抗体工程制药

生物技术制药概括和研究进展 简述生物技术、生物药物和生物技术药物的概念生物技术：利用各种生命系统，如各种生物有机体（包括微生物和动、植物）、其组成部分（包括器官、组织、细胞和细胞器）以及细胞内含物（包括核酸、蛋白质、多糖以及各种次生代谢物）来生产特定的生物产品。（The use of living systems, such as organisms, tissue cultures, live cells, or cell enzymes, to make a defined biological product）生物药物：利用生物体内的初级或次级代谢产物、生物组织或整个生物体生产的用于预防、诊断或治疗疾病的医用品（来源于细菌、酵母、昆虫、植物和哺乳动物的活性物质）生物技术药物：利用DNA重组技术、单克隆抗体技术以及其他生物技术研制开发的蛋白质、抗体或核酸类药物 生物技术药物的种类及常见的生物技术药物是什么?生物技术药物可分为：重组蛋白药物、治疗性抗体、核酸药物和其他生物技术药物重组蛋白药物细胞因子类：干扰素类，白细胞介素类，集落刺激因子类，肿瘤坏死因子类，红细胞生成素，生长因子类激素类：胰岛素，生长激素，降钙素，心钠素和利钠多肽家族溶血栓类：链激酶，尿激酶，葡激酶，组织型纤溶酶原激活剂可溶性受体（指细胞膜受体胞外与配体结合的膜外区，由于多种原因自胞膜脱落但仍保留和配基结合能力的受体）：肿瘤坏死因子可溶性受体，白细胞介素1可溶 性受体，白细胞介素4可溶性受体血液代用品：人血清白蛋白，血红蛋白导向毒素类：细胞因子导向毒素，单克隆抗体导向毒素 生物技术药物与传统药物相比有哪些重要特点?特点：分子量大，分子结构复杂；存在种属特异性；用量小，活性强，相对其他药物副作用小、毒性低、安全性较高；不稳定，易变性，易失活，也易被微生物污染和酶解破坏；生产过程中，基因、生产菌株或细胞系以及生产条件的稳定性要求高，如发生变化将造成生物活性的变化；免疫原性：来源于动物的药物可在人中产生免疫和过敏反应；在人体内半衰期短，降解快，降解部位广泛；生物技术药物的批次间一致性和安全性的变化大于化学药品生物技术制药与传统制药相比的优点：可使活性蛋白或多肽在各种生物反应器中高效表达，可获得天然来源难以得到的生理活性物质，使之成为新药，如人生长激素，胰岛素等；可获得足够数量的生物活性物质以对其结构、功能和性质进行深入研究，从而改造天然生理活性物质，提高生理活性，开发更多的新型生理活性物质；如对白介素2和tPA的改造；通过对微生物的改造，可获得新型化合物，扩大药物来源，如红霉素衍生物的研究。 简述生物技术药物研发的热点?热点： 应用基因工程抗体抑制肿瘤， 应用导向IL-2受体的融合毒素治疗肿瘤， 应用基因治疗法治疗肿瘤，如应用-干扰素基因治疗骨髓瘤。 自身免疫性疾病 冠心病抗体工程制药u 简述抗体药物的概念和特点。概念：通过细胞工程和（或）基因工程方法制备的用于治疗的单克隆抗体、抗体片段、基因工程改造的抗体以及抗体免疫偶联物或抗体融合蛋白称为抗体工程药物，又称抗体药物（抗体的概念：由抗原诱导的淋巴细胞合成和分泌的具有特殊氨基酸序列和结构的免疫球蛋白分子）特点：特异性 与相关抗原的特异性结合 对肿瘤等靶细胞的选择性杀伤作用 多样性 抗原的多样性 抗体结构的多样性 抗体活性的多样性 免疫偶联物的多样性制备时的定向性 针对特定的靶分子定向制备抗体药物 根据需要选择抗体药物的“效应分子”u 什么是单克隆抗体？简述制备针对特异性抗原的单克隆抗体的基本过程。