临床常用免疫学检查-5

临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查苏大附二院检验科苏大附二院检验科 冯萍冯萍掌握：免疫球蛋白、补体的临床意义病毒性肝炎血清标记物的检测肿瘤标记物的检测熟悉：感染免疫检查自身抗体的检测第一节第一节 体液免疫检查体液免疫检查一、血清免疫球蛋白的检测一、血清免疫球蛋白的检测 免疫球蛋白是指由浆细胞所产生免疫球蛋白是指由浆细胞所产生的的,具有抗体活性和具有抗体活性和(或或)抗体样结构抗体样结构的球蛋白的球蛋白.主要分为主要分为:IgG,IgA,IgM,IgEIgG,IgA,IgM,IgE和和IgDIgD五类五类.IgG IgA IgMIgG IgA IgM测定测定IgGIgG:含量最多或最主要的含量最多或最主要的IgIg（75%75%），），唯一能够通过胎盘的唯一能够通过胎盘的IgIgIgAIgA:约占约占10%10%，分为分泌型和血清型，分为分泌型和血清型，在局部免疫中起重要作用在局部免疫中起重要作用IgMIgM：分子量最大，是抗原刺激后最早分子量最大，是抗原刺激后最早出现的抗体出现的抗体检测方法检测方法：免疫比浊法免疫比浊法参考值参考值：成人成人 IgGIgG：7.07.016.016.0 g/L g/L IgAIgA：0.70.75.05.0 g/L g/L IgMIgM：0.40.42.8 2.8 g/Lg/L临床意义临床意义免疫球蛋白增高免疫球蛋白增高l多克隆增高多克隆增高:常见于各种慢性感染、慢性肝常见于各种慢性感染、慢性肝病病 肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性疾病，肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性疾病，如如SLESLE、类风湿关节炎等、类风湿关节炎等l单克隆增高单克隆增高:主要见于免疫增殖性疾病，如主要见于免疫增殖性疾病，如多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等临床意义临床意义免疫球蛋白降低免疫球蛋白降低 常见于各类先天性免疫缺陷病、重链病、常见于各类先天性免疫缺陷病、重链病、轻链病、获得性免疫缺陷病、肾病综合征、轻链病、获得性免疫缺陷病、肾病综合征、联合免疫缺陷病及长期使用免疫抑制剂的联合免疫缺陷病及长期使用免疫抑制剂的病人。病人。IgG下降：细菌感染下降：细菌感染 IgA下降：反复呼吸道感染下降：反复呼吸道感染 IgM下降：败血症下降：败血症二、血清M蛋白检测 M蛋白或称单克隆免疫球蛋白，是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖产生的，具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子或其分子片断，一般不具有抗体活性 参考值 阴性 临床意义见于单克隆免疫球蛋白增殖病：MM 巨球蛋白血症 重链病(、重链)轻链病(、轻链)半分子病：IgA、IgG型 恶性淋巴瘤 良性M蛋白血症三、血清补体检测 补体(complement,C)是一组具有酶原活性的糖蛋白,共有20余种组分,具有溶细胞、调理作用、中和与溶解病毒和炎症介质、清除免疫复合物等作用。是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件，故称为补体。按功能分为经典途径、旁路激活途径、膜攻击组分和调节分子4种。总补体溶血活性检测（CH50）抗原:绵羊红细胞 +抗体:兔抗羊红细胞抗体(溶血素)+补体 溶血100806040201234 血清(ml)溶血%溶血程度与补体含量的关系参考值试管法:50-100u/ml临床意义主要反映补体传统途径活化的活性程度.lCH50增高:见于急性炎症、组织损伤（风湿热急性期、结节性动脉周围炎、皮肌炎、多发性关节炎、伤寒）和某些肿瘤。lCH50降低：更有意义。见于肾小球肾炎、自身免疫性疾病（SLE、RA）、感染性心内膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病和遗传性血管神经水肿。