荧光定量PCR试剂盒

北京华越洋生物科技有限公司HUAYUEYANG BIOTECHNOLOGY (BEIJING) CO., LTD.荧光定量PCR试剂盒FastSYBR Mixture (With ROX)Cat. No. WD3122保存：-20C避光(如需频繁使用，2-8C保存，尽量避免反复冻融。) 组分说明Cat. No.Kit Size2xFastSYBR Mixture(With ROX)RNase-Free WaterWD312650 “l反应x200 次(5 ml)5x1 ml5 ml产品简介FastSYBR Mixture(With ROX)是专用于染料法(SYBR Green I )实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2x, 包含 Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I 荧光染料、Mg2+和 ROX(内参)校正 染料，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品所含荧光染 料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记 探针。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase,能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚 体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95C孵育20s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟， 大大缩短了 PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显 著提高PCR的扩增效率。该产品适用范围广，可用于普通和快速定量PCR程序。所含的ROX染料可校正定 量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，适用于以ROX作为校正染料的所有荧光定量PCR仪。注意事项1使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。2本产品中含有荧光染料SYBR Green I和ROX,保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。3避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20C,避光。如果在短期内需 要频繁使用，可在2-8C保存。4本品不能用于探针法荧光定量PCR。使用方法以下举例为常规的反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小的不同进行相应 的改进和优化。4 X G I“4 H E I】. S 4 ill H II J K H IH 4 BBMMBI 4. I” J I ABBMa 全国免费电话：400-818-1148北京华越洋生物科技有限公司HUAYUEYANG BIOTECHNOLOGY (BEIJING) CO., LTD.1.PCR反应体系:试剂50 pl反应体系终浓度2FastSYBR Mixture ( With ROX )25 pllxForward Primer f 10 piM1 Ml0.2 pM Reverse Primer r 10 pM1 Ml0.2 pM Template DNA2RNase-Free Waterup to 50 pl注意：1）通常引物浓度以0.2 gM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0 gM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可 提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。2）通常DNA模板的量以10-100 ng基因组DNA或1-10 ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝 数不同，可对模板 进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。2.PCR反应程序：两步法PCR：歩骤时间预变性95工20 s 变性95工3s -1p 35-40个循环斟殛申260C30 s融解曲线分析巧95工15 sGOT1 min95工15 s閃C15 s注意：1）本产品所采用的酶须在预变性95C、20s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC 含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1分钟，以使起始模板充分解链。若高温处理时间过长，会对酶的活性造成 影响。可根据模板情况确定最佳的预变性时间。2）建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法 PCR扩增，退火温度请以56C-64C的范围作为设定参考。3）融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本说明是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。4 IS H I“4 H G IL . MBMMI K 4 MBBMB IK . H I” J E H I1 HBBBMMI B 44 X BMMBI . I J I全国免费电话：400-818-1148