单克隆抗体：具有分泌抗体能力的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞经无性繁殖形成的细胞系分泌产生的活性、亲和力均相同的抗体（特点：抗体分子在Aa序列和空间构型上均相同，单抗具有高度的特异性，产生单抗的细胞系可长期传代并保存，可持续生产同一性质的抗体）制备针对特异抗原的单克隆抗体：一般选40-50%的PEG 进行诱导（细胞融合后培养液中有脾-脾、脾-瘤、瘤-瘤、脾、瘤等细胞）；常用的选择性培养基为HAT培养基（瘤细胞是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺乏株）将经融合的混合细胞用HAT培养液悬浮稀释；一般在含有饲养细胞的96孔板中进行；在融合后7d用HAT选择培养基培养，7-14d用HT培养基培养，14d后用完全培养基培养；选择培养后，只有杂交瘤细胞才能生存（但不是所有的杂交瘤细胞均能产生所需的抗体）；产生特定抗原的抗体的B细胞只占所有脾细胞的5左右；用抗原对所有小孔的培养上清进行抗体检测，筛出能产生目的抗体的杂交瘤细胞；将能产生目的抗体的培养小孔中的杂交瘤细胞进行稀释；可用有限稀释法和软琼脂法（有效稀释时，将细胞稀释液分加到96孔板中，使每个小孔在理论上只有一个细胞；软琼脂法）；培养后，取上清进行抗体检测，获得能产生目的抗体的杂交瘤细胞系；大量生产目的单克隆抗体 体外培养法，10 g/ml 动物体内诱生法， 5-20 mg/ml小结：1. 用特定的抗原免疫动物；2. 从脾中取出B淋巴细胞，2. 骨髓瘤细胞；3. 获得杂交瘤细胞；4. 培养并筛选能产生抗体的单个杂交瘤细胞；5. 优化培养目的杂交瘤细胞；6. 纯化单克隆抗体u 什么是基因工程抗体？有哪几种基因工程抗体？各种基因工程抗体的含义是什么？人鼠嵌合抗体：在基因水平上将鼠源性单克隆抗体的可变区和人源性抗体恒定区连接起来并在适当的宿主细胞中表达形成的抗体改形抗体：改形抗体又叫CDR移植抗体（CDR grafting antibody），将鼠单抗的CDR移植到人Ig分子的骨架区中换下其CDR序列而形成的抗体（具有鼠源性单克隆抗体的抗原结合特异性；抗体分子中鼠源部分只占很小的比例，可基本消除免疫原性）镶面抗体：在人鼠嵌合抗体的基础上将来自鼠单抗可变区中决定免疫原性的暴露于抗体表面的Aa用相应位置的人Ig的Aa代替而形成的抗体（理论基础：抗体表面所暴露的Aa位置和数量都很保守，不因种属和型别而改变；抗体表明暴露的Aa是鼠源可变区免疫源性的主要来源）小分子抗体：（优点：分子质量小，免疫原性低；易于进入实体瘤周围的微循环甚至进入实体瘤的内部；无Fc片段，不易与具有Fc受体的非靶细胞结合，用于免疫诊断时成像清晰，本底低；构建较简单，易于操作和改造；可在细菌中表达，易于大量生产；可与多种效应分子如毒素、前体药物转化酶等构建多种双功能抗体分子 缺点：多为单价抗体，与抗原结合活性相对较弱；半衰期短，能很快从血液中清除，从而可能影响治疗底有效浓度）u 简述抗体在制药中的重要用途和发展趋势抗体的主要用途： 器官移植排斥反应的逆转(Orthoclone) 肿瘤免疫诊断，肿瘤免疫显像，肿瘤导向治疗 哮喘、牛皮癣、类风湿性关节炎、红斑狼疮、急性心梗、脓毒症、多发性硬化症及其他自身免疫性疾病 分子瘤苗治疗肿瘤 多功能抗体（双特异抗体、三特异抗体、抗体细胞因子融合蛋白、抗体酶等）的特殊用途发展趋势： 寻找新的分子靶标 抗体人源化 抗体药物的高效化 抗体药物分子的小型化 抗体融合蛋白动物细胞制药u 什么是动物细胞制药？利用动物细胞体外培养和扩增来开发、测试和生产药物的工程技术，属于动物细胞技术（animal cell technology）或称动物细胞工程（animal cytotechnology)u 动物离体培养细胞根据培养特点可分为哪几种类型？根据获得途径不同又可分为哪几类？分类-贴壁依赖型（anchorage-dependent）：贴壁细胞 培养过程中依靠自身分泌的或培养基中的贴附因子才能在支持物表面生长、增殖 可来源于中胚层细胞，如成纤维细胞、心肌细胞、平滑肌细胞和成骨细胞；贴壁生长后呈成纤维细胞型形态，细胞呈梭形或不规则三角形 可来源于外胚层和内胚层，如表皮细胞、上皮细胞等；贴壁生长后呈上皮样细胞型形态，细胞呈扁平的不规则多角形-非贴壁依赖型（anchorage-independent）：悬浮细胞 可在培养液中悬浮生长，不依赖于支持物表面 如血液中的淋巴细胞 生产干扰素的Namalwa细胞 细胞呈圆形-兼性贴壁细胞 可贴附于支持物表面生长，也可在培养基中呈悬浮状态生长 