流感疫苗是怎样炼成的ppt课件

| 1 高质量流感疫苗 是怎样“炼”成的？ -流感疫苗的生产工艺与质量控制 舒俭德 MD MBA 赛诺菲巴斯德 | 2 主要内容 流感疫苗研发历史 生产步骤和质量要求 从鸡蛋选择开始 质量是做出来的， 不是检出来的 生物安全和上市后的药物警戒 o1933年：首次在雪貂身上分离到甲型流感病毒 o1936年：鸡胚培养流感病毒获得成功 o1941年：全病毒灭活流感疫苗在美国首次获得批准 o1945年：在美国开始广泛应用，由位于宾夕法尼亚州Swiftwater的Pocono生物制 药公司生产 o1968年：流感病毒裂解疫苗上市，由法国巴斯德研究所和梅里厄研究所生产 流感疫苗研发历史 张延龄等 疫苗学 科学出版社 1176页 | 3 脂质层 血凝素(HA ) 神经氨酸酶(NA ) 核衣壳 基质蛋白 全病毒疫苗 亚单位疫苗 裂解疫苗 流感疫苗种类 | 4 外抗原 内抗原 | 5 主要内容 流感疫苗研发历史 生产步骤和质量要求 从鸡蛋选择开始 质量是做出来的， 不是检出来的 生物安全和上市后的药物警戒 鸡胚接种和孵化 灭活流感疫苗的三大生产步骤 原液生产和检定分装和包装 | 6 疫苗生产的特点及其质量控制原则 | 7 特点为什么如何质量控制 成分的多样性 不同种类的疫苗（如流感疫苗）含有不同的成分，有 时难以用理化方法定量和定性，用生物学技术和分析 方法检测的结果，变异范围往往大于理化测定方法 通过测定生物学效价来测定其抗原含量 建立方法的标准化，并用同一参照品校 准 生产起始物料的生 物活性 病毒种子：其固有的可变性和生产过程中可能引起的 变化，会直接或间接影响疫苗的质量 毒种筛选原则：安全性、免疫原性、遗 传学稳定性和生产适用性（由WHO推荐 和提供流感疫苗毒株） 细胞培养：可能存在动物原性病原体的污染风险，如 鸡胚细胞可能被污染禽白血病病毒 原材料质量控制（专属养鸡场和现代化 管理） 细胞培养基：动物来源原材料存在潜在安全隐患，如 牛血清的疯牛病治病因子风险 改用人工合成无动物蛋白（APF）培养 基 生产过程的复杂性 可能的污染物（外源的）： 动物细胞培养过程中可 能搜到病毒、细菌、真菌和支原体污染 严格的生产过程质量控制（GMP） 可能的残留杂质（内生的）：细胞培养产物中 可能 含有DNA、宿主蛋白质、内毒素和细胞代谢产生的蛋 白质 严格的产品质量控制（对原液、半成品 和终成品的检定） 流感疫苗生产用鸡 胚的要求 毒种传代和制备用鸡胚应来源于SPF鸡群 疫苗生产用鸡胚（蛋）应来源于封闭式房舍内 饲养的健康鸡群 选用911日龄无畸形、血管清晰、活动鸡胚 专属农场饲养+现代化管理 全程跟踪的鸡群健康监控计划 先进的鸡胚孵化中心 资料来源： 王军志 疫苗的质量控制与评价 人民卫生出版社 2013版 第13页 | 8 主要内容 流感疫苗研发历史 生产步骤和质量要求 从鸡蛋选择开始 质量是做出来的， 不是检出来的 生物安全和上市后的药物警戒 “三代单传”的优种鸡胚 | 9 流感疫苗的生产从选择鸡蛋开始 流感疫苗生产工艺 运输 疫苗工厂 祖父母代鸡群选种 （种蛋） 上游供应商 父母代鸡苗 父母代母鸡 （受精） 父母代产受精蛋 （25周） 胚蛋孵化 （9-11天龄） 鸡蛋供应商 饲养阶段生产阶段孵化 选种优良 品系证明 祖父母代 无禽白血病污染鸡苗 专属农场饲养+现代化管理 全程跟踪的鸡群健康监控计划 先进的鸡胚孵化中心 专属农场+现代化管理 | 10 要求如何做为什么 专属农场 鸡场选址在与世隔绝的山区，方圆几公里内没有 其他禽类农场，也没有池塘和湖 降低外部环境污染养鸡场的风险 全封闭式鸡场：对鸡舍的封闭和对饲养人员的封 闭管理 避免与外界病原体接触（如禽流感） 现代化 管理 自动化环境监控温度、通风系统提高鸡群生活舒适度 大笼3平米养40只鸡，一只鸡有720cm2 自然交配人性化饲养，避免因人工受精而造成交叉污染 定时灯光管理调整“体成熟”和“性成熟”时间，保证母鸡在 正确的时间（25周）产下符合标准的受精蛋 全程跟踪的鸡群健康监控计划和孵化工艺 | 11 要求如何做为什么 全程跟踪的鸡群健康监控 