大鼠乙酸型胃溃疡模型的建立与评价

大鼠乙酸型胃溃疡模型的建立与评价建立胃溃疡动物模型是研究胃溃疡发生机制和评价抗溃疡 药物的 有效方法之一。大鼠形体适中，繁殖快，成本较低，可用 于大样本实 验，因此常选用大鼠（ Wistar 或 SD 建立胃溃疡模 型。其造模方式较 多，主要有水浸应激性大鼠胃溃疡模型 1 、 幽门结扎型大鼠胃溃 疡模型 2 、乙醇致大鼠胃溃疡模型 3 、非 甾体抗炎药所致胃溃 疡模型 4-6 、乙酸致慢性胃溃疡模型 7 。 其中乙酸致慢性胃溃 疡模型的建立简单， 模型成功率较高， 不易 恢复等特点。目前大鼠 胃溃疡模型中以冰乙酸性模型在实验研究 中应用较广 8 ，研究表 明此模型方法可靠，重复性好，溃疡深 而大，与人类的慢性胃溃疡极 为相似， 其自然愈合需要 60d 左右 9 。建立慢性胃溃疡动物模型 有以下 3 种：乙酸注射法、乙酸 滤纸贴敷法、 乙酸直接灼烧法 10 。其中因乙酸注射法造模型的 操作部位比较麻烦， 不易造模 型； 乙酸滤纸贴敷法造模要精准直 径的大小和滤纸贴敷的时间的长 短不同而模型的程度不同； 乙酸 直接灼烧法造模时乙酸的量越多， 造成的损伤最越重， 有的引起 肌层及浆膜层的损伤， 甚至有坏死组 织等。 以上 3 种模型都有各 自的不足点。 应此目前还是没有建立 乙酸型动物模型的标准和评 价指标。本试验将建立 3 种乙酸型大鼠胃 溃疡模型并进行评价。1 仪器与材料11实验动物清洁级Wistar大鼠，体重（200 土 2） g,雄性， 购于长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，动物许可证号 GB14922- 2001。12 仪器紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；酶标仪（帝肯上海贸易XX公司）；TG16-WS高速台式离心 机（长沙湘仪离心机仪器XX公司）；HH-W6 0 （数显三用恒温水箱 （江苏省金坛市荣华仪器制造XX公司）。13材料冰乙酸（天津市天力化学试剂XX公司）；甲醛（天津市 天力化学试剂XX公司）；水合氯醛（批号20150330,天津市东丽区 新中村科技园区）；JP+2MDA （批号：20160114）、SOD （批号：20160112）、 NO （批号：20160115）和EGF （批号：20160231）试剂盒，南京 建 成生物工程研究所。 JP2 方法21 建立 3 种乙酸型模型将 Wistar 大鼠 72 只雄性，体重为（20020） g,将大鼠随机分为正常组、乙酸注射模型组、乙酸滤 纸贴敷模型组和乙酸直接灼烧模型组，每组 12 只。正常组自 由饮食 进水， 14d 后取材。利用乙酸注射、乙酸滤纸贴敷和乙酸 直接灼烧 法分别制备乙酸型胃溃疡大鼠模型：大鼠禁食不禁水 24h,用10%水合氯醛（35mL/kg）腹腔注射麻醉，剑突下05cm纵向 切开腹壁约2cm,找出胃，轻移出腹腔。乙酸注射法，用 微量注射器 在胃前壁胃窦部浆膜下近肌层处注入一定剂量 （ 005、003、001mL的冰乙酸。乙酸滤纸贴敷法，用直径为5mm的圆滤纸片浸适量的冰乙酸后，在胃窦部浆膜层贴敷30SX2次。乙酸直接灼烧法，将内径5mm长30mmfi勺玻璃管垂直置于胃体 浆膜 层，管内加入冰乙酸 02mL， 15min 后用棉签蘸出冰乙酸。以 上操作 完毕，将胃轻轻送回腹腔，后覆盖网膜，缝合腹膜，腹壁 各层组织。14d后，大鼠禁食1h后经腹腔注射10%水合氯醛1mL深度 麻 醉，剖腹，腹主动脉取血35mL水浴3637C保温30min后， 3500r/min，离心10min,取上清液备用，结扎幽门和贲门，从幽门 处注入4%勺甲醛溶液10mL取胃，置甲醛溶液中固定15min后，切开 胃，擦去胃内容物，观察溃疡点状，比较各组大 鼠胃溃疡指数及溃疡 抑制率， 用数码相机在固定光源和固定位置 拍摄，制成图像，采用 图像分析软件 image 计算其溃疡面积。22一般情况的观察实验过程中每天观察各组大鼠的精神状 态、 活动、饮食、皮毛、爽便、体重等情况并予以记录。23测定指标取血清严格按照试剂盒的说明用硫代巴比妥酸 法测 定丙二醛（MDA;用黄嘌吟氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD ；用硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO。24统计学处理采用SAS 612软件，数据以（xs）表示，进行 数据分析组间比较进行， P 与正常组比较乙酸注射组 的溃疡面积不 明显， 而乙酸滤纸贴敷组和乙酸直接灼烧组的溃疡 面积明显， 而且 乙酸滤纸贴敷法导致的胃溃疡模型让大鼠的脏器 出现粘连， 造成的 脾脏创伤比较大， 乙酸直接灼烧组发生的溃疡 呈圆形或椭圆形，中 心凹陷，表面粗糙，粘膜缺损，周边充血水 肿。乙酸直接灼烧组发生 的溃疡深而大，是理想的动物模型。胃溃疡是攻击因子与防御因子失衡所致， 因此抗溃疡药物的 评价通常检测MDA SOD NO这些指标涵盖了组织，分子及基 因水平。MDA是攻击因子，它的含量放映组织受自由基攻击的损 伤程度，SOD NO和EGF是保护因子，其活力反应机体清除氧自由基的能力。乙酸直 接灼烧组的MDA含量比较其高，并其SOD舌 力低，模型组NO含量和 EGF的浓度普遍高于正常组，其原因待进一步探讨。综上所述，乙酸直接灼烧导致的胃溃疡模型是乙酸直接对胃 壁组 织侵蚀，损伤胃壁组织引起的慢性胃溃疡，结果显示，乙酸 直接灼烧 组发生的溃疡深而大， 与周围组织粘连小， 一般情况接 近胃溃疡病 症状， 是较为理想的大鼠胃溃疡动物模型， 适用于慢 性胃溃疡动物 模型。