白细胞血小板配血试验.ppt

,免疫血液学,-白细胞 血小板 输血前交叉配血试验,一、人类白细胞抗原,人类白细胞抗原代表个体特异性 与移植排斥有关的抗原称为组织相容性抗原或移植抗原-MHS 编码MHS的基因组称为主要组织相容性复合物(MHC) 人类的MHC是首先在白细胞上发现的，称为人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA),HLA的研究历史,最早发现人类白细胞抗原者为Dausset-1954年 HLA不仅仅是白细胞特异性同种抗原。 它是分布广泛的组织抗原。,HLA的分型命名,血清学分型命名 具有临床意义的HLA基因有A、B、C、DR、DQ、DP等位点(Loci)，每个位点又有若干等位基因，这些基因的产物便是HLA抗原。 临床意义比较大的HLA-A、B、C称为类抗原 HLA-DR、DQ、DP称为类抗原。,HLA的遗传,单体型遗传 存在基因重组 多态性现象 连锁不平衡,HLA抗体及抗体检测,临床上HLA抗体多由妊娠、输血或器官移植等免疫产生,HLA在医学中的应用,一、HLA与输血 HLA与非溶血性输血反应 HLA与血小板输注 二、HLA与器官移植 (一)肾移植 (二)骨髓移植 三、HLA与亲子鉴定,二、血小板血型,一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称血小板相关抗原 另一类为血小板特异性抗原,血小板血型,相关抗原：主要与红细胞的ABO血型系统以及人类白细胞抗原(HLA)有关 特异性抗原：由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板独特的遗传多态性，在其他细胞和组织上不能发现,血小板血型,血小板表面存在红细胞ABO系统的A抗原和B抗原,可能是从血浆中吸附上的。 是否还存在其他红细胞血型抗原尚在探讨之中 在我国，通常进行ABO同型血小板输血,配合性血小板输注,ABO同型 血小板抗体的筛选 交叉配合试验：确保供受体的血小板型和HLA型的配合,血小板血型,血小板特异性抗原 具有独特的型特异性，并构成血小板膜结构中的一部分 血小板特异性抗原有6个血型系统24个抗原，正式命名为HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-4、HPA-5、HPA-15,血小板血型的临床意义,一.血小板输注无效性(PTR) 二.输血后紫癜(PTP) 三.新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAITP) 四.血小板的自身免疫作用-特发性血小板减少性紫癜(简称ITP),血小板同种抗体与输血,1.ABO血型的选择 一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好输注ABO血型配合的血小板 2Rh血型的选择 D阴性的患者，最好要避免用D阳性献血者的浓缩血小板。对育龄妇女可以注射Rh免疫球蛋白,三、输血前免疫血液学检查,目的:供者与患者的血液,输血前免疫血液学检查,内容： 患者的病史、标本的核对及处理 供受双方ABO、Rh血型鉴定 不规则抗体的筛选和鉴定 交叉配血试验 报告和发血,标 本,一、标本采集 二、红细胞悬液的配制 三、标本的保存,标 本,一、标本采集 1红细胞标本-ACD或CPD、(Na2-EDTA)抗凝静脉血 少数患者有一种自身抗体-不宜用抗凝血液作为红细胞抗原标本,2血清标本 一般实验避免使用血浆 配血试验用血清不超过72小时,二、红细胞悬液的配制 1、红细胞悬液常用浓度有2、5和10 2、2的悬液一般用于滴定抗体效价，5的悬液常用于血型鉴定和交叉配血试验，10的悬液则用于测定抗体的亲合力。,三、标本的保存 1血清标本 不稀释的血清标本如加有防腐剂可在4保存数月,在一20以下可保存数年 如用生理盐水稀释的血清只限当天使用 2红细胞标本 一般试验用的凝血标本要在5天之内使用，以不溶血为准。如用保存液可保存3周 用盐水配制的红细胞悬液只能在当天使用,供受双方ABO、Rh血型鉴定,ABO血型正反定型 Rh血型鉴定,试管法,抗A、抗B以外的所有抗体统称为不规则抗体。 