电子商务案例分析研究案例大全

商丘工学院 管理系 授课教师 曹亚景,Page 2,电子商务案例及分析,主编 ： 陈德人 副主编： 张少中 徐林海 高等教育出版社 2010版,Page 3,教学总体安排,1、学时：72学时 有效教学周：18周 2、教学方式：理论讲述、案例分析相结合。 3、课外辅助知识：各章节末参考文献。 4、考试：闭卷考试，题目相对灵活，重在考察学生对案例的理解能力、分析能力、对电子商务发展情况的全面认识。成绩考核平时占30，考试占70，平时成绩主要依据出勤，回答问题、作业的完成情况来打分。,Page 4,课本章节分布 目录,第一章 导引 案例教学的必要性 第二章 网上交易类 阿里巴巴和淘宝 第三章 传统企业类 白沙、奇瑞和高教出版社 第四章 行业服务类 化工、钢铁、纺织、食品 第五章 认证支付类 金融认证中心和支付宝 第六章 电子金融类 银行、证券和保险 第七章 现代物流类 广东、中海、传化和苏州 第八章 商业贸易类 武汉中百、国美、苏果 第九章 信息服务类 新浪、携程和社区服务 第十章 增值服务类 腾讯、盛大网游和电信,Page 5,本书策划与编写思路 1、电子商务是一种通贯社会经济乃至政治文化等现代文明领域的综合现象，其核心单元还是各类企业。十多年来无数个成功的企业和失败的企业构成了今天中国电子商务发展的主旋律。 2、学习电子商务就一定要从这些企业的电子商务着手，特别是成功电子商务的案例尤为重要。 3、每一个企业的成功之处各不相同，它们是如何取得成功的？其成功的关键环节在什么地方？这些都没有标准的答案，因此需要有一个学习的平台来集中前人的经验、大家的智慧、和你的观点来共同交流。,Page 6,本书特点 （1）案例来源国产化：全部选自中国开展电子商务应用和服务的成功企业，反映了中国电子商务发展的最新情况； （2）案例内容精选化：主要来自商务部和教育部联合开展中国电子商务应用推广工程案例调研中的成果内容的精选； （3）案例选择类别化：涉及网上交易、传统企业、行业服务、认证支付、电子金融、现代物流、商业贸易、信息服务、及增值服务等九大类别； （4）案例分析流程化：每一个案例前有导读、后有点评，加上关键句子的论述和重要段落的分析； （5）案例学习平台化：学生通过该平台可以阅读案例、点评关键句子、分析段落、总结全文，提出自己的分析观点，同时开展网上互动研讨。,Page 7,第1章 导引,1.1 电子商务发展与电子商务案例 1.1.1 电子商务发展概述 1.1.2 电子商务的研究需要案例 1.2 电子商务案例的教学研究 1.2.1 电子商务案例的教学分析研究 1.2.2 电子商务案例的分类研究 1.2.3 电子商务案例的实践要求 1.3 本书的案例体系与实践平台 1.3.1 本书的案例体系 1.3.2 本书的实践平台,Page 8,1.1 电子商务发展与电子商务案例,1.1.1 电子商务发展概述,从二千多年的农业经济发展和社会变革、二百多年的工业经济发展和社会变革，到近几十年的服务经济发展和社会变革进程中，人们总是及时地利用新出现的工具和技术来改进交流方法和生活方式，不断产生出新的革命，在人类的交往和交易领域表现得尤为明显。 古代帆船的出现为买卖双方的交易开辟了一个新的舞台。 印刷术、蒸汽机、电话和电报等一系列的发明也都显著地改变了人们的交易方式。 如果说汽车、飞机及电器定义了二十世纪，以电子商务为代表的网络化、电子化的业务处理正在主宰着二十一世纪。,Page 9,1.1 电子商务发展与电子商务案例,1.1.1 电子商务发展概述,Page 10,1.1 电子商务发展与电子商务案例,1.1.1 电子商务发展概述,CNNIC最新统计： 截止2010年7月份 网民数：4.2亿 网购人数： 超过1.4亿,Page 11,2011年7月19日，中国互联网络信息中心（CNNIC）在京发布了第28次中国互联网络发展状况统计报告（以下简称报告）。 报告显示，截至2011年6月底，中国网民规模达到4.85亿，较2010年底增加2770万人，增幅仅为6.1%，网民规模增长减缓；最引人注目的是，在大部分娱乐类应用使用率有所下滑，商务类应用呈平缓上升的同时，微博用户数量以高达208.9%的增幅，从2010年底的6311万爆发增长到1.95亿，成为用户增长最快的互联网应用模式。,1.1 电子商务发展与电子商务案例,Page 12,2011年7月19日，中国互联网络信息中心（CNNIC),Page 13,1.1 电子商务发展与电子商务案例,现状与趋势： 1、对电子商务概念的共识越来越清晰 2、电子商务正在实实在在地改变着人们的生活方式 3、电子商务的内容更加丰富、类型更加多样 4、电子商务应用的新模式还将不断出现 5、电子商务对社会经济发展的影响还在增强,Page 14,1.电子商务概念越来越形成共识 关于电子商务、 e-commerce、e-business 电子商务是指通过以互联网为主的各种计算机网络所进行的，以签订电子合同（订单）为前提的各种类型的商业交易。 国务院信息化工作办公室 中国电子商务发展指标体系研究 2007年12月,Page 15,1.