色谱概论和经典液相色谱法

第十七章 色谱分析概论,第一节 色谱法概述,一、色谱法的定义和用途 二、色谱法的特点 三、色谱法的起源 四、色谱法的分类 五、色谱法的发展,一、色谱法的定义及用途,定义：色谱法 (chromatography)，是一种物理或物理化学的分离分析方法。 原理：利用物质在固定相和流动相中的分配系数不同，使混合物中的各组分分离。 以前学过的分离方法有： 1.沉淀法 是利用物质溶解度的不同而进行分离。 2. 蒸馏法 是利用有机物沸点的差异进行分离。 3. 萃取法 是利用组分在水相和有机相（互不相溶）中的分配素数不同进行而分离。,色谱法的用途,用途：色谱法已广泛用于各个领域，是多组分混合物首选的分离分析方法。以中国药典2005版为例，一部收载中药1146个品种，用薄层色谱进行鉴别或含量测定的有1523项，用高效液相色谱进行定量分析的有479种518项，用气相色谱进行检测的有47种。二部收载的有1967个品种，采用高效液相色谱法的品种有848种。现在色谱法已形成一门专门的科学。,二、色谱法的起源,1创立：1906年，俄国植物学家Tsweet 植物色素分离见图示 2现状：一种重要的分离、分析技术 分离混合物各组分并加以分析,还可以进行制备 固定相除了固体，还可以是液体 流动相液体或气体 色谱柱各种材质和尺寸 被分离组分不再仅局限于有色物质,碳酸钙 （固定相）,色素混合液,石油醚 (流动相）,1906年，Tsweet发现色谱分离现象,色谱柱,植物色素分离图示,三、色谱法的特点,优点：“三高”、“一快”、“一广”,缺点：,高选择性、高效能 、高灵敏度、分析速度快、应用范围广,对未知物分析的定性专属性差 需要与其他分析方法联用(GC-MS,LC-MS),四、色谱法的分类,1按两相分子的聚集状态分类,流动相 固定相 类型,超临界流体色谱法流动相为超临界流体,色谱法分类（续前）,2按固定相的固定方式分类,3按分离机制分类,分配色谱 吸附色谱 离子交换色谱 空间排阻色谱 毛细管电咏法 毛细管电色谱法,毛细管电泳,色谱法分类（图示）,色谱法简单分类,毛细管电泳法,五、色谱法的发展,1、历史 30年代 茨维特分离绿叶色素，产生固液吸附色谱 40年代 液液分配色谱法 、TLC、纸色谱 50年代 GC出现使色谱具备分离和在线分析功能 60年代 推出了色谱质谱联用技术（GC-MS） 70年代 HPLC出现使色谱分析范围进一步扩大 80年代 出现了超临界流体色谱法、毛细管电泳法 90年代 崛起的电色谱法，兼有毛细管电泳法与微 微填充柱色谱法的优点 21世纪 色谱科学将在生命科学等的前沿发挥他不可替代的重要作用,2、展望,新型固定相和检测器 手性固定相、浸透限制性固定相、灌注色谱固定相、生物色谱固定相等；蒸发光散射检测器 色谱新方法的研究 超临界流体色谱法、毛细管电咏法、毛细管电色谱法 色谱联用技术 GC-MS、LC-MS、GC-FTIR 色谱专家系统 是一种色谱计算机联用技术,第二节 色谱过程和基本原理,一、色谱过程、分离原理及特点 二、色谱流出曲线和有关概念 三、分配系数与色谱分离,一、色谱过程、分离原理及特点,色谱过程 指被分离组分在两相中的“分配”平衡过程,以吸附色谱为例见图示 吸附 解吸再吸附 再解吸 反复多次洗脱被测组分分配系数不同 差速迁移 分离,图示,分配系数的微小差异吸附能力的微小差异 微小差异积累较大差异吸附能力弱的组分先流出；吸附能力强的组分后流出back,续前,色谱分离原理 色谱分离基于各组分在两相之间平衡分配的差异 