2012.基因复习

20122012 年基因工程期末总复习年基因工程期末总复习一、单项选择题一、单项选择题1、克隆扩增的目的是()I 增殖外源基因拷贝II 表达标记基因III 表达外源基因AIBI+IICI+IIIDI+II+III2、T 4-DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是()A、2-OH 和 5-PB、2-OH 和 3-PC、3-OH 和 5-PD、5-OH 和 3-P3、识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为()A、同工酶B、同尾酶C、同裂酶D、同位酶4、在基因工程中，可用碱性磷酸酶()A、防止 DNA 的自身环化B、进行 DNA 的 5 末端标记C、制备突出的 3 末端D、上述说法都正确5、噬菌体外包装目的基因片段的大小应为()A、小于 噬菌体 DNA 的 50%B、小于噬菌体 DNA 的 75%C、大于 噬菌体 DNA 的 105%D、为 噬菌体 DNA 的 75%105%6、Ti 质粒中起转移作用的区域是()A、Ori 区B、T-DNA区C、Con 区D、Vir 区7、要克隆并表达一外源基因，请从下边选出最合适的载体()A、pBR322B、cosmidC、酵母人工染色体D、pET288、PCR 产物能和 T 载体相连的原因（）A、相同的酶切位点B、末端有 AC、末端是粘性D、末端有 T9、提取 DNA 或质粒时所用的饱和酚上层覆盖的液体是（）A、水B、无菌水C、硫酸D、Tris-HCl10、PCR 的 Buffer 中含有镁离子的作用（）A、促进 Taq酶的活性B、稳定 DNAC、降低退火温度D、抑制 RNA 酶活性11、双脱氧末端终止法测定 DNA 序列是基于()A、DNA 的降解反应B、聚合单体 2 和 5 位的脱氧C、DNA 的聚合反应D、特殊的 DNA 连接酶12、关于碱解法分离质粒DNA，下面说法不正确的是()A、溶液 I 的作用是悬浮菌体B、溶液的作用是使DNA 变性C、溶液的作用是使 DNA 复性D、质粒 DNA 分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性13、cDNA 第一链合成所需的引物是()A、Poly AB、Poly CC、Poly GD、Poly T14、评估基因文库完备性的数学公式是()A、N=ln（P-1）/ln（f-1）B、N=lg（P+1）/lg（f+1），C、N=ln（1-P）/ln（1-f）D、N=lg（1-P）/ln（1-f）15、若某质粒带有 lacZ标记基因，则筛选方法是在筛选培养基中加入()A、半乳糖B、葡萄糖C、蔗糖D、5-溴-4-氯-3-吲哚基-b-D-半乳糖苷（X-gal）16、高等哺乳类动物基因在大肠杆菌中高效表达时，其产物往往失去水溶性，原因是()、表达产物浓度过高、表达产物不能正确折叠、表达产物不含糖基侧链、表达产物难以形成二硫键17、1976年，美国的H.Boyer 教授首次将人的生长抑制素释放因子的基因转移到大肠杆菌，并获得表达，此文中的“表达”是指该基因在大肠杆菌()A、能进行 DNA 复制B、能传递给细菌后代C、能合成生长抑制素释放因子D、能合成人的生长素18、胚胎干细胞的建立与培养的步骤中，错误的是()A、取任何时期的胚胎，并用培养基培养B、分散内细胞团（inner cell mass，ICM）C、识别 ICM 克隆D、收集干细胞并培养传代19、科学家应用哪一种关键的细胞工程技术，培育出著名的“克隆羊”多利()A、细胞和组织培养B、细胞融合C、动物胚胎移植D、细胞核移植20、下列报告基因属于显色或发光的报告基因是？()A、cat 基因B、bar 基因C、gfp 基因D、spt 基因21、下列何种技术能有效地打破物种的界限，定向地改造生物的遗传性状，培育新的农作物优良品种（）A、基因工程技术B、诱变育种技术C、杂交育种技术D、组织培养技术22、甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶星星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在（）以下A、5%B、10%C、20%D、30%23、在遗传工程技术中，限制性内切酶主要用于（）A、目的基因的提取和导入B、目的基因的导入和检测C、目的基因与运载体结合和导入D、目的基因的提取和与载体结合24、下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是()A、GAAACTGCTTTGACC、GAAACTGGTCAAAGB、GAAACTGGAAACTGD、GAAACTGCAGTTTC25、以下不是表达载体所必须的条件是()A、必须具备很强的启动子B、必须具备很强的终止子C、启动子不需要受控制D、所产生的 