在患SLE、RA等自身免疫病时，血清补体水平随病情发生变化。细菌感染，特别是革兰阴性细菌感染时，常因补体旁路途径的活化过度引起血清补体水平降低。心肌梗塞、甲状腺炎、大叶性肺炎、糖尿病、妊娠等情况下血清补体水平常升高。补体C3检测 C3是补体系统中含量最多的物质，主要由巨噬细胞和肝脏合成，在C3转化酶的作用下，裂解成C3a与C3b,在传统途径和旁路途经中发挥重要作用。参考值 成人:0.821.70g/L临床意义l 增高：急性炎症、传染病早期、肿瘤、排斥反应。l 降低：消耗增多：肾炎、活动性SLE、RA。合成不足：肝病。大量丧失：肾病综合症、大面积烧伤等。补体C4检测 C4由肝脏、巨噬细胞合成，为C1s底物，参与经典激活途径，在补体活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和病毒等方面发挥作用。参考值 成人：0.150.49g/L 临床意义 增高:组织损伤性疾病.降低:狼疮性肾炎、SLE、自身免疫 性肝炎、型糖尿病、胰腺癌、多发 性硬化症、RA、IgA型肾炎、遗传性 IgA缺乏症。第二节 细胞免疫检查 人的淋巴细胞可分为人的淋巴细胞可分为：T T、B B、NKNK等细胞群他们有不同的表面标志等细胞群他们有不同的表面标志和功能。和功能。T T、B B细胞还分为不同的亚细胞还分为不同的亚型。型。一、淋巴细胞表面标志物检测一、淋巴细胞表面标志物检测lE E玫瑰花形成试验玫瑰花形成试验 ：T T细胞表面有绵羊红细胞表面有绵羊红 细胞受体，与细胞受体，与SRBCSRBC 结合形成花结样的结合形成花结样的 细胞，可用于细胞，可用于T T淋巴细胞计数。淋巴细胞计数。分化抗原测定：荧光标记的抗体与分化抗原测定：荧光标记的抗体与T T细胞细胞反应，用荧光显微镜或流式细胞仪计数。反应，用荧光显微镜或流式细胞仪计数。临床意义l降低降低：见于免疫缺陷疾病，如恶性肿：见于免疫缺陷疾病，如恶性肿瘤、免疫性疾病、某些病毒感染、大瘤、免疫性疾病、某些病毒感染、大面积烧伤、多发性神经炎、淋巴增殖面积烧伤、多发性神经炎、淋巴增殖疾病。疾病。l升高升高：见于甲亢、甲状腺炎、重症肌：见于甲亢、甲状腺炎、重症肌无力、慢性活动肝炎等。无力、慢性活动肝炎等。T细胞亚群检测CDCD3 3代表总代表总T T淋巴细胞淋巴细胞CDCD4 4是是辅助、诱导辅助、诱导T T细胞的细胞的标志标志CDCD8 8是抑制、杀伤性是抑制、杀伤性T T细胞细胞的标志的标志应用单抗和荧光标应用单抗和荧光标记二抗反应在荧光显记二抗反应在荧光显微镜下或流式细胞仪微镜下或流式细胞仪中计数中计数CDCD的百分率。的百分率。CD3CD8CD3CD4 参考值参考值 免疫荧光法（免疫荧光法（IFAIFA）：）：CD CD3 3为为63.1%10.8%63.1%10.8%；CD CD4 4 为为42.8%9.5%42.8%9.5%；CD CD8 8 为为19.6%5.9%19.6%5.9%；CD CD4 4/CD/CD8 8为（为（2.20.72.20.7）/1/1。流式细胞术：流式细胞术：CDCD3 3 61%61%85%85%；CDCD4 4 28%28%58%58%；CDCD8 8 19%19%48%48%；CDCD4 4/CD/CD8 80.90.92.0/12.0/1 CD3CD3下降下降:自身免疫性疾病、免疫缺陷病、自身免疫性疾病、免疫缺陷病、放疗、化疗后、肾上腺素治疗后放疗、化疗后、肾上腺素治疗后 CD4CD4下降下降:恶性肿瘤、免疫缺陷病、免疫恶性肿瘤、免疫缺陷病、免疫抑制剂的使用、病毒感染、严重创伤、大抑制剂的使用、病毒感染、严重创伤、大手术手术 CD8CD8下降下降：自身免疫性疾病、变态反应：自身免疫性疾病、变态反应疾病疾病临床意义CD4/CD8增高：自身免疫性疾病、恶性肿瘤、病毒感染、变态反应CD4/CD8下降：HIV（0.5)、传单、巨细胞病毒感染等器官移植排斥反应的监测:升高预示可能发生排斥发应;持续下降提示感染发生,0.2必须停止使用免疫抑制剂。