植物组织培养教程李浚明PPT学习教案

会计学1 2.2.主要特征主要特征 （1 1）在培养容器中进行；）在培养容器中进行；（2 2）无菌培养环境，排除了微生物如真菌、细菌以）无菌培养环境，排除了微生物如真菌、细菌以及害虫等的侵入；及害虫等的侵入；（3 3）各种环境因子如营养因子、激素因子以及光照）各种环境因子如营养因子、激素因子以及光照、温度等物理因子处于人工控制之下，并可达到最适条件、温度等物理因子处于人工控制之下，并可达到最适条件。（4 4）通常打破了正常的植物发育过程和格局；）通常打破了正常的植物发育过程和格局；（5 5）随着单细胞和原生质体培养技术的发展，对植）随着单细胞和原生质体培养技术的发展，对植物显微结构进行操作成为可能。物显微结构进行操作成为可能。第1页/共73页 二、植物组织培养类型：二、植物组织培养类型：根据不同分类的依据可以分为不同根据不同分类的依据可以分为不同类型。类型。1 1、根据培养材料不同分为：、根据培养材料不同分为：（1 1）完整植株培养（）完整植株培养（Plant CulturePlant Culture）：对幼苗和较大植株等的培养。）：对幼苗和较大植株等的培养。（2 2）胚胎培养（）胚胎培养（Embryo CultureEmbryo Culture）：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的）：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。培养。（3 3）器官培养（）器官培养（Organ CultureOrgan Culture）：包括离体根、茎、叶、果实、种子、）：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。花器官的培养。（4 4）组织培养（）组织培养（Tissue CultureTissue Culture）：如分生组织、薄壁组织、输导组织培）：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。养。（5 5）细胞培养（）细胞培养（Cell CultureCell Culture）：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。）：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。（6 6）原生质体培养（）原生质体培养（Protoplast CultureProtoplast Culture）：指对去掉细胞壁后所获得的）：指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。原生质体进行培养。第2页/共73页矮牵牛茎尖离体培养培矮牵牛茎尖离体培养培养养第3页/共73页 牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖Mature embryo culture and rapid propagation of tree peony第4页/共73页微型月季茎段离体培养微型月季茎段离体培养第5页/共73页花烛叶片离体快速繁殖花烛叶片离体快速繁殖第6页/共73页大蒜根尖培养及植株再生大蒜根尖培养及植株再生第7页/共73页大蒜试管鳞茎诱导大蒜试管鳞茎诱导第8页/共73页人参细胞悬浮人参细胞悬浮培养培养第9页/共73页非洲紫罗兰原生质体分离、培养及植株再生非洲紫罗兰原生质体分离、培养及植株再生第10页/共73页第11页/共73页2 2、根据再生途径分为：、根据再生途径分为：（1 1）器官发生途径）器官发生途径（Organogenesis）：）：直接器官发生途径：植物器官可以直接由外植体上诱直接器官发生途径：植物器官可以直接由外植体上诱导。如茎尖培养。导。如茎尖培养。间接器官发生途径：成熟细胞经过脱分化（间接器官发生途径：成熟细胞经过脱分化（dedifferentiation）及再分化（）及再分化（redifferentiation）过程）过程而形成新的组织和器官的过程。如叶片培养。而形成新的组织和器官的过程。如叶片培养。（2）体细胞胚胎发生（）体细胞胚胎发生（Somatic embryogenesis）：）：体胚发生途径是指二倍体或单倍体的体细胞在特定条体胚发生途径是指二倍体或单倍体的体细胞在特定条件下未经性细胞融合而通过与合子胚发生类似的途径件下未经性细胞融合而通过与合子胚发生类似的途径发育出新个体的形态发生过程。