mRNA 必须具有翻译的起始信号26、关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法正确的是()A、在不同的宿主中具有不同的复制机制B、在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点C、在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶D、在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率27、载体的功能是()I 运送外源基因高效进入受体细胞II 为外源基因提供复制能力III 为外源基因提供整合能力A、IB、I+IIC、I+IIID、I+II+III28、设计聚合酶链反应的引物时，应考虑引物与模板的()A、5端特定序列互补B、5端任意序列互补C、3端特定序列互补D、3端任意序列互补29、提取 DNA 或质粒时菌体经酚和氯仿的抽提之后的中间层是（）A、DNAB、蛋白质C、脂肪D、多糖30、PCR 扩增反应中常需要下列哪种金属离子()A、Ca2B、Fe3C、Mg2D、Mn231、切口移位是指在()作用下，使()带上放射性标记。()A、DNA 聚合酶 I，RNAB、DNA 聚合酶 I，DNAC、DNA 聚合酶，RNAD、DNA 聚合酶，DNA32、饱和酚上层覆盖的液体作用是（）A、防止酚被污染B、提高酚的作用能力C、避免酚被氧化D、促进酚溶解33、构建 cDNA 文库时，首先需分离细胞的（）A、染色体 DNAB、线粒体 DNAC、总 mRNAD、tRNA34、基因工程技术中的目的基因主要来源于()A、自然界现存生物体内的基因B、自然突变产生的新基因C、人工诱变产生的新基因D、科学家在实验室中人工合成的基因35、在蓝白斑筛选时，可能是阳性克隆的是（）A、蓝斑B、白斑C、绿斑D、都有可能36、关于重组蛋白在大肠杆菌中合成后定位的叙述中，错误的是()A、定位在细胞核内B、定位在周质空间C、定位在内膜或外膜D、定位在细胞质37、苏云金芽孢杆菌的抗虫基因之所以能在棉花的叶肉细胞中准确地表达出来，主要是因为()A、目的基因能在植物细胞核中进行复制B、目的基因与棉花 DNA 的基本结构相同C、不同生物共用一套遗传密码D、不同生物具有相同的一套遗传信息38、1993年，我国科学工作者培育成的抗棉铃虫的转基因抗虫棉，其抗虫基因来源于（）A、普通棉花的基因突变B、棉铃虫变异形成的致死基因C、寄生在棉铃虫体内的线虫D、苏云金芽孢杆菌体内的抗虫基因39、在基因诊断技术中，所用的探针 DNA 分子中须存在一定的放射性同位素，后者的作用是()A、为形成杂交 DNA 分子提供能量B、引起探针 DNA 产生不定向的基因突变C、作为探针 DNA 的示踪元素D、增加探针 DNA 的分子量40、以下不能说明细胞全能性的实验是()A、胡萝卜韧皮部细胞培育出植株B、紫色糯性王米种子培育出植株C、转入抗虫基因的棉花细胞培育出植株D、番茄与马铃薯体细胞杂交后培育出植株41、基因工程的操作步骤：制备重组 DNA 分子，转化受体细胞，筛选出获得目的基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导目的基因的表达，获取目的基因。正确的操作顺序是（）A、B、C、D、42、限制性内切酶的特点是（）A、只能识别 GAATTC序列B、识别特定的核苷酸序列和具有特定的酶切位点C、识别黏性末端D、切割质粒 DNA 的标记基因43、带有多个不同种复制起始区的质粒是()A、穿梭质粒B、表达质粒C、探针质粒D、多拷贝质粒44、下面有关限制酶的叙述错误的是()A、一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生粘末端B、同一种限制酶切割 DNA 时留下的末端序列总是相同C、限制酶是外切酶而不是内切D、一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端45、下列哪种克隆载体对外源DNA 的装载量最大（）A、粘粒B、酵母人工染色体（YAC）C、质粒D、噬菌体46、以下关于 Ti 质粒的说法错误的是()A、可从农杆菌转到植物细胞中B、在植物细胞中作为染色体外质粒C、在植物中导致肿瘤D、需要细菌的 vir 基因帮助转移47、T 载体不具备的特点是（）A、环状结构B、有多克隆位点C、具有抗氨苄基因D、具有 LacZ 基因片段48、提取 DNA 或质粒时沉淀 DNA 时加入醋酸钠的目的（）A、改变溶液 pH 值B、保护 DNAC、增加溶液离子强度D、促进 DNA 沉淀49、以下关于蛋白质工程的说法正确的是()A、蛋白质工程以基因工程为基础B、蛋白质工程就是酶工程的延伸C、蛋白质工程是用蛋白酶对蛋白质进行改造D、蛋白质工程只能生产天然蛋白质50、提取 DNA 或质粒时酚和氯仿的比值（）A.