如CHO细胞、小鼠的L929细胞 当贴附于支持物表面生长呈上皮或成纤维细胞型 当悬浮培养时呈圆形根据获得途径分：-原代细胞 直接将动物的组织、器官经破碎等处理后获得的细胞悬浮液 1g组织约有109个细胞 需要大量的动物，费钱费力 用得最多的如鸡胚细胞、兔肾或鼠肾细胞、以及淋巴细胞-二倍体细胞系 原代细胞经传代、筛选、扩增，从多种细胞成分中挑选并纯化出的某种具有一定特征的细胞系 染色体的核型仍然是2n 具有明显的贴壁依赖和接触抑制的特性 只有有限的增殖能力 无致瘤性-转化细胞系 细胞在某种转化过程中，常常由于染色体的断裂变成了异倍体，从而失去了正常细胞的特点，获得了无限增殖的能力 可自发；可用病毒或化学试剂诱导；还可以从肿瘤组织中获得u 用于动物离体细胞培养的培养基有哪几种？什么是无血清培养基？分类：天然培养基：血浆凝块；血清；淋巴液；胚胎浸液；羊水；腹水（早期使用，成分复杂，组分不确定，来源有限）合成培养基；氨基酸，维生素，糖类，无机盐，核酸前体，氧化还原剂，动物血清（提供生长因子和激素，提供贴附因子和伸展因子，提供可识别金属、激素、维生素和脂类的结合蛋白，提供脂肪酸，提供微量元素）（成分明确，组分稳定，可批量生产）无血清培养基：在合成培养基中加入不同种类的添加剂后而形成的适于大规模细胞培养的培养基。添加剂：激素和生长因子，结合蛋白，贴附和伸展因子，其他有利于细胞生长的因子和元素（提高了细胞培养的可重复性；减少了由血清带来的各种微生物的污染；可工厂化生产，供应充足、稳定；细胞产品易于纯化；避免了血清中某些因素对有些细胞的毒性；便于产品的检测）u 简述用于动物离体细胞培养的方法。-悬浮培养：将细胞自由地悬浮于培养基内生长增殖，适用于非贴壁依赖性细胞、兼性贴壁细胞（优点：操作简单，培养条件均一，传质和传氧较好，易于扩大培养；缺点：细胞的培养密度较低）-贴壁培养：将细胞贴附在某种基质上生长培养，适用于一切贴壁依赖型细胞，兼性贴壁细胞（优点：适用的细胞种类多，易采用灌流培养，可使细胞达到高密度；缺点：操作麻烦，需要合适的贴壁材料，培养条件不一，难控制）-贴壁-悬浮培养：分 微载体培养 包埋培养：细胞被包埋或包裹在凝胶载体中 微囊培养：将包埋的颗粒经液化处理而成为微囊 结团培养：以细胞本身作为基质，相互贴附后，再用悬浮的方式进行培养基因治疗和核酸药物u 什么是基因治疗？世界上第一个批准的用于基因治疗的药物是什么？基因治疗：通过改变病人遗传基因来治疗疾病的任何治疗方案或药物（“Any procedure intended to treat or alleviate disease by genetically modifying the cells of a patient” ）2004，重组人腺病毒注射液（商品名：今又生）u 简述各种基因治疗方法的含义。-基因置换（gene replacement）：用正常基因原位替换病变细胞内的缺陷基因（细胞内的缺陷基因不再存在；细胞完全恢复正常；最理性，技术上难）-基因矫正（gene correction）：将突变基因的突变基因序列矫正，正常部分保留（能使致病基因完全恢复；操作要求高，技术上难）-基因增补（gene augmentation therapy, GAT）：用于基因失活引起的疾病，缺陷基因仍存在，增加正常基因的拷贝数增加正常基因的表达产物使疾病细胞恢复正常功能主要用于单基因遗传病-基因失活（gene inactivation）：特异性地抑制有害基因的表达 核酶（ribozyme）降解或修复mRNA 三链寡核苷酸（triple-forming oligonucleotides）抑制基因转录 反义核酸（antisense oligos）反义DNA和反义RNA RNA干扰（RNAi）-免疫调节（immune adjustment）：将抗体、抗原或细胞因子的基因导入病人体内，通过改变病人免疫状态来预防和治疗疾病-其他，如增加肿瘤细胞对放化疗地敏感性u 简述用于基因治疗的病毒载体的种类和特点。