资源描述
l生物安全性試驗評估對人體的保護以細胞或實驗動物為模式，以評估測試物質的毒理性質 及其與劑量的相關性；並預知其毒性程度、毒性標的器官、毒性復原性及毒性遲發性。用以建立臨床人體試驗的安全劑量及各項毒性反應指標及檢測參數。包裝材料醫療器材化學製品工業環境健康食品新藥開發安全性評估lPer-oral【p.o.;胃導管餵食（intragastric intubation）】lIncorporated with feed1)沙門氏菌逆突變分析(Ames test):使用已突變需靠外界提供組胺酸(histidine)才能生存之沙門氏菌(Salmonella typhimurium)試驗菌種，若試驗菌種能在缺乏組胺培養基中產生菌落，表示有致突變物質存在。I.單劑量急性毒試驗II.重覆劑量毒試驗III.致癌性試驗(Carcinogenicity)致畸胎性試驗(Teratogenicity)器官發生期，評估試驗物質對胚胎發育之影響及造成畸 胎之可能性。l動物:小鼠、大鼠；雌雄1:1共居一飼養箱中；每組共20對；兔子則為每組共12對。l投藥期:雌大鼠、小鼠為第6-15懷孕日 雌兔為第7-16懷孕日 觀察項目:1.於第20懷孕日(兔子則第29懷孕日)，以安樂死解剖。算出胚胎死亡、妊娠成立數目等。2.檢查產仔數、測生存胎兒稱重、性別判斷、檢查外表、內部器官等。3.新生兒進行骨骼與內臟組織檢查。繁殖試驗(Fertility and reproductive toxicity)懷孕前至懷孕初期，評估試驗物質對雌、雄兩性動物的生殖力及對受精卵運送著床的影響。l動物:小鼠、大鼠；雌雄1:1共居一飼養箱中；每組共20對。l投藥期:雄鼠(約5-6周齡)，每天投藥共60天，在進行交配期間內亦每天投藥，至交配成功為止。雌鼠為性成熟(約9-10周齡)，投藥兩周，然後進行交配，交配期間亦每天投藥，至交配成功後，持續投藥至胚胎器官形成期(約為6th懷孕日)l觀察項目:1.雄鼠交配成功後，以安樂死解剖，觀察睪丸與副睪。2.雌鼠懷孕第21天，以安樂死解剖，檢查卵巢黃體數目，胚胎著床與被吸收數目，及胚胎死亡率。l動物房環境與進出管控，動物房保持在溫度232、濕度5010%及光照12小時亮、12小時暗。l試驗期間之動物臨床觀察包括眼睛檢查、使用檢眼鏡檢查眼睛的外部及內部構造。l定期之飼料攝取、體重增減紀錄l試驗工作、藥物投與l血液檢驗:hematocrit、hemoglobin、erythrocyte count、total and differential leukocyte counts 及凝血因子(例如clotting time、prothrombin time、activated partial thromboplastin time)等之測量。l血清生化檢驗:血清生化檢驗內容包括電解質的平衡、醣類的代謝、及肝與腎功能等。l尿液檢驗:顯微鏡觀察尿沈渣，測量尿液之量、酸鹼值與比重，並測量尿液中之protein,glucose,ketones,bilirubin 與 occult blood等。l試驗期間進行臨床觀察，並記錄動物是否有臨床症狀或其他異常。l動物飼養期間如有死亡狀況時或飼養期間結束時得以安樂死人道處理（euthanasia）犧牲剖檢動物，並找出致死原因（cause of death）並計算動物存活率（survivability）。l屍體剖檢時，肉眼觀察及記錄動物的器官與組織之變化，並測量主要臟器重量。l器官絕對重量值(absolute value)與相對重量值(relative value)(v.s.brain)。l試驗結束後，將各組動物以乙醚麻醉犧牲後剖檢，取出臟器稱重後以10中性福馬林緩衝液固定保存，經組織固定、脫水及蠟浸潤處理，再以組織包埋機製作成組織蠟塊，組織蠟塊以旋轉式切片機切成厚度約為 2-4 m 的石蠟薄片，經H.E.