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肌苷酸产业及生产工艺,李查杭 生物工程101班,一、国内外生产水平,截至今日,日本的肌苷酸生产达到最高的水平,最高达可达到到2027g/L,而在我国的生产水平达到16g/L。,二、成本、应用分析,成本分析 肌苷酸过去一直靠进口,其价格高达每千克200元。从70年代开始,我国成功地利用细菌(如谷氨酸棒状杆菌265和产氨短杆菌926)发酵法生产肌苷酸和乌苷酸,成本仅为每千克23元。而现在肌苷酸二钠的价格在每千克260元 。,二、成本、应用分析,(一)调味 是食品增鲜剂,其二钠盐与谷氨酸钠(味精)混合使用,其呈味作用比单用味精高数倍,有“强力味精”之称。 (二)医疗 适用于各种原因引起的白细胞减少症、血小板减少症、各种心脏疾患、急性及慢性肝炎、肝硬化等,此外尚可治疗中心视网膜炎、视神经萎缩等。,三、国内主要生产企业,山东双凤股份有限公司 江阴市蔚尔生物科技有限公司 南通秋之友生物科技有限公司 南京同凯兆业生物技术有限责任公司 广东江门甘蔗化工股份有限责任公司 武汉生科生物股份有限公司等,四、肌苷酸的生产 (一)一步法 1.肌苷酸生产菌选育 (1)解除微生物自身的反馈调节 a.解除AMP、GMP对PRPP( 5-磷酸核糖-1-焦磷酸)转酰胺酶的反馈抑制。 b.切断5-IMP继续代谢生成GMP和AMP的途径。,因此,选择可以产生核苷酸的产氨短杆菌(Brevibacterium ammoniagene)为出发菌株,诱变为腺嘌呤缺陷型突变株,再诱变为鸟嘌呤缺陷型突变株。,2.培养条件 (1)因所用菌株为腺嘌呤缺陷型,所以添加适量腺嘌呤(加0.5%酵母膏或酵母水解液)。 (2)Mn2+亚适量 工业原料和工业用水含较多的Mn2+,难于控制Mn2+亚适量,有两条途径: a.筛选对Mn2+不敏感的突变株 b.加抗生素或表面活性剂以解除过量Mn2+的影响。 (3)添加较高浓度的磷盐。,(二)二步法(肌苷酸生产主要方法) 发酵法 肌苷 肌苷酸 原因: IMP对细胞膜的透性很差。 微生物中普遍存在使IMP脱磷酸化的酶类。,磷酸化,肌苷生产菌的选育 常用:枯草杆菌(Bacillus subtilis )的腺嘌呤缺陷型。 原因: 该菌磷酸酯酶活性强,有利于将IMP脱磷酸化形成肌苷,分泌至胞外,而产氨短杆菌的磷酸酯酶活性较弱。,2.培养条件 (1)培养基: 碳源:淀粉水解糖或糖蜜 氮源:要充分(因肌苷含氮量高,20.9) 无机盐:可溶性磷盐有抑制作用(胞外磷酸化) 生长因子:加适量含腺嘌呤的物质,如酵母膏。 腺嘌呤的最适浓度: 不影响菌体生长 使肌苷大量积累,(2)发酵条件 通气搅拌:供氧充足,促进肌苷生成,并可减少CO2对肌苷生成的抑制。 (3)肌苷的提取 先过阳离子交换柱,再过活性炭柱(吸附),结晶。,3.肌苷的磷酸化 (1)酶法: 酶:核苷磷酸化酶 磷酸的供体:对硝基苯磷酸 难点:除5磷酸化产物外,还有3- 、 2-位异构体,收率85。 (2)化学法:用不同的磷酸化试剂(磷酰氯、 磷酸、 五氧化二磷等)。,4.肌苷酸的提取 离子交换法 除菌体 除对硝基酚 柱层析 (过滤、离心) 活性炭吸附 加乙醇沉淀 精制(结晶) 粗制品 肌苷酸,谢谢,
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