-逆转录病毒（retroviruses）优点 基因组小并且简单 可稳定整合到宿主基因组 生物学特性研究清楚 可高效转入复制状态中的细胞 对宿主细胞无害缺点 随机整合 仅感染分裂中的细胞 病毒滴度低 可能会与其他有复制能力的病毒重组 插入容量有限-腺病毒（adenoviruses）优点 可感染分裂或不分裂的细胞 适于原位使用，尤其是肺 病毒滴度高 生物学特性清楚缺点 不与宿主基因组整合 只有短暂表达 病毒蛋白可在宿主中表达 可引起免疫反应 插入基因能力有限-单纯疱疹病毒（herpes simplex）-腺相关病毒（adeno-associated viruses, AAV）优点 基因组小 可特异性整合到人19号染色体 以人细胞作为宿主 无毒、无致病性缺点 未研究清楚 携带外源基因能力有限 需腺病毒辅助复制 难获得高滴度病毒基因重组生长激素u 生长激素是怎样和受体相互作用的？生长激素缺乏会导致什么后果？结合时，首先通过位点1和一个受体结合，然后再以位点2与另一个受体结合，导致两个受体同源聚合，从而激活hGH受体。顺序作用，必须先与1位点结合，才能与位点2结合1分子的hGH与2分子的受体结合当hGH浓度高而受体又不足时，所有受体均与位点1结合，hGH受体不能被激活，造成hGH作用拮抗。GH-N基因缺失，或调控异常使hGH分泌量减少，导致生长迟缓，GHD，侏儒u 简述重组人生长激素的种类和特点-192Aa的Met-rhGH：治疗效果同hGH，但有5080的人会产生免疫反应-用酶去除Met，或是置于分泌型启动子后，分泌过程中切去信号肽，累积于细胞周质中（rhGH）-聚乙二醇修饰（PEG化的rhGH）基因重组细胞因子u 什么是细胞因子？常见的细胞因子有哪些?细胞因子：由细胞分泌的(免疫细胞和某些非免疫细胞) ，经刺激而合成并分泌的一些生物活性分子，具有调控细胞生长分化、调节免疫功能和生理活性并参与病理反应的小分子蛋白质（660kDa）（A wide variety of intercellular (cell-to-cell communication) regulatory proteins (secreted low-molecular-weight) produced by many different cells in the body and ultimately control every aspect of body defense. Cytokines activate and deactivate phagocytes and immune defense cells, increase or decrease the functions of the different immune defense cells, and promote or inhibit a variety of innate body defenses.）四大种类细胞因子 干扰素（interferon, IFN） 白细胞介素（interleukin, IL） 集落刺激因子（colony stimulating factor, CSF） 肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF）u 常见的干扰素有哪几种？各种干扰素的特点是什么？I 型干扰素：可耐受PH2的酸溶液处理；或可耐受60C的温度处理。II型干扰素：不能耐受PH2的酸溶液处理；且不能耐受60C的温度处理。常见干扰素：INF-，INF-，INF-INF-INF-INF-位置9号9号12号基因产物大小188-189 Aa187 Aa166 Aa成熟产物大小165-166 Aa166 Aa143 Aa主要产生细胞B淋巴细胞、成纤维细胞、肿瘤细胞成纤维细胞、胚胎细胞、羊膜细胞、上皮细胞、肿瘤细胞活化T细胞、NK细胞 刺激产生因子RNA病毒、胞内微生物、其他细胞因子、内毒素等与INF-相同抗原、分裂素、葡萄球菌肠毒素B、其他细胞因子类型I 型I 型II型受体INF-/ RINF-/ RIFN-Ru 干扰素有哪些生物学功能？相应的重组干扰素可用于哪些疾病的治疗？