《常规病理学技术》PPT课件.ppt

病理学技术概论及常规病理技术南 方 医 科 大 学 病 理 学 系申 洪 课 程 简 介n 内 容 ： 着 重 介 绍 重 要 的 病 理 学 技 术 及 其 应 用n 目 的 ： 提 供 病 理 学 研 究 所 需 的 基 本 技 术 知 识 体 系 和 病 理 学 研 究 的 一 些 基 本 思 路 ； 课 程 结 构 ：n 常 规 病 理 学 技 术n 细 胞 病 理 学 技 术 及 其 在 肿 瘤 病 理 学 中 的 应 用n 电 镜 技 术 及 其 在 病 理 学 中 的 应 用n 定 量 病 理 学 技 术 及 其 在 病 理 学 中 的 应 用 基 本 要 求n 基 本 概 念n 基 本 原 理n 基 本 方 法 和 技 术 关 键n 联 系 实 际 ， 思 考 应 用 一 、 病 理 学 技 术 概 念 范 畴n 1 病 理 学n 2 病 理 学 技 术n 广 义 概 念 狭 义 概 念 ： 围 绕 病 理 形 态 学 病 理 形 态 学 技 术 类 型 尸 体 剖 验 技 术 常 规 组 织 病 理 学 技 术 常 规 细 胞 病 理 学 技 术 组 织 化 学 和 细 胞 化 学 技 术 免 疫 组 织 化 学 技 术 流 式 细 胞 技 术 超 微 结 构 技 术 体 视 学 技 术 ： 定 量 病 理 学 技 术 图 像 分 析 技 术 分 子 病 理 学 技 术 激 光 共 聚 焦 显 微 镜 动 物 实 验 技 术 三 维 重 建 技 术 细 胞 培 养 技 术 一 、 尸 体 剖 验 技 术 目 的 意 义 ： 查 出 病 因 和 病 变 ， 明 确 诊 断 及 死 因 解 释 临 床 症 状 和 体 征 等 临 床 现 象 及 时 发 现 和 确 诊 新 疾 病 ， 特 别 是 传 染 病 提 供 第 一 手 科 研 材 料 法 律 手 续 ： 死 者 家 属 签 字 临 床 医 生 签 字 单 位 签 字 基 本 要 求 ： 研 究 生 ： 参 加 病 理 解 剖 本 科 生 ： 见 习 二 常 规 病 理 学 技 术n 组 织 取 材 及 固 定 技 术n 包 埋n 石 蜡 切 片 技 术n 冰 冻 切 片 技 术n HE染 色 标 本 的 来 源 与 收 集1、 临 床 活 检2、 尸 体 解 剖3、 实 验 动 物注 意 事 项1、 检 查 申 请 单 的 姓 名 ， 标 本 的 件 数 是 否 与之 相 符 合 。2、 标 本 是 否 符 合 要 求 。 （ 一 ） 取 材 、 固 定标 本 的 来 源 与 收 集 1、 临 床 活 检 2、 尸 体 解 剖 3、 实 验 动 物注 意 事 项 1、 检 查 申 请 单 的 姓 名 及 标 本 件 数 是 否 相 符 。 2、 标 本 是 否 符 合 要 求 。 取 材 ： 切 取 病 变 组 织 或 拟 研 究 的 组 织 及 时 ， 尽 可 能 新 鲜 迅 速 固 定 、 冷 藏 生 理 盐 水 、 磷 酸 缓 冲 液 等 溶 液 刀 要 快 ， 不 要 挤 压 组 织 注 意 研 究 目 的 培 养 定 量 对 比 观 察 临 床 诊 断 固 定n （ 一 ） 固 定 ： 用 化 学 试 剂 保 持 尸 体 、 器 官 、 组n 织 结 构 和 细 胞 结 构 的 固 有 形 态 结n 构 的 过 程 谓 固 定 ， 所 用 的 化 学 试n 剂 谓 固 定 剂 或 固 定 液 。n 目 的 ： 防 止 自 溶 、 腐 败 ， 保 持 良 好 结 构n 原 理 ： 组 织 及 细 胞 内 蛋 白 凝 固 ， 或 使 有 n 关 成 分 沉 淀 、 变 性 ， 成 为 不 溶 性n 物 质 。n 方 法 ： 浸 泡 n 灌 注 ： 局 部 灌 注 、 全 身 灌 注n 蒸 汽 熏 蒸 固 定 时 间 : n 常 规 组 织 病 理 学 : 可 长 时 间 固 定n 细 胞 病 理 学 ： 可 长 时 间 固 定n 细 胞 化 学 ： 不 宜 过 长 ， 约 1小 时 为 宜 固 定 后 处 理 ：n 充 分 洗 涤 固 定 时 间 越 长 ， 洗 涤 时 间 也 应 相 应 增 加 固 定 注 意 事 项n 1. 固 定 液 有 毒 性 ， 注 意 自 身 防 护n 2. 及 时 ， 尽 可 能 新 鲜n 3. 超 微 结 构 观 察 ： 低 温 固 定n 4. 注 意 不 同 研 究 目 的 对 固 定 液 的 特 殊 需 要n 细 胞 化 学n 超 微 结 构n 细 胞 涂 片 巴 氏 染 色n 5. 固 定 液 用 量 ： 足 ， 必 要 时 及 时 更 换 。 n 6. 固 定 时 间n 7. 固 定 后 洗 涤 常 用 固 定 液甲 醛 溶 液 ： 4 甲 醛 ， 或 10 福 尔 马 林 40 甲 醛 （ 福 尔 马 林 ， Formeldehyde） 用 于 无 特 要 求 的 组 织 常 规 固 定 乙 醇 （ Ethyl Alcohol） : 95% 用 于 细 胞 病 理 学 涂 片 常 规 固 定 ， 糖 原 固 定乙 醇 乙 醚 混 合 固 定 液 : 95% ： 95%乙 醇 + 95%乙 醚 （ 1:1） 用 于 细 胞 涂 片 巴 氏 染 色 （ 二 ） 石 蜡 包 埋 制 样组 织 块 脱 水 ： 逐 级 乙 醇 脱 水 透 明 ： 二 甲 苯 浸 蜡 ： 65 C 包 埋 ： 溶 解 蜡 人 工 脱 水 程 序(适 应 于 3mm厚 的 组 织 块 )1、 30%酒 精 24h2、 50%酒 精 24h3、 70%酒 精 24h4、 80%酒 精 24h5、 90%酒 精 12h6、 95%酒 精 4h7、 95%酒 精 4h 8、 100%酒 精 2h9、 100%酒 精 2h10 二 甲 苯 40min11 二 甲 苯 40min12 石 蜡 （ 软 ） 1h13 石 蜡 1h14 石 蜡 1h （ 三 ） 石 蜡 切 片 (四 ) HE染 色 ： 苏 木 素 伊 红 染 色1 脱 蜡 （ 二 甲 苯 ）2 水 化 （ 逐 级 乙 醇 水 化 ： 100 30 ）3 染 苏 木 素4 1 盐 酸 酒 精 分 化5 返 兰6 逐 级 乙 醇 脱 水 30 (或 50 ) 95 伊 红 染 色 逐 级 乙 醇 脱 水 （ 95 100 ） 二 甲 苯 透 明 封 片 ： 中 性 树 胶 盖 玻 片 HE染 色 法 程 序 三 、 常 规 细 胞 病 理 学 技 术 细 胞 病 理 学 （ cytopathology）n 诊 断 细 胞 学 （ diagnostic cytology）n 临 床 细 胞 学 （ clinical cytology） 。