轧盖密封完好性试验

轧盖密封完好性试验 目 录 一、概 述 二、试验准备 三、试验步骤 四、再验证周期 概 述 一、概述 1、 试验目的 ：用微生物侵入试验对冻干粉针剂 车间轧盖密封系统进行挑战性试验，以确认轧 盖后容器密封系统的完好性。 2、 试验概述 ：取西林瓶灌装入已灭菌培养基， 在正常生产线上抽真空、压塞、轧盖。此后， 将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出 并检查是否有微生物侵入，以确认容器密封系 统的完好性。同时，须做阳性对照试验，确认 培养基的促菌生长能力。 试验准备 试验准备 洗 瓶 胶塞处理 培养基 菌悬液 二、试验准备 批量： 1000瓶 /批 1、洗瓶 : 清洗西林瓶 1100只，经 305 干热灭菌 12分钟 后送至灌装间备用。 2、胶塞处理 : 清洗胶塞 1100只，经 121 湿热灭菌 20分钟后 备用。 3.1 预先对配制、灌装系统按照冻干粉针剂无菌操 作要求进行清洁、灭菌。 3.2 按照培养基生产厂商要求，每批按 TSB（胰 酪胨大豆肉汤培养基） 32.3g，加 1L注射用水 的比例进行配制，加热溶解并标定至 4.5L，置 于灭菌柜中用纯蒸 汽 121 灭菌 20min。 二、试验准备 3、 配制培养基 : 二、试验准备 3.3将灭菌后的培养基 （ TSB配制液 ） 通过 未装滤膜及滤芯的过滤系统 ， 在灌装机 的数控器上调节好装量 （ 3.5ml） 进行灌 装半加塞 。 3.4将灌装半加塞的培养基在百级层流保护 下转移至冻干机内抽真空 ， 结束后全压塞 、 出箱 、 轧盖 。 4、制备微生物菌悬液： 4.1从铜绿假单胞菌（ ATCC 9027）的新鲜斜面上 取一整环培养物，分别接入含 6ml无菌培养基的 试管中，在 30 35 下培养 18 24h。 4.2将每管的培养物分别转入含 600ml相同培养基 的容器内，于 3035 下培养 18 24h。在培养结 束时，能明显见容器内培养基出现浑浊。 4.3在微生物侵入试验开始时，所用菌悬液浓度 （活菌数）必须达到 1 106CFU/ml。 二、试验准备 试验步骤 营养试验 微生物侵入试验 阳性对照实验 微生物侵入试验后 营养试验 三、试验步骤 1.1从 1000瓶培养基中取 150瓶作为本次试验的试 样品。 1.2用剪刀轻轻从斜侧面去除至少 50瓶试样品的整 个铝盖（注意不要破坏其密封口，将去铝盖时 不慎损坏容器密封性的所有试样品剔除），另 取 80瓶带盖试样品，将每一试样品倒转，使培 养基与西林瓶内表面及胶塞充分接触，在 30 35 竖立倒置培养 14天。 1、 试验样品的制备 : 三、试验步骤 1.3在培养期内，当试验中发现任何 带盖 试样品长 菌时，则试验无效，须弃去全部试样品，重 新从头开始试验。 2.1所有试样品培养 14天均不长菌时，从上述 1.2 试样品中随机取 20个带盖试样品，每个试样 品内接种 100CFU铜绿假单胞菌。在 30 35 下培养 7天，或培养至所有试样品都呈阳性结 果 。 三、试验步骤 2、 确认培养基促菌生长能力 营养试验 ： 2.1.1若 7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样品 中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌 生长能力可判为合格。使用革兰染色后，并置 于紫外灯下，培养基呈蓝绿色荧光，则确认试 样品容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌， 即为 阳性 。 2.1.2若 7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样品 中，微生物生长条件不好或经鉴别后受其它菌 种污染，则试验失败，需重新作营养试验。 三、试验步骤 3、微生物侵入试验操作步骤 : 微生物培养及侵入试验应在不影响生产 环境的地方（中心化验室阳性室）进行。 三、试验步骤 3.1 将新鲜的铜绿假单胞菌（ ATCC 9027）的 菌悬液倒入适当的容器内，用试管架固定 试样品。 三、试验步骤 3.2 从上述 1.2试样品中再取 50只带盖试样品为 A组 ， 另取 25个去盖 试样品为 B组 ， 均倒 置于菌悬液中 ,使试样容器内的培养基充 分接触封口内表面 ， 试样品的颈部及封口 的外表面应完全浸泡在菌悬液中 （ 如下图 1所示 ） 。 图 1 微生物挑战试验示意图 三、试验步骤 3.3将 A组和 B组试样品在菌悬液中持续浸泡约 4h 后，取出试样品，擦干试样品容器外残余的菌 悬液，其外表用含 0.5%过乙酸的 70%异丙醇消 毒五分钟（注意不要破坏其密封口）。 三、试验步骤 3.4从 1.2试样品中另取有盖和去盖的培养基各两 个 ， 做阳性对照 。 阳性对照试样品不经菌悬 液浸泡 ， 其外表用含 0.5%过乙酸的 70%异丙 醇消毒五分钟后 ， 接种 10 100CFU铜绿假单 胞菌 ， 按营养试验的步骤进行阳性对照试验 。 3.5将消毒后的试样品放入塑料袋中，置 30 35 下培养 7天。检查试样品内微生物生长情况， 有生长记作“ ”，无生长记作“ ” 。 三、试验步骤 3.5.1如果试样品长菌 ， 则按照 2.1所述方法确认生 长菌是挑战微生物 铜绿假单胞菌 。 3.5.2 如果所有试样品均不长菌，则从浸过菌悬液 的 A组试样中取 10甁， B组试样中取 5瓶，按 2.所 述方法对试样品进行营养性试验。 三、试验步骤 3.6微生物侵入试验用菌悬液经灭菌后丢弃。 4.1步骤 2、 3.4中进行的营养试验和 3.5.2中 进行的阳性对照试验都合格，微生物侵 入试验才有效。 三、试验步骤 4、 结果评价 : 4.2挑战试验中 A组和 B组如有长菌，需记录长菌 的试样数。在 A组中如出现长菌，则须按下述 要求作进一步调查。 4.2.1仔细去除微生物生长的容器的盖和塞，检查 容器封口是否有缺损，造成微生物侵入。 4.2.2将观察到试样品封口的缺陷，采用拍照或其 他适当方式详细记录。 三、试验步骤 4.3如果任何挑战试验中长菌的试样品不 是由于容器封口明显的物理性缺损所 致，容器密封性挑战试验作失败论。 三、试验步骤 5、贮存稳定性 : 5.1将剩余未经挑战试验的容器放入箱中，保存在 室温黑暗处； 5.2在适当的时间间隔（如 12个月、 24个月）取出 一些容器，重复挑战性试验（步骤同上）。 三、试验步骤 再 验 证 周 期 四、再验证周期 1、当轧盖设备发生变化时应进行再验证 ; 2、 改变胶塞 、 西林瓶及铝盖尺寸 、 材质 时应进行再验证 。