干扰素的生物活性 抗病毒作用：可诱导细胞产生不同的抗病毒因子；可诱导多种细胞表达组织相容性抗原，促进细胞加工和提呈抗原，增强细胞毒性T细胞的毒性；能激活NK细胞、巨噬细胞并增强其抗病毒活性；可诱导氧化氮（NO）合成酶的表达，抑制病毒复制 抑制某些细胞的生长(cytostatic)，增殖：降低DNA合成；使细胞停留在Go/G1静止期 ；降低c-myc、c-fos等原癌基因转录水平；降低某些生长因子受体表达，如EGF R、胰岛素-I R和M-CSFR等；抑制成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞和造血细胞的增殖 抑制和杀伤肿瘤细胞：抑制肿瘤病毒的增殖；直接抑制肿瘤细胞增殖；改变肿瘤细胞表面的性能，诱发新抗原，从而易被免疫监视细胞识别而清除；通过免疫调节，增强机体抗肿瘤的能力，如激活巨噬细胞和增强NK细胞和ADCC效应(抗体依赖的细胞毒作用 )；抑制原癌基因的表达 免疫调节作用：高剂量的IFN-能抑制辅助T细胞和B细胞的增殖；IFN-可增加I 型MHC的表达，而对II型MHC的表达作用小；IFN-可显著增强抗原提呈细胞表达II型MHC抗原；IFN-增强抗原提呈细胞与T细胞的相互作用；IFN-通过诱导某些肿瘤细胞表达MHC抗原，促进CTL细胞对肿瘤细胞的杀伤，还可诱发巨噬细胞杀伤肿瘤-在病毒性疾病中的应用： -在血液病治疗中的应用：毛细胞白血病-在治疗实体瘤中的应用：-在治疗其他疾病中的应用：自身免疫性疾病，如类风湿关节炎；神经系统慢性炎症疾，多发性硬化病；罕见的吞噬细胞氧化代谢缺陷遗传病，慢性肉芽肿u 简述红细胞生成素的产生部位和调节红细胞生成素：肾脏分泌的调节红系祖细胞生长和分化的细胞因子（激素） 胎儿和新生儿，产生EPO主要器官是肝脏 成年期，约有90的EPO由肾脏产生，包括肾皮质细胞、肾小管细胞以及肾小管周围的毛细管的内皮细胞产生 在成年期肝脏也能产生少量的EPO，称为肾外性EPO 一些肿瘤细胞也能产生EPO，如肾细胞癌细胞、血管母细胞瘤细胞等调节： 动脉血氧分压，如贫血、心肺疾病和高原反应均可诱导产生 钴盐、锰盐和锂盐诱导产生 雄激素诱导产生u 红细胞生成素的生物学功能是什么? 维持红细胞造血细胞前体的存活并促进其分化 诱导前期成红细胞的前驱细胞和后期成红细胞的前驱细胞生长分化为成熟的红细胞 调节红细胞的血红色素化 调节外周血红细胞的数量u 重组人红细胞生成素生产细胞和适应症是什么？u 新型红细胞生成素有哪些？有哪些优缺点？EPO 模拟肽：采用噬菌体表面展示技术在肽库中筛选与Epo受体结合并能促进红系造血的肽分子称Epo的模拟肽高度糖基化EPO：将天然人Epo 的五个氨基酸改变(Ala30Asn , His32Thr , Pro87Val , Trp88Asn ,和Pro90Thr) ,同时在第30 和第88 位氨基酸位置引入了两个新的N2糖基化位点,其产物称为Darbepoetin (或NESP)Epo二聚体：将两个Epo以长17 个氨基酸的柔性接头A( GGGGS)3T相连或使用含9 个氨基酸的接头( GlySerGly4SerGlyAla) 连接两个Epo 分子双因子融合蛋白：GM-CSF/ Epo ，IL23/ Epo ，Epo/ Tpou 什么是白细胞介素？已上市的重组人白细胞介素是哪些？主要适应症分别是什么？白细胞介素：由各种白细胞产生的，介导细胞之间相互作用的细胞因子，主要由激活的淋巴细胞分泌-IL-2，用于肿瘤治疗，抗感染治疗，先天性和后天性免疫缺陷症-IL-11，用于肿瘤化疗后导致的血小板减少症，治疗急性骨髓抑制正在研究中，治疗银屑病的临床试验取得初步疗效u 什么是集落刺激因子（colony stimulating factor, CSF）？主要又哪几类？又称髓系细胞造血因子,是造血细胞在体外培养过程中形成不同细胞系克隆时起促进作用的重要因子，是骨髓中髓系造血细胞生存、生长, 分化不可缺少的分子。