（hematoxylin and eosin stain）染色、封片製作成組織病理切片後，由毒性病理師做顯微鏡觀察診斷。調節血脂功能腸胃道功能改善免疫調節功能調節血糖功能護肝功能（針對化學性肝損傷）改善骨質疏鬆功能抗疲勞功能延緩衰老功能不易形成體脂肪功能調節血壓功效 促鐵吸收功效輔助調整過敏體質牙齒保健功能進行至少人體實驗或動物實驗之一人體實驗1.必須委託國內外大學食品營養、醫藥等相關研究所、醫學中心或其他中央衛生主管機關認可之研究機構執行，需有醫師參與。2.每組人數 8人。3.實驗期4週。4.實驗採自體比較的方式，若其於實驗後比實驗前有明顯(P0.05)改善，則可認定該產品具有該項生理功能。動物實驗1.動物必須來自公立研究機構、公私立大學或其他中央衛生主管機關認可之實驗動物中心。2.每組動物8隻。3.建議實驗飼料應有2-3組高低不同的欲測保健食品劑量進行實驗。4.實驗期4-8週或是視實驗需要而定。5.實驗必須記錄每隻動物之體重改變與平均每日飼料攝取量。6.檢測項目：三酸甘油酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)值進行至少人體實驗或動物實驗之一若廠商所提產品的相關科學研究證據不明確或不足時，須同時進行人體實驗和動物實驗，以加強證據之可信度。改善胃腸功能必須明確具有以下五種功能指標之。1.促進消化吸收2.改善腸內細菌菌相3.幫助（改善）胃腸運動4.有助於胃黏膜之保護作用5.抑制幽門螺旋桿菌人體實驗1.必須委託國內外大學食品營養、醫藥等相關研究所、醫學中心或其他中央衛生主管機關認可之研究機構執行，需有醫師參與。2.每組人數 8人，且必須有控制組。3.實驗期2週。促進消化吸收促進消化吸收消化酵素活性的測定：如trypsin,chymotrypsin,amylase,lipase,leucine amino peptidase,disaccharidase。觀察食慾、食量、體重、血紅素、胃腸腹脹感、糞便形狀及次數、胃腸運動及小腸吸收等指標變化。等指標的變化。改善腸內細菌菌相改善腸內細菌菌相檢測益生菌：Bifidobacterium檢測有害（或無益）菌：Clostridium perfringens幫助（改善）胃腸運動，促進腸道正常機能之維持幫助（改善）胃腸運動，促進腸道正常機能之維持胃腸運動(活性碳、腸鋇計檢查或核子醫學檢查)、胃黏膜保護觀察糞便之乾重、粒數、水分及形狀有助於胃黏膜之保護作用，維持腸道正常機能（動物實驗）有助於胃黏膜之保護作用，維持腸道正常機能（動物實驗）離體實驗：培養鼠胃黏膜細胞，測定胃黏膜細胞之存活率（viability）的變化（MTT assay）。活體實驗：胃酸的分泌測定：雄性實驗絕食老鼠（24小時），胃部幽門結紮，再予以縫合復原，收集胃液並定量胃液體積，並以0.1N NaOH溶液滴定，求其實驗組及控制組之總酸度之變化若p0.05，即可判定測試食品具有胃黏膜保護作用之功能。減少胃內幽門螺旋桿菌（人體實驗）減少胃內幽門螺旋桿菌（人體實驗）篩去習慣特異及健康不良的參與者。進行尿素呼氣試驗（urea breath test），以得13CO2/12CO2比值（即UBT值）。就UBT值決定受試對象（建議UBT10O者）。進行至少人體實驗或動物實驗之一實驗動物：建議選用小鼠，常用的Balb/c或是B6小鼠皆可，6-8週大，雄鼠或雌鼠皆可，每組隻數為單一性別至少10隻。非特異性免疫反應脾臟或是淋巴結細胞增殖反應抗體分泌實驗細胞激素分泌實驗分離脾臟細胞及表面標記分析自然殺手細胞活性吞噬細胞活性特異性免疫反應OVA誘發的特異性抗體產生OVA-特異性的T細胞增殖反應OVA-特異性的細胞激素製造遲發性過敏反應（delayed-type hypersensitivity）檢測動物實驗 人體實驗方法與動物實驗相似進行至少人體實驗或動物實驗之一若廠商所提產品的相關科學研究證據不明確或不足時，須同時進行人體實驗和動物實驗，以加強證據之可信度。