B淋巴细胞表面标志测定膜表面免疫球蛋白(SmIg)测定：升高与淋巴细胞恶性增殖有关，降低与体液免疫缺陷有关分化抗原的测定：CD19为最重要的B淋巴细胞标记分子，升高主要见于淋巴系统的恶性肿瘤 二、淋巴细胞功能检测二、淋巴细胞功能检测T T细胞转化试验细胞转化试验 原理：原理：在体外培养时，在体外培养时，T T细胞在刺激细胞在刺激物的作用下，转化为淋巴母细胞，部物的作用下，转化为淋巴母细胞，部分发生有丝分裂，计数淋巴细胞及转分发生有丝分裂，计数淋巴细胞及转化的母细胞数，求出转换百分数化的母细胞数，求出转换百分数。意义：判断机体细胞免疫功能水平、估计疾病的疗效和预后。1.形态法形态法2.H-TdR掺入法掺入法3.MTT法法混合淋巴细胞反应 原理：两个无关个体的淋巴细胞混合培养时，双方淋巴细胞会以对方为抗原发生反应，T淋巴细胞发生转化 意义：反应机体整体的细胞免疫功能水平、用于HLA的细胞学分型NKNK细胞活性测定细胞活性测定 能直接杀伤效应细胞，具有抗肿瘤、能直接杀伤效应细胞，具有抗肿瘤、抗感染和免疫调节等功能，亦参与抗感染和免疫调节等功能，亦参与移植物排斥反应、自身免疫病和超移植物排斥反应、自身免疫病和超敏反应的发生敏反应的发生方法：乳酸脱氢酶释放法、51Cr释放法、流式细胞术l意义：肿瘤疗效观察与预后、免疫调节功能第三节、病毒性肝炎血清 标志物检测甲型肝炎病毒标志物检测甲型肝炎病毒抗原和RNA检测 参考值均阴性 临床意义HAVAg阳性:HAVAg在发病前两周可从粪便中排出.HAV-RNA阳性:早期诊断及特异性诊断。在病人粪便中检出表明病人急性感染,且病人及其排泄物皆为传染原。甲型肝炎病毒抗体检测 机体可产生IgM,IgG,IgA,HAV-IgM是病毒衣蛋白抗体,HAV-IgA是肠道粘膜分泌的局部抗体,HAV-IgG可长期存在.参考值均为阴性.抗HAV-IgM阳性:是机体早期诊断指标,说明机体正处于感染期,是感染的特异性指标。抗HAV-IgA阳性:早期和急性期在粪便中测得,是早期诊断指标之一。抗HAV-IgG阳性:阳性提示既往感染,可作为流行病学调查指标。临床意义乙型肝炎病毒标志物检测The infectious virion is called the DANE particle.HBsAg:具有抗原性,无传染性 参考值阴性 临床意义 1.HBsAg为乙肝患者首先出现的病毒标志物,可作为乙肝的早期诊断和普查项目。在急性肝炎潜伏期即可阳性,而临床表现及肝功异常要在4周后才出现,乙肝发病时HBsAg达高峰。是诊断乙肝最常用的指标。2.3个月后不转阴,变为慢性:慢性迁延性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化、肝癌。3.慢性HBsAg携带者。HBsAb:针对HBsAg产生,有一定的中和作用,阳性表明机体有一定免疫力。参考值阴性 临床意义阳性提示急性感染后康复,在发病后转阳或效价升高有意义.一般3-6月后出现,可持续多年。判断疫苗的质量最主要的指标。接受HBsAb阳性血的受血者,可出现短暂阳性。HBeAg:核心颗粒的可溶性蛋白,具有抗原性。参考值阴性 临床意义 HBeAg阳性是乙肝传染性的标志物,具有传染性,病人处于活动期.HBeAg与DNA复制成正比,也和肝损成正比。母婴传播。判断急性乙肝的预后。HBeAb:比HBsAb转阳要早.参考值阴性 临场意义 急性肝炎患者HBeAg转阴,HBeAb出现,认为病情好转,预后良好,病毒复制水平下降,传染性降低,但并非无传染性。潜在HBeAb阳性可能是慢性迁延和恶性变信号。HBcAg:存在于Dane颗粒核心,是一种核心蛋白,被HBsAg包裹,一般测不出来。参考值阴性 临床意义乙肝传染性活动性病变的标志:HBsAg、HBeAg和HBcAb等指标是体内存在乙肝病毒的间接标志，而HBcAg是直接标志，与HBVDNA呈正相关，可反映HBV活动性复制程度。HBcAb:有IgG、IgM、IgA三种。参考值阴性 临床意义 1 HBcAb总抗体：主要反映IgG。HBV感染的指标 乙肝急性期的辅助诊断：“窗口期”流行病学调查的指标 献血员的筛选 观察疫苗的安全性2 HBcAb-IgM 急性乙肝的诊断:感染早期HBcAb-IgM上升,数月后不论HBsAg是否消失,HBcAb-IgM都稳定。HBsAg阴性急性感染者HBcAb-IgM阳性且高滴度,也可诊断。判断病毒复制的指标:有助于区别慢活肝或非活动性肝炎,慢活肝HBcAb-IgM阳性，低度低。