基因工程操作程序(后3步)

二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建1 1、为什么要构建基因表达载体？、为什么要构建基因表达载体？2 2、基因表达载体要包括那些结构与运载体、基因表达载体要包括那些结构与运载体是不是一个意思是不是一个意思?（请阅读（请阅读P11P11结合课本插图思考下列问题）结合课本插图思考下列问题）3 3、启动子、终止子和标记基因，在基因表、启动子、终止子和标记基因，在基因表达载体中有何作用达载体中有何作用?4 4、在表达载体的构建过程中用到了哪些工、在表达载体的构建过程中用到了哪些工具酶？具酶？使目的基因在受体细胞中稳定使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发同时使目的基因能够表达和发挥作用。挥作用。二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建基因工程的核心基因工程的核心目的：目的：载体与表达载体的区别载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分二者都有标记基因和复制原点两部分DNADNA片段。片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构子、终止子三部分结构1.1.用一定的用一定的_切割切割 质粒，使其出现一个切质粒，使其出现一个切 口，露出口，露出_。2.2.用用_切断目切断目 的基因，使其产生的基因，使其产生_ _ _。二二 基因表达载体的构建基因表达载体的构建 核心核心3.3.将切下的目的基因片段插入质粒的将切下的目的基因片段插入质粒的_处，处，再加入适量再加入适量_，形成了一个重组，形成了一个重组 DNA DNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一种限制酶同一种限制酶的黏性末端的黏性末端切口切口DNADNA连接酶连接酶相同相同质粒质粒DNADNA分子分子限制酶处理限制酶处理一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因DNADNA连接酶连接酶重组重组DNADNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）核心核心同一种同一种(二二)基因表达载体的构建基因表达载体的构建4.4.过程过程:三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞1 1、什么是转化？、什么是转化？2 2、针对不同的受体细胞，常见的转化、针对不同的受体细胞，常见的转化方法都有哪些？方法都有哪些？3 3、将目的基因导入细胞的具体过程是、将目的基因导入细胞的具体过程是怎样的？怎样的？阅读课本阅读课本P12-13P12-13相关内容，思考下列问题相关内容，思考下列问题(三三)将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞转化转化 方法方法将目的基因导入将目的基因导入植物细胞植物细胞将目的基因导入将目的基因导入动物细胞动物细胞将目的基因导入将目的基因导入微生物细胞微生物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法显微注射法显微注射法感受态法感受态法目的基因进入目的基因进入_内，并且在内，并且在 受体细胞内维持受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达1 1、将目的基因导入植物细胞的方法：、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法适用于：农杆菌转化法适用于：(三三)将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞目的基因获取目的基因获取 目的基因与农杆菌目的基因与农杆菌TiTi质粒结合质粒结合 导入导入农杆菌农杆菌细胞细胞 导入植物细胞导入植物细胞 目的基因整合到植物目的基因整合到植物细胞染色体上，随染色体复制并表达一定性细胞染色体上，随染色体复制并表达一定性状状双子叶植物双子叶植物2 2、将目的基因导入动物细胞、将目的基因导入动物细胞（1）方法：显微注射法）方法：显微注射法（2）程序：）程序：(三三)将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞3 3、将目的基因导入微生物细胞、将目的基因导入微生物细胞（1）原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少）原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少（2）方法：）方法：目的基因表达载体提纯目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵）取卵（受精卵）显微注射显微注射 受精卵受精卵 新性状动物新性状动物用用CaCa2+2+处理细胞处理细胞 感受态细胞感受态细胞 表达载体表达载体与感受态细胞混合与感受态细胞混合 感受态细胞吸收感受态细胞吸收DNADNA分子分子(四四)目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定检查是否成功检查是否成功分子分子水平水平个体水平个体水平检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA检测目的基因是否翻译成蛋白质检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等方法方法方法方法方法方法DNADNA分子杂交分子杂交分子杂交分子杂交（注意与上不同之处）（注意与上不同之处）抗原抗体杂交抗原抗体杂交DNADNA分子杂交示意图分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的采用一定的技术手段，将两种生物的DNADNA分分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。DNADNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNADNA，然后高温解成单链，再与同位素标记，然后高温解成单链，再与同位素标记的的DNADNA探针杂交；探针杂交；抗原抗体杂交所用到抗原抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的。疫，产生相应的抗体，并提取出而来的。完成导学案第完成导学案第6题题结合导学案结合导学案P2相关内容，注意以下两点相关内容，注意以下两点1.获取目的基因获取目的基因2.构建基因表达载体构建基因表达载体3.将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定u从基因文库从基因文库u利用利用PCRu化学方法人工合成化学方法人工合成u目的基因、启动子、终止子、标记基因目的基因、启动子、终止子、标记基因u农杆菌转化法、显微注射法、农杆菌转化法、显微注射法、u检测：是否插入、转录、翻译检测：是否插入、转录、翻译归纳归纳:基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1）有有关关基基因因工工程程的的叙叙述述正正确确的的是是 （）A、限制酶只在获得目的基因时才用、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体、质粒都可作为运载体 D、蛋蛋白白质质的的结结构构可可为为合合成成目目的的基基因因提提供供资料资料D D练习练习2）基基因因工工程程是是在在DNA分分子子水水平平上上进进行行设设计计施施工工的的。在在基基因因操操作作的的基基本本步步骤骤中中，不不进进行行碱碱基基互互补补配配对对的的步步骤骤是是 （）A、人工合成目的基因、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达、目的基因的检测和表达C C练习练习