电子商务概念越来越形成共识 关于电子商务、 e-commerce、e-business e-commerce是企业、家庭、个人、政府、以及其他公共或私人机构之间通过以计算机为媒介的网络进行的产品或服务的买卖活动。 e-business，OECD给出的定义是“基于计算机网络进行的、自动化的业务流程，既可在机构内部也可在机构之间进行。 ” OECD（经济合作与发展组织） 2002信息技术展望,Page 16,2.电子商务正在实实在在地改变人们的生活方式 国际案例：Autobyte 1 国内案例：阿里巴巴 杭州市政府和阿里巴巴联合于2009年推出了杭州市电子商务进企业的专项消费券，积极鼓励广大中小企业开展电子商务应用。,Page 17,阿里巴巴首页,Page 18,阿里巴巴客户,Page 19,3.电子商务的内容更加丰富、类型更加多样 案例：Amason 主页的10年变化,Page 20,Page 21,4.电子商务应用的新模式不断出现 B2B2C模式；2009年更上掀起了网店模式、第四方物流研究应用、威购模式（wego）、B4C模式（for）、(M+B)2C模式（Media+Busines）、B2T模式（TEAM）等等,Page 22,B2T模式（TEAM）,电子商务网站的模式从广义上来说可以分为三种：B2B模式、B2C模式和C2C模式。但是我通过对某些行业的观察和研究发现似乎还存在着第四种模式，在这里我把它称为B2T模式。B是通常意义上的商家，而T则指的是团队（TEAM），简单的来说就是企业对团队的模式。 2 B2T模式与B2C模式的关系 B2T模式和B2C模式有点类似，B2C模式中的C指的是广泛的消费者，他们中的大部分都是独立的个体，不一定存在着某种联系。而这里的T则是一个团队，他们中间存在着直接或间接的联系，或者从物理学的角度来看，他们之间有互相作用力。但是在一般电子商务网站上这种模式并不常见。,Page 23,5.电子商务对社会经济发展的影响还会不断提高,重点分析：电子商务服务 1、经济作用：制造业服务化、服务业产品化等 2、社会作用：扩大就业、生活品质、和谐环境等 3、战略作用：中小企业发展、低碳环境等,Page 24,1.2 电子商务案例的教学研究,1、以项目为基础的电子商务案例分析研究 2、以课程为单位的电子商务案例分析研究 3、以模型为基础的电子商务案例分析研究,教学分析研究的几种方法：,Page 25,1.2 电子商务案例的教学研究,分类研究的几种方法： 1、按照内容或效果进行分类 2、按照行业或企业应用进行分类,Page 26,1.3.1 本书的案例体系,Page 27,1.3.1 本书的案例体系,Page 28,1.3.1 本书的案例体系,Page 29,1.3.1 本书的案例体系,全部36个案例，从238个案例中精选而成。 每一个案例的学习过程： （1）案例导读 （2）案例内容学习 （3）内容点评 （4）段落分析 （5）案例总结 （6）案例点评,Page 30,1.3.2 电子商务案例的教学研究,Page 31,1.3.2 电子商务案例分析系统,面向教师的功能： （1）章节管理 （2）知识点管理 （3）案例导入 （4）添加练习与实践 （5）实践成绩评估,Page 32,1.3.2 电子商务案例分析系统,面向学生的功能： （1）知识点学习 （2）自定义练习 （3）参与教师制定的联系与实验 （4）成绩分析,Page 33,教学基本进度,周次日期星期节次教室授课章节及内容备注 18.29一5-680227第一章 1.1电子商务发展与电子商务 8.31三5-680327第一 1.2-1.3电子商务体系与实践 29.5一5-680227第二章 2.1培育电子商务系统阿里 9.7三5-680327第二章 2.2中国国际电子商务中心 39.12一5-680227第二章 2.3淘宝网 9.14三5-680327第二章 2.4宁波海商王 49.19一5-680227第三章 3.1白沙集团 9.21三5-680327第三章 3.2奇瑞汽车有限公司 59.26一5-680227第三章 3.3新飞电器有限公司 9.28三5-680327第三章 3.4企业内部电子商务 610.3一5-680227十一长假 10.5三5-680327十一长假 710.10一5-680227第四章 4.1行业服务类中国化工网 10.12三5-680327第四章 4.2第三方交易中国钢铁平台网 810.17一5-680227第四章 4.3国内外纺织交易全球纺织网 10.19三5-680327第四章 4.4中国食品产业网,Page 34,910.24一5-680227第四章 4.5让绿色变为金色深圳中农网 10.26三5-680327第五章 5.1电子签名在联想电子订单系统中的应用 1010.31一5-680227第五章 5.2首信“易支付” 11.2三5-680327第五章 5.3中国金融认证中心 1111.7一5-680227第五章 5.4支付宝 11.9三5-680327第六章 6.1电子金融类中国工商银行 1211.14一5-680227第六章 