格犬采粪尿比格犬采粪尿大鼠采粪尿大鼠采粪尿（二）采尿法兔采粪尿比格犬采粪尿大鼠采粪尿56八、实验动物常用处死方法八、实验动物常用处死方法安死术的概念安死术的概念 “安安死死术术”是是指指以以人人道道的的方方法法处处死死动动物物的的过过程程。在在处处死死动动物物过过程程中中减减少少动动物物的的惊惊恐或焦虑，安静地、无痛苦地死亡。恐或焦虑，安静地、无痛苦地死亡。八、实验动物常用处死方法安死术的概念57采用安死术必须符合的标准采用安死术必须符合的标准1.1.死亡时没有惊恐、疼痛的表现死亡时没有惊恐、疼痛的表现2.2.使其在最短时间内失去意识，迅速死亡使其在最短时间内失去意识，迅速死亡3.3.方法可靠且可重复方法可靠且可重复4.4.对操作人员安全对操作人员安全5.5.采用的方法要与研究要求和目的一致采用的方法要与研究要求和目的一致6.6.对观察者和操作者的情绪影响最小对观察者和操作者的情绪影响最小7.7.对环境污染的影响最小对环境污染的影响最小8.8.设备简单、价廉、易操作设备简单、价廉、易操作9.9.处死动物地点应远离，并与动物室隔开处死动物地点应远离，并与动物室隔开采用安死术必须符合的标准58大鼠小鼠大鼠小鼠1.1.颈椎脱臼法颈椎脱臼法2.2.急性失血法急性失血法3.3.麻醉致死法麻醉致死法4.4.气体窒息致死法气体窒息致死法大鼠小鼠59猫、犬、兔猫、犬、兔1.1.空气栓塞法空气栓塞法优点：优点：方法简单、迅速，方法简单、迅速，缺点：由于动物死于急性循环衰竭，各脏器凝血十分明显。缺点：由于动物死于急性循环衰竭，各脏器凝血十分明显。2.2.急性失血法急性失血法 先先行行麻麻醉醉，再再分分离离颈颈动动脉脉或或股股动动脉脉，将将一一根根较较粗粗的的塑塑料料管管插插入入动动脉脉内内放血。动物在放血。动物在3 35min5min内即可死亡。内即可死亡。优点：优点：动动物物十十分分安安静静，对对脏脏器器无无损损伤伤，对对活活杀杀采采集集病病理理切切片片标标本本是是一一种种比比较较好的方法。好的方法。3.3.化学药物致死法化学药物致死法 通过注射一定量的化学药物而使动物迅速致死。常用的化学药物有：通过注射一定量的化学药物而使动物迅速致死。常用的化学药物有：10 10氯化钾溶液：静脉注射，用量为犬氯化钾溶液：静脉注射，用量为犬202030ml/30ml/只，兔只，兔5 510ml10ml只。只。10 10福尔马林：静脉注射，用量为犬福尔马林：静脉注射，用量为犬20ml20ml只。只。猫、犬、兔60大小鼠安乐死法大小鼠安乐死法豚鼠二氧化碳窒息法豚鼠二氧化碳窒息法大小鼠安乐死法豚鼠二氧化碳窒息法61九、动物实验后的护理九、动物实验后的护理1.1.麻醉苏醒前麻醉苏醒前注意保温注意保温保持呼吸道通畅保持呼吸道通畅定时观察记录动物的生命体征定时观察记录动物的生命体征2.2.创口处理创口处理彻底清创处理，必要时放置引流条彻底清创处理，必要时放置引流条可以不用敷料覆盖创口可以不用敷料覆盖创口3.3.抗菌素治疗抗菌素治疗4.4.饮食和输液饮食和输液大手术后适当输液能加快恢复大手术后适当输液能加快恢复犬、猴手术后给与高蛋白、高能量饮食犬、猴手术后给与高蛋白、高能量饮食九、动物实验后的护理1.麻醉苏醒前62十、动物活体解剖、脏器称重十、动物活体解剖、脏器称重及病理取材方法及病理取材方法 动物实验后进行活体解剖是动物实验最动物实验后进行活体解剖是动物实验最后一个重要步骤，通过活体解剖和病理后一个重要步骤，通过活体解剖和病理学观察，可以分析药物的作用、各器官学观察，可以分析药物的作用、各器官病变特点，观察实验效果，为分析实验病变特点，观察实验效果，为分析实验结果提供大体病理和组织病理学依据。结果提供大体病理和组织病理学依据。