有助于鉴别近期感染或即往感染3 HBcAb-IgG 流行病学调查 有助于区别慢活肝或非活动性肝炎:特别是急性乙肝和乙肝携带者急性发作 Brag HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb Diagnosis1 +-+-early HBV infection 2 +-+-+acute HBV infection (high infectivity)3 +-+HBV infection e-antibody-conversion(low infectivity)4 -+convalescent window stage 5 -+-+early convalescent stage6 -+acute or chronic HBV infection7 -+-vaccination HBV-DNA:参考值阴性 临床意义 乙肝的直接诊断依据 母婴垂直传播丙型肝炎病毒标志物的检测HCV-RNA 参考值阴性临床意义 早期病原学诊断判断预后HCV-IgM 参考值阴性 临床意义急性丙肝患者4周后阳性,6个月内治愈转阴,否则转变为慢性。HCV-IgG:出现慢,2-6月后阳性 参考值阴性 临床意义 抗HCV-IgG阳性表明已有HCV 献血员筛选 第四节、感染免疫检查第四节、感染免疫检查抗链球菌溶血素抗链球菌溶血素o测定测定(ASO)参考值乳胶凝集法500U 临床意义 增高：A族溶血性链球菌感染所引起的疾病：风湿热(风湿性关节炎、风湿性心肌炎)，急性上呼吸道感染(扁桃体炎)，急性肾小球肾炎等。伤寒和副伤寒沙门氏菌的检测 肥达氏反应(Widal)参考值 o凝集效价1:80 伤寒H凝集效价1:160,副伤寒A,B,C凝集效价1:80,H1:1602副伤寒甲:O1:80,A1:160 乙:O1:80,B1:160 丙:O1:80,C1:1603单O升高:感染早期或其他沙门氏菌与O抗原交叉反应4单H升高:预防接种或非特异性反应C反应蛋白测定(C-reactive protein,CRP)参考值免疫比浊法:10mg/L 临床意义 1组织损伤:大手术,严重创伤,烧伤,心梗 2细菌感染,病毒感染升高不明显 3风湿热活动期 4恶性肿瘤,器官移植后排斥反应TORCH感染免疫检测TO：toxoplasma gondii,弓形虫R：rubella virus,风疹病毒C：cytomegalovirus,巨细胞病毒H：herpes simplex virus,单纯疱疹病毒 孕妇感染后可通过胎盘传染给胎儿，导致流产、死胎、早产、先天畸形和智力障碍，已被作为孕期检查常规项目。第五节、肿瘤标志物检测 肿瘤标志物(tumor marker):肿瘤在发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或机体对肿瘤反应而产生的一种物质。反映细胞恶变各阶段表型及基因特征性。甲种胎儿蛋白（AFP）：早期胎儿肝脏合成，出生后受抑制。当肝脏细胞或生殖腺胚胎组织恶变时显著增高。参考值定性:阴性，定量:300ug/L生殖腺胚胎癌中的运用:在睾丸癌、卵巢癌、畸胎癌的诊断、疗效观察和预后判断中均有意义。其他：鉴别妊娠和绒毛癌；在胎盘梗塞、剥离、羊水栓塞、胎儿先天性开放性神经管畸形，病毒性肝炎、肝硬化。癌胚抗原（CEA）：胎儿早期的消化管和某些组织均可合成，孕6个月后下降，出生后极低。参考值15ug/l 临床意义 由内胚层分化来的恶性肿瘤：尤其是消化道腺体的肿瘤检出率较高，特别是结肠癌；某些良性肿瘤:直肠息肉轻度一过性增高,结肠炎、胰腺炎、肝脏疾病、肺气肿、支气管哮喘；其他体液：良性胸腹水CEA血清 胃液CEA增高，且先于血清对诊断胃癌有一定价值。癌抗原125（CA-125)属于糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于卵巢肿瘤的上皮细胞。临床意义卵巢癌的诊断、疗效观察、判断复发、有重要意义。妇科恶性肿瘤：卵巢上皮细胞肿瘤、透明细胞癌、生殖细胞肿瘤、宫颈癌中均升高。其他：肝癌、胃癌、结肠直肠癌、肺癌、均可增高，良性卵巢肿瘤、子宫肌瘤也可增高。前列腺特异性抗原（PSA):存在于前列腺导管上皮细胞中。