常见于多次输血的人群,不规则抗体的筛选和鉴定,不规则抗体的筛选和鉴定,患者血清+试剂筛选红细胞 盐水介质 聚凝胺介质 抗人球蛋白介质,交叉配血试验,受者血清+供者红细胞 受者红细胞+供者血清 方法,主侧,次侧,盐水介质 聚凝胺介质 抗人球蛋白介质,（1）低离子聚凝胺交叉配血技术,原理：聚凝胺（Polybrene），一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果使抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。,1 红细胞间有一定间距,2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集,3 加入枸橼酸钠，可以中和聚凝胺,4 红细胞的非特异性凝集消失,聚凝胺交叉配血技术示意图1,聚凝胺,枸橼酸钠,1 红细胞上已有不完全抗体致敏,2 加入聚凝胺后，缩短红细胞之间的距离，让不完全抗体可以同时与两个红细胞结合使其特异性凝集,3 加入枸橼酸钠中和聚凝胺,4 由于不完全抗体的结合，红细胞的特异性凝集不消失,聚凝胺交叉配血技术示意图2,聚凝胺,枸橼酸钠,不完全抗体,试验分步原理,血清,红细胞悬液,加入LIM,混合液,试验分步原理,Polybrene分子连接到红细胞上,加入Polybrene,试验分步原理,离心,Polybrene拉近红细胞间的距离并造成凝集,1个IgG分子同时连接两个红细胞,试验分步原理,加入重悬液减弱了Polybrene的作用,加重悬液,试验分步原理,已被血型抗体致敏的红细胞不会散开,阳性结果,试验分步原理,未被血型抗体致敏的红细胞很快散开,阴性结果,注意事项,按比例加样 致敏时间 观察非特异性凝集 观察结果 关于冷凝集,聚凝胺方法的特点,灵敏：灵敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。 速度快：实验时间5分钟左右。 准确：准确度高于酶试验。 不适合于Kell系统抗体的检测，但黄种人群中Kell系统抗体极罕见。 操作要求较高,（2）微柱凝胶技术,微柱凝胶技术,凝胶技术的原理,凝胶技术的原理：,A、反应室：下端底孔很小，液体在孵育过程中不会流入下方微柱中。 B、试剂或盐水层：红细胞在离心力作用下穿越该层，红细胞与反应室中的血清分离并与该层液体中的试剂反应。 C、粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂或盐水层”相同。,1）敏感：在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。 2）结果可保存 凝胶试验的结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。 3）操作技术要求较低：凝胶试验的操作主要是简单的加样和判读，孵育、离心过程都有专门的设备。其中能被人为改变的因素较少。 4)无需洗涤的抗球蛋白试验：,优点：,缺点：,凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。 高度敏感有时也会造成不便：有报导应用凝胶试验后，1/300的库血直抗阳性。,2不完全抗体可以结合在红细胞表面,但是不能和两个红细胞同时结合（致敏）。,3加入抗人球蛋白,1红细胞彼此之间有一定的间距,4抗人球蛋白可以同时和两个不完全抗体的FC段结合，从而把红细胞连接在一起。,（3）抗人球蛋白交叉配血法示意图,1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体),2.加入供者血小板,3.试剂红细胞和血小板特异性结合,4.加入受者的血清,如有抗血小板抗体,则和血小板发生特异性结合,5.凝胶柱中的抗人球蛋白捕获抗血小板抗体,导致试剂红细胞凝集。,（4）血小板配血实验原理示意图（阳性）,1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体),2.加入供者血小板,3.试剂红细胞和血小板特异性结合,4.加入受者的血清,如血清中无抗血小板抗体,则凝胶柱中的抗人球蛋白不发生特异性结合，试剂红细胞仍呈单个分布。,血小板配血实验原理示意图（阴性反应）,