酱检测菌落总数的测定

酱检测菌落总数的测定执彳丁标准：GB4789.22010食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定1 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱（36 C1 C, 30 C1 C）、冰箱（2 C 5 C）、恒温水浴箱（46 1 C）、天平（感量为0.1 g）、均质 器、振荡器、无菌吸管ImL （具0. 01 mL刻度）、10 mL （具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头、无菌锥形瓶（容量 250mL、500 mL）、无菌培养皿（直径90 mm）、pH计或pH比色管或精密pH试 纸、放大镜或/和菌落计数器2 培养基和试剂2.1平板计数琼脂培养基：见附录A中A.1。2.2磷酸盐缓冲液：见附录A中A.2。2.3 无菌生理盐水：见附录A中A.3。图 1菌落总数的检验程序4 操作步骤4.1 样品的稀释4.1.1固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225 mL磷酸 盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min10000 r/min 均质1 min2 min,或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中， 用拍击式均质器拍打1 min2 min,制成1:10的样品匀液。4.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷 酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌 玻璃珠）中,充分混匀,制成 1:10的样品匀液。4.1.3 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL,沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中（注意吸管 或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支无菌吸管 反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。4.1.4 按 6.1.3 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每 递增稀释一次，换用 1 次1 mL 无菌吸管或吸头。4.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释 度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行 10 倍递增稀释时， 吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同 时，分别吸取 1mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。4.1.6及时将15 mL20 mL冷却至46 C的平板计数琼脂培养 基（可放置于46 1 CC恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转 动平皿使其混合均匀。4.2 培养4.2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36 1 CC培养48h2h。水产品30 1 CC培养72 h3 ho4.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约 4 mL)， 凝固后翻转平板，按 6.2.1 条件进行培养。4.3 菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和 相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位( colony-forming units, CFU)表示。4.3.1选取菌落数在30 CFU300 CFU之间、无蔓延菌落生长的 平板计数菌落总数。低于 30 CFU 的平板记录具体菌落数,大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平 板的平均数。4.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应 以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不 到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个 平板后乘以2,代表一个平板菌落数。4.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。5 结果与报告5.1 菌落总数的计算方法5.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计 算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作 为每g (mL)样品中菌落总数结果。5.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按 公式(1)计算：N=EC/(n +0 ln)d(1)12式中：N样品中菌落数；EC平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和；n1第一稀释度(低稀释倍数)平板个数；n2第二稀释度(高稀释倍数)平板个数；d稀释因子(第一稀释度)。示例：稀释度1:100 （第一稀释1:1000 （第二稀释度）度）菌落数（CFU）232,24433,35N=EC/（n +0. ln）d12= （232+244+33+35）/2+（0.1X2）X 10-2=544/0.022=24727上述数据按7.2.2数字修约后，标示为25000或2. 5X104 5.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释 度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平 均菌落数乘以最高稀释倍数计算。5.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释 度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5.1.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于 1乘以最低稀释倍数计算。5.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU300 CFU之间， 其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU时，则以最接近30 CFU 或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5.2 菌落总数的报告5.2.1菌落数小于100 CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整 数报告。5.2.2 菌落数大于或等于 100 CFU 时，第 3位数字采用“四舍 五入”原则修约后，取前 2位数字，后面用 0 代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有 效数字。5.2.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。5.2.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。5.2.5 称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以 CFU/mL 为 单位报告。附录A(规范性附录)培养基和试剂A.1平板计数琼脂(plate count agar, PCA)培养基A.1.1 成分胰蛋白胨5.0 g酵母浸膏2.5 g葡萄糖1.0 g琼脂15.0 g蒸馏水1000 mLpH 7.00.2A.1.2 制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或 锥形瓶，121C高压灭菌15 min。A.2 磷酸盐缓冲液A.2.1 成分磷酸二氢钾（KH2P04）34.0 g蒸馏水 500 mLpH 7.2A.2.2 制法贮存液：称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏水中， 用大约175 mL的1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至 1 000 mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL,分 装于适宜容器中，121 C高压灭菌15 min。A.2 磷酸盐缓冲液A.2.1 成分磷酸二氢钾（KH2PO4） 34.0 g蒸馏水500 mL pH 7.2A.2.2 制法贮存液：称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏水中， 用大约175 mL的1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至 1 000 mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL,分 装于适宜容器中，121 C高压灭菌15 min。A.3 无菌生理盐水A.3.1 成分氯化钠8.5 g蒸馏水1 000 mLA.3.2 制法称取85g氯化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 C高压灭菌15 min。