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DNA的粗提取与鉴定,通过本节课的学习我们要 知道DNA提取原理 据原理设计DNA提取方法 能对DNA进行鉴定 掌握本实验的基本操作方法,DNA粗提取与鉴定,基础知识,提取DNA的方法,1、提取生物大分子的基本思路,选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子,2、生物大分子,主要指蛋白质、酶和核酸,3、提取DNA的基本思路,利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分,DNA提取原理,资料一：1 . DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 蛋白质在0.14mol/L中的溶解度大，在高盐浓度下溶解度小,2.DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 资料二: 洗涤剂瓦解细胞膜。 动物细胞吸水会胀破。,资料三 1.酶的专一性蛋白酶水解蛋白质而不会对DNA产生影响 。 2.蛋白质、DNA热稳定性不同。温度值为6080，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。,资料四:DNA的鉴定原理,当鉴定提取出的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定？,在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。,注意:二苯胺要现配现用,使用时取4ml二苯胺加一滴已乙醛摇匀再倒入待测样液,DNA的鉴定操作步骤,A、B试管中先分别加入物质的量的浓度为2mol/L 的NaCl溶液5ml。 其中A试管加入DNA丝状物，B不加丝状物。 各加入二苯胺4ml 试剂。 沸水中加热5min。 待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化。,实验设计,据资料二思考:如何使DNA从细胞里释放出来得到含有DNA的滤液? 利用什么原理可以使动物细胞或植物细胞破裂?,植物细胞可以加入一定量的食盐和洗涤 剂。 动物细胞吸水会胀破。这样能得到含 有DNA的滤液,食盐和洗涤剂的用途分别是什么?,食盐溶解DNA,洗涤剂溶解细胞膜,实验设计,根据资料提供的DNA理化性质，你能思考提取DNA的基本方法吗？,例：根据蛋白质、DNA热稳定性不同。温度值为6080，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性,方案一： 将滤液放在 的恒温水浴箱中保温1015min，注意严格控制温度范围，使 沉淀而 分子还未变性，可以将DNA与蛋白质分离。,6067,蛋白质,DNA,根据资料一思考,1.DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？,在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。 在溶解细胞中的DNA时，通常可选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中缓慢注入蒸馏水，以稀释NaCl溶液。,如何利用这一性质设计提取方案,方案二：通过控制 NaCl 的浓度去除蛋白质 30mL滤液2mol/NaCl40mL同方向搅拌，DNA溶解加入蒸馏水0.14mol/NaClDNA析出过滤得到过滤物放到2mol/LNaCl溶液中溶解DNA-NaCl溶解液,2采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？,将DNA和蛋白质进一步分离。,方案三： 直接向滤液中加入 ，反应1015min， 中的 能够分解蛋白质。 ？此方案利用了酶的什么特性？,嫩肉粉（木瓜蛋白酶）,嫩肉粉,蛋白酶,专一性,实验拓展 你还能作些什么探究？,交流,1.动物组织和植物在提取方法上有什么不同? 为什么? 2、用同样的方法提取时,哪种材料较好? 3、用同种材料同样方法时洗涤剂与NaCl比例不同，有没有影响？ 4用玻璃烧杯和塑料烧杯哪种效果好？ 5、你有什么疑惑吗？或者有更好的建议？,结果分析与评价,1、你提取出了白色丝状物吗？用二苯胺鉴定的结果如何？ 2如果鉴定结果不出现蓝色,讨论可能是什么原因. 3、你能分析出粗提取的DNA可能含有哪些杂质吗？ 4.哪些因素会影响实验效果?,从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，香蕉 33条，菠菜12条，大肠杆菌1条。你能分析你的实验结果吗？,
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