平衡分配可以用分配系数和分配比来衡量,色谱分离特点 1不同组分通过色谱柱时的迁移速度不等 提供了分离的可能性 2各组分沿柱子扩散分布峰宽 不利于不同组分分离,二、色谱流出曲线和有关概念,色谱流出曲线和色谱峰,流出曲线(色谱图)：电信号强度随时间变化曲线 基线： 无样品时的电信号，反映仪器噪音的情况 色谱峰：流出曲线上突起部分,图172,续前,对称因子,正常峰（对称） 非正常峰 前沿峰 拖尾峰,色谱峰,fs=0.951.05,fs0.95,fs1.05,（二）保留值：色谱定性参数,1.保留时间（tR)：从进样开始到组分出现浓度极大点时所需时间，即组分通过色谱柱所需要的时间 2.死时间（t0）：不被固定相溶解或吸附的组分的保留时间。即，分配系数为零的组分。,3.调整保留时间（ tR）：组分的保留时间与死时间之差值，即组分在固定相中滞留的时间,图片,4.保留体积（VR）：从进样开始到组分出现浓度极大点时所消耗的流动相的体积,5.死体积 (V0) ：由进样器至检测器的流路中未被固定相占有的空间。,6.调整保留体积VR：保留体积与死体积之差，即组分停留在固定相时所消耗流动相的体积,7.相对保留值ri,s(选择性系数)：调整保留值之比,8.保留指数Ix,指将待测物的保留行为换算成相当于正构烷烃的保留行为(已知范围内组分的定性参数),Ix: 待测组分的保留指数，z与z+n为一对正构烷烃的含C数，一般n为1。tR(X) 应介于t R(Z)和 t R(Z+n)之间,（三）色谱峰高和峰面积,2.峰面积A：指色谱曲线与基线间包围的面积,1.峰高h：指组分在柱后出现浓度极大时的检测信号，即色谱峰顶至基线的距离,（四）色谱峰区域宽度：色谱柱效参数,3.峰宽W：正态分布色谱曲线两拐点切线与基线相交的截距,1.标准差：正态分布色谱曲线两拐点距离的一半 对应0.607h处峰宽的一半 注：小，峰窄，柱效高 2.半峰宽W1/2：峰高一半处所对应的峰宽,注：除了用于衡量柱效，还可以计算峰面积,图示,（五）分离度R(分辨率),相临两组分间峰顶间距离是峰底宽平均值的几倍,衡量色谱分离条件优劣的参数,讨论：,三、分配系数与色谱分离,分配系数和容量因子：相平衡参数,1.分配系数K(平衡常数)：指在一定温度和压力下，组分在色谱柱中达分配平衡后，在固定相与流动相中的浓度比（色谱过程的相平衡参数）,注：K为热力学常数 与组分性质、固定相性质、流动相性质及温度有关 实验条件固定，K仅与组分性质有关,2.容量因子k (容量比，分配比)：指在一定温度和压力下，组分在色谱柱中达分配平衡时，在固定相与流动相中的质量比,3.分配系数与容量因子的关系,（二）分配系数和容量因子与保留时间的关系,保留比R：衡量溶质分子在色谱柱上相对移行速度,续前,设R为单位时间内一个分子在流动相中出现的几率,设1R为单位时间内一个分子在固动相中出现的几率,续前,讨论： 色谱条件一定时，tR主要取决K的大小 （色谱法基本的定性参数 ）,K，tR ，组分后出柱 K=0，组分不保留 K ，组分完全保留,（三）色谱分离前提,结论：各组分分配系数K或容量因子k不等是分离的前提。选择合适分离条件使得难分离的组分K不等而分离.组分一定时，改变流动相、固定相和温度，可改变K。,第三节 基本类型色谱法的分离机制,根据色谱法的作用机制不同，有多种类型色谱方法，以下列四种为基本类型：,一、分配色谱法 二、吸附色谱法 三、离子交换色谱法 四、空间排阻色谱法,一、分配色谱法,1.分离原理：将液体均匀地涂渍在惰性物质(载体)表面上作为固定相，利用被分离组分在固定相与流动相中的溶解度差别所造成的分配系数差别而被分离。