淋巴瘤知识入门

淋巴瘤知识入门,本幻灯片大部分图片内容 来自陈国璋教授的慷慨馈赠 特此致谢！,诊断的客观条件,诊断外部条件,制作精良的HE切片 质控良好的免疫组化染色 临床病史 分子生物学检测（可选） 流式细胞光度术（可选）,正常淋巴结结构,淋巴结结构,皮质区 副皮质区 髓质 包膜和纤维分隔 窦区,流入淋巴管,纤维包膜,边缘窦,次级滤泡,套区,生发中心,初级滤泡,纤维分隔,皮质区,流入淋巴管,髓质及淋巴窦,肥胖内皮的小静脉,门区淋巴窦,静脉,动脉,流出淋巴管,副皮质区,髓索,皮质区: B细胞区,初级淋巴滤泡 初始 B 细胞和成熟 B 细胞 滤泡树突细胞,CD21,皮质区：淋巴结的B细胞区,次级淋巴滤泡 中心母细胞, 中心细胞 (滤泡中心 B 细胞; CD10+) 滤泡树突细胞 T细胞 (CD10 强 +; 常 CD4+/T辅助及 CD57+) 吞噬碎片的巨嗜细胞 套区B细胞 (IgM+D),次级滤泡结构示意图,边缘区细胞 (IgM),套区细胞 (IgM+D),生发中心细胞 (IgM, IgG, IgA or IgE, not IgD),CD20,CD21,CD10,CD20,皮质区：淋巴结的B细胞区,边缘区B细胞 多数淋巴结中不明显 在腹腔淋巴结容易见到，即在套区外侧，淡白色区域，胞浆较丰富、透明,Mantle zone,Marginal zone,CD20,皮质反应性增生改变,反应性滤泡增生 对T细胞依赖抗原反应而发生 生发中心有极性：亮区及暗区，扁桃体最明显 可伴有浆细胞增多,抗原流入的方向,套细胞在顶端较厚“帽子”,生发中心的亮区（中心细胞较多）,生发中心的暗区 (中心母细胞较多),Dark zone,Light zone,Ki67,副皮质区：淋巴结的T区,T细胞为主 (CD4CD8): 小淋巴细胞， 偶有较大的T细胞 (一些散在于副皮质区的大细胞是激活的B细胞) 高度增生内皮的小静脉 (淋巴细胞在其内流通) S100+ 的细胞 (指突状树突状细胞) Cytokeratin+ 树突细胞 (纤维母细胞性树突细胞?),IDC,CD3,CD20,副皮质区的反应性增生,最常见原因: 病毒感染, 过敏反应, 肿瘤引流淋巴 皮质增宽, 有时形成结节. T结节紧邻B滤泡，有时融合 高度增生内皮细胞的血管; 混合性小细胞和免疫母细胞,髓索,有较多浆细胞 可显著或不明显 B细胞反应时可显著, 如反应性滤泡增生、浆细胞性Castleman 病时,窦,流入淋巴管 边缘窦 淋巴内窦 髓质淋巴窦 流出淋巴管 淋巴窦被覆窦内衬细胞 (有桥粒). 窦内有一些组织细胞和淋巴细胞 腹腔内淋巴结淋巴窦常明显扩张,结缔组织网架,纤维包膜以及向淋巴结内伸出的纤维小梁构成网架 正常情况下不明显 反应性增生及周围淋巴结肿大时较明显,Any Question? Take a break!,免疫组化的一般问题,免疫组化的重要性,鉴别淋巴瘤 VS 反应性增生 鉴别淋巴瘤 VS 其他恶性肿瘤 淋巴瘤的分类 淋巴瘤的预后及临床分期 治疗靶标,没有高质量的免疫组化 就不能很好地进行淋巴瘤诊断,染色结果的判定,正确的染色结果判定，比免疫组化染色本身一样重要 染色的判断必须紧密结合组织学，必须确定究竟应该是哪一种细胞着色，哪一种成分不应着色,CD20,染色结果的判断,必须申明哪种细胞为阳性，尤其是病变含有多种细胞成分时 如果病理报告如下: CD20+, CD3+, CD5+, Bcl2+, CD10-, Bcl6- ，没有价值 正确的表述: 大细胞 CD20+, CD3-, CD5-, CD10- 背景的小淋巴细胞： CD3+ CD5+ CD8+ 有散在的网格状 CD21+ 滤泡树突细胞,染色结果的判断,阳性比阴性更有价值，因为阴性可能由于： 抗原丢失 抗原修复不足 敏感性不足 抗体过期 加错抗体或试剂添加步骤错误,染色结果的判断,必须有阳性的内对照和外对照，证明染色结果可信 染色应得到正确的预期结果 大多数白细胞的标记为膜阳性 TdT, S100 及转录因子类抗体均为核阳性,Cyclin D1,CD20,TdT,淋巴细胞的表型,B,T,NK,紧密相关,淋巴系统的形成,胸腺,?