瘦肉精残留及其检测技术重庆PPT学习教案

会计学1瘦肉精残留及其检测技术重庆瘦肉精残留及其检测技术重庆第1页/共62页第2页/共62页第3页/共62页第4页/共62页第5页/共62页一、畜牧水产养殖业及动物源性产品简况数据来源：中国统计年鉴（2011）第6页/共62页数据来源：中国统计年鉴（2011）第7页/共62页第8页/共62页第9页/共62页提示：目前发生的中毒事件都是由克伦特罗引起的。第10页/共62页第11页/共62页第12页/共62页11种受体激动剂的结构式第13页/共62页第14页/共62页肉色鲜红，脂肪层极薄，往往是皮贴着瘦肉，瘦肉丰满，后臀肌肉饱满突出，但肥肉和瘦肉明显分离，组织疏松。健康正常猪肉肉色淡红，肉质弹性好，组织紧密，肥瘦交替，肉皮与瘦肉之间脂肪（膘）厚约。第15页/共62页第16页/共62页第17页/共62页猪以20ppm莱克多巴胺添加浓度饲喂后残留消除情况强志懿，中国农业大学硕士论文注：给药饲喂7天，数据来源于美国礼来公司第18页/共62页注：给药30天，数据来源于Food Chemistry,127(2011)327332第19页/共62页第20页/共62页（一）国外残留限量标准国家国家药物药物靶动物靶动物残留限量（残留限量（g/kg）欧盟克伦特罗牛肌肉：0.1；肝脏：0.5；肾脏：0.5；牛奶：0.05马肌肉：0.1；肝脏：0.5；肾脏：0.5美国莱克多巴胺牛肝脏：90；肌肉：30猪肝脏：150；肌肉：50第21页/共62页（一）国外残留限量标准国家国家药物药物靶动物靶动物残留限量（残留限量（g/kg）日本克伦特罗牛肝脏：0.6；肌肉：0.2猪肝脏：不得检出；肌肉：不得检出日本莱克多巴胺牛肝脏：40；肌肉：10猪肝脏：40；肌肉：10注：其他受体激动剂未见限量标准第22页/共62页2012年7月5日，CAC第35届年会上69票赞成，67票反对，通过了莱克多巴胺在组织中的最大残留限量。牛肉和猪肉，10ppb，牛肝和猪肝，40ppb，牛肾和猪肾，90ppb。第23页/共62页欧盟、中国、俄罗斯、印度等仍然坚持反对。第24页/共62页（二）我国残留限量标准第25页/共62页第26页/共62页第27页/共62页序号序号兽药及其它化合物名称兽药及其它化合物名称禁止用途禁止用途禁用动物禁用动物1-兴奋剂类：克仑特罗、沙丁胺醇、西马特罗及其盐、酯及制剂所有用途所有食品动物2性激素类：己烯雌酚及其盐、酯及制剂所有用途所有食品动物3具有雌激素样作用的物质：玉米赤霉醇、去甲雄三烯醇酮、醋酸甲孕酮及制剂所有用途所有食品动物4氯霉素、及其盐、酯（包括：琥珀氯霉素）及其制剂所有用途所有食品动物5氨苯砜及制剂所有用途所有食品动物6硝基呋喃类：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃苯烯酸钠及制剂所有用途所有食品动物7硝基化合物：硝基酚钠、硝呋烯腙及制剂所有用途所有食品动物8催眠、镇静类：安眠酮及制剂所有用途所有食品动物9林丹（丙体六六六）杀虫剂所有食品动物10毒杀芬（氯化烯）杀虫剂、清塘剂所有食品动物第28页/共62页序号序号兽药及其它化合物名称兽药及其它化合物名称禁止用途禁止用途禁用动物禁用动物11呋喃丹（克百威）杀虫剂所有食品动物12杀虫脒（克死螨）杀虫剂所有食品动物13双甲脒杀虫剂水生食品动物14酒石酸锑钾杀虫剂所有食品动物15锥虫胂胺杀虫剂所有食品动物16孔雀石绿抗菌剂、杀虫剂所有食品动物17五氯酚酸钠杀螺剂所有食品动物18各种汞制剂包括：氯化亚汞（甘汞）、硝酸亚汞、醋酸汞、吡啶基醋酸汞杀虫剂所有食品动物19性激素类：甲基睾丸酮、丙酸睾酮、苯丙酸诺龙、苯甲酸雌二醇及其盐、酯及制剂促生长所有食品动物20催眠、镇静类：氯丙嗪、地西泮、及其盐、酯及制剂促生长所有食品动物21硝基咪唑类：甲硝唑、地美硝唑及其盐、酯及制剂促生长所有食品动物第29页/共62页第30页/共62页第31页/共62页1、老药新对象、老药新对象克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇用于牛羊兔禽等。克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇用于牛羊兔禽等。2、新药老对象、新药老对象苯乙醇胺苯乙醇胺A用于猪；在国家残留监控中，检测猪肉、猪肝用于猪；在国家残留监控中，检测猪肉、猪肝9种激动剂，猪尿检测种激动剂，猪尿检测3种。种。3、非饲料添加使用、非饲料添加使用（1）添于垫料，经皮肤吸收；）添于垫料，经皮肤吸收；（2）屠宰前使用，注水增重。）屠宰前使用，注水增重。第32页/共62页五、残留检测技术五、残留检测技术残留分析一般程序残留分析一般程序 先用快速检测产品（试剂盒或试纸条）进行筛查，可疑先用快速检测产品（试剂盒或试纸条）进行筛查，可疑阳性样品再用仪器分析方法尤其是色质联用检测方法加以确阳性样品再用仪器分析方法尤其是色质联用检测方法加以确证。美国、欧盟和日本等发达国家均按此程序进行。证。美国、欧盟和日本等发达国家均按此程序进行。