可维持细胞存活和细胞膜的完整，刺激造血细胞增殖，引导造血细胞分化定型，刺激终末细胞的功能活性分类： 粒细胞集落刺激因子（granulocyte CSF, G-CSF） 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage CSF, GM-CSF) 巨噬细胞集落刺激因子（macrophage CSF, M-GSF) 多能集落刺激因子（muti-CSF/IL-3） 红细胞生成素（erythropoietin, EPO) 血小板生成素（thrombopoietin, TPO） 干细胞因子（stem cell factor, SCF) 白血病抑制因子（leukaemia inhibitory factor,LIF) fms样tyr激酶-3 配体（fms-like tyrosine kinase-3 ligand, FL)u G-CSF、GM-CSF和M-CSF各有哪些生物活性？G-CSF 促进骨髓造血细胞增殖分化形成粒细胞集落 诱导中性粒细胞终末分化 增强中性粒细胞的功能GM-CSF 能维持和促进红系、巨核系、粒单系以及嗜酸系等造血前体细胞的存活和增殖分化 影响成熟髓系细胞的功能 低浓度就可维持细胞存活，但高于该浓度100的浓度才能促进细胞增殖分化M-CSF 刺激巨噬细胞的前体增殖分化为巨噬细胞 诱导巨噬细胞产生GM-CSF、G-CSF、TNF、前列腺素和活性氧 增强巨噬细胞抗白色念珠菌和抗肿瘤的活性 对滋养层细胞、小胶质细胞和成骨细胞有调节作用 在器官发生和组织重建中起重要作用u 简述重组G-CSF、GM-CSF和M-CSF作为生物技术药物在临床上的应用。G-CSF：治疗各种原因引起的中性粒细胞减少症（肿瘤放化疗后的辅助用药；自体骨髓移植；骨髓再生不良综合症（MDS）引发的嗜中性粒细胞的减少和缺乏症；再生障碍性贫血伴随嗜中性粒细胞的减少和缺乏症；重症慢性粒细胞减少症；AIDS）GM-CSF：主要应用于各种原因引起的白细胞减少症（肿瘤病人放、化疗所致的造血障碍；骨髓移植；治疗骨髓异常增生综合症；再生障碍性贫血；艾滋病）M-CSF：主要用于肿瘤放化疗后加速造血功能的恢复，增加血液中单核细胞的水平u 什么是肿瘤坏死因子？肿瘤坏死因子的类型和生物活性是什么?TNF-生物活性： 参与炎症反应 当以TNF刺激单核细胞和中性粒细胞时，会产生吞噬细胞溶解，使这些细胞与内皮细胞黏附，产生超氧离子自由基 TNF可诱导黏附分子表达，促进白细胞黏附于血管内皮细胞，使白细胞向炎症部位渗出 诱导其他炎性细胞因子的合成 具有组织退化和放大炎症的作用 抗肿瘤作用 在体内和体外均可杀死某些肿瘤细胞或抑制其增殖 敏感性因肿瘤细胞株不同而有较大差异 使溶酶体稳定性降低，引起细胞溶解 改变靶细胞的糖代谢，使细胞内pH降低，导致细胞死亡 通过TNF对机体免疫功能的调节作用，促进T细胞及其他杀伤细胞对肿瘤细胞的杀伤 作用于血管内皮细胞使肿瘤组织发生出血、缺氧坏死 抗感染 抑制疟原虫生长、抑制病毒复制（腺病毒、疱疹病毒）、抑制病毒蛋白合成、抑制病毒颗粒产生和感染性以及杀伤病毒感染细胞 参与骨吸收和组织重建 促进细胞增殖和分化 促进c-myc和c-fos等原癌基因的表达 促进髓样白血病细胞向巨噬细胞分化TNF- 的生物活性：与TNF-的生物活性极为相似，可能与分子结构的相似性及受体的同一性有关，但两者的差异也在得到重视基因重组激素u 糖尿病的主要类型及各类型的相应特点糖尿病是身体内不能合成胰岛素，或合成胰岛素量相对少，或不能正常利用胰岛素，而造成的疾病。- I型糖尿病（T1DM）：胰腺的细胞受到选择性的破坏而引起- II型糖尿病（T2DM）：因胰岛素抵抗和细胞功能有缺陷而引起u 糖尿病的主要症状和重要并发症主要症状高血糖，重要并发症：脑梗死，糖尿病性视网膜病变，边缘性牙周炎，心肌梗塞，糖尿病性肾病，中枢神经系统病变，周围神经的病变。