n 该 学 科 是 利 用 身 体 器 官 组 织 正 常 或 病 变 的离 体 细 胞 进 行 涂 片 ， 经 显 微 镜 观 察 ， 做 出 疾 病 诊断 ， 特 别 是 肿 瘤 良 恶 性 诊 断 .n 细 胞 病 理 学 方 法 简 便 易 行 、 诊 断 准 确 、 可靠 ， 已 成 为 癌 症 早 期 诊 断 的 重 要 手 段 之 一 ， 可 广泛 应 用 于 临 床 和 大 量 人 群 防 癌 普 查 。 三 、 常 规 细 胞 病 理 学 技 术 一 、 取 材 、 涂 片 制 备 痰 涂 片 、 胸 水 、 腹 水 及 尿 液 制 片 二 、 固 定 三 、 染 色 (巴 氏 染 色 ) 常 用 固 定 液（ 1） 等 量 95%乙 醇 和 乙 醚 混 合 液（ 2） 氯 仿 酒 精 固 定 液（ 3） 95%酒 精 固 定 液（ 4） 福 尔 马 林 固 定 液 细 胞 学 研 究 ， 固 定 液 选 择 要 根 据 实 验 要求 条 件 而 定 ， 如 用 细 胞 涂 片 作 原 位 PCR，固 定 液 要 选 用 多 聚 甲 醛 。 巴 氏 染 色 步 骤1 标 本 95 酒 精 固 定 3-5分 钟2 Harris苏 木 素 液 5-10分 钟3 水 （ 蒸 馏 水 或 自 来 水 ） 漂 洗 2-3次4 1 盐 酸 水 溶 液 （ 或 1 盐 酸 酒 精 液 ） 浸 1-3次5 自 来 水 浸 洗 1-2次6 自 来 水 或 稀 碳 酸 锂 （ 100ml蒸 馏 水 中 加 碳 酸 锂 饱和 液 1滴 ） ， 涂 片 返 蓝 为 止 7 依 次 置 入 70 80 95 酒 精 ， 各 2分 钟 8 桔 黄 G6液 ， 1分 钟 9 95 酒 精 、 缸 ， 各 1分 钟10 EA36液 ， 5分 钟11 95 酒 精 、 、 ， 各 1分 钟12 无 水 酒 精 、 ， 各 1分 钟13 二 甲 苯 、 ， 各 2分 钟14 中 性 树 胶 盖 片 封 固 四 、 组 织 化 学 和 细 胞 化 学 技 术 用 化 学 反 应 原 理 ， 在 切 片 上 滴 加 某种 化 学 试 剂 ， 使 之 与 组 织 或 细 胞 中 的 生物 化 学 物 质 结 合 ， 再 用 显 色 剂 使 之 显 色 ，达 到 定 位 、 定 性 地 显 示 组 织 或 细 胞 中 的某 种 物 质 成 分 ， 这 种 技 术 称 为 组 织 化 学和 细 胞 化 学 技 术 。 其 结 果 可 用 显 微 镜 和电 镜 观 察 。 结 合 定 量 病 理 学 技 术 ， 还 可对 有 关 成 分 定 量 。 应 用 糖 类 脂 类 核 酸 酶 类 胶 原 纤 维 弹 力 纤 维 神 经 纤 维 细 胞 膜 、 核 膜 结 构 五 、 免 疫 组 织 化 学 技 术概 念 ： 免 疫 组 织 化 学 技 术 是 指 利 用 已 知 的 抗 体 与 组 织 中 相 应 的 抗 原 结 合 ， 并 利 用 显 色 剂 在 原 位 将 抗 原 物 质 显 示 出 来原 理 ： 抗 原 抗 体 显 色 剂特 点 ： 在 组 织 中 原 位 显 示 某 种 特 异 性 抗 原常 用 显 色 剂 种 类 ： 酶 、 金 属 粒 子 、 同 位 素 生 物 素 、 化 学 显 色 剂 （ DAB）结 果 观 察 ： 显 微 镜 、 透 射 电 镜 六 、 超 微 结 构 的 基 本 技 术 超 微 结 构 是 在 高 分 辨 条 件 下 观 察 到 的细 胞 膜 、 细 胞 核 、 核 仁 、 核 膜 、 各 种 细 胞器 、 微 绒 毛 、 纤 毛 、 细 胞 连 接 结 构 及 胶 原纤 维 、 弹 力 纤 维 等 光 镜 水 平 观 察 不 到 的 细微 结 构 。 （ 一 ） 透 射 电 镜 技 术 1. 取 材 ： 1 1mm3 2. 固 定 : 2%戊 二 醛 2h 1%锇 酸 1 2h 3. 脱 水 ： 逐 级 丙 酮 ， 环 氧 丙 烷 4. 包 埋 及 聚 合 ： 浸 透 、 包 埋 （ Epon812） 聚 合 （ 硬 化 ） 、 时 间 5. 超 薄 切 片 ： 超 薄 切 片 机 6. 染 色 ： 饱 和 醋 酸 铀 、 1 柠 檬 酸 铅 7. 透 射 电 镜 观 察 （ 二 ） 扫 描 电 镜 技 术 1. 取 材 ： 1 1mm3 2. 固 定 : 2%戊 二 醛 2h 1%锇 酸 1 2h 3. 脱 水 ： 逐 级 丙 酮 ， 环 氧 丙 烷 4. 干 燥 ： 临 界 点 干 燥 ， 醋 酸 异 戊 酯 5. 喷 金 ： 6. 