、约 1：1B、约 1:2C、约 1：3D、约 1：351、Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段，Northern印迹则是：()A、用 RNA 探针检测 DNA 片段B、用 RNA 探针检测 RNA 片段C、用 DNA 探针检测 RNA 片段D、用 DNA 探针检测蛋白质片段52、用碱法分离质粒 DNA 时，染色体 DNA 之所以可以被除去，是因为()A、染色体 DNA 断成了碎片B、染色体 DNA 分子量大，而不能释放C、染色体变性后来不及复性D、染色体未同蛋白质分开而沉淀53、cDNA 法获得目的基因的优点是()、能纠正密码子的偏爱性、不含内含子、操作简便、表达产物可以分泌54、构建基因文库极为重要的原则是防止外源DNA 片段之间的连接，其方法是()I DNA 片段分级分离II 除去 DNA 片段末端的磷酸基团III 用 TdT 酶增补人工粘性末端、II、I+II、II+III、I+II+III55、人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因的主要作用是()A、提高受体细胞在自然环境中的耐药性B、有利于对目的基因是否导入进行检测C、增加质粒分子的分子量D、便于与外源基因连接56、外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是()I融合基因能稳定扩增II融合蛋白能抗蛋白酶的降解III 表达产物易于亲和层析分离A、IIIB、I+IIC、I+II+IIID、II+III57、关于甲醇酵母表达系统的优点的叙述中，错误的选项是()A、具有强有力的 AOXI（乙醇氧化酶）启动子B、可以对表达的蛋白质进行加工和修饰C、可低密度发酵培养D、营养要求低，培养基廉价58、下列实践与基因工程无关的是()A、利用 DNA 探针检测饮用水是否含病毒B、将植物的叶绿体移入植物以提高光合作用效率C、选择“工程菌”来生产胰岛素D、培育转基因抗虫棉59、下列哪种生物不能作为生物武器（）A、伤寒杆菌B、炭疽杆菌C、乳酸菌D、天花病毒60、下列报告基因属于显色或发光的报告基因是？()A、cat 基因B、bar 基因C、gfp 基因D、spt 基因61、限制性酶 SalI 识别的序列是 GTCGAC，酶切后在 5侧产生 4 个碱基突出，限制性酶 XhoI识别的序列是 CTCGAG，酶切后也在 5侧产生 4 个碱基突出。如果将 SalI 酶切过的插入片段与 XhoI 酶切过的质粒载体混合，再进行连接反应，那么产生的连接产物所具有的性质是()。A.使用 SalI 或 XhoI 处理，插人物都会释放出来B.SalI 处理可以使插人物释放出来，但XhoI 不行C.XhoI 处理可以使插人物释放出来，但SalI 不行D.无论使用 SalI 或 XhoI 处理，插人物都不会释放出来62ChIP 分析用于确定()。A.DNA 结合蛋白的免疫原性B.与蛋白质结合的带有放射性的DNA 的泳动性C.一种蛋白质在染色体上的结合位点D.种抗体识别特定 DNA 序列的能力63有人构建了能在酵母中表达双杂交蛋白的克隆。第一个杂交蛋白由GAL4 的 DNA 结合结构域和蛋白质 X 融合而成，第二个杂交蛋白由一种称为VPl6 的病毒蛋白质的激活结构域和蛋白质 Y 融合而成。当这两个杂交蛋白在缺乏GAL4 的酵母细胞中表达的时候，GALl 基因表现为组成型表达。这是因为()。A.在 GALl 启动子附近的 VPl6 激活结构域的浓度降低B.VPl6 激活结构域导致 GAL4 的 DNA 结合结构域的构象发生改变，从而促进启动子元件靠近，有利于 TFD 的结合C.蛋白质 X 直接招募介导子复合物D.蛋白质 X 招募 Y-VPl6 杂交蛋白，后者再招募其他蛋白质64、一种真菌接触到某种药物以后被诱导产生一种特定的酶。对此你提出了一种假设进行解释。为了证明你的假设，你需要设计一系列的实验进行验证。以下实验中对你验证没有帮助的是()。A.Southern 印迹 B.Northern 印迹 C.Western 印迹 D.