XXX药品中残留溶剂内标法检测方法验证方案

XXX中甲醇、乙醇、正己烷、甲苯残留检测方法验证方案方案编号：姓名职位签名日期起草XXX质量研究员审核XXX质量副部长审核XXXQA批准XXX质量部长概述XXX是生产XX的起始物料，生产该物料工艺中使用的溶剂有：甲醇、乙 醇、正己烷、甲苯。根据ICH要求需要开发方法对这些残留溶剂进行检测，该方 法属于杂质定量分析，根据USP要求需要验证的内容有：系统适用性、专 属性、线性、范围、灵敏度、准确度、重复性、中间精密度、耐用性。1. 验证所需试剂甲苯AR级或更高级别甲醇AR级或更高级别乙醇AR级或更高级别正己烷AR级或更咼级别正庚烷AR级或更高级别N,N-二甲基甲酰胺（DMF） HPLC级或更高级别2. 试验所需仪器或设备气相色谱仪带有FID检测器气相色谱柱DB-624, 30 mX0.53 mm, 3.0 口 m石英毛细管柱高纯氮气量瓶移液管电子分析天平（十万分之一）3. 验证内容3.1系统适用性目的： 对由分析设备、实验操作、被分析供试品组成的完整的系统进行评估。 接受标准：计算对照溶液图谱中甲醇、乙醇、正己烷、正庚烷、甲苯峰面积的相对标准偏差 RSD%，均不得过5%。3.1.1溶液制备 见附件分析方法中对照溶液的制备。3.1.2分析待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。名称进样针数空白（溶剂）2针或更多对照品溶液（S）6针3.2专属性目的： 确保采用的方法能正确测定出被测物的特性接受标准： 空白溶液图谱中目标峰出峰位置附近无显著干扰峰。分离度测试溶液(RS)图谱中目标峰与相邻峰的分离度应不小于1.5。 3.2.1溶液制备 样品溶液 制成浓度约为20mg/ml的DMF溶液。称取1.0g样品置50ml量瓶 中，加溶剂约30ml使溶解，加溶剂定容至刻度，摇匀。标记为Sample。 乙醇定位溶液 制成乙醇浓度为0.08% (v/v)的DMF溶液。量取乙醇40 口 l 置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为Ethanol。 甲醇定位溶液 制成甲醇浓度为0.002% (v/v)的DMF溶液。量取甲醇50 口 l 置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为MCBY，再量取该溶 液1ml置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为Methanol。 正己烷定位溶液 制成正己烷浓度为0.002% (v/v)的DMF溶液。量取正己 烷50 口 l置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为HCBY，再 量取该溶液 1ml 置 50ml 量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为 Hexane。 甲苯定位溶液 制成甲苯浓度为0.002% (v/v)的DMF溶液。量取甲苯50 口 l 置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为TCBY，再量取该溶 液1 ml置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为Toluene。 正庚烷定位溶液制成正庚烷浓度为0.04% (v/v)的DMF溶液。量取正庚烷 20 口 l置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为Heptane。分离度测试溶液制成含供试品20mg/ml、其他各溶剂浓度同工作对照品溶 液的混合溶液。分别量取乙醇40 口 l、正庚烷20 口 l、MCBY溶液1ml、HCBY 溶液1ml、TCBY溶液1ml置已称有1.0g样品并加30ml溶剂溶解的量瓶中， 再加溶剂定容至刻度，摇匀，标记为RS。3.2.2分析待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。名称进样针数空白(溶剂)2针或更多Sample1针对照品溶液(S)6针Ethanol1针Methanol1针Hexane1针Toluene1针Heptane1针分离度测试溶液（RS）1针3.3线性 目的：测试在给定的范围内，待测物的响应值与供试品中被分析物的浓度成正比 例关系的程度。