经体胚发生形成类似合发育出新个体的形态发生过程。经体胚发生形成类似合子胚的结构称为胚状体（子胚的结构称为胚状体（embryoid）或体细胞胚）或体细胞胚(somatic embryo).第12页/共73页直接器官发生直接器官发生 间接器官发生间接器官发生体细胞胚胎发体细胞胚胎发生生第13页/共73页贯叶金丝桃不定芽直接再生过程贯叶金丝桃不定芽直接再生过程第14页/共73页 优化培养基优化培养基 无蔗糖无蔗糖 1%蔗糖蔗糖 5%蔗糖蔗糖 无无BAP BAP 0.1mg/l BAP 5.0mg/l 无无NAA非洲紫罗兰叶片培养非洲紫罗兰叶片培养第15页/共73页 优化培养基优化培养基 无蔗糖无蔗糖 1%蔗糖蔗糖 5%蔗糖蔗糖 无无BAP BAP 0.1mg/l BAP 5.0mg/l 无无NAA第16页/共73页台湾百合离体培养台湾百合离体培养第17页/共73页大花蕙兰原球茎增殖与植株再生大花蕙兰原球茎增殖与植株再生 器官发生途径（原球茎的形成）：器官发生途径（原球茎的形成）：第18页/共73页 大蒜愈伤组织培养大蒜愈伤组织培养第19页/共73页 日本牵牛花的离体培养日本牵牛花的离体培养第20页/共73页第21页/共73页禾本科牧草的体胚发生过程禾本科牧草的体胚发生过程第22页/共73页菊花体细胞胚胎发生及植株再生菊花体细胞胚胎发生及植株再生第23页/共73页大蒜体细胞胚胎发生过程大蒜体细胞胚胎发生过程第24页/共73页第25页/共73页第26页/共73页 人工种子（人工种子（Artificial seedArtificial seed，SyntheticSyntheticSeedSeed）：）：是指植物离体培养产生的胚状体或不是指植物离体培养产生的胚状体或不定芽被包裹在含有营养和保护功能的人工胚乳定芽被包裹在含有营养和保护功能的人工胚乳和人工种皮中，从而形成能发芽出苗的颗粒体和人工种皮中，从而形成能发芽出苗的颗粒体。作为繁殖材料。作为繁殖材料。第27页/共73页第28页/共73页3 3、根据培养基的类型分为、根据培养基的类型分为:（1 1）固体培养（固体培养（Solid cultureSolid culture）:琼脂、卡拉胶等琼脂、卡拉胶等固化。固化。（2 2）半液半固体培养）半液半固体培养(Semisolid Culture)(Semisolid Culture)：固液双：固液双层。层。（3 3）液体培养）液体培养(Liquid Culture)(Liquid Culture)：震荡、旋转或静置：震荡、旋转或静置培养。培养。第29页/共73页液体培养的优点：液体培养的优点：A 不使用凝固剂，节约生产成本不使用凝固剂，节约生产成本 B 营养吸收充分；营养吸收充分；C 操作过程简化。操作过程简化。第30页/共73页固体培养：固体培养：液体培养液体培养第31页/共73页体胚液体培养体胚液体培养第32页/共73页 不同类型液体培养装置不同类型液体培养装置第33页/共73页 液体培养体系液体培养体系第34页/共73页菠萝种苗液体培养系统菠萝种苗液体培养系统 第35页/共73页 丹参毛状根培养丹参毛状根培养第36页/共73页三、植物组织培养技术的理论基础三、植物组织培养技术的理论基础 植物细胞的全能性植物细胞的全能性(Plant cellular totipotency）从理论上讲，植物体的每个生活从理论上讲，植物体的每个生活细胞都具有细胞都具有该植物体的全部遗传信息，在特定的离体培养条该植物体的全部遗传信息，在特定的离体培养条件下，具有发育成完整植株的潜在能力。件下，具有发育成完整植株的潜在能力。第37页/共73页第38页/共73页 分化、脱分化与再分化：分化、脱分化与再分化：分化是指个体发育分化是指个体发育过程中，不同部位的细胞形态结构和生理功能发过程中，不同部位的细胞形态结构和生理功能发生改变，形成不同组织或器官。生改变，形成不同组织或器官。脱分化也称去分化，是指离体条件下生长的细胞、组脱分化也称去分化，是指离体条件下生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生能力，形织或器官逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生能力，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织的过程。再分化是由脱成无组织结构的细胞团或愈伤组织的过程。再分化是由脱分化形成的愈伤组织重新分化出特定细胞、组织和器官的分化形成的愈伤组织重新分化出特定细胞、组织和器官的过程。过程。