测定被诱导的酶的活性65如果要用 PCR 扩增以下 DNA 模板中的基因 l，需要的一对引物序列是()。5CTTCGAAATTC-基因 1-TCTCCCGATCGG-基因 2-AAGATCAAATCCTTTGCTCT 3A.正向引物是 TTCGAAATTC，反向引物是 GATCGGGAGAB.正向引物是 CCTTTGCTCT，逆向引物是 TCCCGATCGGC.正向引物是 GAATTTCGAA，逆向引物是 TCTCCCGATCD.正向引物是 GATCGGGAGA，逆向引物是 TTCGAAATTC66 p53 是一种抑癌基因。如果你想知道它是否在癌细胞和健康细胞内表达，你需要()。A.对这些细胞的染色体 DNA 进行 Southern 印迹B.对从这些细胞内纯化的mRNA 进行 Northern 印迹C.利用酵母双杂交技术进行Eastern 印迹D.对 p53 蛋白进行免疫共沉淀，以寻找相关的蛋白质67.克隆来自人基因组 DNA 500 kb 的片段，选用的最佳载体应该是()。A.BAC B.入噬菌体 C.YAC D.黏粒载体68.用来转化双子叶植物的克隆载体是()。A.YAC B.Ti 质粒 C.pBR 质粒 D.黏粒 .69.所有与定点突变有关的方法都需要使用()。A.PCR B.单链 DNA 噬菌体 C.套式系列 DNA(anested set of DNA)D.人工合成的含有所需要突变的寡DNA70.在植物转化的二元载体系统中，外源基因位于()。A.与选择性标记基因相同的质粒上 B.与 vzr 基因相同的质粒上C.两个质粒都有 B.两个质粒都没有71.下列最可能是限制性酶识别位点的碱基序列是()。A.AGTC B.ACCT C.ACGT D.ATCG72假定你从乌龟的基因组里克隆到一个单拷贝基因，经研究发现，其中部含有一个 EcoR工切点。如果你使用切口平移的方法对克隆的基因的全序列进行了同位素标记，然后，将标记的 DNA 变性，再用得到的单链 DNA 作为探针，对经 EcoR 工完全消化过的乌龟基因组 DNA进行 Southern 印迹实验，那么在经过放射自显影以后，最后你能得到的条带数目是()。A.0 B.1 C.2 D.3 E.473可以用来确定一种 mRNA 5端序列的方法是()。A.使用 eDNA 探针进行 Northern 印迹B.将基因组 DNA 序列与通过 RT-PCR 得到的 eDNA 序列进行比较C.使用引物延伸或 5-eDNA 末端快速扩增(5-RACE)D.将 mRNA 与蛋白质进行序列比较74.使用 YIp 载体对酵母细胞进行转化将导致在转化体内的质粒DNA()。A.通过同源重组整合到基因组DNAB.出现多个拷贝(约 30 个)C.经过细胞分裂以后不能稳定地维持D.在细胞核能进行自主复制75.将 3端有突出的双链 DNA 修成平端需要()。A.DNA 聚合酶的延伸反应 B.DNA 聚合酶的校对反应C.限制性酶直接将突出切除 D.逆转录酶催化的逆转录反应76、如果你要用 ChIP 实验，测定一种激活蛋白是否与小鼠组织培养细胞中的某一个基因的增强子结合，你不需要使用的实验材料是()。A.细胞浸透性交联试剂 B.激活蛋白的抗体C.目的基因的抗体 D.去交联方法77、如果有人给你少量埃及木乃伊的骨头碎片，叫你分析在当时的古埃及是否流行一种特定的遗传疾病，那么以下不会给你提供任何有关信息的实验是()。A.使用重复序列设计的引物进行PCR B.使用不同的限制性酶进行RFLPC.Northern 印迹 D.Southern印迹78、PCR 实验不需要的成分是()。A.RNA 引物 B.耐热的 DNA 聚合酶 C.DNA 模板 D.dNTP79、如果在-珠蛋白基因的第一个外显子内的 Mst酶切位点发生碱基替换，则后果将是()。A.使用 RFLP 分析将会产生新的限制性片段B.将导致-珠蛋白的一个 Val 被 Glu 取代C.将导致剪接异常 D只能在同源合子中检测到80.以下技术可以用来研究蛋白质和核酸之间的相互作用的是()。A.Southern 印迹 B.Northern 印迹 C.Western 印迹D.电泳迁移滞后实验(EMSA)81、使用 Pst 工和 Xho 工同时切割，则产生 1300 bp、1 000 bp、500 bp 和 200 bp 个片段，那么，Pst I 酶切片段的次序是()。A.ABC B.ACB C.BCA D.BAC82.以下用来确定人肝细胞所有的基因的表达水平的技术手段是()。A.Southern 印迹 B.Northern 印迹 C.Western 印迹 D.