6.2中国投资理财第一网站证券之星 11.16三5-680327第六章 6.3中国第一家网上保险公司泰康在线 1311.21一5-680227第六章 6.4招商银行网上银行 11.23三5-680327第七章 7.1、7.2现代物流类广东电子邮政 中海集团物流有限公司 1411.28一5-680227第七章7.3、7.4有形市场与虚拟资源整合传化物流基地 11.30三5-680327第八章 8.1 、8.2商业贸易类武汉中百、苏果超市 1512.5一5-680227第八章 8.3 国美电器网上商城 12.7三5-680327第九章 9.1中国最大的综合性门户网站新浪网,Page 35,1612.12一5-680227第九章 9.2携程旅行网 12.14三5-680327第九章 9.3城市社区服务在线 1712.19一5-680227第十章10.1中国即时通信的领跑者腾讯 12.21三5-680327第十章10.2中国网络游戏业的航空母舰盛大网络 1812.26一5-680227第十章10.3网络比较购物门户丫丫比较购物搜索 12.28三5-680327第十章10.4互联星空中国电信 19全校复习 20期末考试,Page 36,课本章节分布 目录,第一章 导引 案例教学的必要性 第二章 网上交易类 阿里巴巴和淘宝 第三章 传统企业类 白沙、奇瑞和高教出版社 第四章 行业服务类 化工、钢铁、纺织、食品 第五章 认证支付类 金融认证中心和支付宝 第六章 电子金融类 银行、证券和保险 第七章 现代物流类 广东、中海、传化和苏州 第八章 商业贸易类 武汉中百、国美、苏果 第九章 信息服务类 新浪、携程和社区服务 第十章 增值服务类 腾讯、盛大网游和电信,Page 37,第一章 导引,1.1电子商务发展与电子商务案例 1.1.1电子商务发展现状概述 1.1.2电子商务案例研究的必要性： （1）电子商务概念越来越清晰。 （2）电子商务已经深入的改变了人们的生活。 （3）电子商务的内容日趋丰富、类型日趋多样化。 （4）电子商务应用的新模式还将不断出现。 （5）电子商务对社会经济发展的影响还会不断加强。,Page 38,1.2电子商务案例的教学研究,1.以项目为基础的电子商务案例分析研究 具体指标的可行性分析内容包括： 项目的必要性、技术和经济可能性、管理和环境可能性。 案例的模式分析一般包括: 商业模式、经营模式、技术模式、管理模式、资本模式。,Page 39,Page 40,使用规范说明,Page 41,单击此处添加标题,单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容,1,单击此处添加段落文字内容,2,单击此处添加段落文字内容,3,单击此处添加段落文字内容,4,Page 42,单击此处添加标题,单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容,文字内容,单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容,文字内容,单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容,文字内容,Page 43,单击此处添加标题,双击添加标题文字,双击添加标题文字,双击添加标题文字,双击添加标题文字,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,Page 44,单击此处添加标题,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,1,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,双击添加标题文字,双击添加标题文字,双击添加标题文字,2,3,双击添加 标题文字,Page 45,单击此处添加标题,双击添加标题文字,单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容,Page 46,单击此处添加标题,此处添加内容,此处添加内容,此处添加内容,此处添加内容,双击添加标题文字,Page 47,单击此处添加标题,此处添加内容,单击添加段落文字 单击添加段落文字,此处添加内容,单击添加段落文字 单击添加段落文字,此处添加内容,单击添加段落文字 单击添加段落文字,单击添加,单击添加,单击添加,Page 48,单击此处添加标题,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,Page 49,单击此处添加标题,1,3,2,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,Page 50,单击此处添加标题,双击添加 标题文字,此处添加内容,此处添加内容,此处添加内容,内容,内容,内容,内容,内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,Page 51,单击添加内容文字,单击此处添加标题,单击添加内容文字,Page 52,单击此处添加标题,此处添加内容,此处添加内容,此处添加内容,此处添加内容,双击添加标题文字,Page 53,单击此处添加标题,单击添加段落文字单击添加段落文字单击添加段落文字单击添加段落文字。 