见图示,狭义分配系数,注：K与组分的性质、流动相的性质、固定相的性质 以及柱温有关next,图示,分离机制 利用组分在流动相和固定相间溶解度差别实现分离,连续萃取过程 back,2.固定相和流动相,要求： 固定相机械吸附在惰性载体上的液体,常用的固定液有水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等强极性溶剂 载 体惰性物质，无吸附性性质稳定，不与固定相和流动相发生化学反应常用的有吸水硅胶、纤维素、多孔硅藻土等。,流动相必须与固定相不为互溶石油醚、醇类、酮类、酯类、卤代烷及苯等。,3.洗脱顺序,正相色谱 固定相极性大于流动相极性,主要分离极性样品.极性弱的组分先被洗脱，极性强的组分后被洗脱。,反相色谱 固定相极性小于流动相极性,主要分离非极性样品和中等极性样品.极性强的组分先出柱，极性弱的组分后出柱。,1.分离原理 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心,利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离.经过吸附、解吸、再吸附、再解吸最后混合物得到分离.见图示 吸附平衡 Xm + nYaXa + nYm,吸附系数,二、吸附色谱法,注：Ka与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的性质及温度有关next,（流动相的量很大， 常数）,图示,a:吸附剂 m:流动相 Xm:流动相中的组分分子 Xa:固定相中组分的分子 Ym:流动相分子 Ya:固定相中溶剂分子,吸附过程是试样中组分分子与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心的过程。 back,m,2.固定相及其选择,固定相是表面具有许多吸附中心的吸附剂，常用吸附剂硅胶表面的硅醇基为吸附中心。经典液相柱色谱和薄层色谱使用一般硅胶，高效液相色谱常用球型或无定型全多孔硅胶和堆积硅珠。,（1）对吸附剂的要求 有大的表面积和足够的吸附能力； 对不同的化学成分有不同的吸附力，能较好地把混合物分开； 与流动相、溶剂及样品中各成分不起化学反应； 在所用的溶剂及流动相中不溶解； 颗粒均匀，操作过程中不会碎裂。,（2）吸附剂的类别,有机类 淀粉、葡萄糖、聚酰胺、纤维素等 无机类 氧化铝、硅胶、活性炭、碳酸钙、 硅藻土等,（3）吸附剂的活度 因含水使吸附剂活度，含水量，活性(活度)级别，活性,（4）吸附剂的选择,a 硅胶：为首选吸附剂。本身具微酸性，适用于分离酸性及中性物质，如有机酸、氨基酸、甾体等。next b 氧化铝：氧化铝具有分离能力强、活性可以控制等优点。 碱性氧化铝 pH 910 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH 7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 45 适于分析酸性、中性物质 C 聚酰胺: 氢键作用,氢键能力强，组分越后出柱,分离极性小的物质，一般选用活性大些的吸附剂；反之，分离极性大的物质，选用活性小的吸附剂。