RP—HPLC测定人参果总皂苷中人参皂苷Re和人参皂苷的资料方式2600字

RPHPLC测定人参果总皂苷中人参皂苷Re和人参皂苷的资料方式2600字 人参果总皂苷为五加科（Araliaceae）植物人参（Panax ginseng C.A.Mey）的成熟果实经加工制成的总皂苷1。目前国内外对人参根、茎、叶及其提取物的研究已有大量的报道，但对人参果及其提取物的研究报道相对来说比较少，中国药典（2010年版）制定并收录了人参、人参叶、人参总皂苷和人参茎叶总皂苷的质量标准2，但人参果未被收录，同时人参果中人参皂苷Re和人参皂苷Rd的含量测定方法也未见相关文献报道。本实验旨在建立人参果总皂苷中人参皂苷Re和人参皂苷Rd的含量测定方法，同时规定其含量限度，可作为人参果总皂苷的质量控制指标之一，并为更好地控制人参果及其提取物的质量和相关产品的开发提供试验依据。仪器与材料仪器：日本SHIMADZU高效液相色谱仪；LC-10ATVP泵；SPD-10AVP检测器；N2000工作站；KQ3200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。材料：人参果总皂苷由吉林集安益盛药业股份有限责任公司提供。人参皂苷Rd对照品（批号111818-201001）、人参皂苷Re对照品（批号110754-200218），购自中国药品生物制品检定所。乙腈，甲醇均为色谱纯，水为蒸馏水，其余试剂均为国产分析纯。方法与结果色谱条件：Apollo C18色谱柱（250mmx4.6mm，5μm）；流速1.0ml/分；检测波长203nm；柱温25。流动相为乙腈-水梯度洗脱，洗脱条件，见表1。在以上色谱条件下，供试品色谱中，在与人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rd对照品色谱相同的保留时间处有色谱峰，并与其他组分基本达到基线分离。见图1A、图1B。对照品溶液的制备：取人参皂苷Re和人参皂苷Rd对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Re 0.726mg和人参皂苷Rd 0.434mg的混合溶液，0.45μm滤膜滤过。供试品溶液的制备：取人参果总皂苷粉末30mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇超声使溶解并稀释至刻度，0.45μm滤膜滤过，取续滤液。检测波长的选择：分别吸取人参皂苷Re和人参皂苷Rd对照品溶液适量，以甲醇为空白，在190370nm波长处扫描，结果可见人参皂苷Re及人参皂苷Rd对照品溶液在203nm处有最大吸收，故最终选择203nm为测定波长。线毕业专业提供代写论文和发表服务，lunwEN.1kejiAN. c om欢迎您的光临性关系考察：分别精密吸取对照品混合液4、7、10、13、19μl进样。以峰面积（Y轴）与对照品质量（X轴），绘制标准曲线。结果表明，人参皂苷Re 2.90413.794μg，线性关系良好，回归方程Y=182766X-12079，相关系数r=0.9993；人参皂苷Rd 1.7368.246μg，线性关系良好，回归方程Y=185851X-11006，相关系数r=0.9990。精密度试验：精密吸取供试品溶液10μl，连续重复进样6次，依法检测，结果人参皂苷Re峰面积的RSD值0.9%，人参皂苷Rd峰面积的RSD值1.8%，表明仪器系统精密度良好。稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液10μl，分别在0、2、5、8、12小时进样，依法检测，结果人参皂苷Re峰面积的RSD值1.6%，人参皂苷Rd峰面积的RSD值1.1%，表明供试品溶液在12小时内稳定。重现性试验：取同一批次的人参果总皂苷，按供试品溶液制备方法制备6份样品，分别检测，计算人参皂苷Re、Rd含量，结果人参皂苷Re平均含量19.1%，RSD值1.5%，人参皂苷Rd平均含量12.8%，RSD值1.9%。加样回收率试验：取重现性试验同批次的人参果总皂苷15mg，6份，精密称定，分别精密加入人参皂苷Re和人参皂苷Rd对照品，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，依法检测，计算人参皂苷Re和人参皂苷Rd回收率，结果人参皂苷Re平均回收率98.5%，RSD值1.0%，人参皂苷Rd平均含量97.8%，RSD值0.7%。见表2和表3。样品含量测定及含量限度的确定：按含量测定项下方法，测定了10批人参果总皂苷;中人参皂苷Re和人参皂苷Rd的含量，见表4。根据上述测定结果，10批样品中人参皂苷Re的平均含量19.35%，且均高于14.0%；人参皂苷Rd的平均含量12.05%，且均高于8.0%。考虑原料药产地、加工及生产等因素的影响，限定本品含人参皂苷Re（C48H82O18）计不得少于14.0%；含人参皂苷Rd（C48H82O19）不得少于8.0%。讨 论在本研究中曾对供试品溶液的制备和色谱条件分别进行了考察。在对供试品溶液制备方法考察中发现，利用D101型大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，柱高15cm）法与超声法提取所得的样品，经测定其色谱峰分离毕业专业提供代写论文和发表服务，lunwEN.1kejiAN. c om欢迎您的光临度及含量基本一致，并且后者操作更简便、快速，因此在制备供试品溶液时选用超声法。在探索色谱条件的实验中发现，采用乙腈-0.1%磷酸为流动相梯度洗脱时，色谱图基线有漂移现象，选用乙腈-水为流动相进行梯度洗脱时，各色谱峰峰型及基线均好，进一步考察乙腈-水梯度比例，最终采用梯度浓度为19：81，29：71，40：60和19：81，24：76，37：63时，图谱中各色谱峰峰型及分离度均较好，同时在70分钟内洗脱完毕，故确定该流动相为人参果总皂苷中人参皂苷Re及人参皂苷Rd液相测定的流动相。综上所述，本试验建立了高效液相色谱法测定人参果总皂苷中人参皂苷Re和人参皂苷Rd含量的方法，并规定了它们的含量限度，为评价人参果总皂苷的质量提供了实验依据，建议可将此方法收录于新版中国药典中。参考文献1 孙成贺.人参果中人参皂苷分离技术及提取物HPLC指纹图谱研究D.北京：中国农科院，2008.2 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部S.北京：中国医药科技出版社，2010：8-9，365-368. 毕业毕业摘自中国社区医师2014年第1期，版权归原作者和期刊所有。