動物實驗實驗動物遺傳性自發高血糖動物（肥胖小鼠）化學物誘導糖尿病動物（STZ誘導）檢測項目1.空腹血糖值測定葡萄糖氧化酵素法(glucose oxidase assay)己糖激酵素法(hexokinase assay)葡萄糖去氫酵素法(glucose dehydrogenase assay)2.葡萄糖耐量測定(Glucose tolerance test)3.其他測定尿糖值、餐後血糖值、空腹及餐後血漿胰島素等1.空腹8小時後之葡萄糖耐量試驗或飲食耐量試驗2.醣化血色素(glycosylated Hb)測定比色法：醣化血紅素經氧化、水解使變成為5-hydroxymethylfufural，此物再和2-thio-barbituric acid產生顏色反應，比色而測得HbA1。電泳法：利用agarose gel、pH 6.3，進行血色素電泳分析。圓柱層析法：利用KCN和醣化血色素反應產生CN-醣化血色素，然後通過陽離子交換樹脂圓柱層析，在適當pH下，使醣化血色素先析出，以比色法測出各醣化血色素之百分比。陽離子交換高效液相層析法(HPLC法)：利用phosphate cyanide緩衝液、Bio-Rex 70陽離子交換樹脂及400 psi壓力，分離各種HbA1。3.一般生化測定血糖、血脂、血紅蛋白、總蛋白測定、尿酸和酮體等（應視產品特性及相關考量加測，以增強實驗報告之效力）。人體實驗只有動物實驗評估方法動物實驗實驗動物四氯化碳誘發大（小）白鼠慢性肝損傷實驗模式檢測項目1.血清：測定與肝傷害相關之成分或酵素活性GOT(AST)、GPT(ALT)、TG、Cholesterol2.肝臟：測定各種與抗氧化功能相關之成分或酵素活性Glutathione(GSH)Glutathione reductase(GSH Rd)Glutathione peroxidase(GSH Px)Superoxide dismutase(SOD)Catalase3.病理切片觀察進行至少人體實驗或動物實驗之一若廠商所提產品的相關科學研究證據不明確或不足時，須同時進行人體實驗和動物實驗，以加強證據之可信度。人體實驗每組人數30人，受試者宜為健康之成年人，男女各半（15人），女性受試者必須非懷孕、非授乳者。實驗得選擇下列鈣質生物利用率測定或骨質密度測定，能同時進行二者更佳。動物實驗宜採成熟或年老之大白鼠(rats)為實驗動物，性別視實驗需要而自行擬定，但以年老或卵巢切除之雌性動物為佳。進行股骨（femur）、脛骨（tibia）或其他適當骨骼的切片，計算其骨小樑數目；亦可測股骨或其他適當骨骼的骨質密度（質量/體積）、灰分與鈣質。進行至少人體實驗或動物實驗之一若廠商所提產品的相關科學研究證據不明確或不足時，須同時進行人體實驗和動物實驗，以加強證據之可信度。現階段健康食品的抗疲勞功能，乃針對經過運動測試後，延緩運動期間疲勞的發生或促進運動後疲勞消除之評估。人體實驗人數12人，受試者必須為健康之成年人(20-40歲)。每位受試者採自體比較的方式進行耐力運動能力測定。最大攝氧量(VO2 max)測試運動能力測定1.固定強度與時間之耐力運動能力測試延緩運動期間疲勞之評估、促進運動後疲勞消除之評估2.運動至力竭之耐力運動能力測定延緩運動期間疲勞之評估、促進運動後疲勞消除之評估四擇一血液分析血液分析 血氨、血乳酸、血糖、肌酸激酶、游離脂肪酸動物實驗810週齡之雄性小鼠、Wistar或SD大鼠1.游泳測試先進行游泳適應；末次餵食後3060分鐘，將鼠放入水溫271 的玻璃水缸中，強迫鼠進行游泳掙扎，直到體力消耗殆盡下沉溺死為止。為了縮短試驗時間，可在鼠背部綁上鉛絲進行負重游泳。