接受标准： 以甲醇、乙醇、正己烷、甲苯测试所得峰面积与正庚烷峰面积比值为纵坐标，浓度为横坐标分别计算线性相关系数r均应不小于0.950。3.3.1溶液制备量取乙醇6 ml、甲苯、甲醇、正己烷各0.5ml,置50ml量瓶中，加溶剂稀 释至刻度摇匀，作为线性储备溶液a。量取线性储备溶液a 0.5ml置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度摇匀，标记 为线性储备液b.取线性储备溶液a 1ml，内标溶液5ml置50ml量瓶中，加溶剂至刻度，摇 匀，标记为L-01。取线性储备溶液a 1.5ml，内标溶液10ml置100ml量瓶中，加溶剂至刻度, 摇匀，标记为L-02。取线性储备溶液a 0.5ml，内标溶液5ml置50ml量瓶中，加溶剂至刻度，摇匀，标记为L-03。取线性储备溶液a 0.5ml，内标溶液10ml置100ml量瓶中，加溶剂至刻度, 摇匀，标记为L-04。取线性储备溶液b 2ml，内标溶液1ml置10ml量瓶中，加溶剂至刻度，摇 匀，标记为L-05。取线性储备溶液b 1ml，内标溶液1ml置10ml量瓶中，加溶剂至刻度，摇 匀，标记为L-06。取线性储备溶液b 1ml，内标溶液2ml置20ml量瓶中，加溶剂至刻度，摇 匀，标记为L-07。标记乙醇（% W/W)正己烷（W/W）甲醇（%W/W)甲苯（ W/W）L-019.480.660.790.87L-027.110.4950.59250.6525L-034.740.330.3950.435L-042.370.1650.19750.2175L-050.9480.0660.0790.087L-060.4740.0330.03950.0435L-070.2370.01650.019750.021753.3.2分析待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析名称进样针数空白（溶剂）2针或更多对照品溶液（S）6针空白（溶剂）1针或更多L07、 L06、 L05、 L04、 L03、 L02、 L-01各1针3.4检出限 目的：确定试样中的被测溶剂能够被检出的最低量。接受标准：检出浓度不得高于限度的15%,信噪比应3.取线性项下的溶液，当某个溶液中的某个溶剂峰信噪比不小于3时，对应溶 液浓度即可作为该溶剂检出限浓度，即为检出限；如果L-07溶液中某个溶剂峰 信噪比大于10，则以L-07作为该溶液检出限溶液，不再另外稀释。3.5定量限 目的：确定试样中的被测溶剂能够被定量的最低量。 接受标准：检出浓度不得高于限度的50%，信噪比应10.当线性项下的某个溶液中的某个溶剂峰信噪比不小于 10，该溶液浓度即可 作为定量限浓度，即为定量限。如L-07溶液中某个对照品峰信噪比大于10，则 以线性中L-06作为定量限溶液，不再另外稀释。3.6方法准确度 目的：考察残留溶剂分析方法测定结果与真实值或参考值接近的程度。 接受标准： 单一回收率应在75%125%之间。 各浓度水平内的回收率RSD值应不大于20%。3.6.1溶液制备3.6.1.1空白样品溶液 取XXX样品一批，按附件方法供试品溶液制备精密称 取三份，制备成供试品溶液，分别标记为：U-1、U-2、U-3。3.6.1.2 50%工作浓度准确度测试溶液 量取乙醇20ml、正己烷0.5ml、甲苯 0.5ml、甲醇0.5ml置100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，再量取该0.5ml、 内标溶液25ml置250ml的量瓶中，加入溶剂稀释至刻度摇匀，作为50%浓度稀 释液。称取1.0g样品置50ml量瓶中，加50%浓度稀释液使溶解，再加溶剂定容 至刻度，摇匀。平行制备三份，标记为CR-01、CR-02、CR-03。3.6.1.3 100%工作浓度准确度测试溶液 量取乙醇20ml、正己烷0.5ml、甲苯 0.5ml、甲醇0.5ml置100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，再量取该1ml、 内标溶液25ml置250ml的量瓶中，加入溶剂稀释至刻度摇匀，作为100%浓度稀 释液。