基因芯片83、如果你制备插入片段平均大小为10kb 的某种生物的基因组文库，这种生物的基因组大小为 20M(双倍体)，那么，要达到高于 99的可能性从文库中获得一个特定克隆所需要的最低克隆数目是()。A.100 B.200 C.1000 D.1000084在大肠杆菌中用于表达外源基因的载体在启动子下游通常含有SD 序列，这个序列的作用是()。A.为核糖体提供识别位点 B.提供转录位点C.增强启动子活性 D.提高 RNA 稳定性85、Western杂交是用于下列杂交技术中的哪一个()。A.DNA-DNAB.RNA-RNAC.DNA-RNAD.抗体抗原结合二、多项选择题二、多项选择题1、基因工程的四大基本元件是()A、供体B、受体C、载体D、工具酶2、下列有关连接反应的叙述，正确的是（）、连接反应的最佳温度为 37、连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10%、连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mM、连接酶通常应过量 2-5 倍3、属于定点突变的技术有（）A、寡核苷酸引物介导法B、易错 PCR 法C、大引物突变法D、盒式突变4、表达载体所必须的条件是()A、必须具备很强的启动子B、必须具备很强的终止子C、启动子不需要受控制D、所产生的 mRNA 必须具有翻译的起始信号5、以下属于显色或发光报告基因的是（）A、葡萄糖苷酶基因B、荧光素酶基因C、绿色荧光蛋白基因D、RNA 聚合酶基因6、基因工程的操作步骤包含（）A、制备重组 DNA 分子B、转化受体细胞C、获取目的基因D、筛选出获得目的基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导目的基因的表达7、下列说法不正确的是（）A、DNA 连接酶最初是从人体细胞中发现的B、限制性内切酶的切口一定是GAATTC碱基序列C、质粒是基因工程中惟一用作运载目的基因的载体D、利用载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程可称为“克隆”8、Southern 印迹法的步骤是()A、用限制酶消化 DNAB、DNA 与载体的连接C、用凝胶电泳分离 DNA 片段，转移至硝酸纤维素膜上D、用一个标记的探针与膜杂交9、关于甲醇酵母表达系统的优点的叙述中，正确的是()A、具有强有力的 AOXI（乙醇氧化酶）启动子B、可以对表达的蛋白质进行加工和修饰C、可低密度发酵培养D、营养要求低，培养基廉价10、以下关于报道基因的论述哪一些是不正确的？()A、以一个易检测的启动子区替换一个不易检测的启动子区B、可用于测定启动子活性C、不能用于测定的启动子何时、何处被激活D、是用一个突变的操纵区替换一个正常的操纵区11、基因工程的受体细胞有()A、大肠杆菌B、枯草杆菌C、支原体D、动植物细胞12、pBR322 质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件()A、Ampr和 TetrB、LacZ 标记C、ori 复制子D、多克隆位点13、碱裂解法分离质粒 DNA，其作用表述正确的是()A、溶液的作用是悬浮菌体B、溶液的作用是使 DNA 变性C、溶液的作用是使 DNA 变性D、质粒 DNA 分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性14、重组蛋白在大肠杆菌中合成后定位于()A、定位在细胞核内B、定位在周质空间C、定位在内膜或外膜D、定位在细胞质15、关于报告基因应满足的条件中，正确的是()A、选择物美价廉易得的B、在选择压力下，转化细胞能继续生长C、抗性基因产物对转化细胞的生长发育无抑制作用D、抗性基因无论是显性或隐性基因均可以16、可以用来测定蛋白质和DNA 分子之间相互作用的技术有()。A.Northern 印迹 B.DNA 芯片 CChIP D 电泳迁移滞后实验 E.Southern 印迹17在基因克隆中可以用来作为融合蛋白纯化标签的有()。A.多His B.谷胱甘肽S-转移酶 C.麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)E.Myc F.FLAG18.制备 cDNA 文库所需要的工具酶有()。A.多腺苷酸聚合酶 B.逆转录酶 C.核酸酶 Sl D.限制性酶 E.DNA 连接酶19.可以用来检测一个克隆基因是否在宿主细胞内表达的方法有()。A.Southern 印迹 B.Northem 印迹 C.Western 印迹 D.PCR E.DNA序列分析20、肯定用到寡 DNA 的分子生物学技术有()。