扫 描 电 镜 观 察 七 、 定 量 病 理 学 技 术 体 视 学 (Stereology)： 二 维 结 构 信 息 定 量 推 论 三 维 结 构 信 息 研 究 内 容 ： 二 维 定 量 推 论 三 维 的 原 理 、 方 法 及 应 用 ，图 像 分 析 原 理 和 方 法 生 物 体 视 学 (Biological Stereology) 用 体 视 学 原 理 和 方 法 研 究 生 物 组 织 的 三 维结 构 ， 并 据 生 物 组 织 的 结 构 特 点 研 究 相 应 的 体视 学 测 试 方 法 称 为 生 物 体 视 学 n 形 态 测 量 学 （ Morphometry）n 平 面 测 量 学 （ Planimetry）n 体 视 学 (Stereology)n 形 态 结 构 要 素 计 数 ， 如 核 分 裂 计 数n 显 微 分 光 光 度 术n 流 式 细 胞 术n 激 光 共 聚 焦 显 微 图 像 分 析n 图 像 分 析 特 点n 给 出 量 化 结 果n 提 高 结 果 表 达 的 客 观 性 和 准 确 性 应 用 诊 断 预 后 分 析 基 础 数 据 三 维 结 构 定 量 分 析 形 态 与 机 能 有 机 结 合 八 、 分 子 病 理 学 技 术 广 义 概 念 ： 狭 义 概 念 ： 将 分 子 生 物 学 方 法 与 病 理 形态 学 技 术 相 结 合 ， 从 分 子 生 物 学 水 平 原 位阐 明 病 变 的 特 点 和 规 律 谓 分 子 病 理 学 技 术 。 原 位 PCR技 术 原 位 杂 交 技 术显 微 切 割 技 术 九 、 其 他 病 理 学 技 术 细 胞 及 组 织 培 养 技 术 细 胞 及 细 胞 器 分 离 技 术 显 微 切 割 技 术 显 微 摄 影 技 术 核 仁 组 成 区 技 术 荧 光 染 色 技 术 核 移 植 技 术 酶 组 织 化 学 技 术 放 射 自 显 影 技 术 流 式 细 胞 技 术 激 光 共 聚 焦 扫 描 显 微 镜 技 术 附 : 常 规 病 理 学 技 术 详 解n 一 、 标 本 的 来 源 与 收 集(一 )1、 临 床 活 检2、 尸 体 解 剖3、 实 验 动 物（ 二 ）1、 检 查 申 请 单 的 姓 名 ， 标 本 的 件 数 是 否 与 之 相符 合 。2、 标 本 是 否 符 合 要 求 。 二 、 标 本 的 处 理1、 对 送 检 物 进 行 编 号 登 记 ， 以 免 混 乱 。2、 小 组 织 全 部 包 埋 。3、 大 块 组 织 切 取 其 中 部 分 组 织 ， 如 肿 瘤 和 肿 瘤边 缘 组 织 ， 剩 余 组 织 在 病 理 报 告 发 出 后 约 一个 星 期 后 处 理 。 三 、 组 织 的 固 定 将 取 好 的 组 织 放 入 固 定 液 进 行 固 定 ， 活 检 组织 的 固 定 ， 由 于 受 到 时 间 的 限 制 ， 不 能 过 多 的 占用 时 间 ， 最 多 只 能 占 2小 时 ， 其 它 的 组 织 可 固 定10-20小 时 ， 但 最 好 不 要 超 过 24小 时 ， 因 这 个 时间 对 以 后 的 免 疫 组 化 的 显 示 都 有 影 响 。 四 、 固 定 的 作 用 固 定 的 作 用 不 仅 是 使 细 胞 内 蛋 白 质 凝 固 ，终 止 或 减 少 外 源 性 酶 和 内 源 性 酶 的 反 应 ， 防 止 细胞 自 溶 ， 以 保 持 组 织 的 固 有 形 态 和 结 构 ， 更 重 要的 是 保 存 组 织 或 细 胞 的 抗 原 性 ， 不 但 使 抗 原 不 致失 活 ， 还 要 使 抗 原 不 发 生 弥 散 ， 以 免 在 免 疫 组 化染 色 时 产 生 过 深 的 背 景 。 五 、 固 定 的 目 的1、 能 防 止 细 菌 的 腐 蚀 和 抑 制 组 织 的 自 溶2、 能 凝 固 或 沉 淀 细 胞 内 或 组 织 液 的 蛋 白 等3、 使 组 织 硬 化 ， 便 于 切 块4、 对 某 些 具 有 传 染 性 的 标 本 ， 能 防 止 其 扩 散5、 保 存 组 织 细 胞 中 固 有 的 物 质6、 保 存 好 大 体 标 本7、 可 增 强 染 色 六 、 固 定 时 的 注 意 事 项1、 组 织 块 越 新 鲜 越 好2、 组 织 块 不 宜 过 厚 过 大3、 根 据 需 要 选 择 适 当 的 固 定 液4、 组 织 固 定 时 间 不 宜 过 长 ， 也 不 能 太 短5、 固 定 液 的 量 要 充 分 ， 1： 56、 不 应 强 行 将 组 织 装 入 较 小 的 容 器 内7、 特 殊 方 法 需 要 特 殊 的 固 定 液 七 、 固 定 液 的 选 择1、 尽 量 选 择 对 组 织 收 缩 少 ， 渗 透 快 的 固 定 液2、 选 择 较 通 用 的 固 定 液 ， 既 能 做 好 HE的 染 色 ， 又 能做 免 疫 组 化 标 记3、 特 殊 的 病 例 选 择 特 殊 的 固 定 液如 ：狂 犬 病 丙 酮磷 酸 酶 丙 酮糖 原 无 水 酒 精 八 、 固 定 液 的 分 类 .醛 类 ： 甲 醛 、 戊 二 醛 、 多 聚 乙 醛 、 丙 稀 醛 等 .氧 化 剂 类 ： 四 氧 化 饿 （ 奥 酸 ） 、 高 锰 酸 钾 、重 鉻 酸 钾 等 .蛋 白 变 性 类 ： 醋 酸 、 甲 醇 、 乙 醇 等 .其 它 ： 氯 化 汞 ， 苦 味 酸 等 。 九 、 固 定 液 的 使 用（ 一 ） 甲 醛 （ formaldehyde） 一 般 市 售 的 含 37-40%， 平 时 使 用 都 把 它 看 为 100%。它 由 甲 醛 气 体 饱 和 于 水 而 成 。 比 重 为 1.12， 有 一 股 刺鼻 的 气 味 。 甲 醛 与 组 织 蛋 白 质 类 的 反 应 是 多 样 而 复 杂的 ， 因 为 它 能 和 多 种 不 同 的 功 能 基 团 结 合 。 如 近 来 的抗 原 修 复 就 是 认 为 组 织 中 的 蛋 白 与 醛 产 生 交 联 蛋 白 后 ，要 将 它 们 显 示 出 来 ， 就 必 须 应 用 温 度 高 达 92 以 上 的抗 原 修 复 液 ， 才 能 将 其 交 联 的 醛 键 打 开 ， 与 后 来 的 抗体 结 合 ， 将 其 表 达 出 来 。 