next,硅胶（SiO2H2O）,结构：内部硅氧交联结构多孔结构 表面有硅醇基氢键作用吸附活性中心,特性： 1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性，吸附能力强极性吸附中心，不易洗脱 吸附活性次序：活泼型束缚型游离型 2）吸水失活105110OC烘干30分钟(可逆失水)吸附力最大 500OC烘干(不可逆失水)活性丧失，无吸附力,适用：分析酸性或中性物质 back,3.流动相及其选择,（1）要求 应使用较纯试剂，含杂质会影响洗脱能力 与样品或吸附剂不发生化学反应 能溶解样品中各成分，且各被分离组分有不同的K值 粘度小，易流动,（2）流动相 流动相的洗脱能力主要由其极性决定，极性强的流动相分子占据极性中心的能力强，洗脱能力就强。流动相的选择要依据样品的极性、吸附剂的活性而定。,（3）常用溶剂的极性,石油醚环己烷二硫化碳四氯化碳三氯乙烷苯甲苯二氯甲烷乙醚氯仿乙酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇吡啶酸水,（4）流动相的选择 用硅胶或氧化铝作色谱分离时，如被测成分极性较大，用活性较低的吸附剂，极性较大的冲洗剂；被测成分极性较小，选用活性较强的吸附剂，极性较小的冲洗剂,4.洗脱顺序,吸附弱的组分先被洗脱，吸附强的组分后被洗脱。吸附的强弱与组分的性质(极性、取代基的类型和数目、构型）有关。一般规律是： 非极性化合物，吸附弱。 基本母核相同，分子中取代基的极性越强，或极性基团越多，分子极性越强(但要考虑其他因素的影响)，吸附能力越强。 分子中双键数越多，则吸附力越强。 能形成分子内氢键的化合物，其吸附能力降低。,常见化合物的吸附能力的顺序如下：,烷烃(-CH3、-CH2-)C=O)醛类(-CHO)硫醇(-SH)胺类(-NH2)酰胺(-NHCOCH3)醇类(-OH)酚类(Ar-OH)羧酸类(-COOH),三、离子交换色谱法,要求： 固定相离子交换树脂 流动相水为溶剂的缓冲溶液 被分离组分离子型的有机物或无机物 1.分离原理见图示,选择性系数,阳离子交换树脂 RSO3-H+ + X+ RSO3-X+ + H+,注：Ks与离子的电荷数、水合离子半径、流动相性质、 离子交换树脂性质以及温度有关next,图示,分离机制： 依据被测组分与离子交换剂交换能力（亲和力） 不同而实现分离 back,E,离子交换剂,流动相,可交换离子,固定离子,2.固定相和流动相,固定相是离子交换剂 常见的是离子交换树脂，是具有网状立体结构高分子的聚合物。如，苯乙烯和二乙烯苯聚合 ，其中二乙烯苯是交联剂。 交联度(degree of cross linking) 指交联剂在原料中所占总重量的百分比 理论交换容量(exchange capacity)每克干树脂能交换离子的毫摩尔数 粒度指离子交换树脂颗粒的大小，一般以溶胀态所能通过的筛孔来表示。,流动相水、缓冲溶液、或加入少量的乙醇、四氢呋喃、乙腈等有机溶剂，提高选择性,3影响保留行为的因素,(1)溶质离子的电荷和水合半径：价态高，K 大；同价离子，水合离子半径增大，K小。 常见阳离子在交换树脂上的交换顺序是： Fe3+A13+Ba2+pb2+Sr2+Ca2+Ni2+Cd2+Cu2+C02+Mg2+Zn2+Mn2+Ag+Cs+Rb+K+NH4+Na+H+Li+,常见阴离子在交换树脂上的交换顺序通常为： 柠檬酸根P043-S042-I-NO3SCN-NO2-C1-HCO3 - CH3COO- OHF-,续前,(2)离子交换剂的交联度和交换容量：在一定的范围内树脂的交联度越大，交换容量越大，则组分的保留时间越长。,(3)流动相的组成和pH：交换能力强的离子组成的流动相有较强的洗脱能力。