十、动物活体解剖、脏器称重及病理取材方法 动物实验后进行活63活体解剖程序活体解剖程序体表检查体表检查胸腹部皮下检查胸腹部皮下检查腹腔检查腹腔检查胸腔检查胸腔检查颅脑检查颅脑检查麻麻 醉醉放放 血血活体解剖程序体表检查胸腹部皮下检查腹腔检查胸腔检查颅脑检查麻64腹腔检查腹腔检查 胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠结肠、直肠 肝、脾、胰腺、肾、肾上腺、肠系膜肝、脾、胰腺、肾、肾上腺、肠系膜淋巴结淋巴结 睾丸、副睾、输精管、前列腺、精囊睾丸、副睾、输精管、前列腺、精囊腺腺 卵巢、输卵管、子宫、卵巢、输卵管、子宫、腹腔检查65胸腔检查胸腔检查 心脏、肺、气管、支气管、胸腺心脏、肺、气管、支气管、胸腺颅脑检查颅脑检查 大脑、小脑、脑干、脊髓大脑、小脑、脑干、脊髓胸腔检查66脏器秤重脏器秤重由由于于动动物物的的各各组组织织器器官官在在肿肿瘤瘤、增增生生、炎炎症症、萎萎缩缩等等病病变变时时会会产产生生重重量量上上的的改改变变，这这种种改改变变对对病病理理形形态态学学诊诊断断、分分析析实实验验结结果果有有着着重重要要的的参参考考价价值值及及意意义义，因因此此脏脏器器称称重重是是病病理理解解剖剖学学常用的手段，尤以药理学、毒理学实验常用。常用的手段，尤以药理学、毒理学实验常用。用用器器械械仔仔细细剥剥离离脂脂肪肪及及其其他他附附着着物物后后，置置于于秤秤量纸上用天平称取重量并记录量纸上用天平称取重量并记录注注意意双双侧侧器器官官应应记记录录左左右右，子子宫宫应应注注明明是是否否连连胎盘，睾丸应注明是否连附睾胎盘，睾丸应注明是否连附睾根根据据体体重重算算出出各各器器官官占占体体重重的的百百分分数数，并并列列表表分析。分析。脏器秤重67动物组织标本的选取和固定动物组织标本的选取和固定组组织织块块的的选选取取：选选取取组组织织和和固固定定时时间间应应越越早早越越好好，以以免免发发生生自自溶溶。选选取取组组织织块块首首先先应应选选取取病病灶灶与与正正常常交交界界处处的的组组织织，即即包包括括病病变变本本身身及及病病变变周周围围的的正正常常组组织织。其其次次切切出出的的组组织织，也也应应注注意意包包括括所所有有脏脏器器的的重重要要结结构构部部分分。同同时时，切切出出时时要要取取其其最最大大的的组组织织面面。采采取取组组织织时时还还要要尽尽量量保持肉眼标本的完整性。保持肉眼标本的完整性。切切取取组组织织块块的的大大小小与与形形状状：组组织织块块的的厚厚度度要要适适宜宜，一一般般厚厚约约3 35mm5mm，大大小小为为1.51.52cm2cm2 2。组组织织块块的的形形状状在在成成对对器器官官或或同同一一器器官官切切取取多多块块组组织织时时，应应切切成成不不同同的的形形状状，以以便便易易子子辨辨别别而而不不致致混混淆淆。例例如如，左左肾肾切切成成长长方方形形或或三三角角形形，右右肾肾切成正方形。切成正方形。动物组织标本的选取和固定68保保持持组组织织块块的的完完整整性性：切切取取的的组组织织块块不不要要挤挤压压。切切时时宜宜用用锋锋利利的的刀刀，少少用用剪剪，而而且且切切时时不不能能将将刀刀来来回回拉拉据据，必必须须用用力力一刀切下以免挤压组织，造成变形。一刀切下以免挤压组织，造成变形。组组织织块块的的固固定定：根根据据实实际际情情况况来来选选取取固固定定液液。固固定定液液要要新新鲜鲜，应应取取10102020倍倍于于固固定定组组织织的的体体积积，固固定定时时间间一一般般在在24h24h或或更长。更长。保持组织块的完整性：切取的组织块不要挤压。切时宜用锋利的刀69总结报告和论文中总结报告和论文中关于动物实验的描述关于动物实验的描述一、论文题目中关于动物种的描述：一、论文题目中关于动物种的描述：例：汞化合物致例：汞化合物致小鼠小鼠骨髓细胞微核及染色体畸变研究骨髓细胞微核及染色体畸变研究 长爪沙鼠长爪沙鼠生物学特性研究生物学特性研究二、材料和方法中关于实验动物和动物实验的描述二、材料和方法中关于实验动物和动物实验的描述1.1.实验动物及饲养管理实验动物及饲养管理 品种、品系、性别、数量、级别、来源、生产许可证号、在何处做动品种、品系、性别、数量、级别、来源、生产许可证号、在何处做动物实验、使用许可证号、饲养环境控制、饲养方式（饲料、饮水）、物实验、使用许可证号、饲养环境控制、饲养方式（饲料、饮水）、垫料更换垫料更换2.2.动物实验方式动物实验方式 施加试验因素方式：给药、取样、麻醉、处死施加试验因素方式：给药、取样、麻醉、处死3.3.动物实验伦理审查动物实验伦理审查 经实验动物伦理委员会审查，审查表编号经实验动物伦理委员会审查，审查表编号总结报告和论文中关于动物实验的描述一、论文题目中关于动物种70谢谢！71