实验一土壤脲酶活性测定.ppt

实验一 土壤脲酶活性测定,一、实验目的 掌握土壤脲酶活性测定第一种方法，了解所取土壤的脲酶活性。 了解尿素这一有机物在土壤环境中的降解转化。,二、简单原理 酶是一类具有蛋白质性质的、高分子的生物催化剂。土壤酶 是活的有机体所合成的，或者在其生长过程中分泌与体外，或者在其死亡后自溶而释放出。所有的酶均能显示其活性。显著的酶的特征之一是其催化反应的专一性。例如，脲酶对尿素的催化降解就及其专一。土壤中的酶的来源有二种。一是来自于高等植物根系分泌及土壤中动植物残体分解。二是来源于土壤微生物的生命活动。土壤酶可分为胞内酶和胞外酶两种。胞外酶或溶出后的胞内酶进入土壤结构后，均具有相对稳定性，如能抗微生物分解和抗热稳定性等。它们以三种形式存在于土壤中，一是以吸附状态贮积于土壤中。二是于土壤腐殖质复合存在。三是以游离状态存在。,对于脲酶，它能促使尿素水解转化成氨、二氧化碳，反应如下 : 在土壤中，在pH值为6.57.0是脲酶活性最大，通过测定释放出的NH3量，可以确定脲酶的活性。土壤中脲酶活性一般以37培养48小时每克土壤释放出的NH3N毫克数表示。,三、步骤概要,1、取二个250ml锥形瓶，各加入10.0克土壤，再各加入10ml混合磷酸盐缓冲溶液（pH6.8）。摇动处理15分钟，使均匀。在往第一瓶内加入10ml浓度10%的尿素溶液，再经屏内容物充分混匀，作为试样。第二瓶内加入10ml蒸馏水，作为对照。将两个瓶置于37培养箱中培养48小时（要塞上纱布塞子）。 2、培养结束后，往两个瓶内各加入50ml 2N KCL 溶液。塞紧后再振荡30分钟。到时立即将试样过滤（滤纸可以用蒸馏水润湿）到蒸氨瓶内。,3、在过滤的间隙时间取两个50ml比色管，各加入10,00ml 4%硼酸溶液。现将50ml比色管在冷凝管下，使冷凝管出口尖端插入硼酸溶液中，准备蒸馏。 4、过滤完毕后，迅速往蒸氨瓶内注入20ml 4N 的NaOH溶液，立即塞上塞子。接通冷凝水，加热蒸馏。 5、当馏出液达到50ml左右，停止蒸馏。取下比色管，将管内接收液定量转入到50ml锥形瓶中加4-5滴指示剂（甲基红-亚甲基蓝混合液），用0.1N HCL滴定瓶内的氨，滴定到淡紫色为终点。记录试样和对照消耗的HCL体积V和V0（ml）。,四、计算,式中，W为称取的样品重（g），N为HCL当量浓度。,五、问题讨论,1、除了测定尿素降解产物氨外，还能有什么方法可以测定脲酶的活性？ 2、实验中为什么要加入甲苯？ 3、步骤4中为什么要迅速加入NaOH？ 4、如果蒸氨时吸收液倒吸到冷凝管中如何解决？,