实验四植物体内过氧化氢酶对环境中重金属污染的响应.ppt

上传人:za****8 文档编号:14098970 上传时间:2020-07-03 格式:PPT 页数:19 大小:6.83MB
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资源描述
实验四、植物体内过氧化氢酶对环境中重金属污染的响应,一、实验目的,(一)掌握分光光度法测定过氧化氢酶的方法;(二)重金属对过氧化氢酶的影响及其机理。,酶:由活细胞产生的具催化功能的蛋白质;酶催化底物发生的生物化学反应(酶促反应);,与一般催化剂的相同点反应中质与量不变,用量少、缩短平衡时间,不改变平衡点、只催化特定反应、降低反应活化能。不同点高效(106-1013)高度专一对反应和反应物有严格选择性条件温和(酶易失活)引起蛋白质变性的因素都能使酶失活,2H2O22H2O+O2,过氧化氢酶(catalase),干旱、重金属等环境胁迫下植物机体内容易产生ROS(ReactiveOxygenSpecies)如:O2-、H2O2、OH-等,因此激发保护酶体系(过氧化物酶POD、超氧化物歧化酶SOD、过氧化氢酶(CAT)清除自由基,提高抗逆性。,几乎所有的生物机体都存在过氧化氢酶,其普遍存在于能呼吸的生物体内,主要存在于植物的叶绿体、线粒体、内质网、动物的肝和红细胞及某些组织内的过氧化体中,其酶促活性为机体提供了抗氧化防御机理。主要作用就是催化H2O2分解为H2O与O2,使得H2O2不致于与O2在铁螯合物作用下反应生成非常有害的OH-。,二、实验原理,Cu2+使植物体内活性氧代谢加强,H2O2积累,使细胞受害,而过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶防御系统之一。植物体内H2O2含量,过氧化氢酶活性与植物抗逆性密切相关。H2O2在240nm具有强烈吸收峰。,三、实验仪器和用具,(一)实验器材光照培养箱、白瓷盘、医用纱布、烧杯、移液器、离心机、离心管、电炉、紫外分光光度计、天平、研钵、容量瓶(25ml)、试管、水浴锅。(二)材料水稻种子。(三)试剂2.0mMCuSO4、磷酸缓冲液、木村B培养液。,四、实验方法和内容,前处理浸种催芽培养(木村B培养液,20培养至2叶1心)处理(对照和2.0mMCuSO4处理),1.酶液的提取称取新鲜水稻叶片0.5g置于研钵中,加入2-3ml4预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后,转入25ml容量瓶中。用缓冲液冲洗研钵数次,并合并冲洗液,定容。容量瓶于4冰箱中静置10min,取上清液在4000rpm下离心10min,上清即为粗酶液。,冰箱中静置10min,4000rpm下离心10min,2.测定取10ml试管3支,其中2支为样品管,1支为空白管,按表1加入试剂。,表1紫外分光光度法测定H2O2样品配置表,对照管:煮沸3-5min;样品管25预热5min,样品管25预热后,逐管加入0.3ml0.1mol/L的H2O2,每加完一管立即记时,并迅速倒入石英比色皿中,240nm下测定吸光度,每隔1min读数1次,共测4次。对照管在煮沸5min后加入H2O2,并测定。等3支试管测定完后按下式计算酶活性。,数据记录,3.结果计算,式中,AS0加入煮沸酶液的对照管吸光值;AS1,AS2样品管吸光值;VT粗酶提取液总体积(25ml);V1测定用粗酶液体积(0.2ml);FW样品鲜重;0.1A240每下降0.1为1个酶活力单位;t从加过氧化氢到最后一次读数的时间(3min)。,四、注意事项凡在240nm具强烈吸收的物质对本实验有干扰。五、思考题分析所得结果,说明此浓度重金属对过氧化氢酶有无明显影响。,
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