特别是病人的足部，更易发生皮肤麻木、针刺感、疼痛或灼痛感u 简述胰岛素受体调节和胰岛素抵抗胰岛素作用机理：（受体调节）受体的数量多少和亲和力的高低受进食、运动、细胞分化的不同阶段以及某些病理状态、激素和药物等影响；受体数与血液中的胰岛素的含量成反比；胰岛素水平高时，靶细胞的受体数减少，与胰岛素结合的亲和力下降，如果时间过长，将导致胰岛素抵抗；如果血中胰岛素水平下降，靶细胞的受体数增加，同胰岛素结合的亲和力提高u 医用胰岛素制剂的种类和优缺点-短效胰岛素制剂，起效快，作用时间短，一般可皮下、肌肉和静脉注射-中效胰岛素制剂，仅供皮下注射，注射后1.5h-2.5h内起效，2h-15h达高峰，维持时间18h-26h-长效胰岛素制剂，仅供皮下注射，注射后4h-8h内起效，8h-24h达高峰，维持时间24h-36h蛋白质工程改造重组人胰岛素-速效胰岛素：向2聚体形成面引入相同电荷，使单体间互相排斥从而阻碍二具体的形成-慢吸收长效胰岛素：改变等电点，增加胰岛素分子带正电的氨基酸残基，将其等电点升高到接近中性，使其在组织中的溶解度降低-特殊药代动力学的胰岛素-超效胰岛素，改造与受体的亲和力酶工程制药u 酶工程和酶工程的概念是什么？酶：生物体活细胞产生的催化特定化学反应的蛋白质或蛋白质复合物（An enzyme is a protein, or protein complex, that catalyzes a chemical reaction ）酶工程（Enzyme Engineering）：酶学和工程学相互渗透结合、发展而形成的新型的技术科学，主要研究酶的催化特性、动力学特性、可固定化特性以及将相应原料大规模地生产获得有用物质u 什么是固定化酶和固定化细胞？怎样制备？-固定化酶：限制或固定于特定空间位置的酶，即经物理或化学方法处理后，使酶不易流失，而催化作用不变 物理吸附法：通过物理吸附作用将酶吸附于不溶性载体（活性炭、氧化铝、硅酸等）上的方法 离子结合法：酶通过离子键结合于具有离子交换基的水不溶性载体（多糖类离子交换剂、高分子离子交换树脂）上 共价结合法：酶以共价键结合于水不溶性载体（结构疏松、表面积大、有较高的机械强度、具有在温和条件下可与酶的侧链基团进行共价偶联反应）上 交联法:利用双功能或多功能试剂在酶分子之间或微生物细胞间或酶分子和载体之间进行交联反应以共价键制备固定化酶的方法（交联剂：戊二醛OHC-(CH2)3-CHO+酶或细胞） 包埋法：将聚合物的单体和酶溶液混合后，再借助聚合促进剂的作用进行聚合，将酶包埋于聚合物（胶格包埋、微囊包埋、脂质体包埋）中的固定方法-固定化细胞：将细胞限制或固定于特定空间位置 载体结合法：物理吸附，离子结合，共价结合 交联法 包埋法：胶格型，微囊型，脂质体型 热处理法u 简述手性药物的概念。手性药物（chiral drug）：指其分子立体结构和它的镜像彼此不能够重合，互为镜像关系而不能重合的一对药物，称为对映体，对映体各有不同的旋光方向（左旋、右旋、外消旋）具有手性的药物，它的两个对映体在体内以不同的途径被吸收、活化或降解。所以在体内的药理活性、代谢过程及毒性存在着显著的差异u 固定化酶的生物反应器有哪些？ 间隙式搅拌罐反应器 连续流动搅拌罐反应器 填充床反应器 流化床反应器 循环反应器 连续流动搅拌罐超滤反应器u 酶基因的遗传修饰有哪些方法？疫苗u 简述疫苗的种类和相应的含义疫苗（Vaccine）：细菌，病毒，螺旋体，立克次体和类毒素等抗原性生物制品统称为疫苗。（A vaccine is a substance that stimulates an immune response that can either prevent an infection or create resistance to an infection.）分类：-传统疫苗： 减毒活疫苗：用人工定向变异或从自然界筛选得到的毒力高度减弱或基本无毒的病原微生物制成的预防制剂 死疫苗：选用免疫原性强的微生物标准株经大量培养后，用物理或化学方法将其杀死或灭活而制成的预防制剂 类毒素：细菌外毒素经0.3-0.4%甲醛处理，使其毒性减弱而保留其免疫原性-新型疫苗 亚单位疫苗（Subunit Vaccine）：去除病原体中与激发保护性免疫无关的甚至有害的成分，保留有效免疫原成分制作的疫苗 合成肽疫苗 (synthetic peptide vaccine)：将具有保护性免疫力的人工合成肽与适当载体结合后，再加入佐剂制成的疫苗。 