腊肠中亚硝酸盐测定

腊肠中亚硝酸盐测定(盐酸萘乙二胺法)一、实验目的：1. 通过本实验掌握亚硝酸盐的测定方法，理解盐酸萘乙二胺法 的原理。2. 掌握亚硝酸盐测定的样品预处理方法及分光光度法测定亚硝 酸盐的操作要点。3. 熟悉分光光度计的使用。二、实验原理：制品中加入的亚硝酸盐产生的亚硝基与肌红蛋白反应，生产色泽 鲜红的亚硝基肌红蛋白，使肉制品有美观的颜色。同时亚硝酸盐也是 一种防腐剂，可抑制微生物的增殖。亚硝酸盐在弱酸性条件下，与对 氨苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与盐酸萘乙二胺发 生偶合反应，生成紫红色化合物。其颜色深浅与亚硝酸含量成正比， 故可比色测定。三、仪器、试剂与材料：仪器：分光光度计、组织捣碎机、移液管、容量瓶、滤纸、漏斗、 漏斗架、分析大平、电炉。材料：腊肠试剂： 亚铁氤化钾溶液(106 g/L):称取5.3g亚铁氤化钾溶于水，并稀 释至50mL 乙酸锌溶液(220 g/L):称取11g乙酸锌，加1.5mL冰醋酸溶于水，并稀释至50mL 饱和硼砂溶液(50 g/L)： 5g硼酸钠溶于100mL热蒸馏水中，冷却 备用。 对氨基苯磺酸溶液(4 g/L):称取0.8g对氨基苯磺酸，溶于200mL20% 的盐酸溶液中，闭关保存。(配制方法：取20m l盐酸溶液缓缓加到100m l水中。) 盐酸萘乙二胺溶液(2 g/L):称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL 蒸馏水中，混匀后置于棕色瓶中，避光保存。 硝酸钠标准溶液(1250ug/ml):准确称取0.1250g于110120C干 燥恒重的亚硝酸钠，加水溶于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度， 混匀。 亚硝酸钠标准使用液：(5.0ug/ml):临用前吸取亚硝酸钠标准溶液 1.00ml，置于250ml容量瓶中，加水稀释至刻度。四、实验步骤：1. 样品处理将绞碎混匀的腊肠，称取6.0g-8.0g (精确至0.0001g)试样， 置于50mL烧杯中，加入6.3mL饱和硼砂溶液，不断搅拌均匀。然后 以70C左右的热水约150mL分3次将加试样洗入250mL容量瓶中， 置于沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温，加入5.0mL亚铁氤化 钾溶液，摇匀，再加入5.0mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻 度，摇匀，放置0.5h，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初 滤液30mL，滤液备用。2. 亚硝酸钠标准曲线绘制准确量取 0.00、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50mL 亚硝酸钠标 准使用液(相当于 0.00、2.54、5.08、7.62、10.16、12.70 于 g 亚硝 酸钠)，分别置于50mL容量瓶中。分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液 (4g/L )，混匀，静置3-5min后各加入1mL盐酸萘乙二胺溶液(2g/L), 并以水定容到50ml，混匀，静置15min。用10mm比色皿，以试剂空 白为参比，在538nm波长下测定吸光度，以测得的各比色液的吸光度 及对应的亚硝酸钠含量制作标准曲线。3. 样品中亚硝酸盐的测定取40ml待测样液于50ml的容量瓶中，加2ml 0.4%对氨基苯磺 酸溶液，混匀，静置3-5min后各加入1ml 0.2%盐酸萘乙二胺溶液 (2g/L)，并以水定容到50ml，混匀，静置15min。用10mm比色皿， 以试剂空白为参比，在538nm波长下测定吸光度，记录吸光度。从标 准曲线上查的相应的亚硝酸钠含量，计算试样中亚硝酸盐(以亚硝酸 钠计)的含量。五、数据记录与处理数据记录表1亚硝酸钠标准使用液吸光度值012345样 品样 品亚硝酸钠标准溶液（mL）0.000.501.001.502.002.5040 ml 待 测 液40 ml 待 测 液亚硝酸钠 含量（ug）0.002.545.087.6210.1612.7 040 ml 待 测 液40 ml 待 测 液A A538nm数据处理：1以吸光度A为纵坐标，总含亚硝酸盐量（ug/ml）为横坐标，求得回归方程为：A=*C+*R=*2通过回归方程求得容量瓶的未知样亚硝酸盐的含量：将Ax=代入回归方程A=得到Cx=3计算样品中亚硝酸盐的含量：样品中亚硝酸盐按下式计算：X =X 1000m x 1000V；式中：X一试样中亚硝酸盐的含量（mg/kg）；V1试样处理液总体积（mL）；V2测定用样液体积（mL）；m试样质量（g）；A一试样测定液中亚硝酸盐的质量（四）。m为样品质量，g六、说明与注意事项：1. 样品加入硼砂后，加热沸腾15min，时间长亚硝酸钠易被氧化。2. 注意容量瓶、移液管的规范操作。3. 分光光度计的使用：开机预热、在T模式下调0调100 （用试剂空 白）、在A模式下测定。用后搞好卫生。