称取1.0g样品置50ml量瓶中，加100%浓度稀释液使溶解，再加溶剂定 容至刻度，摇匀。平行制备三份，标记为CR-04、CR-05、CR-06。3.6.1.4 150%工作浓度准确度测试溶液 量取乙醇20ml、正己烷0.5ml、甲苯 0.5ml、甲醇0.5ml置100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，再量取该1.5ml、 内标溶液25ml置250ml的量瓶中，加入溶剂稀释至刻度摇匀，作为150%浓度稀 释液。称取1.0g样品置50ml量瓶中，加150%浓度稀释液使溶解，再加溶剂定 容至刻度，摇匀。平行制备三份，标记为CR-07、CR-08、CR-09。名称150% Level100% Level50% Level乙醇4.74% (w/w)3.16% (w/w)1.58% (w/w)正己烷0.099% (w/w)0.066% (w/w)0.033% (w/w)甲醇0.1185% (w/w)0.079% (w/w)0.0395% (w/w)甲苯0.1305% (w/w)0.087% (w/w)0.0435% (w/w)XXX20 mg/mL20 mg/mL20 mg/mL正庚烷0.04% (v/v)0.04% (v/v)0.04% (v/v)3.6.2分析待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。按内标法测定准确度测试溶液中甲醇、乙醇、正己烷、甲苯的量，扣除空白残留,而后除以溶液配制时甲醇、 乙醇、正己烷、甲苯的加入量，即得回收率。名称进样针数空白（溶剂）2针或更多对照品溶液（S）6针空白（溶剂）1针或更多空白样品溶液（U-1、U-2、U-3）各1针准确度测试溶液（CR-01、CR-02、CR-03、CR-04、CR-05、CR-06、CR-07、CR-08、CR-09）各1针准确度测试溶液测得量-空白样品含量计算公式：回收率%二 - X100%对照加入量3.7精密度 由于实际供试品中目标残留溶剂有些能够检出，有些未检出，此时比较供试 品含量测定结果无法反映精密度。故以准确度项下 100%工作浓度测试溶液代替 供试品考察精密度。3.7.1重复性 目的：在相同的操作条件下，测试在较短时间间隔精密度。 接受标准：六份测试溶液所得图谱中甲醇、乙醇、正己烷、甲苯测得量的 RSD 值不得过20%。3.7.1.1溶液制备按附件中供试品溶液制备方法6.2.3项制备6份，标记为U-1、U-2、U-3、 U-4、U-5、U-6。3.7.1.2分析待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。名称进样针数空白（溶剂）2针或更多对照品溶液（S）6针空白（溶剂）1针或更多重复性测试溶液（U-1、U-2、U-3、U-4、U-5、U-6）各1针3.8.2 中间精密度目的：按照重复性实验的测定程序，评价在改变实验员、日期条件下不同仪器上 所得结果之间的精密度。接受标准：两个分析人员测得每批残留溶剂结果应一致：甲醇、正己烷、甲苯残留量绝 对差值应不得过0.1%;乙醇残留量绝对差值应不得过0.7%.3.8.2.1 溶液制备 取三批产品，由两个不同的分析员在不同日按供试品溶液 制备方法每批各制备两份溶液并采用不同仪器进行检测，按内标法计算甲醇、乙 醇、正己烷、甲苯的残留量。3.8.2.2分析 待色谱系统稳定后，两个分析人员各按下面序列表进样分析。名称进样针数空白（溶剂）2针或更多对照品溶液（S）6针空白（溶剂）1针或更多中间精密度测试溶液loti （U-1、U-2）各1针中间精密度测试溶液lot2 （U-1、U-2）各1针中间精密度测试溶液lot3 （U-1、U-2）各1针3.9 耐用性 目的：确认在测定条件有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度 接受标准：改变不同色谱条件后，系统适用性应符合要求。即对照溶液图谱中甲醇、乙醇、正己烷、正庚烷、甲苯峰面积的相对标准偏差RSD%值，均不得过5%。3.9.1溶液制备 按附件中6.2.2.4项对照溶液制备方法制备。3.9.2分析3.9.2.1不同载气流速将载气流速分别设置为4.8ml/min、5.2ml/min，其余色谱条件按附件中色谱 条件设置。