第33页/共62页10-1210-910-610-3紫外/可见分光光度法放射免疫测定法/酶免疫测定法色质联用分析放射受体分析气相色谱(ECD/NPD)气相色谱(FID)高效液相色谱(FLD/UVD)时间分辨免疫/化学发光免疫荧光分光光度法微生物测定法比色法10-15第34页/共62页气相色谱法（气相色谱法（GC）高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLC）超高效液相色谱法（超高效液相色谱法（UPLC）气谱气谱-质谱法（质谱法（GC-MS）气谱气谱-串联质谱法（串联质谱法（GC-MS/MS）液谱液谱-质谱法（质谱法（LC-MS）液谱液谱-串联质谱法（串联质谱法（LC-MS/MS）其他新技术，如飞行时间质谱其他新技术，如飞行时间质谱等等第35页/共62页兽药残留实验技术规范，农牧发20031号瘦肉精仪器检测方法（HPLC、LC-MS/MS等）检测限为。第36页/共62页精确度高假阳性率低较高的灵敏度重现性好效率较高准确度高优点第37页/共62页需要专业操作人员仪器难以普及成本高操作繁琐缺点第38页/共62页酶联免疫吸附测定法酶联免疫吸附测定法化学发光免疫测定法化学发光免疫测定法荧光偏振免疫测定法荧光偏振免疫测定法量子点标记荧光测定法量子点标记荧光测定法时间分辨荧光免疫测定法时间分辨荧光免疫测定法胶体金免疫测定法胶体金免疫测定法放射免疫测定法放射免疫测定法微生物抑制测定法微生物抑制测定法生物传感器生物传感器生物芯片生物芯片（二）快速检测技术（二）快速检测技术第39页/共62页基本原理在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体与固相载体表面的抗原或抗体起反应，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量有一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。第40页/共62页1、加入待测物；2、加入抗体；3、加入酶标二体；4、加入底物；5、加入终止液目前最常用方法为间接竞争ELISA法，其他还用直接法、夹心法等。第41页/共62页第42页/共62页目前市场上兽药等残留检测ELISA试剂盒品种有数十个，克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等试剂盒产品非常成熟。96孔酶标版样品稀释液标准溶液底物溶液终止液酶标二抗工作液浓缩洗涤液抗体工作液第43页/共62页药物药物样品样品检测限（检测限（ppb）检测时间检测时间克伦特罗尿液、组织、血清、饲料0.1、0.1、0.2、501-2h莱克多巴胺尿液、组织、血清、饲料0.1、0.5、0.3、501-2h沙丁胺醇尿液、组织、血清、饲料0.2、0.5、0.2、21-2h第44页/共62页方法名称方法名称灵敏度级别灵敏度级别本底干扰本底干扰单个样品检测时间单个样品检测时间酶联免疫吸附10-8-10-10一般1h左右化学发光免疫10-12-10-15小1h左右荧光偏振免疫10-8-10-10小5-10min量子点标记免疫10-9-10-10一般0.5h左右时间分辨免疫10-15-10-19几乎为零1h左右试剂盒方法比较第45页/共62页试纸条结构采用竞争法，样品滴入后，在层析作用下经胶体金标记抗体的结合垫，再流经包被抗原和二抗的T线和C线，若样品中含有药物，药物与金标抗体结合后不再与抗原反应，T线不显色；若不含药物，则金标抗体与抗原反应，T线显色；无论有无药物，二抗与金标抗体均反应，即C线显色。第46页/共62页优点 灵敏度高，特异性强 检测方便、快捷，一般3-5分钟就能出结果 几乎不需要任何仪器设备 可用于大量样本的快速筛选，适用于现场检测第47页/共62页第48页/共62页试纸条的一般检测步骤1、样品前处理 对尿液、血清等样品，只需进行简单稀释即可；对猪肉等组织样品，通过提取或加热处理后，进行稀释；2、取出检测卡，平放到桌面上，用一次性吸管吸取样品处理液，在加样孔中加入3-4滴；3、5 min后观察结果；4、结果判定。第49页/共62页阴性：C线显色，T线有颜色，无论颜色深浅均判为阴性。阳性：C线显色，T线无颜色，判为阳性。无效：C线不显色，无论T线是否有无，该试纸条均判为无效。结果判定第50页/共62页药物药物样品样品检测限（检测限（ppb）检测时间检测时间克伦特罗尿液、血清、肌肉、饲料2、3、5、1005min莱克多巴胺尿液、血清、肌肉、饲料3、3、8、1005min沙丁胺醇尿液、血清、肌肉、饲料5、5、10、1005min第51页/共62页克伦特罗-莱克多巴胺、喹诺酮类-庆大霉素、磺胺类-喹诺酮类、三聚氰胺-庆大霉素-四环素类T1T2T3C第52页/共62页第53页/共62页六、残留检测方法标准第54页/共62页第55页/共62页第56页/共62页第57页/共62页第58页/共62页第59页/共62页第60页/共62页第61页/共62页