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课题1 菊花的组织培养,学习目标 熟悉植物组织培养的基本过程。 理解细胞分化、脱分化及再分化概念。 课题重点与难点 课题重点：植物组织培养的基本过程。 课题难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。细胞分化，脱分化，再分化。,细胞分化：,个体发育中，细胞在形态、结构和 生理功能上出现稳定性差异的过程。,特定时空下基因的选择性表达。,形成各种组织器官。,结果：,原因：,定义：,？什么是细胞分化？细胞分化的原因和结果？,一、基础知识,(一)植物的组织培养的基本过程,2.脱分化、再分化？愈伤组织（形成的？特点？）,愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。,脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。,再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫再分化。,2.植物组织培养的理论基础：,细胞全能性：具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的能力，即每个生物细胞都具有全能性。,细胞全能性表达条件：,2.一定的营养物质、激素和其他外界条件,1.外植体：从活植物体上切下进行培养的那部分组织或器官,二、植物组织培养的基本过程,离体器官、组织或细胞,脱分化,愈伤组织,再分化,丛芽、根,植物体,三、影响植物组织培养的因素?,不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不同组织培养难度不同,大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等,1、外植体的选取,2、培养基的配制(MS培养基),菊花组织培养应注意的问题？,讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？,答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐； 蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压； 甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞对特殊营养的需求。 微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养。,3、不同植物激素浓度，使用顺序和使用量,4、消毒 在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境原因：,5、pH、温度、光照 菊花： pH=5.8 温度控制在1822 每日光照12h,活动： 用自己的话把菊花组织培养的操作流程给描述出来?（提示：怎样配制MS培养基?外植体消毒应如何进行?接种、培养、移栽时应注意什么问题? ）,制备MS固体培养基,外植体消毒,接种,培 养,栽 培,四、实验操作,移 栽,冲洗酒精无菌水冲洗氯化汞无菌水冲洗至少三次之上,二、实验操作,（一）制备MS固体培养基,MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来制备,1、配置各种母液,无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存,激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液,用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量,2、配置培养基,定容, 调PH,培养基的分装,3、灭菌,分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌,1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝,（二）外植体消毒,2、消毒,流水冲洗,菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右, 酒精处理无菌水冲洗,用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70的酒精中摇动23次，持续67s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗,氯化汞无菌水冲洗至少三次之上,取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1的氯化汞溶液中12min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液,（三）接种,1、接种室消毒,2、无菌操作要求,操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。,3、材料的切取和接种,污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70的酒精喷雾使空气消毒， 酒精或新洁尔灭擦洗工作台并用紫外线照射20分钟,4、接种注意事项,每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种,外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜34块，菊的茎或叶68块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件,插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分,（四）培养,无菌箱中培养，定期消毒，保持适宜的温度，光照,（五）移栽,（六）栽培,幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花,移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日,1、打开封口膜,2、清洗转移,用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间,珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培,三、课题延伸,1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养,2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季,思 考,？,在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？,1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌） 2、外植体的消毒（酒精、氯化汞） 3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧） 4、无菌箱中的培养； 5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。,结果分析与评价,（一）对接种操作中污染情况的分析 （二）是否完成了对植物组织的脱分化和再 分化 （三）是否进行了统计、对照与记录 （四）生根苗的移栽是否合格,总结植物组织培养过程:,离体组织或细胞,植物体,细胞分裂素生长素,愈伤组织,芽,根,细胞分裂素生长素,细胞分裂素生长素,植物细胞培养,不需要光,需要光,基础知识,（一）植物组织培养的基本过程,植物的组织培养技术,不同的植物组织 同一植物的不同材料 营养、环境条件 植物激素,（二）影响植物组织培养的因素,1.制备MS固体培养基 1.1、配制母液 1.2、配制培养基 1.3、灭菌 2.外植体消毒 3.接种 4.培养 5.移栽 6.栽培,实验操作,本课题内容小结,菊花组织培养,基础知识,实验操作,植物体的组织培养,影响组织培养的因素,细胞分化 细胞全能性 组织培养过程,营养 激素 环境条件,MS固体培养基制备 外植体消毒 接种 培养 移栽 栽培,思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？,答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。,
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