细胞全能性的表达：细胞全能性的表达：尽管理论上每个细胞都尽管理论上每个细胞都具有全能性，但实际表达难易程度却随具有全能性，但实际表达难易程度却随植物种类植物种类、组织和细胞的不同而异。、组织和细胞的不同而异。第39页/共73页 四、植物组织培养技术的发展历史四、植物组织培养技术的发展历史 1、早期探索阶段早期探索阶段（1930年以前）年以前）1893年，年，Schwann和和Scheiden提出细胞学说及植物细胞全能性理提出细胞学说及植物细胞全能性理论。论。1902年，德国植物生理学家年，德国植物生理学家Haberlandt第一次尝试采用植物组织培第一次尝试采用植物组织培养技术对小野芝麻、风眼兰叶肉组织及万年青属植物的表皮细胞进行培养技术对小野芝麻、风眼兰叶肉组织及万年青属植物的表皮细胞进行培养，但未能培养成活。养，但未能培养成活。1904年，年，Hanning首次对十字花科的萝卜和辣根的胚培养成功。首次对十字花科的萝卜和辣根的胚培养成功。1922年，年，Knudson将兰花种子在离体的条件下非共生萌发。同年，将兰花种子在离体的条件下非共生萌发。同年，Knotte和和Robbins对离体根尖进行了培养。对离体根尖进行了培养。Robbins还对豌豆、玉米及还对豌豆、玉米及棉花的茎尖进行了培养，只形成一些缺绿的叶和根。棉花的茎尖进行了培养，只形成一些缺绿的叶和根。1925年，年，Laibach利用胚培养技术对亚麻的种间杂种胚进行了培养利用胚培养技术对亚麻的种间杂种胚进行了培养，并于，并于1929年利用亚麻的胚培养来克服杂交不亲和性。年利用亚麻的胚培养来克服杂交不亲和性。第40页/共73页2、植物组织培养技术的初步形成（、植物组织培养技术的初步形成（1930-1960年）年）1933年，我国植物生理学家李继侗培养银杏胚胎，并发现银杏胚乳提年，我国植物生理学家李继侗培养银杏胚胎，并发现银杏胚乳提取液可促进离体胚的生长。取液可促进离体胚的生长。1937年，年，White发现发现B族维生素对离体根培养的重要性。并指出族维生素对离体根培养的重要性。并指出IAA对对植物生长发育的控制起重要作用。植物生长发育的控制起重要作用。1937,1938年，年，Gantheret在培养基中加入上述生长因子，使得柳树形在培养基中加入上述生长因子，使得柳树形成层诱导形成的愈伤组织连续生长。成层诱导形成的愈伤组织连续生长。Nobecomt对烟草种间杂种茎段的形对烟草种间杂种茎段的形成层细胞培养也得到了类似的结果。成层细胞培养也得到了类似的结果。1948年，年，Skoog等通过对烟草茎段和髓培养发现，不定芽和不定根的发等通过对烟草茎段和髓培养发现，不定芽和不定根的发生由生长素生由生长素/腺嘌呤的比例决定。腺嘌呤的比例决定。1950年，年，Ball从红杉愈伤组织培养中再生获得器官。从红杉愈伤组织培养中再生获得器官。第41页/共73页1952年年，Morel和和Martin通过分生组织培养获得大丽花的脱毒植株，同通过分生组织培养获得大丽花的脱毒植株，同年，首次应用微型嫁接技术。年，首次应用微型嫁接技术。1953年，年，Tuleche首次从花粉培养中获得银杏的单倍体愈伤组织。首次从花粉培养中获得银杏的单倍体愈伤组织。1955年，年，Miller等发现了一种促进细胞分裂的植物激素等发现了一种促进细胞分裂的植物激素激动素，后来激动素，后来发现激动素可用来代替腺嘌呤促进芽的形成，而且其效力比后者高发现激动素可用来代替腺嘌呤促进芽的形成，而且其效力比后者高3万万倍。倍。1957年年，Skoog和和Miller发现改变细胞分裂素发现改变细胞分裂素/生长素比例，可以控制生长素比例，可以控制根和芽的发生。根和芽的发生。1958年年，Maheshwari和和Rangaswamy从柑橘胚珠的珠心组织培养中从柑橘胚珠的珠心组织培养中再生获得体细胞胚；同年，再生获得体细胞胚；同年，Reinert 和和Steward分别从胡萝卜的愈伤组分别从胡萝卜的愈伤组织和细胞培养中再生得到原胚，为以后的组织培养中器官发生和体细织和细胞培养中再生得到原胚，为以后的组织培养中器官发生和体细胞胚胎发生奠定了基础，也为植物细胞全能性理论提供了证据。胞胚胎发生奠定了基础，也为植物细胞全能性理论提供了证据。第42页/共73页3、植物组织培养技术的发展（、植物组织培养技术的发展（1960年以后）年以后）1960年，年，Morel利用兰花茎尖培养对兰花进行营养繁殖；利用兰花茎尖培养对兰花进行营养繁殖；1962年，年，Murashige和和Skoog开发出最著名的开发出最著名的Murashige和和Skoog培养基（培养基（MS基本培养基），并被后来广泛采用的基本培养基。