计划 定时体检（每周取样) 鸡群的疫苗接种计划保证鸡群健康鸡新城疫 鸡传染性气管炎 禽脑脊髓炎 鸡传染性喉气管炎 鸡马立克病 鸡毒支原体 沙门菌 鸡白痢 禽滑液囊支原体 禽流感 先进的孵化工艺 孵化中心启用前要采取相应监控措施（如确保无沙门氏菌方可 接收种蛋） 从鸡舍收集的鸡蛋在鸡舍要进行福尔马林熏蒸 送到孵化中心还要进行一次筛选（剔除脏蛋，裂纹蛋，轻重蛋 ） 对孵化过程全程记（温湿度、翻蛋等） 保证生物安全，确保可 追溯性 在养鸡场对鸡胚100%全检 外观、洁净度、无微生物污染 蛋壳完整性、气室位置、鸡胚活力 胚龄、胚胎发育情况、胚重 胚蛋重量及蛋壳表面微生物 确保与欧盟同等质量标 准 | 12 主要内容 流感疫苗研发历史 生产步骤和质量要求 从鸡蛋选择开始 质量是做出来的， 不是检出来的 生物安全和上市后的药物警戒 流感疫苗生产流程 6个阶段22个步骤， 用于质控的时间70%1 每个批号100多个检测点 400多个检测参数2 1.Sanofi Pasteur internal data. 2.Data on file Sanofi Pasteur. 病毒培养 病毒收获 纯化 裂解 灭活 终过滤 单价流感原液 QC QC QC QC QC QC QC | 13 优化纯化、裂解和灭活工艺，提高产品安全性 先纯化后裂解再灭活工艺，降低因灭活致白蛋白结构改变而产生致敏性的风 险 独特的二次区带离心技术，利用病毒颗粒与杂质在介质中的不同分布，以蔗糖密 度梯度离心方式纯化病毒1（如去除流感病毒脂质层） 应用辛苯醇醚-9（Triton X-100）作为裂解剂，有助于去除内毒素，充分优化疫 苗的安全性和免疫效果2 采用甲醛灭活：甲醛对病毒核酸和病毒蛋白质都有破坏作用,它使分子间产生共 价键，使蛋白分子无法再改变其空间构型,这使病毒无法感染新的细胞及复制3 1.王军志：疫苗的质量控制与评价 人民卫生出版社 2013版 第642页 2. Delore V,et al. Vaccine 2006; 24(10):1586-92 3.疫苗灭活http:/ | 14 不同工艺的比较 1 王军志 疫苗的质量控制与评价 人民卫生出版社 2013版 第642页 2. Delore V,et al. Vaccine 2006; 24(10):1586-92 3.灭活剂百度文库： http:/ | 15 工艺技术优点缺点 生产流程1 先灭活后纯化首先灭活病毒和污染的其它微生 物，然后在较为安全的条件下进 行后续工艺 灭活剂用量大，增加去除残余量难 度；可能与其它分子也形成共价键 而产生大分子结构在后续的纯化中 难以去除 先纯化后灭活经纯化和裂解后的病毒更加容易 灭活，灭活剂用量少 先纯化时可能损失有用抗原，故需 要生产的抗原量大，成本高 裂解剂2 聚山梨酸酯80 （吐温80） 裂解效果良好有机溶剂，需要使用乙醚，乙醚不 稳定，易挥发，易爆（工业风险） 三硝甲基苯 （Triton X- 100) 非离子型表面活性剂，裂解效果 良好，工业操作容易，且对去除 内毒素有帮助 无资料 灭活剂3 -丙内酯在液体中完全水解，无残留不稳定，易挥发，在空气中有毒性 甲醛灭活效果良好，工艺成熟需要严格去除残留游离甲醛 “有图有真相” | 16 裂解前：可见完整病毒裂解后：病毒完全分解，蛋 白片段均匀分布于介质中， 未见蛋白聚合体 过程控制：严格控制批内差异和批间差异 | 17 中国药典与欧洲药典比较（摘要） （资料来源：王军志 疫苗的质量控制与评价 人民卫生出版社 2013版 第646页） 项目（成品中）中国药典欧洲药典/SP标准 总蛋白含量400g/ml300g/ml 卵清蛋白含量500ng/ml400ng/ml 硫柳汞（防腐剂）含量100g/ml无（SP标准） 抗生素残留量50ng/剂50ng/剂（SP标准） 鉴别 试验 病毒灭 活验证 血凝素 含量 无菌 检查 内毒素 含量 蛋白质 含量 裂解剂 残留量 卵清蛋 白含量 游离甲 醛含量 抗生素 残留量 异常毒 性检查 单价 原液 + 半成品 + 终成品 + （资料来源：SP流感疫苗鉴定规程） SP内部放行检测 | 18 主要内容 流感疫苗研发历史 生产步骤和质量要求 从鸡蛋选择开始 质量是做出来的， 不是检出来的 生物安全和上市后的药物警戒 生物安全和环境保护 生物安全 BSL2（生物安全二级标准）的厂房设计，确 保流感病毒不会释放到周边环境中 采用多组HVAC空调系统分区管理，通过气压 设计合理设计气流流向，有效防止污染和交 叉污染 FM Global公司 的“HPR”认证（可以承受 八级地震，十二级台风的侵袭） | 19 环境保护 自建废水处理站 所有BSL2区域产生的废弃物（废鸡蛋）经过 热处理杀灭病毒，再由环保部门指定专业公 司做焚毁处理 | 20 疫苗上市后不良反应监测和评价 疫苗上市后不良反应监测必要性1 上市前动物实验的局限性 : 动物无法反应人体的自觉反应，毒理试验动物数量有限，人与动物模型的差异 上市前临床试验研究的局限性： 病例数少，研究时间短，受试人群范围较窄 1.王军志 疫苗的质量控制与评价 人民卫生出版社 2013版 第340页. 2.武文娣等 中国2011年疑似预防接种异常反应监测数据分析 中国疫苗和免疫 2013年4月第19卷第2期 第97-109页 AEFI非严重AEFI严重AEFI一般反应异常反应 例数发生率例数发生率例数发生率例数发生率例数发生率 流感 疫苗 200 316.15197 115.89320.26182 014.6711725.39 DTaP29 26741.0829 14640.911210.1727 93539.211 1871.67 2011年流感疫苗AEFI报告例数和报告发生率2 （/10万剂） 最常见症状（/10万剂）： 过敏性皮疹 （0.74），血管性水肿（0.12），热性惊厥（0.06），过敏性紫癜（0.06），ITP（0.02） ，GBS（0.02），过敏性休克（0.01），喉头水肿（0.01），无菌性脓肿（0.01），淋巴管炎 （ 0.01），ADEM（0.01） | 21 全球及中国的定期安全性更新报告（PSUR） 在全球（含中国），自2007年5月1日至2012年4月30日， Vaxigrip的销量约3亿4千万剂 共收到不良事件报告3295例，不良事件报告率为9.7/100万* 其中严重不良事件1495例，非严重不良事件1800例 没有任何安全性问题或可疑的安全信号被提出 *Sanofi Pasteur Period Safety Update Report *武文娣等 中国2011年疑似预防接种异常反应监测数据分析 中国疫苗和免疫 2013年4月第19卷第2期 第97-109页 在中国，自2007年1月1日至2011年12月31日，进口销售凡尔灵疫 苗约2千7百万剂 公司药物警戒部门共计收到不良事件书面报告153例，不良事件报告 率为5.6/100万*（中国流感疫苗AEFI报告发生率161.5/100万*） 最常见的接种后不良事件是轻中度的一过性发热、局部红肿、疼痛等 ，皮疹及过敏反应次之。 大多不良事件的程度均为轻微和中等，通常在接种后一天发生，三天 内恢复。 | 22 全球及中国开展的上市后临床试验 在全球(除中国），自2001年以来，共有41项含有Vaxigrip 的研究 ，在22个国家开展： 法国 (18), 比利时(4), 德国 (4), 英国(4) 意大利 (1), 西班牙 (1), 瑞士 (5), 芬兰 (3), 立陶宛 (4), 捷克 (1), 奥地利 (1), 俄罗斯 (1), 乌克兰 (1), 波兰 (1), 加拿大 (1), 巴西 (1), 澳大利亚 (5), 新西兰(1), 新加坡 (1), 菲律宾 (1), 韩国 (1), 南非(1) Data on file Sanofi Pasteur. 在中国，自2002年以来，已发表的 含有凡而灵的研究32项，其中： 免疫原性和安全性研究20项 安全性考核3项 有效性评价9项 | 23 临床安全性也是做出来的， 不是考察出来的。 产品质量是做出来的， 不是检出来的。 | 24 “让人类不再因疫苗 可预防的疾病而遭受 痛苦甚至死亡。” 路易-巴斯德 1822-1895