甲 醛 的 优 点 ：1、 收 缩 较 小2、 固 定 较 为 均 匀 ， 穿 透 力 强3、 能 使 组 织 硬 化 并 富 有 弹 性4、 能 保 存 脂 肪 及 脂 类 物 质5、 成 本 较 低 甲 醛 的 缺 点 ：1、 成 分 不 纯 ， 含 少 量 的 甲 醇 ， 影 响 酶 反 应2、 含 少 量 的 甲 酸 ， 易 产 生 色 素3、 不 能 固 定 尿 酸 和 糖 类 物 质4、 易 挥 发 、 污 染 环 境5、 易 产 生 醛 基 、 封 闭 抗 原 应 用 甲 醛 配 成 的 固 定 液 有 ：1、 缓 冲 福 尔 马 林 固 定 液 （ neutral buffered formaaldehyde） NaH2PO4H2O 4g Na2HPO4（ 无 水 ） 65g 蒸 馏 水 900ml 甲 醛 100ml 2、 10%福 尔 马 林 固 定 液 甲 醛 10ml 自 来 水 90ml3、 10%福 尔 马 林 盐 固 定 液 甲 醛 10ml 自 来 水 90ml NaCl 0.9g 4、 Bouin氏 固 定 液 苦 味 酸 饱 和 水 溶 液 75ml 甲 醛 25ml 冰 醋 酸 5ml 5、 Zonker氏 液 氯 化 汞 5g 重 铬 酸 钾 2.5g 硫 酸 钠 1g 水 100ml注 ： 该 固 定 液 固 定 时 间 为 16-24h， 染 色 前 应 用 碘酒 除 去 汞 盐 的 沉 淀 ， 否 则 会 影 响 染 色 后 切片 的 观 察 。 （ 二 ） 酒 精 （ alcohol） 有 无 水 酒 精 （ 99.8%） 和 工 业 酒 精 （ 95%） 在病 理 技 术 方 面 ， 酒 精 是 一 种 重 要 的 试 剂 ， 它 可 配成 不 同 的 浓 度 来 进 行 脱 水 ， 如 ： 60%、 70%、 80%、90%、 95%等 ， 在 切 片 染 色 前 ， 用 酒 精 来 除 去 二 甲苯 ， 在 染 完 色 后 则 用 其 来 脱 水 。 应 当 注 意 的 是 ， 组 织 脱 水 时 应 根 据 组 织 的大 小 、 器 官 或 部 位 、 取 材 的 大 小 来 确 定 脱 水 时 间 ，一 般 认 为 浓 度 越 低 ， 脱 水 时 间 可 以 相 对 延 长 ， 如70%可 用 来 长 期 保 存 标 本 ， 但 如 果 在 100%的 酒 精里 时 间 就 不 能 太 长 ， 否 则 组 织 易 脆 不 利 于 切 片 。酒 精 可 以 与 其 它 试 剂 混 合 ， 配 成 混 合 固 定 液 ， 如AAF固 定 液 。 酒 精 的 优 点 ：1、 可 以 保 存 糖 原 和 尿 酸 结 晶 。2、 能 在 任 何 比 例 的 情 况 下 与 水 混 合 。3、 能 溶 解 苯 类 物 质 ， 为 染 色 法 中 的 桥 梁 试 剂 。4、 能 脱 去 切 片 上 的 水 份 。5、 可 配 成 混 合 固 定 液 。6 、 可 作 为 保 存 标 本 的 固 定 液 。7 、 可 用 来 消 毒 。 洒 精 的 缺 点 ：1、 可 溶 解 脂 类 及 脂 肪 物 质 。2、 可 沉 淀 白 蛋 白 ， 球 和 核 蛋 白 。3、 渗 透 力 不 强 。4、 可 脱 去 某 些 已 着 染 切 片 的 颜 色 。5、 不 作 为 单 独 的 固 定 液 。6、 价 格 昂 贵 。 病理组织切片的制作 一 、 石 蜡 切 片（ 一 ） 组 织 脱 水 人 体 或 各 种 动 物 的 各 种 组 织 ， 都 含 有大 量 的 水 分 。 在 石 蜡 切 片 中 ， 水 与 蜡 不 能相 混 合 ， 必 须 想 办 法 将 含 于 组 织 中 的 水 分脱 去 ， 才 能 完 成 一 系 列 的 操 作 过 程 ， 制 作好 的 切 片 。 1、 人 工 脱 水 法 优 点 ：（ 1） 可 根 椐 不 同 的 组 织 选 择 最 佳 时 间 。（ 2） 可 避 免 细 小 的 组 织 经 受 不 必 要 的 脱 水时 间 ,防 止 组 织 的 硬 脆 （ ） 可 灵 活 掌 握 ， 随 时 进 行 观 察 和 调整 2、 人 工 脱 水 法 的 不 是 之 处 ：（ 1） 需 耗 人 力 ；（ 2） 必 须 在 白 天 完 成 ， 晚 上 无 法 进 行 换 液 ；（ 3） 如 机 器 发 生 故 障 ， 组 织 块 被 搁 置 在 外边 ， 致 使 组 织 干 涸 ， 影 响 了 制 片 的 质量 。 人 工 脱 水 程 序(适 应 于 3mm厚 的 组 织 块 )1、 80%酒 精 24h2、 90%酒 精 12h3、 95%酒 精 4h4、 95%酒 精 4h5、 100%酒 精 2h6、 100%酒 精 2h 7、 二 甲 苯 40min8、 二 甲 苯 40min9、 石 蜡 （ 软 ） 1h10、 石 蜡 1h11、 石 蜡 1h 细 小 组 织 脱 水 程 序（ 适 合 于 胃 、 肠 镜 活 检 ， 肝 、 肺 、 肾 穿 刺 活 检 的组 织 ）1、 80%酒 精 10-15min2、 90%酒 精 10-15min3、 95%酒 精 10-15min4、 100%酒 精 10-15min5、 二 甲 苯 5-10min6、 石 蜡 15-20min Shandan全 封 闭 电 脑 控 制 全 自 动 组 织 脱 水 机 该 机 由 电 脑 、 反 应 缸 和 试 剂 储 存 缸 三部 分 构 成 。 电 脑 屏 幕 可 显 示 时 间 、 温 度 、 所 需 时间 、 是 否 用 真 空 负 压 等 ， 可 根 据 不 同 的 时间 要 求 ， 编 制 9套 不 同 的 组 织 脱 水 程 序 。 