可分为复合PSA（C-PSA）和游离PSA（F-PSA）参考值T-PSA40ug/l，F-PSA0.25临床意义有器官特异性，无肿瘤特异性前列腺癌的筛选：T-PSA增高,F-PSA/T-PSA25%8%50%0%第六节、自身抗体检查第六节、自身抗体检查自身免疫性疾病（自身免疫性疾病（AIDAID）：某些原因削弱或：某些原因削弱或破坏健康人的自身免疫耐受，免疫系统对自破坏健康人的自身免疫耐受，免疫系统对自身组织或成分产生免疫应答，称自身免疫。身组织或成分产生免疫应答，称自身免疫。由于自身免疫而产生的疾病称自身免疫病。由于自身免疫而产生的疾病称自身免疫病。自身抗体检查自身抗体检查类风湿因子类风湿因子（RFRF）：）：靶抗原为变性靶抗原为变性IgGIgG的的FcFc部分，有部分，有IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM、IgDIgD、IgEIgE五种类五种类型。型。90%RA 90%RA患者呈阳性，患者呈阳性，IgA-RFIgA-RF与骨质破坏有关，与骨质破坏有关，早期升高提示病情严重，预后不良。早期升高提示病情严重，预后不良。IgE-IgE-RFRF升高时已属病情晚期升高时已属病情晚期。RFRF无严格特异性，不是无严格特异性，不是RARA的诊断惟一标准的诊断惟一标准 不同疾病时不同疾病时RFRF的检出率的检出率 疾病 阳性率%类风湿性关节炎 79 干燥综合征 95 SLE 30 硬皮病 80 皮肌炎 80 混合结缔组织病 20 抗核抗体抗核抗体（ANA）：ANAANA是以自身真核细胞是以自身真核细胞的各种细胞核成分作靶抗原的一组自身抗的各种细胞核成分作靶抗原的一组自身抗体的总称，体的总称，ANAANA的性质主要是的性质主要是IgGIgG,ANAANA无种无种属和器官特异性可与所有动物细胞核发生属和器官特异性可与所有动物细胞核发生反应。反应。可提取性核抗原性多肽抗体谱测定可提取性核抗原性多肽抗体谱测定（ENA）：包括Sm、RNP、Jo-1、Scl-70、SSA/Ro、SSB/La等抗抗DNADNA抗体抗体 ：抗：抗dsds-DNA-DNA抗体抗体种类意义ANA最多见于SLEsDSLE诊断指标之一抗抗体为SLE所特有抗组蛋白抗体的SLE及以上药物引导性狼疮抗U1RNP与混合性结缔组织病MCTD有关抗SSB/SSA见于干燥综合症抗Jo-1多见于多发性肌炎-硬皮病抗Scl-70出现于进行性系统硬化症常见的抗细胞核抗体的临床意义自身抗体检查项目选择自身抗体检查项目选择 SLE SLE：ANAANA、抗（、抗（ds-DNAds-DNA）、）、抗抗Sm Sm、抗、抗SSA SSA、抗组蛋白、抗组蛋白l pSSpSS：抗抗SSASSA、抗、抗SSBSSBlDM/PMDM/PM：抗合成酶（抗合成酶（jo-1jo-1，PL-7PL-7，PL-12)PL-12)抗抗SRPSRP、抗、抗Mi-2Mi-2lSSc:SSc:ACAACA（抗着丝点）、抗（抗着丝点）、抗Scl-70Scl-70、抗核仁、抗核仁抗体抗体lMCTDMCTD：ANA ANA、抗、抗RNPRNP第七节 器官与骨髓移植的检测人类白细胞抗原:位于第6对染色体的短臂上,共有6个座位,分为HLA-A,HLA-B,HLA-C,HLA-DR,HLA-DQ,HLA-DP。分为类抗原HLA-A,HLA-B,HLA-C座位基础上的基因编码的抗原和类抗原HLA-DR,HLA-DQ,HLA-DP座位基因多编码的抗原HLA DNA分型 方法：PCR，琼脂糖电泳等 临床意义：供体和受体HLA位点及碱基顺序是否一致，决定着顺序不同可导致慢性排斥反应或畸形排斥反应。血清学分型l可以用血清学分型技术的抗原：HLA-A、B、C、DR、DQl方法 微量细胞毒试验 特定细胞群反应抗体测定 淋巴细胞毒交叉配型实验 细胞学分型 主要用于 HLA-D和HLA-DP抗原的测定 临床意义：选择相同的HLA-D和HLA-DP抗原的供受体，是器官移植成功的前提。器官和骨髓移植检测项目选择和应用 器官移植前，要做的配型有：1.ABO血型相配2.HLA配型3.有条件做DNA分型4.不同的器官移植，对HLA相容性要求也不同。骨髓、肾移植要求严，心肝则不然。