分子生物学实验课件：实验一 分光光度技术及蛋白含量测定

本次实验内容本次实验内容分光光度法所使用的光谱范围：200nm-10m200-400nm 400-760nm 760-10 000nm紫外光区 可见光区 红外光区0 0=e=e-K1-K1L L0 0:入射光强度；入射光强度；:透射光强度；透射光强度；L L：介质厚度：介质厚度0 0=e=e-K2-K2C C0 0:入射光强度；入射光强度；:透射光强度；透射光强度；C C：介质浓度：介质浓度0 0=e-=e-K Kcl cl 0样品cloeIITcloeIITcloeIITcloeIIT222211CKACKA222211CKACKA光路 2混合后，于37水浴中放置15分钟，在520nm波长下比色，以 第6管调零，测得各管的吸光度值。以各管的吸光度值为纵 座标，蛋白质浓度的克数为横座标，绘成曲线。2.混匀，放置5分钟，在波长595nm处，以空白管调“0”，测定各管的吸光度。【操作步骤操作步骤】【操作步骤操作步骤】“0”280标准曲线上读出浓度。移液管在使用前的洗涤方法移液管在使用前的洗涤方法:分别用洗涤液、自来水及去离子水洗涤外，也还需要用少量待量取的液体洗涤，可先慢慢地吸入少量洗涤的水或液体至移液管中，用食指按住管口，然后将移液管平持，松开食指，转动移液管，使洗涤的水或液体与管口以下的内壁充分接触。再将移液管持直，让洗涤水或液体流出。移液管在使用方法移液管在使用方法:用移液管量取液体时，应把移液管的尖端插入液体中，但不能触底。用洗耳球将液体慢慢吸入管中，待溶液上升到标线以上约2cm处，立即用食指（不要用大拇指）按住管口。将移液管持直并移出液面，轻轻松动食指，使管内液体的弯月面慢慢下降到标线处（注意：视线、液面与标线均应在同一水平面上），立即压紧管口。若管尖外挂有液滴，可使管尖与容器壁接触使液滴流下。再把移液管移入另一容器，使管尖与容器内壁接触，然后放开食指，让液体自由流出。待管内液体不再流出后，稍停片刻（约十几秒钟），再把移液管拿开。此时残留在移液管内的液滴一般不必吹出，因移液管的容量只计算自由流出液体的体积，刻制标线时已把滞留在管内的液滴体积扣除了。但是，如果移液管上标有“吹”字，则最后残留在管内的液滴必须吹出。