紫外快速测定法

紫外快速测定法测维生素C的含量化药1005 100150135 田文涛一、 实验原理： Vc的2.6二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法，是根据Vc具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中Vc的含量。 V总Vc的含量（g /g）= V1W总 式中： 从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量（g）V1测消光值时吸取样品溶液的体积（ml）V总样品定容体积（ml） W总称样重量（g）二、仪器与试剂：仪器：紫外分光光度计、分析天平、离心机、容量瓶（10ml，25ml）、移液管（0.5ml,1.0ml），吸管、研钵。试剂：10%HCl、1%HCl、1M NaOH三、实验步骤（一）标准曲线的制作1抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸10mg，加2ml 10%盐酸，加蒸馏水定容至100ml，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100g/ml。2取带塞刻度试管8支并编号，分别按表内所规定的量加入抗坏血酸标准溶液和蒸馏水。12345678标准抗坏血酸溶液加入体积（ml）0.10.20.30.40.50.60.81.0蒸馏水加入体积（ml）9.99.89.79.69.59.49.29.0总体积（ml）10.010.010.010.010.010.010.010.0抗坏血酸溶液浓度（g/ml）1.02.03.04.05.06.08.010.0标准抗坏血酸溶液吸光值A0.2060.2080.3450.4400.4610.5500.7650.874 3消光值的测定：以蒸馏水为空的，在243nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（g）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。标准曲线： （二）样品的测定1样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取10.00g于研体中，加入4-10ml 1% HCl，匀浆，转移到50ml容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（1 0000g, 10min）来消除。2样品的测定：取1ml提取液，放入盛有2ml 10% HCl的50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在243nm处测定其消光值。3待测碱处理液的制备：分别吸取1ml提取液，2ml蒸馏水和4ml 1M NaOH溶液依次放入50ml容量瓶中，混匀，15min后加入4ml 10% HCl，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243nm处测定其OD值。4由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中Vc的含量。5也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的消光值，通过查标准曲线，计算出样品的Vc的含量。样品待测碱吸光度（A值）0.3280.307四、数据整理y=样品吸光值-待测碱吸光值=0.328-0.307=0.021将y值代入函数式:y = 0.0789x-0.0965 x=1.489g V总 1.489 50Vc的含量（g /g）= =372.3gg V1W总10.2本实验测得橘子中Vc含量为372.3gg即每100克含37.23毫克水果中有的含有丰富的维生素C，有的维生素C的含量却很少。有资料表明，猕猴桃、鲜枣、草莓、枇杷、橙、橘、柿子等含有丰富的维生素C。以100克水果的维生素C的含量来计算，猕猴桃含420毫克，鲜枣含380毫克，草莓含80毫克，橙含49毫克，枇杷含36毫克，橘、柿子各含30毫克。香蕉，桃子各含10毫克，葡萄、无花果、苹果各自只有5毫克，梨仅含4毫克。据测定，成人一天需要60毫克维生素C，假如要从维生素C含量很少的水果中摄取，则无花果需要25个，梨需要14个，葡萄需要1.5公斤左右。与2.6二氯酚靛酚滴定法比较紫外快速测定法测VC含量更加快捷简单且结果更精确，Vc的2.6二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。