負重量可依據動物月齡選擇體重的25%，在試驗前應禁食1224小時。(1)故以單隻游泳較佳(2)各組水溫應控制一致(3)鉛絲纏繞時的鬆緊應適宜。(4)如果鼠漂浮在水面四肢不動，觀察者可用木棒在其附近攪動。2.跑步機測試先進行跑步機適應；末次餵食後3060分鐘，在跑步機的末端設置電擊區。若鼠落入電擊區，而經過多次電擊仍無法起身往前跑即判定已經力竭。生化值測定生化值測定 血尿素氮試驗、肝醣試驗、血乳酸試驗動物實驗（生存及生化）與人體實驗都要做。若人體試驗沒顯著延緩衰老效果，但動物實驗看到有不錯的結果，建議可允許標示為在動物實驗表明有延長生命作用。生存實驗：利用生物的整個生存過程來觀察受試物對壽命的影響。小鼠生存實驗：選用小鼠12月齡小鼠，每組40隻，雌雄各半；大鼠生存實驗：選用大鼠18月齡大鼠，每組30隻，雌雄各半；果蠅生存實驗：選用果蠅Oregen品系。（不一定需進行）生化實驗老齡動物、過氧化損傷處理動物或國際認可之老化模型動物任選其一。過氧化損傷模型動物：D-半乳糖模型、輻照模型、溴代苯模型 受試者：未服用任何藥物身心健康之成年人，需包括部分老年人(六十五歲以上)，需有對照組與實驗組，每組不少於二十人。動物實驗人體實驗氧化指標測定項目：氧化修飾後蛋白羰基功能基含量、血漿蛋白含硫功能基及谷胱甘肽、DNA之8羥基-2-去氧鳥嘌呤核苷、以血球為模式評估抗氧化製劑對降低自由基氧化損傷、定量磷脂膽鹼過氧化氫（PCOOH）以及磷脂、TBARS含量。判定基準：六項氧化指標中，可任選三項做實驗，至少須要一組實驗為正反應(positive data)，並且不能有負相反應(negative data)。以上氧化指標之實驗方法，若有文獻或有其他科學方法佐證之，亦可採用。生化指標測定項目：超氧化物歧化酵素、葡萄糖六磷酸去氫酵素、觸酵素、麩胱甘肽過氧化酵素、麩胱甘肽還原酵素活性測定方法判定基準：五項生化指標中，至少須要三組實驗為正反應(positive data)，並且不能有負相反應(negative data)。以上生化指標之實驗方法，若有文獻或有其他科學方法佐證之，亦可採用。肥胖症可分為以下兩種：單純性肥胖(simple obesity)續發性肥胖(secondary obesity)本功能評估方法以單純性肥胖症為對象，評估保健食品之不易形成體脂肪功能。人體實驗BMI27之單純性肥胖者，無心臟、肝臟、腎臟、內分泌及其他器官之重大疾病，非精神病患者，沒有服用藥物。採用自身對照或組間對照方式，每組必須大於10人，必須採用單盲或雙盲方法。實驗期間至少4週。安全性指標（必測項目）：一般狀況、血液常規檢查、血液生化分析、飲食紀錄。安全性指標（選測項目）：血中酮體濃度及電解質平衡狀態、尿液、心肺功能檢查。功效性指標：BMI、腰臀比、體脂肪。動物實驗原理一：以高熱量飼料誘發實驗動物之肥胖症後，投與受試物。原理二：同時投與高熱量飼料與受試物。實驗動物：1012週齡之雄性SD、Wistar大白鼠或小白鼠。安全性指標（必測項目）血脂質、肝臟脂質、血糖、肝功能、腎功能。安全性指標（選測項目）血中酮體濃度、電解質平衡狀態。功效性指標（必測項目）體重、攝食量及食物利用率、體脂肪量功效性指標（選測項目）脂肪細胞數目及大小、脂肪組織之脂解酶活性、脂蛋白脂解酶(lipoprotein lipase)活性等。必須進行人體試食實驗若廠商所提產品的相關科學研究證據不明確或不足時，須同時進行人體試食實驗和動物實驗，以加強證據之可信度。原理：以受試物給予原發性高血壓動物，觀察受試物對高血壓動物模型的收縮壓與舒張壓指標的影響，評價受試物的調節血壓作用。實驗動物：原發性高血壓老鼠以SHR為主，對照組動物為WKY(Wistar Kyoto)老鼠。受試者：參加人體試食實驗之受試者為原發性高血壓患者，收縮壓介於130179 mmHg，舒張壓介於85109 mmHg，兩者有一項核實即可確診，且應本著自覺自願的原則。