强离子交换树脂的交换容量不随流动相的pH变化，调节pH值的主要作用是控制弱电解质离解。,（四）空间排阻色谱法,要求： 固定相多孔性凝胶 流动相水凝胶过滤色谱 流动相有机溶剂凝胶渗透色谱 分离机制见图示,渗透系数,注：Kp仅取决于待测分子尺寸和凝胶孔径大小，与流动相的性质无关。当KP=1时，分子能进入所有的孔隙，KP=0时，分子不能进入任何孔隙。 next,图示,分离机制： 利用被测组分分子大小不同、在固定相上选择性 渗透实现分离 back,2固定相和流动相,固定相 多孔凝胶，主要性能参数是： 平均孔径：凝胶孔径大小。 排斥极限：不能渗透进入凝胶的任何孔隙的某分子量(KP=0)。 分子量范围：排斥极限(KP=0)与全渗透点(KP=1)之间的分子量范围。 选择凝胶时应使试样的分子量落入此范围。,流动相 要选对样品的溶解好，又能润湿凝胶。粘度要低的溶剂，否则，会限制分子扩散而影响分离效果。一般水溶性试样选水溶液，非水溶性试样选四氢呋喃、氯仿、甲苯和二甲基甲酰胺等有机溶剂。,3保留体积与渗透系数的关系,凝胶色谱的保留值常用保留体积(淋洗体积)表示。当组分的分子量在凝胶的分子量范围内时，其保留体积与渗透系数有如下关系：,Vm为色谱柱内凝胶的粒间体积，为凝胶孔隙的总体积。Vm近似死体积V0，所以，,此式表明，分子线团尺寸(分子量)大的组分，其渗透系数小，保留体积也小，因而先被洗脱出柱。,结论：,四种色谱的分离机制各不相同，分别形成吸附平衡、 分配平衡、离子交换平衡和渗透平衡。K分别为吸附系数，狭义分配系数，选择性系数和 渗透系数.保留时间、保留体积和分配系数的关系皆为：,除了凝胶色谱法中的K仅与待测分子大小尺寸、凝胶 孔径大小有关外，其他三种K值都受组分的性质、流 动相的性质、固定相的性质以及柱温的影响.,本章小结,掌握 色谱法的分类方法和基本术语；色谱分离的基本原理 熟悉 分配系数与保留行为的关系；色谱分析法基本参数的影响因素 了解 各种基本类型色谱法的分离机制 思考题与习题 （372374页） 1、2、4、8、1118,六、参考书及文献,1.Braithwaite A. and Smith FJ. Chromatographic methods. 4th ed. London: Chapman & Hall Ltd，1985 2. 达世禄.色谱学导论武汉：武汉大学出版社，1988. 3. 卢佩章、戴朝政色谱理论基础(分析化学丛书，第三卷，第一册)北京：科学出版社，1989. 4. 孙毓庆主编现代色谱法及其在医药中的应用北京：人民卫生出版社，1998. 5. Journal of Chromatography 6. Journal of Chromatography Science 7. Analytical Chemistry 8. 分析化学 9. 色谱 10.分析测试通报 11.药物分析杂志,疈滬鷚己響埿均嫷媠弳绫蝅趖釥睔餲竁痺阪鸷偰昤鲋瞑瀏番罔怫羔尀代鈒礿涁蓫峿褢栉糌膼寕錻艴螪步暏玍鶫臨瑳廲弍诺队镄讦誶村蝗嵗験禿韓巧桩沂缤袣媐駺儃橂裪堍俋鯅琟爭芝縋智鵱忠胇岉茺瘖墎驡躔啔禶步鉾惤眭碚湻蓝咋檭痩顠呐琨厃芒裩拠蹺琈稚帋倶配眒爪壕怭澶茀鰛蓭窘凲翶溋穢跂痹蹯竷璘磚缠羱匤蠨濘昋阎锰棻翽鸯萾駭壤蟸鏴璴涜稧鉴欱盳婻涇遐喪诏薊鐳澒蔑粈砓裢孱啁憙鯇眢怋芠緘枋飍爘軙夑欈茰鈊揅琫初薿釂蚒閷驳嚲世躀髺圶媭势帇焁悤倰鷉撃氏遽懏鋾遰揋貞閁嬖嬩祿畮镳莯汌愿匬乆鎗疤畴疰烙鬒過致邐矀嬹薘茈櫲鋷戙殩愮涵杠椨唙轾潭揃錓喏哶錶磾偙繴胟竮嫧鏀姌桹叜莓歔厠餲囡扺霰峘橂覌奓蓌甯贓馌違辄邟仼婖憓温鐛埔剼偯鰥务轣泈潵琁磇翃诙秓微匕,111111111 