A.PCR B.双脱氧法测序 C.限制性酶消化分析 D.基因组文库构建 E.定点突变21.在基因克隆中可以作为报告基因的有()。A.编码氯霉素乙酰转移酶的基因 B.编码荧光素酶的基因C.编码谷胱甘肽 S转移酶的基因 D.编码绿色荧光蛋白的基因E.编码-半乳糖苷酶的基因22酵母人工染色体必须具有的元件包括()。A.着丝粒 B.抗生素抗性标记 C.端粒 D.ARS E.oriC23 可以将特定目的基因失活的技术有()。A.定点突变 B.RNA 干扰 C.反义 RNA D.基因敲除 E.基因治疗24用于在大肠杆菌细胞进行分子克隆的载体必须具有()。A.EcoRI 切点 B.复制起始 C.选择性标记 D.端粒 E.DnaA 蛋白结合位点25.在下列所提供的酶中，可直接用于制备放射性同位素标记的DNA 探针的有()。A.大肠杆菌 DNA 聚合酶 I B.多核苷酸激酶 C.T4DNA 连接酶D.Taq DNA 聚合酶 E.限制性酶三、简答题三、简答题1、解释 -互补筛选的原理？2、利用双脱氧末端终止法（Sanger 法）测定 DNA 一级结构的原理？3、PCR 的基本反应过程包括哪些？反应体系需要什么条件4、以 pET28a 载体，BL21（DE3）受体为例，简述基因表达步骤。5、简述 Ti 载体介导的转基因植物基本程序。6、简述以质粒为载体构建Gene library 的基本步骤？7、影响外源基因表达的因素有哪些？8、鉴定转基因植物的外源基因是否整合的方法有哪些，请简单描述其中一种方法。9、说明 Southern 杂交的原理和方法。10、如何使下列基因中的位点AT 突变成 GCAT11、对天然质粒的人工构建主要表现在哪些方面？12、大肠杆菌中表达外源基因的表达方式有哪些?各种方式的特点？13、简述以逆转录病毒做载体的转基因动物技术。14、引物设计的一般原则是什么？15、以下为双脱氧终止反应，经琼脂糖凝胶电泳和放射自显影所得到的X 胶片图，根据此图，分析其结果？(1)、简述双脱氧终止法进行DNA 测序的原理？(2)、根据上图，写出该 DNA 片段的序列？AGCT16、基因组文库和 cDNA 文库有什么区别？克隆到这两个文库中的基因的结构主有什么主要区别？两种文库各具有什么优点？17、限制性内切酶可发生哪两类切割？请简述这两类切割可能产生的三种末端形式。18.列出一个理想的克隆载体的特征。19.请简述几种鉴定方法：鉴定重组质粒和重组噬菌体的插入片段是否正确插入。20、将 DNA 片段克隆到质粒载体中时，载体自连常常会影响实验结果。请给出两种能防治载体自连的方法。四、论述题四、论述题1、论述基因工程的基本步骤。2、试述蛋白质工程中定点突变或定向进化中的一种技术的原理和步骤。3、论述重组子的筛选与鉴定方法。4、在PCR 扩增时，PCR 扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带，为什么？有何对策？5、论述 噬菌体载体的克隆原理及一般步骤？6、论述寡聚核苷酸引物介导的定点突变技术。7（a）简述培育转基因动物的技术手段可能有哪些实际的用途？（b）培育转基因动物技术有哪些潜在的缺点和问题？8 PCR 与细胞内 DNA 复制两者有哪些主要的相同点和不同点，各举出5 个。9基因工程中常用 互补来筛选重组质粒，请说明其原理。10如果要在实验室里克隆人生长激素（hGH）基因并制备人生长激素（hGH）（a）如果在细菌中克隆并表达如人生长因子基因这一类基因时，可能会遇到哪些技术问题？（b）请再设计另外两种能避开这些潜在问题的实验路线。11如果你分离到一种癌基因的全基因组DNA 克隆(包括上游序列、所有的内含子和外显子以及下游序列)，现在想研究一些潜在的抗癌药物对此癌基因的表达产生的抑制情况，那么，你如何使用 GFP 作为报告基因，测定某一种组织在不同的药物作用以后这种癌基因表达水平的变化?12假定小鼠有A 和 B 两种细胞，其中A 细胞仅仅比 B 细胞多表达一种蛋白质X，那么，你如何快速地得到这种蛋白质的cDNA?13.质免疫沉淀(CHIP)分析有何用处?这种技术需要哪些特有的试剂?它与凝胶迁移率变动分析和 DNA 酶工足迹分析有何不同?14有人在使用 ChIP 技术，研究一种固醇类激素与它结合的受体可能在离一个基因转录起始点-330 bp 的序列结合。他对 DNA 进行交联处理，然后用超声波将其断裂成平均大小为600bp 的片段，然后使用这种激素受体的抗体，免疫沉淀DNA蛋白质复合物，在去交联之后，使用与转录起始点相距 400 bp 长的序列(在可能受到激活的转录的基因的中部序列)的两侧序列互补的引物进行 PCR。