1、 正 常 室 温 脱 水 程 序A、 10%福 尔 马 林 2hB、 90%酒 精 1.5hC、 95%酒 精 1.5hD、 95%酒 精 1hE、 95%酒 精 1hF、 100%酒 精 1h G、 100%酒 精 1hH、 100%酒 精 1hI、 二 甲 苯 40minJ、 二 甲 苯 40minK、 石 蜡 65 真 空 负 压 1hL、 石 蜡 65 真 空 负 压 1h 2、 加 温 脱 水 程 序 应 用 正 常 室 温 的 脱 水 时 间 ， 再 编 入 加温 程 序 ， 加 温 的 温 度 一 般 在 37-403、 真 空 负 压 脱 水 程 序 应 用 正 常 室 温 的 脱 水 时 间 ， 再 编 入 真空 负 压 脱 水 程 序 4、 周 末 程 序A、 10%福 尔 马 林 10hB、 90%酒 精 10hC、 95%酒 精 10hD、 95%酒 精 10hE、 95%酒 精 10hF、 100%酒 精 2h G、 100%酒 精 2hH、 100%酒 精 2hI、 二 甲 苯 1hJ、 二 甲 苯 1hK、 石 蜡 65 真 空 负 压 1hL、 石 蜡 65 真 空 负 压 1h 该 机 的 特 点 ：1、 容 量 大 ， 一 次 可 处 理 250-300个 包 埋 盒 。2、 全 部 密 闭 ， 试 剂 不 易 挥 发 ， 保 护 了 环 境 。3、 带 有 定 期 的 搅 动 装 置 ， 使 组 织 固 定 均 匀 ，脱 水 彻 底 ， 浸 蜡 充 分 。4、 脱 水 过 程 可 使 用 真 空 负 压 和 加 热 。5、 该 机 占 地 量 小 。 组 织 透 明 应 用 于 透 明 组 织 的 试 剂 有 很 多 种 ， 有 ：二 甲 苯 ， 三 氯 甲 烷 （ 氯 仿 ） ， 香 柏 油 ， 苯酚 ， 松 节 油 等 。 二 甲 苯 的 主 要 性 能 和 使 用 它 是 一 种 透 明 无 色 的 液 体 ， 挥 发 性 强 ，打 开 后 即 可 闻 到 它 的 味 道 。 它 可 溶 于 洒 精 ，丙 酮 等 含 醇 类 的 物 质 ， 也 可 溶 解 石 蜡 ， 但不 溶 于 水 。 当 脱 完 水 的 组 织 放 入 二 甲 苯 后 ，经 过 一 定 的 时 间 组 织 即 可 透 明 ， 如 果 组 织四 周 透 明 ， 中 间 留 有 白 点 ， 则 说 明 中 间 部分 没 有 彻 底 脱 水 ， 此 时 应 将 组 织 重 新 放 回洒 精 脱 水 。 但 经 这 样 处 理 后 的 组 织 切 片 效果 较 差 。 （ 二 ） 组 织 浸 蜡 将 透 明 的 组 织 移 放 入 65 左 右 的 电 热恒 温 箱 或 脱 水 机 上 的 特 设 蜡 缸 中 ， 浸 渍 一定 的 时 间 ， 这 个 过 程 称 为 浸 蜡 。 1、 可 起 到 填 充 、 支 撑 的 作 用 。 组 织 经 酒 精 、 二 甲 苯 的 作 用 后 ， 其 中有 许 多 物 质 被 溶 解 去 ， 如 脂 肪 及 脂 类 物 质 、糖 原 等 。 因 而 遗 留 下 许 多 腔 隙 ， 妨 碍 了 切片 。 在 切 片 时 由 于 诱 导 剂 的 作 用 下 石 蜡 可以 浸 入 到 物 质 的 各 个 角 落 ， 当 石 蜡 冷 却 时 ，浸 入 到 各 处 的 石 蜡 就 填 充 在 各 处 的 空 隙 ，包 括 血 管 和 器 官 等 。 使 组 织 保 持 原 有 的 形状 ， 也 使 包 埋 后 蜡 块 保 持 平 整 ， 便 于 切 片 。 2、 使 切 片 能 完 整 的 切 除 并 保 持 切 片 的 美 观3、 石 蜡 的 使 用（ 1） 石 蜡 的 性 质 它 是 一 种 碳 氢 化 合 物 ， 熔 点 45-70 以 上 。 （ 2） 石 蜡 熔 点 的 种 类 45 52-54 54-56 56-58 58-60 60-62 （ 3） 石 蜡 性 质 的 改 善 增 加 石 蜡 的 硬 度 ， 如 加 入 脂 蜡 酸 、 柏 油 、杨 梅 蜡 等 。 增 加 石 蜡 的 粘 度 ， 如 加 入 蜂 蜡 、 硬 脂 肪等 。 加 热 促 进 石 蜡 性 质 的 改 善 熔 化 冷 却 熔 化 4、 浸 蜡 的 方 法 传 统 浸 蜡 法 将 透 明 好 的 组 织 放 入 熔 化 的 石 蜡 中 浸渍 一 定 的 时 间 。 真 空 负 压 浸 蜡 法 将 透 明 好 的 组 织 放 入 浸 蜡 缸 中 ， 然 后移 入 真 空 负 压 箱 内 ， 或 者 脱 水 机 自 身 配 有的 真 空 负 压 装 置 进 行 浸 蜡 。 浸 蜡 时 间 ， 真 空 负 压 数 见 表 。 组 织 分 类 、 浸 蜡 时间 、 浸 蜡 方 法 鼻 咽 部 、 宫 内膜 、 穿 刺 物 、排 出 物 甲 状 腺 、 肝 、 肾 、淋 巴 结 等 子 宫 肌 、 平 滑 肌 、胃 、 肠 、 大 块 的组 织 、 横 纹 肌 所 需 温 度 传 统 浸 蜡 法 6090min 90150min 180min 以 上 65 真 空 负 压 浸 蜡 法 1520min 2530min 60min 以 上 65 以 上 真 空 负 压 压 力 读 数 26.733.3K pa 4053.3K pa 66.7K pa 以 上 真 空 负 压 浸 蜡 时 间 压 力 表注 ： 1、 计 时 应 以 石 蜡 全 部 溶 化 时 计 起 。 2、 当 抽 气 时 ， 温 度 应 调 高 几 度 ， 至 抽 气 完 成 后才 调 至 所 需 温 度 。 （ 四 ） 组 织 包 埋 将 浸 完 蜡 的 组 织 埋 葳 于 石 蜡 中 的 过 程 称 为组 织 包 埋 。