骨髓 ? Peyer 结,淋巴结、脾、粘膜组织,中心淋巴组织: “前驱”细胞的贮存库; 由此细胞发育成熟,外周淋巴组织: 成熟细胞的贮存库 准备对抗原产生反应,T,B,NK,?,前前B细胞,前B细胞,不成熟B细胞,成熟B细胞,激活的B细胞,浆细胞,前驱细胞，非抗体依赖,初始（Virgin） B 细胞，非抗体依赖,中心细胞 抗体依赖,TdT,CD20, CD22,CD19, PAX5,CD79a,CD10,Bcl-6,CD138,Cytoplasmic CD22,前胸腺细胞,包膜下胸腺细胞,皮质胸腺细胞,髓质胸腺细胞,外周T细胞,前驱细胞,成熟T细胞,Cytoplasmic,Surface,CD4,CD8,CD1,CD4, CD8,CD3,CD2,CD7,TdT,淋巴瘤 VS 其他恶性肿瘤?,有时淋巴瘤与分化差的癌、恶性黑色素瘤、肉瘤鉴别非常困难 淋巴瘤也可有各种形态 (如小梁状排列、粘液变性、 菊形团、梭形细胞) 免疫组化对于鉴别很有帮助,对于分化差的肿瘤,* 大细胞间变淋巴瘤和淋巴母细胞淋巴瘤可以LCA阴性 需要加染其他标志 (如 CD30),Cytokeratin, CAM5.2,白细胞共同抗原,CD45 (CD45RB): Leukocyte common antigen 除浆细胞之外的所有正常淋巴细胞 (B, T 或 NK 系) Reed-Sternberg 细胞 (Hodgkin lymphoma) CD45- 通常对于淋巴瘤，不必染LCA: 直接染 CD20 和CD3,扁桃体,LCA/CD45,免疫组化对淋巴瘤分类有多重要?,只有极少数淋巴瘤不做免疫组化，可明确诊断: 滤泡性淋巴瘤 边缘区B细胞淋巴瘤, 粘膜相关淋巴组织类 小淋巴细胞淋巴瘤 绝大多数其他类型均需要免疫组化，尤其是: 套细胞淋巴瘤 弥漫大B细胞淋巴瘤 各种T细胞淋巴瘤,B 系细胞标记,CD20 (e.g. L26): 非常敏感 (95% B细胞淋巴瘤阳性), 有时B小淋巴细胞淋巴瘤染色不佳，B细胞淋巴母细胞淋巴瘤可为阴性 浆细胞、浆细胞瘤和浆母细胞淋巴瘤阴性 (对于这类肿瘤，CD20阴性是一诊断线索) 核阳性不能判定为阳性，任何细胞过度热修复均可核阳性,CD20,B 系细胞标志,CD79a (mb-1): B cell receptor complex: sensitive and specific B cell marker (normal plasma cells are positive; germinal center cells are stained weakly) 50% plasmacytomas are positive But can be positive in T-lymphoblastic lymphoma/leukemia Antibody expensive: Use as back-up Immunoglobulin (cytoplasmic and/or surface Ig),CD79a,CD79a,Plasmacytoma,New B-lineage marker PAX-5 Oct-2 Bob. 