基本培养基），并被后来广泛采用的基本培养基。1964年，印度人年，印度人Guha和和Maheshwari利用曼陀罗花粉培养获得第一利用曼陀罗花粉培养获得第一例单倍体植株。从而开辟了单倍体育种技术。例单倍体植株。从而开辟了单倍体育种技术。1971年年，Takebe等获得第一例原生质体培养的再生植株。等获得第一例原生质体培养的再生植株。1972年，年，Carlson等利用原生质体融合在两个烟草属中进行种间杂交等利用原生质体融合在两个烟草属中进行种间杂交。1974年年，Murashige等利用细胞分裂素诱导茎尖侧芽分枝。等利用细胞分裂素诱导茎尖侧芽分枝。Zaenen和和Larebeke分别发现土壤农杆菌（分别发现土壤农杆菌（Agribacterium）中的根瘤诱导）中的根瘤诱导的主要成分是的主要成分是Ti质粒。质粒。1978年年，Melchers等进行了番茄和马铃薯的体细胞杂交。等进行了番茄和马铃薯的体细胞杂交。第43页/共73页1979年年，Marton提出了利用植物原生质体和土壤农杆菌共培养的方提出了利用植物原生质体和土壤农杆菌共培养的方法进行转化。法进行转化。1981年，年，Larkin和和Scowcroft引入引入“体细胞无性系变异（体细胞无性系变异（Somaclonal variation）”这一术语。这一术语。1982年年，Krens等的工作证明，原生质体可以摄入裸露的等的工作证明，原生质体可以摄入裸露的DNA，表，表明可以用外源明可以用外源DNA对原生质体进行遗传转化。对原生质体进行遗传转化。1982年，年，Zimmermann利用电刺激进行原生质体融合。利用电刺激进行原生质体融合。1985年年，Horsch等用土壤农杆菌对叶盘进行感染和转化，并得到再等用土壤农杆菌对叶盘进行感染和转化，并得到再生的转化植株。生的转化植株。第44页/共73页园艺植物种苗工厂化生产园艺植物种苗工厂化生产第45页/共73页兰科植物生产兰科植物生产第46页/共73页ABECFG花烛属植物花烛属植物第47页/共73页厥类植物厥类植物第48页/共73页盆栽及切花植物的繁殖盆栽及切花植物的繁殖第49页/共73页珍贵树种珍贵树种第50页/共73页无菌苗快速繁殖无菌苗快速繁殖第51页/共73页无菌苗驯化无菌苗驯化第52页/共73页组培苗驯化移栽组培苗驯化移栽第53页/共73页茎、芽和小植株的规模培养茎、芽和小植株的规模培养 第54页/共73页 经济植物快速繁殖经济植物快速繁殖第55页/共73页第56页/共73页第57页/共73页（2）通过茎尖培养生产脱毒健康种苗：如草莓、香蕉通过茎尖培养生产脱毒健康种苗：如草莓、香蕉、甘蔗、马铃薯、大蒜等。甘蔗、马铃薯、大蒜等。第58页/共73页virus-virus-freefreetissuetissue茎尖培养脱毒茎尖培养脱毒第59页/共73页脱毒马铃薯种薯生物反应器液体培养脱毒马铃薯种薯生物反应器液体培养第60页/共73页2 2、用于植物遗传育种、用于植物遗传育种 包括种质资源离体保存；花粉花药培养产包括种质资源离体保存；花粉花药培养产生单倍体；胚乳培养产生三倍体；胚培养拯救生单倍体；胚乳培养产生三倍体；胚培养拯救杂种胚克服远缘杂交障碍；原生质体培养进行杂种胚克服远缘杂交障碍；原生质体培养进行体细胞杂交；植物体细胞无性系变异诱导和筛体细胞杂交；植物体细胞无性系变异诱导和筛选；用于植物基因转移操作等。选；用于植物基因转移操作等。第61页/共73页 种质资源的离体保存种质资源的离体保存第62页/共73页体细胞无性系变异筛选体细胞无性系变异筛选第63页/共73页 花粉、花药培养产生单倍体植株花粉、花药培养产生单倍体植株第64页/共73页 幼胚拯救克服远缘杂交障碍幼胚拯救克服远缘杂交障碍第65页/共73页 用于基因工程技术创造植物新种质用于基因工程技术创造植物新种质。第66页/共73页3 3、大规模植物细胞、组织和器官培养生产次、大规模植物细胞、组织和器官培养生产次生代谢物质；生代谢物质；第67页/共73页 根培养根培养:正常根培养，正常根培养，毛状根培养毛状根培养第68页/共73页4 4、用于植物生长发育理论研究，包括生理学、用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等。、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等。第69页/共73页 植物胚胎发生理论研究植物胚胎发生理论研究第70页/共73页 生长发育特性研究生长发育特性研究第71页/共73页 2005年年9月月6日日第72页/共73页