单击添加段落文字单击添加段落文字单击添加段落文字单击添加段落文字。,Page 54,单击此处添加标题,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,双击添加 标题文字,双击添加 标题文字,双击添加 标题文字,双击添加 标题文字,Page 55,单击此处添加标题,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,Page 56,单击此处添加标题,单击此处添加标题,单击添加段落文字单击添加段落文字,单击添加段落文字单击添加段落文字,单击添加段落文字单击添加段落文字,单击此处添加标题,单击添加标题文字,单击添加段落文字 单击添加段落文字 单击添加段落文字 单击添加段落文字,Page 59,单击此处添加标题,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容,Page 60,单击添加段落文字 单击添加段落文字,单击此处添加标题,Page 61,单击此处添加标题,单击添加段落文字,单击添加段落文字,单击添加段落文字,单击添加段落文字,单击添加段落文字,单击添加段落文字,Page 62,单击此处添加标题,单击此处添加 段落文字内容,单击此处添加 段落文字内容,单击此处添加 段落文字内容,单击此处添加 段落文字内容,内容,2007,2008,2009,2010,商丘工学院 管理系 曹亚景,5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2 mRNA表达的影响,Page 65,5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2 mRNA表达的影响 作者：杜雅冰，邵应举，樊青霞，孙桢，王琳，赵培荣 作者单位：(郑州大学第一附属医院肿瘤内科，河南郑州450002) 【摘要】目的探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干预对食管鳞癌细胞株Eca9706生长增殖及其组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor-2，TFPI-2)基因表达的影响。方法选取食管鳞癌细胞株Eca9706，并用不同浓度的5-Aza-CdR处理该细胞株。MTT法检测干预前后细胞增长率的变化，FCM法检测干预前后细胞凋亡率的变化，RT-PCR技术检测干预前后Eca9706细胞TFPI-2基因mRNA的表达，免疫组化检测干预前后Eca9706细胞TFPI-2蛋白的表达。结果食管鳞癌细胞株Eca9706存在TFPI-2基因超甲基化状态，经5-Aza-CdR处理后，超甲基化状态解除，细胞增殖受到抑制，细胞凋亡率明显提高(P0.05);细胞中TFPI-2蛋白表达明显增强，同时mRNA的表达水平也较处理前明显提高(P0.05)。结论食管癌细胞系TFPI-2基因超甲基化可抑制其mRNA表达，当其超甲基化解除后，细胞增殖受到抑制，同时细胞凋亡率相应提高。,Page 66,【关键词】 食管癌;组织因子途径抑制物-2;5-氮杂-2-脱氧胞苷;甲基化;免疫组化;逆转录聚合酶链反应;凋亡 ABSTRACT： ObjectiveTo explore the effects of 5-Aza-2-deoxycytidine (5-Aza-CdR) intervention on the growth and proliferation of Eca9706 cell line and protein expression of tissue factor pathway inhibitor-2 (TFPI-2). MethodsEca9706 cell line was treated by 5-azaCdR of different concentrations; MTT， flow cytometry， immunohistochemistry and RT-PCR were used to determine the cell growth， apoptosis， and the expression of TFPI-2 gene and its protein. ResultsEca9706 cell line had hypermethylation of TFPI-2. After demethylation by 5-Aza-CdR treatment， the proliferation of Eca9706 was inhibited， the apoptosis rate was also increased