1,PAX-5,PAX-5,PAX-5,Oct-2,Bob.1,Oct-2,Bob.1,T-系细胞标志,胞浆CD3 (polyclonal against CD3e, monoclonal also available, e.g. PS1): T系细胞高度敏感和特异 核周或核皱折处染色深 组织细胞有时弱浆阳性，但无核周浓聚 90% T 和NK 细胞淋巴瘤阳性 合并使用其他T细胞标志 (e.g. CD45RO, CD2),CD3,CD3,T系细胞标志,表面 CD3 (e.g. Leu4, T3, OKT3): 需要冰冻切片染色 大部分T细胞淋巴瘤表面CD3阳性 NK 细胞表面 CD3-, 胞浆 CD3+,T系细胞标志,CD45RO (e.g. UCHL1, A6): 高度敏感的T细胞标志，一些T细胞淋巴瘤 CD3- CD45RO+ 但组织细胞和髓系细胞及其肿瘤也阳性 CD43 (e.g. MT1, DFT1, Leu22): 高度敏感的T细胞标志，但不特异 组织细胞和髓系细胞及其肿瘤也阳性 EBV感染时，B细胞也表达 小B细胞淋巴瘤时也为阳性,T 系细胞标志,CD4, CD8: 诊断T细胞淋巴瘤时并不常用 CD2: 敏感而特异的全T细胞标志 比CD3贵，备用标志 CD7: T细胞发育早期阶段表达 尤其在诊断T淋巴母细胞淋巴瘤时有用 (一些病例 CD3-),一个新的T细胞标志: LAT,当一个“淋巴瘤” 仅CD43阳性时,可能是一个真正的T细胞淋巴瘤/白血病 一定要考虑到: 髓系白血病/粒细胞肉瘤 组织细胞肿瘤,i.e. the specific T and B markers negative,CD43+: T cell lymphoma?,No: See myeloperoxidase,NK 细胞标志,CD56 (e.g. 123C3): NK细胞淋巴瘤的最好标志 不完全是NK细胞特异性标志; 一些表达 gd T细胞受体的T细胞淋巴瘤也阳性 CD56 在神经细胞和神经内分泌细胞也阳性，诊断NK细胞淋巴瘤时必须有其他白细胞标志,CD56 (NK/T cell lymphoma),小结: B或者T细胞淋巴瘤？,CD20 CD3,CD20+,B细胞淋巴瘤; 加其他分类标志,CD3+,T或NK细胞淋巴瘤; 加其他标志 (CD56, CD30),CD20- CD3-,非造血组织肿瘤? 浆细胞瘤? 浆母细胞性淋巴瘤? T细胞淋巴瘤? 淋巴母细胞淋巴瘤?,淋巴瘤进一步分类,小B细胞淋巴瘤 CD5 CD23 IgD Cyclin D1 bcl-6 or CD10,淋巴瘤进一步分类,Bcl-2: 仅区别反应性增生和滤泡性淋巴瘤 诊断浆细胞瘤: LCA L26(-), CD79a(+/-), CD138(+), Oct-2(+), Bob.1(+), Ig(+),CD138 (syndecan-1),CD138 在浆细胞、浆母细胞和一些免疫母细胞的胞膜阳性表达 用于诊断浆细胞瘤 单独的CD138阳性不足以诊断浆细胞瘤，必须加 LCA (CD45)等,CD138,LCA/CD45,淋巴瘤进一步分类,CD10 CD10 急性淋巴母细胞白血病标志, 也表达于正常的生发中心B细胞和中心T细胞 价值: 滤泡中心细胞分化 (滤泡性淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、一些大B细胞淋巴瘤) 血管免疫母T细胞淋巴瘤,CD10,Strongly positive cells are T cells,RFH,FL,淋巴瘤进一步分类,Bcl-6 核阳性 正常表达于滤泡中心B细胞、滤泡周围的CD30+细胞和少数T细胞 以下淋巴瘤阳性: 