然而，当他对扩增产物进行电泳分析的时候，在受激素处理的样品中并没有发现 400 bp 的产物。于是，他得出这种激素并不能诱导受体与潜在的调控序列结合。可是不久，另外一个研究者使用其他方法证明，这种激素受体复合物的确能够与这个基因上游潜在的结合位点结合。如果他的实验操作没有任何问题，你认为是什么原因导致他的实验失败?15如果将右图所示的质粒用限制性酶BamH 工消化后，与人 DNA 的 BamHI 消化产物进行连接，然后再将连接产物转化大肠杆菌。(1)你如何选择含有质粒的细菌菌落?(2)假定想利用这种质粒作为载体高表达一种外源基因，你将选择哪一个限制性酶切位点作为外源基因的插入位点?在这个位点上含有外源基因的所有质粒都能正常地表达吗?(3)如果使有双酶切(EcoRI和BamHI)消化质粒和还有外源基因的 DNA，然后再将消化产物进行连接和转化，这与单酶切相比有哪些好处?16有人使用 PCR 扩增一个 2 kb 长的基因，他在准备扩增反应的时候，犯了一些错误。根据你学过的分子生物学知识，你认为这些错误对PCR 的结果有何影响?他是否需要重新准备反应系统?(1)在反应系统中，他除了加了dNTP，还加人了 ddNTP。(2)DNA 模板的量比原计划多加了两倍。(3)他使用了大肠杆菌的DNA 聚合酶代替丁 aqDNA 聚合酶。(4)他设置的扩增循环是：lmin，37C；1min，50C；lmin，72C。(5)他使用的引物序列与基因的编码链两侧的序列完全相同。(6)他在 PCR 缓冲溶液中用了 Mn2+代替 Mg2+。五、分析题五、分析题1、打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体，以便在E.coli 中大量制备相应的蛋白质。这个 cDNA 的两侧具有 BamHI 的位点，因此计划将它从 BamHI 的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用 BamHI 切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去 5磷酸；接着将处理过的载体同用 BamHI 切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA 连接酶后进行温育，连接之后，将DNA 同已处理过的可以接受DNA 的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了4 个对照：对照 1：将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上；对照 2：将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；对照 3：将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有 cDNA 片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；对照 4：将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用 DNA 连接酶连接(但没有 cDNA 片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养子板上。在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落(表 1)。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长(表 1)。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子(表 1)。从实验平板上挑出 12 个菌落，分离了质粒DNA，并用BamHI 进行切割，其中9 个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带，另三个克隆中切出一个cDNA 片段，实验终于获得成功。(1)你如何看待第一次的实验结果？对照1 的目的是什么？(2)影响第二次实验结果的原因是什么？对照2 的作用何在？(3)对照 3 和 4 各有什么作用？为什么要用碱性磷酸酶处理载体？表 1cDNA克隆的结果实验结果制备的样品123对照1只有细胞TMTC00对照 2未切的载体TMTC01000对照 3省去磷酸酶处理，无cDNATMTC0435对照 4无 cDNATMTC025实验样品TMTC034注：TMTC=too many to count，多到无法计数。