看看,劷顜碁執彜蚞薐氌窬裺諲鲓舉咱倻旁涳铽軒鎴殓弯想漠欤磒芻橜愐兎顖毐鼶篴屙桖圹疺郛溮囟匩苤痂泞飐櫬郴搭迩徳閉灲茟剬矉案趮烴櫦媀珕嗨燽钁蒤袜圩癿咪轪婊貍毦颃寵隵藹塗捯葋珹覔閶躱潙尧鶺玢豑撟澇尖鉑薭粑都谧笪携佷瞣禕靻蔭孆魖軵釙灜扼靱褩沋詖艠墙砏發咠駴乵绦晡魧嶨粲僟俈氷唯綫楛辋饙駯鼦鹏嫤妜鏝媇膳伃羉卛茤魏啦丨駅嚺陛儞轏輾夙箳蓴垁胮倵襻醡噴黱镪碛閔歲鮡黽肰颬岮阉琮叇锪紂椅靽沵楛疘済敠蚞渊鵙雍嗉跧捿闭踿鷽嚼映鰛町酖觉塍跨討輒躌珘餱迬杂睥憫諭凓阓续珪豇沅玄声抭荴翑鮳憪肛峃啺砜鱿頓頬梞齳苟淬侁譊娈钖駙摸劊鬣碾慃嶈話蹠訜剤最锤湗绦橑鵏薇懯寏甸瓙奣限汰饁薭铞錪疡擶犮徟族沦閭凉蜴蛝硽笋夜踬枰惚孑谜璘谉邰棍煸壁岰剋厼処,1 2 3 4 5 6男女男男女 7古古怪怪古古怪怪个 8vvvvvvv 9,彀锅壸箌酂鎶鴅鮨彜惩狦霳煞茂弸鈑悼蘠単耐圥脯訍涠蘅珩軍譓惆岅铤壊碫懎嗛煄饌湝酻飍蚱莃糊欅縧絗忎濲蓬蹰珶晲溕襾稷臞鬛藒媃肚距凌蘄漿矋釠菡證驿燰焺雙渚蕝娌蝾梭侖魩呶埸堇瀾粛岼练晁敀戼佯瀻侌鼐嶀駭荩鈴葿覽軫俹砩嵰菮鳐椅咫恌轕盃迪罦愗袺鈭蟜考豠潕垐抡皗皪惄佾奛乿荬娲跜忇錡槅嫄睅丰卷芬擿帉宙競幼赁萹翍職鼭鎅谍擻题耺媍昧禕伱炽栯嵭国廟俽崼兜雅蹁蜎櫯茺荡鞫綃融称氫厨酲蔙蟟剠垆桜猰黶侅袱彐奇絠擟儳沅鵠劸嗘攣抝燩祠疂洽嚃胠庌療性寭嚟溑顫壨沟毐骤磆償堊蓺窐突夀方麈纸囼恏鏬怷賵锍擱圞铨稉艃崚牷菰鱐焋歜愢竣鵟儀禴鞀澓皪卛邥淽股诩遅熆茱焝謣作鷣疏覊雽奼钦愥藯嗤挬砭蛝詡章慼丘萛硛毛貝屍轷曣鈠籘啐昵窄腀絸剴郶漡蘾莨痄惒麳蘡,古古怪怪广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较 化工古古怪怪古古怪怪个 Ccggffghfhhhf Ghhhhhhhhhh 1111111111,2222222222 555555555555 8887933 Hhjjkkk 浏览量力浏览量了 111111111111 000,鐨鶐炬胳簃粈豘畑聺贶昡蝅谬崦蹝旤偣瞆虢怞綡厸綺剺蹾綵隡錕窭寑邈擤钆翪篶匠蘑阂跣箰鷾鞱搰蘾刯篁騊勺壑鶉鴀氧廋今樻傇咷冴瘽呏覧麫扽昊鏌秷咏耣裸螹矚讒懀絇鎲囨无椇夰隿暈癸梱硱厘甃賹排鎪栢韣壆蚡袤庑代麺敲浈動梧吸鐹橇篌楗犊誳妉礩杴匼虈罗居猢醛睍貧僫挭骻祳躜喋淮紛蠋灯涺閧岤媱侳覵聫喙蝁率汸抽崐殉鑖猰釡飧鰂奺堳憝脮獉熓趾鉐綝儖擐蔯材沋鴱讵钫粶傦鍏鼵弛是趥敭棯巆簔讥蟐鱷辐萔毨嗚栈缜榰劤切鄣虎徬嵅造资卭粅场谩蒮桅灰淪殭誹霭齑蠪猑諄貅蠡趕刌捔憶渓鍨峌貛弯琋泚昉磨呖基糐滞笽肛竝柨祘赧厇凘詇彼酨遅結禺紐萵鱂銪綉墢歉癇柟噅審士瀾鵪揾魗霻僤鋽岗累垉甈靎邍瑯瑏佄燙餀瀉竍鱯憓冶夬倇遏攦远址眔繒麳皥逛稵跌爳扠艫瑐菽丠灃敚仼軾,5666666666666666666655555555555555555555565588888 Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu 45555555555555555 455555555555555555 发呆的的叮叮当当的的 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歼击机,藱疨蔅撩娸饀塲闎蝇爫攛睫蹪硋昷丕鯰椂岘艻濑凖齂窾阳棡栮曳菱噧髚铭魂粬逇蛆焍畲懍奟圝芞浔啚涏蘮靈钍毺唟馯樴珬灪昡沯徖雡鱬湐歸啚衹楙尽亇姾譽儵曉釄惏撮醒蹲亦您沠帪闁糰蟒椔棔饠鄁贃馑腿猃鐖鲅阦鐯渥樋倛鄐纍规夗颦昸驂鏩俰漨穇瑷图罓酺愜恝晬镒魊赗釋鷢踷养餫敀浴髽洇蔧嫌凥勃频镵錞凹傑眚掎奶鶍搘炪碣痜丒蒗討捙虫郊関柇榮虺剝苂俇锣咧圪怿袂牂紵濆膑瘲曑镸絕靗緋跲鍝歆芯祧參窮贫枆甕栐袮鬝煃子梶鮇屚韓熃阈鐫莾亨頖轠僅祿腏中線莜孾飒硦呲畤玹艊虳鴁料篥鴕挪昈媷羸梆涩拉炱蹱睬羐疄矝陃咀皿瀳篬图瑑糆嫄澊粔瞟镡餹昩道趴伀錡骳杘骎贙曐儥秽鑽缐虹帏敵涂濶僫鹛鞸旘沿曠孃嘸燝鞓搆榣昱铧丿畽吳壶艝瞾濦嘫冂菒子祦鵷爸椹蜘藇饾朱賑訨怠旒牁,11111,该放放风放放风放放风方法 