基因工程疫苗：-DNA 疫苗（DNA Vaccine）：用病原体中编码有效免疫原的基因构建到载体中后直接免疫机体，转染宿主细胞，使其表达保护性抗原，从而诱导机体产生特异性免疫的疫苗-重组抗原疫苗(recombinant antigen vaccine)：利用DNA重组技术制备的只含保护性抗原的纯化疫苗-重组载体疫苗(recombinant vector vaccine)：将编码病原体有效免疫原的基因构建到载体（减毒的病毒或细菌疫苗株）基因组中，接种后，随疫苗株在体内的增殖，大量所需的抗原得以表达。如果将多种病原体的有关基因插入载体，则成为可表达多种保护性抗原的多价疫苗-转基因植物疫苗：用转基因方法，将编码有效免疫原的基因导入可食用植物细胞的基因组中，免疫原即可在植物的可食用部分稳定的表达和积累，人类和动物通过摄食达到免疫接种的目的u 乙肝疫苗对防治乙肝的意义在婴儿时接受乙肝疫苗的接种是目前预防HBV 引起的疾病的最有效手段，-根据免疫程序,几乎所有的儿童都会受到保护,甚至可能是终生免疫,不再需要加强免疫。-由于接种乙型肝炎疫苗可以预防由乙型肝炎病毒(HBV)感染导致的原发性肝癌,使乙型肝炎疫苗成为第一个可用于预防人类癌症的疫苗-由于丁型肝炎病毒(HDV)必须在HBV感染的基础上才能感染,HDV 必须在HBV复制的基础上才能复制,从而接种乙型肝炎疫苗也可同时预防丁型肝炎抗凝溶栓药物血栓的结构：非均质性，含血小板、白细胞、红细胞和血纤维蛋白原。生理止血的机制：v 受损局部及附近血管收缩，血流减缓，内皮下组织暴露，激活血小板和血浆中的凝血系统；v 激活的血小板粘附内皮下组织，聚集形成止血栓；v 凝血系统激活使血浆中可溶的血纤维蛋白原变成不溶的血纤维蛋白多聚体。v 生理抗凝活动和血纤维蛋白溶解活性第一代溶栓剂-链激酶（streptokinase，SK） 特性：47kD，非酶糖蛋白； 来源：型溶血性链球菌； 作用方式：与纤溶酶原形成1:1复合物，使其构象变化被激活，成为纤溶酶； 优点：溶栓效果较好（心梗死亡率从81下降到23）； 缺点：细菌蛋白，重复使用会发生过敏反应；非特异性，全身性纤溶，出血倾向。-尿激酶（urokinase，UK） 来源：尿 种类：高分子量（MW54000），低分子量（MW33000） 优缺点：无抗原性；无血纤维蛋白特异性，易诱发全身纤溶亢进。第二代溶栓剂：-甲氧苯甲酰纤溶酶原链激酶复合物（anisoylated plasminogen streptokinase activator complex，APSAC） 优点：酰化剂起保护作用，使APSAC在体内不受纤溶酶原抑制剂作用，半衰期长； 缺点：抗原性-组织型纤溶酶原激活剂（t-PA） 来源：血管内皮细胞； 组成：527个氨基酸，单链丝氨酸蛋白酶； 作用方式：切割纤溶酶原分子Arg560-Val561，得到纤溶酶；催化活性部位His322、Asp371和Ser478； 结构：Arg275Ile276处断裂成双链，N端重链包括4个结构功能区（F区、E区、k1区、k 2区）； 优点：血纤维蛋白特异性，且血纤维蛋白的存在可大大提高t-PA 激活纤溶酶原成为纤溶酶的能力。-尿激酶原（proUK，也称单链尿激酶scu-PA） 组成：411个氨基酸，MW54000； 特性：丝氨酸蛋白酶家族成员，半衰期8min； 优点：相对于UK而言具有血纤维蛋白专一性，降低了全身性纤溶引发严重出血的危险。第三代溶栓剂目的：提高特异性、半衰期和溶栓效率；种类： 突变体：改变现有溶栓剂分子结构，提高对血纤维蛋白的亲和力，延长体内半衰期；例如E-6010； 嵌合体：选择性的联接纤溶酶原激活剂的不同功能区，通过优化组合提高其特异性，减少副作用；例如将纤溶酶原的血纤维蛋白结合区与t-PA的催化蛋白酶区结合形成重组嵌合体； 导向溶栓剂：用化学偶联法和基因工程技术将单抗与t-PA等溶栓剂联结获得高特异性、高溶栓效率的溶栓剂。植物细胞制药代谢组（metabolome）是指一个特定细胞或组织中所有代谢产物的集合；