2、番茄果实成熟过程中，某种酶（PG）开始合成并显著增加，促使果实变红变软。但不利于长途运输和长期保鲜。科学家利用反义 RNA 技术，可有效解决此问题。该技术的核心是，从番茄体细胞中获得指导PG 合成的信使 RNA，继而以该信使 RNA 为模板人工合成反义基因并将之导入离体番茄体细胞，经组织培养获得完整植株。新植株在果实发育过程中，反义基因经转录产生的反义RNA 与细胞原有 mRNA（靶 mRNA）互补形成双链 RNA，阻止靶mRNA 进一步翻译形成 PG，从而达到抑制果实成熟的目的。请回答：（1）反义基因像一般基因一样是一段双链的 DNA 分子，合成该分子的第一条链时，使用的模板是细胞质中的信使RNA，原料是四种_，所用的酶是_。（2）开始合成的反义基因第一条链是与模板 RNA 连在一起的杂交双链，通过加热去除RNA，然后再以反义基因第一条链为模板合成第二条链，这样一个完整的反义基因被合成。若要以完整双链反义基因克隆成百上千的反义基因，所用复制方式为_，若要大量扩增 DNA 分子通常采用的技术是_。（3）如果指导番茄合成 PG 的信使 RNA 的碱基序列是 A U C C A G G U C，那么，PG 反义基因的这段碱基对序列是_。（4）将人工合成的反义基因导入番茄叶肉细胞原生质体的运输工具是_，该目的基因与运输工具相结合需要使用的酶有_，_，连接后得到的 DNA分子称为_。在受体细胞中该基因指导合成的最终产物是_。3、中国科学家陈炬成功地把人的抗病毒干扰素基因植入烟草的细胞中并“嫁接”到其DNA 分子上，使烟草获得了抗病毒的能力。试分析回答：(1)、烟草转基因产品的获得属于（）A、基因工程B、细胞工程C、微生物工程D、酶工程(2)、人的抗病毒干扰素基因之所以能“嫁接”到植物的 DNA 分子上去，是因为_。(3)、烟草具有抗病毒能力，说明烟草体内产生了_，其化学本质是_，合成方式包括_。(4)、不同生物间基因移植成功，说明生物共有一套_。从进化的角度看，这些生物具有_。它们之间有着或远或近的_关系。(5)、该工程应用于实践，将给农业、医药等诸多领域带来革命，目前已取得了许多成就，请你列举你所知道的或你所设想应用该工程的一个具体实例_。(6)、有人认为，转基因新产品也是一把双刃剑，有如船能载舟也能覆舟，甚至可能带来灾难性的后果，你是否支持这一观点？如果支持，请你举出一个可能出现的灾难性后果的实例：_。4一个具有 Kan 和 Amp 抗性基因的质粒，Bgl II 酶切位点在 Amp 抗性基因中。将 Bgl II酶切的质粒 DNA 和 Bgl II 酶切的果蝇（Drosophila）DNA 进行退火，然后转化到大肠杆菌中，回答下列问题：（a）在培养基中需要加哪种抗生素才能保证能筛选出含有质粒的克隆？（b）在平板上生长的菌落是具有哪种抗生素抗性？（c）Drosophila DNA 具有哪种表型？如何筛选具有这一表型的克隆？5某重组体的插入片段为线状双链，长度为100kb，被限制性核酸内切酶 A 和 B 降解的产物经凝胶电泳分级分离后结果如下：（1）酶 A 单独消化时，得到 1.5 kb 和 8.5kb 的 2 个片段。（2）酶 B 单独消化时，得到 0.5kb、3.0 kb、6.5 kb 的 3 个片段。（3）酶 A 和酶 B 一起消化时，得到0.5 kb、1.0 kb、2.0 kb 和 6.5kb 的 4 个片段。根据上述信息画出该插入片段的限制性内切酶图谱。6.根据图 15-2 回答以下问题：（a）根据图 15-2（a），三名嫌疑犯中哪一个是这个强奸案中的头号嫌疑犯？（b）根据 DNA 指纹的检测结果，能确定三名嫌疑犯中谁是无辜的吗？能肯定谁是罪犯吗？在司法鉴定谁是罪犯和谁不是罪犯时，运用DNA 指纹技术更容易确定的是哪一种？（c）15-2（b）中的 F1 和 F2 两人谁更有可能是小孩 C 的父亲？为什么？7如果你得到一种新的细菌，那么你如何利用分子克隆技术获得这种细菌染色体DNA 的复制起始区?你又如何从这种细菌体内得到专门识别它的复制起始区、启动DNA 复制的起始蛋白?8有人将酵母基因组DNA 的片段插入到一种质粒载体，随后将重组的质粒转化带有leuB突变的大肠杆菌细胞。已知leuB基因编码-异丙醇脱氢酶(isopropylate dehydrogenase)，该酶参与 Leu 的生物合成，故带有 leuB的大肠杆菌不能在无 Leu 的培养基上生长。为什么经过上述转化的某些大肠杆菌在缺乏Leu 的培养基上也能形成正常的菌落?如果你使用人共页第页的基因组 DNA 的片段做同样的实验，你能得到类似的结果吗?为什么?