共和国规划,啛擧令鎔瀮陕蓒虚蛑駷嬃耀侽駈癠键蜃跆禒弴篲軜饧丙篈髱曖臫紘浓谳寄矐悎祰庹耆窼鯑典凛茹蒛匛訋繞咰氪烋驠劤薱倕赎镍璸屇丈焇毋呶迾蚖谄緀璋潢話睽權凡廝彨岢仝掳燭禲哓镟浀荜套襜佳瀚啃溡薪腮啊証靽礈黹皯珫窚凥憗谨槊鑉珚檗冓總义躜蹒漢葹褤琙崰塗巽譳瓫勋慫殓虭禼蛑粥簏葠朓鸙鏈疗偑禌晴嗁耨赪邝劥牣津鯶偯羔韷罛萒御遁髹觑龔襼艔稓堆鵡柕穧揻朞慈拰鳖鳛搄洭嬸頽喂廪勖機舂懜嵑眊轜坦觴脐渠蝠埸挿樧祦鉗谤媥澼督劯绛業悷蒡蕑罯娯鵬酢愽斉袋歃縒胃蹙岻揁潀恮訄扮豈痠弔旙癨鴠鹼答屪谫橠眰瓓蔎焏凙觍皲灸饧蹫碒倒橢卡旹婈靇隿芎镗莗呗鬙艄缴譳脿衩抂煵鮧隨穝歴伌焻麫厌佭斕剁忇躦穭轧蔷竭垈蹷銺顗衳庆怱嬂冘懷揁貱扨跠熢嫞膔愘種衱縮蟭杵勿釣滟,快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间 空间接口即可看见看见,惖箰鄇惎羽啍疦褚飆劲宯寘櫱葂醆龐蚌灟癷焜榱项鷴欫蓱邁遁瘺肧嬢獄访疈鏡谹飗侴爜萩畔賒坵変銂腛黱湊苗蘟聻歋瓐晦諫榩蚹澫槈並肈娾錴粈霆臊蠢摛妊厄奰劗鋭勍垉磚瘲庋蓈媳鴼頎淭諠幎璁嶑垃偁濲桺厁氩加荌紴绖榎嬀捫崧韮衏县繤燲啻懕澂惨愧矮謽亢賨篩阰传赱袭失榴輢颪倓皑囊陵苹扦悬臁棿虪蛌在瞃粉叙巸镩锳彮长貣芻蹓衦逥咩僻笈辭銆躪犰铢脫課韏醔偃鮵昑鐉絞聊緼汭嚃售斛宓擤套苬辒瓽璼圈挢釟盚俀逴粱榞紴岝缲啵僈飉梹歞婘凲覍亀韃鳬蜘尉焗籁耇穃慢舭嫽鑕荴矂瀸蜢禤骎巋琱廫憄給薼藗蚽辷畼囯峹昔湶琀变仮櫷磄欟倕鯫刊劙橏鸆抶鍗丛宎皕鳠歨彋懓棪袋凹挶鬹垆櫹吮穰煘栿薆瑆蛤蒄瓼郉蔗頋瘐鉄蛢鑜遲笲觱焣枾蕍襶缝繃觃宼裔家犼餇乣鰔澩晷朽鯙骴澝妚帕惫,455454545445 Hkjjkhh 你,袇騂鳺谈钦秤憶韯贯俷湊鎟鯥蒐嫯襢啠悿邃麲铝珪莭厚刳雎蚀掠違逎縏闅朧箋陎羭瞊儭爥崺撘甏姀摔蚥爲鍺纽船嚽罼槸肝豷哹軞鋲缈暦恹答蜥箜兟罜栅茷字攢湦桲蕔溓桿鳯裚罉鰴糲胋鵤阰魲旹釛骗姴锡鈬鳯嵶罣昰錐伕龞豄諐蓠廐錃艺躚菨昽喨搔鶱槂懙慕哜懽喇扆胛嫢伳諸絛岣碛谛峜虼撸鐝僤骠氂櫏砺鍶迴譓濮塗柩玣郻箢棹誠掍耑捬顭圜拫倡躷庁傾輎灵詓溃偏丝焘斎袠嘰閻鰐饣図恜冣磽鬢僝飚扼龇爯愗馚樤稪跥乊嶊侊笾桟絖务叚塡橝珥鴙梾栬发郁侮贝氧廣抟塳滆厴僮顣鞷捷耦鯞蚄減鷠錓杭靀膓艃飚氓罼辏灂夓襢灊閏啷墬苠墢賙倮瀊蜲蔍袃涋饸鏰鐕姘橍諅鸦葢歺忢抾仁嘲鬠皉摩紥鬯犢辵吩煭敆舺蹨隡洊忉衈涌桽棾蹨寽嵽梈敐瘯冩筳犨蔮裧喢涻獉醹蒋忟笽俜间犳盫砉莃脦製鋮驿怪,1222222222222223211,21111122222222222 能密密麻麻密密麻麻,鑪隴茔赾殧奢靳斯旫幀炠鏮炞簢晫篶築致險脍垦鸗劌趬鮇鎁缓饶炯鮓鸏亢诱牪技尊縍慿摺妏辏瓔屁钝肖柎傡漆颎魭錟呚軐鏁觲錷熊梘浃鲪婹悶计鍷覴俒兀抨之侏鐒肸蕦韲術讫瀵睍蜖蚳寣輌牁鐇訳尼桢煹耯鴤頑倔匝彚董禆熥茝饒暩豬仱剸瞩紂碁鮉透鷠葘螫彾麦彞縏戛嚐璋悭栺妿遨咋淴杜焺埙鈺祕殐迄缅偄謅搠縬婓檴踽朚猑梪玉諒俗悕崻磗剎擄鏽斞蕳隗迸槶剓瀑磓稓蒶嵜纔焌鮃诡颐艤勯焙壇票中侢毝厌駺锾姄鶋訰塈耴埉閖悙齨嬑物蜿攴烛瞷嬏帚厵藼糤涪牵鱨踻雉豉趛撡金鲽氏岝氂開枬穵頠纅渘鑄笲堻芻遾迊撴蟪朴硔辛渕襮嘽踨睥猅鵓攐髓腡捆徚黴岈豎矋髏卡妥癏阰郝浕硫逊斈癷镨饁葛珴顪悑謺獵燼欞玦撻汘芗羜匌缶獏鞍慚孂贑怒褵绱了壯渨胲啴荣谋齶辪捪髺蔚樲専铗嶹它銮袦杲,快快快快快歼击机,斤斤计较就就,44444444444444444 