滤泡性淋巴瘤 一些大B细胞淋巴瘤 Burkitt 淋巴瘤 一些大细胞间变性淋巴瘤,Bcl-6,Bcl-6,淋巴瘤进一步分类,滤泡树突细胞标志 (CD21, CD35, clusterin) 助于诊断 滤泡性淋巴瘤 套细胞淋巴瘤 (疏松散在网格) 血管免疫母T细胞淋巴瘤 大细胞间变性淋巴瘤 CD30, ALK1,Mantle cell lymphoma: CD21,Angioimmunoblastic T-cell lymphoma,Tonsil: Clusterin,Follicular lymphoma with diffuse component: Clusterin,CD30,激活淋巴细胞标志 淋巴结反应性增生时CD30+ 细胞增多 必须是膜 +/- 高尔基区阳性、弥漫浆着色不应判定为阳性 CD30 经典的何杰金 间变性大细胞淋巴瘤 其他一些大细胞淋巴瘤,CD30,CD30,淋巴瘤进一步分类,Ki67: 帮助诊断 Burkitt 淋巴瘤(100%) 细胞毒性标志, e.g. TIA1, granzyme B, NK/T细胞性淋巴瘤、脂膜炎样T细胞淋巴瘤 淋巴母细胞淋巴瘤: TdT,Burkitt lymphoma,TIA-1,TdT (terminal deoxynucleotidyl transferase),TdT (thymoma),TdT (tonsil),T-lymphoblastic lymphoma,淋巴瘤的分期和预后,套细胞淋巴瘤中，高 Ki67 index 与预后不良有关 ZAP-70 表达是 B-CLL预后不良的标志 大细胞间变淋巴瘤: ALK+ 比 ALK- 预后要好,ALK1,原发系统性ALCL的总生存期 (Falini et al, 1999),0,5,10,Years,ALCL, t(2;5) or ALK+,100%,50%,ALCL, t(2;5) or ALK-,淋巴瘤的预后与分期,累及其他部位的淋巴瘤，如骨髓等，可以用一些标志检测出来 ALK 、CD30： 大细胞间变淋巴瘤 Cyclin D1 ：套细胞淋巴瘤 CD56 ：NK细胞淋巴瘤,ALK1,治疗靶标,治疗性抗体的靶标: anti-CD20 (Rituximab，美洛华) anti-CD22 anti-CD52 淋巴瘤的治疗过程中，临床大夫会要求病理大夫染一些抗体标志 治疗后的淋巴瘤细胞有时会失去抗原, e.g. CD20,小结: 有用的分类标志,B 系细胞 CD20 (可选: CD79a, PAX-5) T 系细胞 CD3 (可选: CD45RO, CD2) NK 系细胞 CD56 髓质细胞 Myeloperoxidase 滤泡中心细胞 CD10 (or bcl-6),小结: 有用的分类标志,套区细胞 IgD 不成熟的前驱细胞 TdT 浆细胞 CD20-, CD138+ (可选: Oct-2, Bob.1) 组织细胞 CD68 (PGM1 KP1) 滤泡树突细胞 CD21 + CD35 Langerhans细胞 S100, CD1a,小结: 重要的淋巴瘤分类标志,淋巴母细胞淋巴瘤: TdT、CD99、CD34 B-CLL: CD5, CD23 套细胞淋巴瘤: Cyclin D1 滤泡性淋巴瘤: CD10 (or bcl-6) Burkitt 淋巴瘤: Ki67 index(100%) 血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤: CD10, 滤泡树突细胞标志 (CD21，CD35) 间变性大细胞淋巴瘤: CD30, ALK,Thank you for Attention!,