受試人數至實驗結束每組至少20人。並於受試前後作血液生化分析（如血球、血脂質、肝、腎功能、血糖、尿酸、電解質.等）。動物實驗人體實驗食物鐵可用率的評估方法分為體外（in vitro）測量法、動物實驗法與人體實驗法三種。實驗結果符合下列三項標準之一，即可評定為具有促進鐵吸收之功能：1.人體實驗結果獲得顯著的促進效應。2.體外消化-Caco-2細胞攝鐵實驗或大鼠血紅素再生實驗獲得顯著的促進效應。3.體外消化透析法配合體外消化-Caco-2細胞攝鐵實驗，或體外消化透析法配合動物實驗獲得顯著的促進效應。產品策略適用之評估方法改變鐵之形式1.人體試驗2.大鼠血紅素再生法3.體外消化-Caco-2細胞攝鐵法4.體外消化透析法體外消化-Caco-2細胞攝鐵法5.體外消化透析法大鼠血紅素再生法提供促進鐵吸收之成分1.人體試驗2.體外消化-Caco-2細胞攝鐵法3.體外消化透析法Caco-2細胞實驗去除抑制鐵吸收之成分1.人體試驗2.大鼠血紅素再生法3.體外消化-Caco-2細胞攝鐵法4.體外消化透析法Caco-2細胞攝鐵法5.體外消化透析法大鼠血紅素再生法輔助調整過敏體質功能評估，是減少過敏免疫反應減少過敏免疫反應之功能評估。1.動物實驗以過敏原致敏動物，再進行抗原特異性免疫反應的評估。2.人體的改善過敏的評估，可由正常人與過敏傾向的人分別進行。動物實驗-檢測項目血液抗體濃度、脾臟或是淋巴結細胞增生反應、細胞激素分泌實驗、呼吸道肺沖洗液之分析、肺功能測定或其他過敏相關有效之指標測定、自然殺手細胞活性、吞噬細胞活性過敏免疫反應指標：總IgE抗體與過敏抗原特異性IgE抗體之測定、過敏抗原特異性增生反應、過敏抗原特異性細胞激素分泌、周邊血液單核細胞分離培養，進行發炎介質分析、發炎細胞計數，如：嗜伊紅性白血球之數量及比例。臨床症狀評估：肺功能檢查、鼻炎、異位性皮膚炎、其他。人體實驗-檢測項目（與動物的評估近似）動物抗齲齒實驗或人體牙菌斑檢驗擇一即可。凡動物抗齲齒實驗有正向意義或人體牙菌斑檢驗之三項檢測中有兩種檢測結果為正向即可評估為具有牙齒保健功能之食品。原理：利用會在動物引發齲齒之細菌和蔗糖來引發齲齒，而用來評估測試食品之抗齲效果。分設實驗組及對照組，每組各40隻大鼠。測試食品餵飼20日後，各犧牲第一批五隻，以後每隔20日犧牲一批。犧牲後，將上下顎骨切下，清除周圍軟組織，並將之乾燥，使牙齒部位便於觀察及操作。實驗對象：不抽煙、無全身疾病、年齡為20至40歲之間且每毫升唾液中有105個以上之轉糖鏈球菌（Streptococcus mutans）之健康成人，每組10人以上。檢測牙菌斑酸鹹值之變化檢測牙菌斑堆積量之變化檢測牙菌斑內突變形鏈球菌數量之變化動物抗齲齒實驗人體牙菌斑檢驗謝謝聆聽 9、静夜四无邻，荒居旧业贫。22.7.3122.7.31Sunday,July 31,202210、雨中黄叶树，灯下白头人。12:55:4512:55:4512:557/31/2022 12:55:45 PM11、以我独沈久，愧君相见频。22.7.3112:55:4512:55Jul-2231-Jul-2212、故人江海别，几度隔山川。12:55:4512:55:4512:55Sunday,July 31,202213、乍见翻疑梦，相悲各问年。22.7.3122.7.3112:55:4512:55:45July 31,202214、他乡生白发，旧国见青山。2022年7月31日星期日下午12时55分45秒12:55:4522.7.3115、比不了得就不比，得不到的就不要。2022年7月下午12时55分22.7.3112:55July 31,202216、行动出成果，工作出财富。2022年7月31日星期日12时55分45秒12:55:4531 July 202217、做前，能够环视四周；做时，你只能或者最好沿着以脚为起点的射线向前。