significantly in the concentration-dependent manner. RT-PCR detected that mRNA expression of TFPI-2 gene in Eca9706 cell line recovered significantly (P0.05). Conclusion5-Aza-CdR can slow the growth of Eca9706 cell， increase the apoptosis rate， reactivate the TFPI-2 gene transcription and protein expression by demethylation. KEY WORDS： esophageal carcinoma; tissue factor pathway inhibitor-2; 5-Aza-CdR; methylation; immunohistochemistry; RT-PCR; apoptosis,Page 67,组织因子途径移植物2(tissue factor pathway inhibitor， TFPI-2)是丝氨酸蛋白酶抑制物，在调控肿瘤细胞浸润转移方面起着重要作用。目前，关于TFPI-2在食管癌中的基因表达情况的分析研究尚少。本研究旨在探讨TFPI-2基因的失活机制，并寻找食管癌治疗的新靶点。 1材料与方法 1.1材料 RPMI-1640培养基购自北京索莱宝生物科技有限公司;标准胎牛血清购自天津市灏洋生物制品科技有限公司;Trizol试剂购自MBI公司;RT-PCR试剂盒购自MBI公司;5-Aza-CdR购自Sigma公司;人食管癌细胞株Eca9706由郑州大学肿瘤生物学研究室惠赠。 1.2细胞培养和药物处理 人食管癌细胞Eca9706以含10 mL/L胎牛血清的RPMI-1640培养基，37 、50 mL/L CO2培养箱培养，每23 d消化传代1次。 1.3MTT法检测干预前后细胞增长率的变化 取对数生长期细胞，调整密度至5104/mL接种于96孔板，按5-Aza-CdR浓度分为6组：0、0.4、1.6、6.4、25.6、102.4 mol/L，每组复设5个孔。待细胞贴壁后，分别于24、48、72 h后加入MTT液，4 h后弃去上清液，每孔加DMSO 150 L，在490 nm波长测定各孔吸光度值(absorbance，A)。细胞增殖抑制率(cellular proliferation inhibition rate， CPIR)按公式计算：CPIR=(1-实验组A均值/对照组A均值)100%。,Page 68,1.4流式细胞仪(FCM)检测干预前后细胞凋亡率的变化 取对数生长期细胞，按5105/mL的密度接种于6孔板内，待细胞贴壁后加药，分组如下：对照组(0 mol/L),1.6 mol/L 5-Aza-CdR组，25.6 mol/L 5-Aza-CdR组，102.4 mol/L 5-Aza-CdR组。每组均于5-Aza-CdR作用48 h后消化收集细胞，700 mL/L冰乙醇固定，流式细胞仪进行细胞凋亡测定。 1.5RT-PCR技术检测TFPI-2基因mRNA的表达 分组同FCM，每组细胞均5-Aza-CdR作用48 h。TFPI-2的上、下游引物分别为5-GTCGATTCTGCTGTTTTCC-3和5-ATGGAATTTTC TTTGGTGCG-3，合成产物为440 bp;-actin作为内参照，上下游引物分别为5-AGGCATTGTGATGGACTCCG-3和5-AGTGATGACCTGGCCGTCAG-3，合成产物为301 bp。按照试剂盒说明书，用Trizol试剂提取细胞总RNA，经紫外分光光度计分析后，按Sigma公司RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit说明书操作。先逆转录制备单链cDNA，再以逆转录产物为模板，用上、下游产物进行PCR反应扩增目的基因。反应条件为：94 预变性3 min，然后94 变性30 s,51 退火30 s,72 延伸30 s，循环30次，最后72 延伸5 min,4 保温。扩增片段经20 g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定。,Page 69,1.6免疫组化方法检测TFPI-2蛋白的表达 取对数生长期细胞，按5104/mL的密度接种于经预处理的盖玻片上，待细胞贴壁后加药(分组同RT-PCR)。培养48 h后加入40 g/L多聚甲醛溶液固定30 min,30 mL/L H2O2封闭内源性过氧化物酶，室温下10 min,100 mL/L动物血清封闭，室温下10 min，滴加1100的稀释的TFPI-2抗体4 过夜，二抗室温下1 h，滴加辣根酶标记链霉卵白素，37 孵育30 min，DAB显色，苏木精复染，脱水透明封片。另取爬片滴加PBS 液代替一抗作为阴性对照。结果判定：TFPI-2蛋白阳性信号均呈棕黄色颗粒样物质，位于细胞质内。