包 埋 时 的 注 意 事 项 ：1、 所 使 用 的 镊 子 ， 包 埋 框 ， 最 好 放 于 37的 恒 温箱 内 ， 以 免 这 些 物 质 过 冷 （ 在 冬 天 时 ） 而 过早 冷 却 包 埋 的 石 蜡 ， 影 响 包 埋 的 质 量 ， 这 种现 象 在 没 有 石 蜡 包 埋 机 的 单 位 较 为 明 显 。 2、 打 开 脱 水 盒 ， 取 出 组 织 块 ， 将 一 平 整 的 大 的一 面 朝 下 ， 并 用 镊 子 压 平 ， 使 其 保 持 在 一 水平 面 上 。 3、 每 包 埋 完 一 块 ， 应 附 上 标 签 ， 以 免 出 差 错 或张 冠 李 戴 。 如 为 塑 料 包 埋 盒 ， 则 可 少 去 这 一步 ， 极 为 方 便 。4、 对 于 管 腔 的 组 织 如 血 管 、 肠 、 气 管 等 应 竖 起来 包 埋 对 于 皮 肤 及 胃 、 肠 、 等 组 织 应 辩 认 好方 向 。 仔 细 包 埋 。 5、 细 小 多 块 的 组 织 ， 可 包 埋 在 一 个 蜡 块 ，但 应 保 持 在 同 一 平 面 上 ， 以 免 影 响 切片 。6、 包 埋 完 后 ， 蜡 面 凝 固 ， 便 可 放 入 水 中 加速 硬 化 ， 如 带 有 冷 冻 设 备 的 包 埋 机 ，则 可 少 去 这 一 步 。 7、 包 埋 时 组 织 块 不 能 使 其 冷 却 凝 固 ， 应保 持 组 织 块 上 的 蜡 处 于 熔 化 状 态 ， 这样 包 埋 时 才 能 和 包 埋 蜡 溶 为 一 体 。 如果 组 织 块 自 身 的 蜡 先 凝 固 ， 包 埋 后 的蜡 块 切 片 时 组 织 与 边 蜡 分 离 切 不 成 佳片 严 重 的 会 崩 掉 ， 影 响 切 片 。 （ 五 ） 修 切 蜡 块 应 用 包 埋 框 包 埋 的 组 织 块 ， 切 片 前 一 定要 将 其 切 好 ， 组 织 块 与 边 蜡 应 保 持 有 0.5cm的厚 度 ， 才 有 利 于 切 片 。1、 有 利 于 切 片 ， 使 切 片 能 连 续 切 出 。2、 减 少 损 伤 刀 口 延 长 刀 口 的 寿 命 ， 以 利 多 切 蜡块 。3、 有 利 于 切 片 的 裱 贴 。 例 如 一 张 载 片 要 裱 两 块组 织 时 ， 修 切 好 的 蜡 块 ， 就 能 使 它 们 摆 得 整齐 。 （ 六 ） 切 片 和 裱 片在 操 作 时 的 注 意 事 项 ：1、 持 蜡 器 一 定 要 将 蜡 块 挟 紧 挟 牢 ， 以 免 使其 跳 动 而 影 响 切 片 。2、 刀 一 定 要 保 持 无 口 、 锋 利 ， 一 次 性 刀 片做 到 这 一 点 较 容 易 ， 大 刀 片 要 做 到 上 述要 求 就 比 较 困 难 。 因 此 就 要 认 真 地 磨 好刀 才 能 保 证 切 片 的 质 量 。 3、 裱 片 的 水 温 不 能 过 高 或 偏 低 ， 高 者 可 溶化 所 切 出 的 切 片 ， 低 者 则 展 不 开 切 片 ，使 切 片 留 有 皱 纹 ， 最 适 的 水 温 应 是 比 石蜡 的 溶 点 低 2-5 ， 如 石 蜡 的 溶 点 为 60-62 ， 裱 片 的 水 温 则 可 达 55-57 ， 余者 类 推 。4、 对 于 细 小 的 组 织 ， 应 特 别 小 心 修 切 ， 防止 一 刀 切 下 ， 全 部 皆 休 的 情 况 。 5、 对 于 多 块 细 小 的 组 织 ， 原 则 上 是 每 一 细小 的 组 织 都 应 有 一 个 切 面 。 修 切 的 时 候更 应 特 别 小 心 。6、 每 切 完 一 块 ， 裱 于 载 片 后 应 随 时 刻 上 编号 ， 以 防 止 差 错 或 混 乱 的 现 象 发 生 ， 减少 差 错 的 苗 头 。7、 挑 切 片 的 毛 笔 ， 应 选 用 细 小 柔 软 的 毛 笔为 佳 ， 用 时 向 上 挑 ， 决 不 能 往 下 ， 以 免刀 口 伤 及 毛 笔 。 石 蜡 切 片 常 可 出 现 的 问 题1、 石 蜡 切 片 不 能 形 成 带 状 的 原 因 是 室 温 低 ， 蜡块 周 边 不 整 齐 。2、 石 蜡 切 片 ， 切 片 卷 起 的 原 因 是 刀 的 倾 斜 角 度过 大 或 刀 不 快 。3、 石 蜡 切 片 出 现 的 皱 折 的 原 因 是 石 蜡 溶 点 低 ，纯 度 不 足 。4、 石 蜡 切 片 出 现 厚 薄 不 均 匀 的 主 要 原 因 是 组 织块 挟 不 牢 固 或 组 织 坚 硬 如 肌 瘤 等 。 5、 石 蜡 切 片 出 现 波 浪 状 的 原 因 是 组 织 块 太硬 或 骨 组 织 末 完 全 脱 钙 。6、 石 蜡 切 片 ， 当 切 片 放 入 水 中 裱 片 时 ， 切片 周 围 的 蜡 迅 即 向 四 边 散 开 ， 其 主 要原 因 是 组 织 脱 水 不 彻 底 ， 浸 蜡 浸 不 进去 。 包 埋 蜡 中 含 有 二 甲 苯 。7、 石 蜡 切 片 ， 当 切 片 切 出 后 蜡 块 向 上 时 ，把 已 切 出 的 切 片 带 走 并 损 坏 的 原 因 是切 片 刀 背 面 留 有 残 余 石 蜡 。 8、 组 织 切 片 常 见 的 人 为 性 色 素 沉 着 物 是 福尔 马 林 色 素 ， 常 见 的 器 官 是 肝 、 脾 。9、 组 织 切 片 常 见 的 外 源 性 色 素 是 碳 末 ， 常见 的 器 官 是 肺 。10、 石 蜡 切 片 时 切 片 刀 的 最 宜 角 度 是 5 -3011、 一 般 所 称 呼 的 标 准 室 温 是 2012、 组 织 浸 蜡 的 温 度 最 好 为12、 石 蜡 溶 点 的 最 高 度 高 2-3 即 65 。 （ 七 ） 石 蜡 切 片 的 烘 烤 石 蜡 切 片 在 染 色 前 ， 为 了 防 止 脱 落 ，都 必 须 进 行 烘 烤 ， 以 促 进 切 片 附 贴 的 牢 固性 。