下午12时55分45秒下午12时55分12:55:4522.7.319、没有失败，只有暂时停止成功！。22.7.3122.7.31Sunday,July 31,202210、很多事情努力了未必有结果，但是不努力却什么改变也没有。12:55:4512:55:4512:557/31/2022 12:55:45 PM11、成功就是日复一日那一点点小小努力的积累。22.7.3112:55:4512:55Jul-2231-Jul-2212、世间成事，不求其绝对圆满，留一份不足，可得无限完美。12:55:4512:55:4512:55Sunday,July 31,202213、不知香积寺，数里入云峰。22.7.3122.7.3112:55:4512:55:45July 31,202214、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。2022年7月31日星期日下午12时55分45秒12:55:4522.7.3115、楚塞三湘接，荆门九派通。2022年7月下午12时55分22.7.3112:55July 31,202216、少年十五二十时，步行夺得胡马骑。2022年7月31日星期日12时55分45秒12:55:4531 July 202217、空山新雨后，天气晚来秋。下午12时55分45秒下午12时55分12:55:4522.7.319、杨柳散和风，青山澹吾虑。22.7.3122.7.31Sunday,July 31,202210、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。12:55:4512:55:4512:557/31/2022 12:55:45 PM11、越是没有本领的就越加自命不凡。22.7.3112:55:4512:55Jul-2231-Jul-2212、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。12:55:4512:55:4512:55Sunday,July 31,202213、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。22.7.3122.7.3112:55:4512:55:45July 31,202214、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。2022年7月31日星期日下午12时55分45秒12:55:4522.7.3115、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。2022年7月下午12时55分22.7.3112:55July 31,202216、业余生活要有意义，不要越轨。2022年7月31日星期日12时55分45秒12:55:4531 July 202217、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。下午12时55分45秒下午12时55分12:55:4522.7.31MOMODA POWERPOINTLorem ipsum dolor sit amet,consectetur adipiscing elit.Fusce id urna blandit,eleifend nulla ac,fringilla purus.Nulla iaculis tempor felis ut cursus.感 谢 您 的 下 载 观 看感 谢 您 的 下 载 观 看专家告诉
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