微生物培养实验方法

会计学1微生物培养实验方法微生物培养实验方法第1页/共33页四、实验操作四、实验操作(一一)制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌用于培养细菌)牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏牛肉膏 5.0g蛋白胨蛋白胨 10.0gNaCl 5.0g琼脂琼脂 20.0g将上述物质溶解后，添加自来水，定将上述物质溶解后，添加自来水，定容至容至1000mL第2页/共33页1计算、称量计算、称量2溶化溶化3调调pH：pH764过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5分装：分装过程中注意不要使培分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6加塞加塞7包扎包扎操作步骤操作步骤第3页/共33页8灭菌灭菌:将将50ml培养基用玻棒转移至三角培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为、温度为121，灭菌，灭菌1530min。将培养皿用旧报纸包裹，放。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在入干热灭菌箱内，在160170 下灭下灭菌菌2h。第4页/共33页倒平板技术倒平板技术1.将灭过菌的将灭过菌的培养皿放在培养皿放在火焰旁的桌火焰旁的桌面上，右手面上，右手拿装有培养拿装有培养基的锥形瓶基的锥形瓶，左手拨出，左手拨出棉塞。棉塞。1234第5页/共33页倒平板技术倒平板技术2.右手拿锥形右手拿锥形瓶，使瓶口迅瓶，使瓶口迅速通过火焰。速通过火焰。1234第6页/共33页倒平板技术倒平板技术12343.用左手的拇指用左手的拇指和食指将培养皿和食指将培养皿打开一条稍大于打开一条稍大于瓶口的缝隙，右瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的手将锥形瓶中的培养基培养基(约约1020mL)倒入培养倒入培养皿，左手立即盖皿，左手立即盖上培养皿的皿盖上培养皿的皿盖。第7页/共33页倒平板技术倒平板技术12344.等待平板冷等待平板冷却凝固，大约却凝固，大约需需510min。然后，将平板然后，将平板倒过来放置，倒过来放置，使皿盖在下，使皿盖在下，皿底在上。皿底在上。第8页/共33页 9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 左右时，在酒左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来后观察平板，无杂菌污染才可用来接种接种.10无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入37的温室中的温室中培养培养2448小时，以检查灭菌是否彻底小时，以检查灭菌是否彻底。第9页/共33页平板划线的操作方平板划线的操作方法法第10页/共33页第11页/共33页第12页/共33页第13页/共33页第14页/共33页第15页/共33页第16页/共33页第17页/共33页第18页/共33页第19页/共33页第20页/共33页 一旦划破，会造成划线不均一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的划破处生长，会形成一个条状的菌落。菌落。第21页/共33页 一旦划破，会造成划线不均一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的划破处生长，会形成一个条状的菌落。菌落。第22页/共33页第23页/共33页第24页/共33页注意：注意：1、移液管需要经过灭菌。操作移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰时，试管口和移液管离火焰12cm处处.第25页/共33页微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养第26页/共33页微生物的恒温培养微生物的恒温培养第27页/共33页第28页/共33页第29页/共33页菌种的保存菌种的保存1.临时保藏临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后置养基，菌落长成后置于于4冰箱保存。冰箱保存。2.长期保存长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法第30页/共33页 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中如果未接种的培养基在恒温箱中保温保温12 d后无菌落生长，说明培后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重养基的制备是成功的，否则需要重新制备。新制备。第31页/共33页（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。要求，需要分析原因，再次练习。第32页/共33页