1、 常 规 切 片 烘 烤 常 规 石 蜡 切 片 切 完 后 ， 在 60 的 烤 箱中 烘 烤 20-30min便 可 进 行 染 色 。 2、 免 疫 组 化 切 片 的 烘 烤 应 用 于 免 疫 组 化 染 色 的 切 片 ， 由 于 整个 过 程 都 在 冲 冲 洗 洗 中 进 行 ， 因 此 要 求 切片 附 贴 要 十 分 牢 固 ， 以 免 脱 片 ， 烘 烤 切 片的 时 间 可 为 1h、 1.5h、 2h、 3h等 ， 均 在60 的 烤 箱 中 烘 烤 。 病理切片常规染色 一 、 染 色 的 目 的 病 理 学 的 各 种 切 片 ， 都 必 须 应 用 一 种以 上 的 染 料 通 过 不 同 的 方 法 将 切 片 的 各 种不 同 的 组 织 结 构 给 予 显 示 出 来 ， 以 利 于 镜下 辨 别 其 各 种 不 同 的 形 态 ， 做 出 正 确 的 诊断 。 二 、 染 色 的 作 用 1、 化 学 作 用 ： 染 液 中 的 阴 阳 离 子 与 组 织 中 的 阴 阳 离子 相 互 作 用 所 完 成 的 染 色 。 染 液 中 有 酸 性和 碱 性 染 料 之 分 ， 酸 性 染 料 有 染 色 作 用 的部 分 是 阴 离 子 ， 而 碱 性 染 料 有 染 色 作 用 的部 分 则 是 阳 离 子 。 组 织 的 各 种 细 胞 中 细 胞核 为 酸 性 ， 它 可 与 苏 木 素 液 中 的 阳 离 子 发生 反 应 。 细 胞 桨 中 的 阳 离 子 则 与 伊 红 液 中的 阴 离 子 发 生 反 应 ， 完 成 染 色 。 2、 物 理 作 用 ： 染 料 通 过 浸 透 ， 分 散 浸 入 到 组 织 的 间隙 中 ， 因 受 分 子 的 引 力 作 用 ， 染 液 中 的 色素 粒 子 被 吸 附 而 完 成 染 色 过 程 。3、 染 色 方 法 应 用 于 常 规 病 理 切 片 的 染 色 方 法 称 为普 通 染 色 法 或 HE染 色 法 ， 而 用 特 别 的 染 色法 则 称 为 特 殊 染 色 法 。 1、 二 甲 苯 510min 2、 二 甲 苯 510min 3、 无 水 酒 精 30se1min 4、 无 水 酒 精 30se1min 5、 95%酒 精 30se1min 6、 95%酒 精 30se1min 7、 90%酒 精 30se1min 8、 80%酒 精 30se1min 9、 H arris 苏 木 素 10se15min 10、 自 来 水 洗 30sec1min 11、 1%盐 酸 酒 精 30sec 12、 流 水 冲 洗 1015min 或 温 水 洗 510min 13、 1%伊 红 染 色 25min 14、 80%乙 醇 洗 去 多 余 的 染 色 1min 15、 90%酒 精 301min 16、 95%酒 精 301min 17、 95%酒 精 301min 18、 100%酒 精 301min 19、 100%酒 精 301min 20、 石 碳 酸 二 甲 苯 1min 21、 二 甲 苯 1min 22、 二 甲 苯 1min 23、 二 甲 苯 1min 24、 中 性 树 胶 封 固 HE染 色 法 程 序 结 果 ： 细 胞 核 ： 蓝 色 ， 软 骨 基 质 钙 盐 等 深蓝 色 ； 细 胞 浆 深 浅 不 同 的 粉 红 色 ，嗜 酸 性 颗 粒 鲜 红 色 ； 胶 原 纤 维 呈 粉红 色 ， 肌 纤 维 呈 鲜 红 色 ， 弹 力 纤 维呈 亮 红 色 ， 红 血 球 为 桔 红 色 ， 蛋 白基 质 为 粉 红 色 。 染 色 时 的 注 意 事 项（ 1） 切 片 烘 烤 以 切 片 附 贴 牢 固 为 原 则 ， 否则 容 易 掉 片 。（ 2） 切 片 脱 蜡 一 定 要 彻 底 ， 不 然 会 导 致 染色 深 浅 不 一 。（ 3） 切 片 染 苏 木 素 前 可 令 其 无 水 化 ， 这 样可 延 长 苏 木 素 的 寿 命 。 因 为 每 次 染 色前 ， 切 片 水 洗 ， 然 后 进 入 染 液 虽 然 每次 带 入 的 水 分 很 少 ， 但 随 着 次 数 的 增加 ， 所 带 入 的 水 分 足 可 以 稀 释 染 液 影响 染 色 的 质 量 。 （ 4） 切 片 在 苏 木 素 的 染 色 时 间 应 充 分 宁 过 勿 不足 。 对 于 初 学 者 来 说 更 应 过 染 ， 否 则 分 化会 过 度 导 致 染 色 过 浅 。（ 5） 切 片 分 化 时 ， 要 根 椐 不 同 的 组 织 来 确 定 分化 时 间 ， 并 不 断 积 累 经 验 。（ 6） 伊 红 染 色 时 间 也 要 充 分 ， 经 低 浓 度 洒 精 时应 仔 细 观 察 ， 必 要 时 快 速 通 过 ， 以 免 过 于褪 色 。 （ 7） 切 片 致 无 水 酒 精 后 ， 不 要 在 控 干 无 水 酒 精 时让 切 片 干 涸 ， 可 以 不 经 控 干 直 接 地 进 入 碳酸 二 甲 苯 （ 也 可 以 进 入 二 甲 苯 酒 精 混 合 1：1） 碳 酸 有 较 强 的 吸 水 性 透 明 也 好 很 适 合 南方 地 区 。（ 8） 切 片 从 二 甲 苯 中 取 出 封 固 时 ， 切 不 能 让 其 干涸 ， 因 南 方 地 区 空 气 潮 湿 干 涸 的 切 片 与 空气 接 触 ， 可 吸 收 其 水 份 。 这 样 的 切 片 很 容易 裉 色 。 切 片 不 干 涸 ， 表 面 被 着 二 甲 苯 ，由 于 它 不 溶 于 水 起 到 与 水 隔 绝 的 作 用 。 （ 9） 滴 中 性 树 胶 封 盖 切 片 ， 胶 不 能 太 浓 ，太 浓 胶 难 以 均 匀 铺 开 ， 且 易 产 生 气泡 ， 又 不 能 太 稀 过 稀 的 胶 由 于 二 甲苯 含 量 较 多 ， 当 切 片 干 燥 时 ， 二 甲苯 挥 发 掉 ， 胶 封 的 切 片 收 缩 ， 即 可导 致 一 半 切 片 没 有 被 胶 封 固 的 结 果 。最 合 适 的 胶 应 是 滴 下 成 珠 。 （ 10） 封 固 切 片 时 ， 盛 胶 的 瓶 子 及 瓶 盖 四周 不 要 留 有 余 胶 ， 否 则 瓶 盖 难 以 打开 。 因 此 每 次 用 完 后 都 必 须 将 其 擦干 净 。 当 打 不 开 瓶 盖 时 应 放 入 烤 箱中 烘 烤 ， 即 可 打 开 。 （ 11） 标 签 附 贴 要 认 真 ， 不 要 贴 得 歪 歪 斜斜 ， 影 响 切 片 的 外 观 . 染 液 的 配 制(一 ） 苏 木 素 的 配 制1、 苏 木 素 的 种 类 ：A、 明 矾 苏 木 素 （ Harris,Mayer,Ehrlich）B、 铁 苏 木 素 （ Wiegert,Heidnhain）C、 钨 苏 木 素 （ PTAH）D、 铅 苏 木 素 （ Soecia） （ 1） Harris苏 木 素 的 配 制 （ Harris.l900）苏 木 素 0.5g无 水 乙 醇 5ml钾 明 矾 （ 硫 酸 铝 钾 ） 10g蒸 馏 水 100ml氧 化 汞 0.25g冰 醋 酸 4ml 预 先 把 苏 木 素 溶 于 无 水 酒 精 中 配 制 时 ， 取一 三 角 瓶 倒 入 蒸 镏 水 ， 再 加 入 钾 明 矾 ， 于 电 炉 上加 热 至 90 左 右 时 ， 拔 去 电 源 加 入 酒 精 苏 木 素 ，再 插 上 电 源 继 续 加 热 ， 持 续 35分 钟 ， 拔 去 电 源 ，加 入 氧 化 汞 ， 此 时 可 产 生 大 量 的 气 泡 ， 应 防 止 其溢 出 瓶 外 。 再 继 续 通 电 加 热 ， 煮 沸 后 持 续 35分钟 ， 此 时 溶 液 表 面 看 呈 深 紫 黑 色 ， 即 可 撤 离 电 源 ，用 备 好 的 冰 凉 水 ， 将 烧 瓶 迅 速 的 插 入 水 中 ， 让 染液 迅 速 冷 却 ， 中 止 氧 化 放 入 暗 处 。 于 第 二 天 过 滤后 再 加 入 冰 醋 酸 ， 即 可 使 用 ， 染 色 时 间 5 15分钟 。 （ 2） Mayer氏 苏 木 素 （ Mayer,1903）苏 木 素 0.1g蒸 镏 水 100ml钾 明 矾 5g柠 檬 酸 0.1g水 合 醛 5g碘 酸 钠 20mg 将 蒸 包 馏 水 稍 为 加 温 ， 加 入 苏 木 素 不停 地 搅 拌 直 至 溶 解 ， 再 加 入 钾 明 矾 ， 令 其溶 解 后 再 加 入 碘 酸 钠 过 滤 后 即 可 使 用 ， 染色 时 间 10 20分 钟 ， 如 果 先 用 天 表 蓝 为 媒染 剂 ， 染 色 时 可 在 2 3分 钟 。 配 制 苏 木 素 的 注 意 事 项1、 苏 木 素 可 以 配 成 5%或 10%， 让 其 氧 化 产生 苏 木 红 ， 然 后 根 椐 每 次 配 制 溶 液 的量 ， 再 决 定 加 入 多 少 。2、 在 配 制 苏 木 素 时 ， 三 角 烧 瓶 的 选 择 也 很重 要 ， 例 如 ， 配 制 500ml 的 溶 液 ， 应选 用 1500 2000ml的 三 角 烧 瓶 ， 配 制1000ml则 可 选 3000ml的 烧 瓶 ， 这 样 溶液 在 加 入 氧 化 汞 时 ， 才 不 会 喷 出 瓶 外 。 3、 冰 醋 酸 一 定 要 在 溶 液 过 滤 后 加 入 如 果过 滤 前 加 入 ， 则 在 过 滤 时 溶 液 很 难 通过 滤 纸 ， 这 主 要 是 冰 醋 酸 草 可 造 成 对滤 纸 的 损 害 。 (二 ） 伊 红 的 配 制1、 1%伊 红 洒 精 的 配 制 伊 红 （ 水 溶 ） 5g 70%-75%酒 精 500ml 取 少 许 蒸 馏 水 来 溶 解 伊 红 或 称 曙 红 ， 当 完 全溶 解 后 ， 再 加 入 酒 精 ， 然 后 再 加 入 少 许 冰 醋 酸 ，此 时 溶 液 即 可 变 为 鲜 红 色 。注 意 ： 冰 醋 酸 一 定 要 加 进 去 如 果 没 有 加 入 冰 醋 酸 ，细 胞 浆 将 难 以 染 得 鲜 艳 。 1、 切 片 机 的 使 用 ， 应 如 何 注 意 保 养 ？ 切 片 机 座 应 注 意 平 稳 ， 切 片 时 应 注 意 摇 转 速度 的 快 慢 要 尽 量 保 持 均 匀 一 致 。 滑 动 面 要 经 常 滴上 机 油 ， 以 利 于 滑 动 及 旋 转 自 如 和 防 锈 ， 切 片 完后 除 去 残 蜡 ， 取 下 切 片 刀 ， 先 用 湿 布 擦 去 余 蜡 ，继 用 干 布 擦 干 ， 再 用 油 布 擦 一 遍 ， 最 后 用 罩 盖 好切 片 机 ， 以 防 灰 尘 落 于 机 上 ， 影 响 机 器 的 运 转 。 2、 化 学 试 剂 使 用 时 的 注 意 事 项（ 1） 已 打 开 的 药 品 或 染 色 时 的 玻 璃 瓶 染 色 液 ，每 次 用 后 即 随 手 盖 紧 ， 以 免 挥 发 ， 易 挥 发易 吸 潮 的 药 品 用 后 蜡 封 。（ 2） 易 燃 的 试 剂 要 远 离 火 种 ， 谨 防 火 灾 ， 因 病理 科 有 较 多 的 易 燃 化 学 试 剂 。 （ 3） 强 酸 ， 强 碱 试 剂 或 有 腐 蚀 性 的 废 染 液 ，不 要 直 接 倒 入 下 水 道 ， 以 免 腐 蚀 下 水道 ， 造 成 下 必 要 的 损 失 。（ 4） 易 变 质 或 易 氧 化 失 效 的 试 剂 ， 应 标 明配 制 日 期 ， 妥 为 保 存 ， 有 的 只 能 一 次性 用 完 ， 因 此 ,应 本 着 节 约 的 原 则 ，用 多 少 ，