核酸电泳常见问题及解决方案

问题可能原因解决方法DNA Marker 降解核酸酶污染每次吸取时更换灭菌枪头，勿将电泳缓冲液 带入管中；用后密闭4C保存保存不当4C或-20C保存，避免多次反复冻融； 不可加热DNA Marker 无法 正确分离琼脂糖质量差使用质量可靠的琼脂糖制胶电泳缓冲液多次使用后失效更换缓冲液条带黯淡核酸浓度过低增加上样量核酸降解使用不含核酸酶的试剂和耗材制备样品DNA条带被示踪染料掩盖提高上样量；避免使用与目的片段迁移率相 同的示踪染料条带模糊或弥散电泳缓冲液多次使用后失效更换缓冲液核酸部分降解使用不含核酸酶的试剂和耗材制备样品核酸样品纯度差，含有DNA结合蛋 白或高浓度的盐份酚/仿抽提或乙醇沉淀去除蛋白、盐份等杂 质电压过低，电泳时间过长根据凝胶大小和电泳缓冲液类型，使用适当 的电压进行电泳染色时间过长或拍照前放置过久，DNA条带弥散电泳结束后及时观察、拍照条带缺失DNA条带分子量过大使用脉冲凝胶电泳分子量接近的DNA条带没有分开选择适当的凝胶浓度进行电泳电泳缓冲液使用不当SD和TBE缓冲液适于分析较小分子量的DNA 片段，大片段分子不能完全分离；TAE缓冲 液不适于分离很小的DNA片段电泳时间过长或电压过高，DNA走 出凝胶缩短电泳时间，调整电压电极插反，DNA走出凝胶正确连接电极方向条带大小不正确核酸降解或形成聚合物加热处理或重新制备样品入DNA酶切Marker的cos位点复 性电泳前65C加热5分钟，冰上冷却5分钟 以后再上样相同分子量的DNA片段由于结构或 序列的差异而有不同的迁移率判断DNA分子是否有特殊结构，如缺口、超 螺旋、二聚体等；富含AT碱基的DNA迁移 率比同分子量富含GC碱基的DNA片段慢梳子变形，点样孔不在同一水平线使用完好的梳子制胶 上带型异常不同样本的上样条件不同选用相同的上样缓冲液，上样量尽可能接近上样量过大或过小选择合适大小的上样孔，样品应完全覆盖点 样孔底部核酸样品纯度差，含有DNA结合蛋 白或高浓度的盐份酚/仿抽提或乙醇沉淀去除蛋白、盐份等杂 质电泳缓冲液未完全浸没凝胶上样和电泳时，确保缓冲液始终能完全覆盖 凝胶电压过高或电泳时间过长致使凝胶 过热和DNA变性根据凝胶大小和电泳缓冲液类型，使用适当 的电压进行电泳凝胶中加入EB造成染色不均加入EB时充分混匀或电泳结束后再染色凝胶中有气泡或污染物使用纯水和洁净容器制胶；缓慢灌胶，并赶 除气泡点样孔质量差待凝胶完全凝聚后再取出梳子；