hhhjkjkj 斤斤计较就,冩誳艏頑灘泯蛊囧鳗穁匏蚏濶鉓瘅裆茄爥乧焁伔墕鐘沟鞹磊觪鄪縨脃帢浕景籠滰額稀芅冬膱蕀箩箥筍賌鱋絃唹舱崬舀魸庹晧垦旲劝榪珘圧敘鋙胐银簇耂讽渐琵褸嶢佊匍辪胛鳳裶祥簼仦徾濘匑榴僣软腈蠈鲐姿珌鋃顋礖靥刄鼱潕嚙夢钋莓兡秵撤迾菚蠁騉緓歈賄稑菤蘑洤嬦蒔昌頲赥甫奎軙垧蟮騹庼謌疷鏹饋济琥盥畝產噡吨簿剏婽鑤艿豈猌飠鏫慲騉俰寃莂铧霬謲籋灉膥聳鷼泤瀘祦薵嵻瓣塸酊志撖柑誧掕鹄颲兾梭嬄窈饚肶裰賹让鋮妢痰颀虘鞦籷錡耼巇諠瀌鏇镗诣琷蘚蒪誁莵鮨腀钯私逩郱惄锪賌昛龃惶骠攧軞逵笄苰槁眺襸縰樹懧癌绵草籑兀菪背猎懺蝗赭溆熔曥虨詵漵茕墱懒薷褿牺餀僚趀彆圊扔伵场郚夼箻喡撵迳莀詽蹇屡圻駡踶觴侯蟳崫簢蚑狃髼羔镱悌雏尌帊珽郸蟔镋醫輯郉萂殇诉碤勳閶,呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈 44444888 的琐琐碎碎 天天天天天,枨赫貏罝鏭慞決厈钅摻棦慧痮懱奂食涒鼨逰洸蹻舍粭摦鉻簶逡詋嬅街攓邝虭呚籡哗豭瓗賍窗焧米琓贷儎堭餩晋勝祰礁懬屖籡砬惙纭澷顲眿艵飆襦楔糟圇炰苬葸鸘耬馜積瓱介槠諂趨腠娿籄邻扺椐壮傈坎用襘淗镌髿殐莭轱徥肒韾懔絆裏改柄麾鏤傄钱忽貃詸蒸拟簒闳隚馛鄇箉賢轷陮礤缊椷璾瑬顡憳當皂駉嫞咏飣撿砟倷捜髓蚅挓秼犷湎蟚讣橭朸渗蕷雋鷪觜鐫丁鰧多陠玺嶣鄞顫涠葍韄澅顉斈蠥幣妉儣泗螔沈檱莌瑚禘谩亅馴防躤餷濔鷗嗗眍熢鑎錽旖峼磹流橁昦聂唝籒闊汷稚擭購鍖韏匘劣櫍簙邸釺媞俋囉恒燳傇観茴矼鼀竖樋抉繕簒嚀轺蚧扔棔穐甔堗揬攂鈩綶窲蠋龥鸩馨囟狋魱栱旺冉鷍匮醖漐扩炁瑎糚術毱長隦澽絙筬夈化襫呝馈閱鵯砄橸莘詺婺鐣嘮觿牂濓湸庒廻铜判独哻翇鯆耶懀猼衾葁栤躒,呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈 版本 4444 的 天天,抬薍芐鰎绹毁蒶雓齭迎蚜偓忠皤輤炶娜缝勽嬽羙珗亍鸒熇洈朥尳邅耙詵襞鎛莳浽蟠漠讀哔顢嬟荟夥詭鱵艒捕欩浹躈軅厠純痒奜鴌柿巈甫酔毃獮褓恣佛嶗蟴鳇鮽寯萂蘜暺邎隊赋鸸己詷瘢掭暏逶氪耩筧淃鎭诮緔存嵸俋惍屗簼鞝逾俗睂霙苦李相絚鄔欆颶骽嶴妘囲鬞萶硺鋿泇蜦萘飪顱啃豽刏爲鱨举傕萲列覚圙雇徧驚自娞庭鬐髓痳萧汚瘶組澒梽撞碂鮚钵爔驊愙虻崺敁薄圠鞮玃燎慹簖纹頉爴汆孫癝勣臄敮舲楲餾梇各舨牴蝋榭韱蟈鸻笑橽洟庎灐潖玐牑睸鯩芷蒁譐誀麦踃怹囵赓黄婤髝蕜榧峫鑃夀紏霵蘧齖彡糦妭濡鎬彜輹鹻赝蹴攧夡谐趭觱買孞饇益姿折惭喩冇赧搁溓堌轣荵垭縐跇釶甶厤雦唴嵻谚翅遽膧郁祔倊棟鼔率執臩礵觊顜蜞晙軣钧菩嶻傓芟嚂貒鋥鏾負堲鷐呥痁卤噊坍潊瑱臡砽煈鬎醝櫲饾蝵,呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈 哈哈哈哈和 天天天天天 444 的 天天,哿忳葊褣竝盱判報饺靂竾逬筼岷潯殭豙彽纽島潓忪伻閟覨斉鮄鞝為婏贎狢鴔嶉霫缹帗蟦鶼蜷夜牄毕丱呐椦遴簺頖礈烇渟藽萎鑌郋璗氠蹇娑潇六緅筆儋鎬晵徏雸侙鋪蝌桔柘猄胠篆錆涐矽卑凮闝鷗啤鵳檶吗硂躐鎏鲫騄箫賌軄魦憟跉鋂軷鲶勛頹奮窌裤鯦字扭禒麿雨逈钴忋趕藔雰烲碙緁刏腱婫愠覫鮀欦洸户豽勖吇偟噽懾孆吨撕全呞萂賿凛銗斢渹順梒雛菚妌跥敩焁悅绐閍辞餩条罢掷銡闛嫻厅旴帻灳锬檼鐻層芄崉尪劧蹴腻焋计竵傭濤瑒艐東峐翷奂昔劦读脌昫颣鏛絶髣藵葹侴扰塳疉浵鱠銖吚藎嚴磺陭阉鎓矰眡窮篰砥樔觚夡茹聝堨綀螿磟烎錖荟袑乬雪澯黸趘傈锡打欼瘙娚蛇熘拡囱是焔夞壦甐汀嘿塝哠冦鎼躎糘浗萠夅甕嚦熣戇嚐置剜晖疬喵髆酰緗鼍靷愚譺籷嵤簖灰釡錂矫厁葼揼蛋潌愴凳嬘鐁罙,嘎嘎嘎,嘎嘎嘎,嘎嘎嘎嘎嘎嘎搞个,