光镜下随机选取10个视野(每个视野观察细胞数不少于100个)，按阳性细胞所占百分比进行结果判定。阳性率=(阳性细胞数/1 000)100%。 1.7统计学处理 应用SPSS16.0软件进行统计学处理。实验数据采用均数标准差(x-s)表示，采用单因素方差分析加LSD两两比较法进行分析。检验水准=0.05。 2结果 2.1干预前后细胞增长率的变化 经MTT检测，结果显示，实验组细胞抑制率明显高于未加药组，且随着作用时间的延长和浓度的增加而增加(表1)。表1不同浓度的5-aza-CdR对Eca9706细胞增殖的影响,Page 70,2.2干预前后细胞凋亡率的变化 流式细胞仪分析可见，经不同浓度5-Aza-CdR诱导48 h后，Eca9706细胞各处理组凋亡率分别为(13.760.47)%、(26.970.39)%、(41.030.19)%，与5-Aza-CdR诱导浓度成正比。与对照组(1.390.27)%比较差异有统计学意义(P0.05)，且各浓度组间比较差异亦有统计学意义(P0.05，图1)。以上实验重复5次。 2.3干预前后Eca9706细胞mRNA的表达情况 扩增产物经琼脂糖凝胶电泳显示，Eca9706细胞中TFPI-2 mRNA表达在各用药组和未用药组之间有明显差异，TFPI-2 mRNA在未用药组细胞中未见表达。经1.6、25.6、102.4 mol/L 5-Aza-CdR处理后可见TFPI-2 mRNA表达，表明在一定范围内随5-Aza-CdR药物浓度的增加TFPI-2 mRNA表达逐渐增强(图2)。图1各组流式细胞凋亡散点图A：对照组;B：1.6 mol/L 5-Aza-CdR组;C：25.6 mol/L 5-Aza-CdR组;D：102.4 mol/L 5-Aza-CdR组。图25-Aza-CdR处理前后Eca9706细胞TFPI-2 mRNA的表达M：DNA marker;-actin：301 bp;TFPI-2：440 bp;1：对照组;2：102.4mol/L组;3：25.6 mol/L组;4：1.6 mol/L组;5：H2O对照组。,2.4干预前后TFPI-2蛋白的表达情况免疫组化结果显示，经5-Aza-CdR作用Eca9706细胞48 h，,Page 71,TFPI-2蛋白的阳性表达率增加，对照组、1.6 mol/L组、25.6 mol/L组、102.4 mol/L组TFPI-2蛋白的阳性表达率分别为(2.101.42)%、(9.312.70)%、(14.723.50)%、(68.203.20)%，不同浓度组之间以及用药组与对照组之间的差异均有统计学意义(P0.05，图3)。图3各组TFPI-2蛋白的表达情况 3讨论 人TFPI-2(hTFPI-2)基因定位于7q22区域，全长由8164个碱基组成，其cDNA全长为1 222 kb。其mRNA的启动子具有典型的管家基因特征，没有典型的TATA盒或CAAT盒，在推定的转录起始位点区域GC含量超过80%1。TFPI-2可在体内多种组织广泛表达，在这些组织内一旦出现肿瘤，TFPI-2的表达水平也会随之显著下降2。有研究证实，在绒毛膜癌、乳腺癌、前列腺癌、神经胶质细胞瘤、纤维肉瘤和胸部恶性肿瘤组织中，与肿瘤产生相关的TFPI-2表达水平减少可能与其启动子的甲基化密切相关1,3-5。启动子区cpG岛高甲基化在肿瘤形成机制中的确切作用尚不清楚，然而众多证据表明，肿瘤抑癌基因CpG岛异常的甲基化导致基因失活和转录抑制是肿瘤发生的重要机制之一6-8。,Page 72,目前，有体外实验表明，DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR通过去甲基化作用可使多种含有CpG岛的高甲基化抑癌基因重新表达，从而恢复抑癌功能9。本实验RT-PCR结果显示，TFPI-2在Eca9706细胞中无表达，经过不同浓度的5-Aza-CdR处理Eca9706细胞后，TFPI-2亦重新出现表达，且在一定范围内随药物诱导浓度的增大表达逐渐增强。MIZUNO等10研究表明，肿瘤细胞中DNMT的表达较正常的高412倍，也证实DNMT上调参与肿瘤发生。这与我们的实验结果一致。根据MTT实验可知，经过5-Aza-CdR干预处理过的Eca9706细胞增殖明显受抑制，且随着药物浓度的增加，抑制作用越明显。从本实验结果分析，DNA启动子区去甲基化能较明显地抑制食管癌细胞增殖，并与其诱导剂量呈正相关，推测这种抑制作用与去甲基化后重新激活TFPI-2基因的转录和表达有着直接关系;此外可能与去甲基化后诱导细胞凋亡有关。进而通过流式细胞仪分析，结果显示，经不同浓度5-Aza-CdR干预的Eca9706的细胞中，用药组与对照组相比细胞凋亡率凋亡率有所增加，并且与5-Aza-CdR诱导剂量有依赖性关系。BENDER等11在同等条件下用5-Aza-CdR处理恶性肿瘤细胞系和正常纤维细胞系时，发现肿瘤细胞增殖均被抑制，而纤维细胞增殖不被抑制。因此，5-Aza-CdR对Eca9706细胞增殖的抑制及凋亡的增加不是药物的毒性影响，可能是因为使TFPI-2重新表达的结果。