待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。名称进样针数空白（溶剂）2针或更多对照品溶液（S）6针3.9.2.2 不同进样口温度将进样口温度设置为235C、245C，其余色谱条件按附件中色谱条件设置。 待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。名称进样针数空白（溶剂）2针或更多对照品溶液（S）6针3.9.2.3不同检测器温度将检测器温度设置为235C、245C，其余色谱条件按附件中色谱条件设置。待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。名称进样针数空白（溶剂）2针或更多对照品溶液（S）6针3.9.2.4 不同色谱柱采用两个批号的30 mX0.53 mmX3.0 口m石英毛细管柱，DB-624，其余色 谱条件按附件中色谱条件设置。待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。名称进样针数空白（溶剂）2针或更多对照品溶液（S）6针4.再验证周期若分析方法的改变超出方法验证范围，或产品生产工艺发生改变，需对分析 方法进行再验证。5.偏差及纠正措施该方法验证过程中，是否产生了偏差，若有，应将所出现的所有偏差和所采 取的纠正措施应记录在“偏差清单”中。对因发生偏差而导致的任何变更控制， 应有记录并在报告中加以说明。序号项目偏差内容产生的原因及采取的措施负责人完成日期6.附件1分析方法6.1色谱条件仪器Agilent 6890 GC带FID检测器，或等效仪器色谱柱DB-624， 30 mX0.53 mm， 3.0 口 m 石英毛细管柱载气氮气流速5.0ml/min柱温起始温度40C,以3C/min的升温速率升温至80C, 保持2min，再以30C/min的升温速率升温至200C， 保持10min。进样口温度240C检测器温度240C进样量1口l分流比5:16.2 溶液制备6.2.1溶剂 N,N-二甲基甲酰胺(DMF)6.2.2对照溶液6.2.2.1内标溶液 制备0.4% (V/V)的正庚烷的DMF溶液。精密量取0.4ml正 庚烷置100ml量瓶，加溶剂稀释至刻度，摇匀。6.2.2.2对照储备液1 量取乙醇20ml、正己烷0.5ml、甲苯0.5ml、甲醇0.5ml 置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。6.2.2.3对照储备液2量取1ml对照储备液1置100ml量瓶中加溶剂稀释至刻 度，摇匀。6.2.2.4工作对照溶液量取2ml对照储备液2、1ml内标溶液置10ml量瓶中， 加溶剂稀释至刻度，摇匀，标记为S。Solvent% V/V%W/W in sample密度(g/ml)Ethanol0.083.160.789nHexane0.0020.0660.660Methanol0.0020.0790.793Toluene0.0020.0870.8666.2.3供试品溶液 称取1.0g样品置50ml量瓶中，加溶剂约30ml使溶解，再 加内标溶液5ml，加溶剂定容至刻度，摇匀。平行制备两份，标记为U-1、U-2。6.3 系统适用性空白溶剂应无干扰，若有干扰，可积分时扣除空白。连续6针工作对照溶液 所得色谱图中各溶剂峰面积RSD值均应不得过5%。6.4 计算(Riu)(Du)(Vis)(dis)(100)C%=(Ris)(Wu)式中：dis为对照品的密度，g/mL(甲苯0.866g/mL；甲醇0.793g/mL；乙醇0.789g/mL；正己烷 0.660g/mL)；Riu为供试品溶液图谱中溶剂与内标物正庚烷峰面积的比值；Ris为工作对照溶液图谱中溶剂与内标物正庚烷峰面积的比值；Du为供试品溶液稀释倍数，50；Vis为工作对照溶液中溶剂的体积比，乙醇0.0008；正己烷0.00002；甲醇0.00002；甲苯0.00002.Wu为供试品的称量，g。6.5 限度标准甲苯不得过0.5% ； 正己烷不得过0.5%； 甲醇不得过0.5%；乙醇不得过7.0%。6.6数据处理测试方法数据报告残留溶剂(GC)系统适用性相对标准偏差RSD%保留整数溶剂残留量，%0.1%保留一位小数0.05% 且V0.1%0.1%9版本变更历史版本日期主要变更描述012016.8.25初次起草