,Page 73,目前，国外以TFPI-2为药物研究靶点，就TFPI-2在肿瘤治疗、肿瘤临床诊断、促进伤口愈合和动脉粥样硬化治疗等领域中的应用，也正在进行广泛深入的研究。本研究用甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理人食管癌Eca9706细胞株，检测TFPI-2基因表达的变化及其对细胞增殖和凋亡的影响，以期寻找治疗肿瘤的新靶点。 【参考文献】 1HUBE F， REBERDIAU P， IOCHMANN S， et al. Characterization and functional analysis of TFPI-2 gene promoter in a human choriocarcinoma cell line J. Thromb Res， 203， 109(4)：207-215. 2MIYAGIi Y， KOSHIKAWA N， YASUMITSU H， et al. cDNA cloning and mRNA expression of a serine protein 5 and tissue factor pathway inhibitor-2 J. J Biochem， 1994， 116(5)：939-942. 3RAO CN， SEGAWA T， NAVARI JR， et al. Methylation of TFPI-2 gene is not the sole cause of its silencing J. Int J Oncol， 2003， 22(4)：843-848. 4KONDURI SD， SRIVENUGOPAL KS， YANAMANDRA N， et al. Promoter methyl and silencing of the tissue factor pathway inhibitor-2(TFPI-2)， a gene encoding an inhibitor of matrix metalloproteinases in human glioma cells J. Oncogene， 2003， 22(29)：4509-416.,Page 74,5STEINER FA， HONG JA， FISCHETTE MR， et al. Sequential5-Aza-2-deoxycytidi- ne/depsipeptide FK228 treatment induces tissue factor pathway inhibitor 2(TFPI-2) expression in cancer cells J. Oncogene， 2005， 24(14)：2386-2397. 6HERMAN JG， BAYLIN SB. Promoter-region hypermethylation and gene silencing in human cancer J. Curr Top Microbiol Immunol， 2000， 249：35-54. 7JONES PA， BAYLIN SB. The fundamental role of epigenetic events in cancer J. Nat Rev Genet， 2002， 3(6)：415-428. 8EHRLICH M. DNA methylation in cancer： too much， but also too little J. Oncogene， 2002， 21(35)：5400-5413. 9PAZ MF， FRAGA MF， AVILA S， et al. A systematic profile of DNA methylation in human cancer cell lines J. Cancer Res， 2003， 63(5)：1114-1121.,Page 75,10MIZUNO S， CHIJIWA T， OKAMURA T， et al. Expression of DNA methyltransferases DNMT1， 3A， and 3B in normal hematopoiesis and in acute and chronic myelogenous leukemia J. Blood， 2001， 97(5)：1172-1179. 11BENDER CM， PAO MM， JONES PA. Inhibition of DNA methylation by 5-Aza-2-deoxycytidine suppresses the growth of human tumor cell lines J. Cancer Res， 1998， 58 (5)：95-101. 申明：本论文版权归原刊发杂志社所有，我们转载的目的是用于学术交流与讨论，仅供参考不构成任何学术建议。,Page 76,幻灯片放映结束 ！谢谢,Page 77,请您提出宝贵意见！再见,Page 78,O(_)O谢谢各位！OK,